Summary
كان الهدف من هذه الدراسة تقييم في المختبر الدهن لخفض آثار المخدرات في تحوير مورفولوجية جزيئات الكولسترول. وكشفت مقارنة بين الأدوية الخافضة للدهون الاختلافات في أثرها في تحوير الميزات المورفولوجية لجزيئات الكولسترول.
Abstract
علاج مرضى دسليبيدميا مع الأدوية الخافضة للدهون يؤدي إلى انخفاض كبير في مستوى البروتينات الدهنية low-density (LDL) ومنخفض إلى مستوى معتدل لزيادة الكثافة lipoprotein (HDL) الكوليسترول في البلازما. ومع ذلك، هو دور المحتمل لهذه العقاقير في تغيير مورفولوجية وتوزيع جزيئات الكولسترول غير مفهومة. هنا، يمكننا وصف تقييم آثار المخدرات الخافضة للدهون في تحوير الخصائص المورفولوجية جزيئات الكولسترول استخدام أسلوب صفيف اللوحة في تركيبة مع التصوير التدفق الخلوي في المختبر . تحليل الصورة من جزيئات الكوليسترول أشارت إلى أن لوفاستاتين، سيمفاستاتين، ازيتمايب، واتورفاستاتين الحث على تكوين جزيئات حبلا على شكل كروي والخطي على حد سواء، بينما حمل النياسين، فيبراتيس، فلوفاستاتين و rosuvastatin تكوين جزيئات على شكل كروي فقط. المقبل، وتنقية جداً low-density lipoprotein (VLDL) وجسيمات LDL المحتضنة مع هذه الأدوية أظهرت التغييرات في نسيج مورفولوجيا وصورة من الكوليسترول الجسيمات الفئات السكانية الفرعية. وعلاوة على ذلك، فحص عينات مصلية 50 كشفت عن وجود مستوى أعلى من الجسيمات الكولسترول الحميد على شكل الخطي في المواضيع مع دسليبيدميا (يعني من 18.3 في المائة) مقارنة بالعينات مطابقة العمر العادي (يعني من 11.1 في المائة). كما لاحظنا تفاوتات كبيرة في تخفيض الدهن آثار المخدرات على تقليل الخطية على شكل تشكيل جزيئات الكوليسترول LDL والكوليسترول الجيد في عينات مصل الدم. تشير هذه النتائج إلى أن الأدوية الخافضة للدهون، بالإضافة إلى آثارها hypolipidemic الخلية بوساطة، مباشرة قد تعدل مورفولوجيا جزيئات الكولسترول بآلية غير الانزيمية للعمل. نتائج هذه النتائج إمكانية إعلام تشخيص تصلب الشرايين والتنبؤ بالعلاج الأمثل لخفض الدهون.
Introduction
العديد من الدراسات السريرية أظهرت الآثار المفيدة للأدوية الخافضة للدهون في الحد من مستويات البلازما الكوليسترول low-density البروتينات الدهنية (LDL) وانخفاض لمستوى متوسط من الزيادة في نسبة الكولسترول في الدم الكثافة lipoprotein (HDL)، الذي يمنع حدوث المرحلتين الابتدائية والثانوية من الأحداث القلب والأوعية الدموية الضارة المرتبطة بتصلب الشرايين1،2،3،،من45. Statins، مجموعة من حكومة صاحب الجلالة-CoA مثبطات الإنزيم ريدكتيز، كتلة توليف الكولسترول الذاتية في الكبد أن تعمم في يؤدي بدوره إلى انخفاض مستويات الكولسترول في الدم6،7. وبالمثل، هو توسط الدهن خفض تأثير النياسين تثبيط مباشرة ويختلف تتمثل دياسيلجليسيرول أسيلترانسفيراسي-2، إنزيم كبد رئيسية مشاركة في توليف الدهون الثلاثية8. نسبيا، ازيتمايب يقلل من مستوى LDL البلازما عن طريق الحد من امتصاص الكوليسترول خارجية ملزمة للبروتين نيمان بيك C1-Like 1 (NPC1L1) الموجودة في الخلايا الظهارية من الأمعاء الدقيقة9. فينوفيبرات، آخر العقاقير الخافضة للدهون، يقلل إلى حد كبير تركيزات البلازما الدهون الثلاثية وأيضا معتدل يقلل الكولسترول عن طريق ممر مستقبلات المنشط ادعاءا بيروكسيسومي10. إلى جانب ذلك، أفيد بالأحماض الدهنية أوميغا-3 لها تأثير المضادة تصلب الشرايين نظراً لقدرتها على خفض مستويات الكولسترول11البلازما.
الأدوية الخافضة للدهون، بالإضافة إلى تأثيرها الأساسي على تخفيض الكولسترول، تحتوي على عدد من الآثار بليوتروبيك المفيدة، بما في ذلك تحسين مستوى الكوليسترول الجيد، وتحسين وظائف بطانية، الحد من الالتهابات، وتثبيط الصفيحات المجموعات12،،من1314. ومع ذلك، الآلية الأساسية لهذه الأدوية في زيادة جزيئات الكولسترول الحميد وتعديل خصائصها الهيكلية ليست مفهومة تماما. نظراً لهذه الأدوية توصف على نطاق واسع لعلاج أمراض القلب والأوعية الدموية المتصلة بتصلب الشرايين (كفدس)، من الضروري مواصلة التحقيق أدوارهم المحتملة في تحديد الخصائص المورفولوجية وتوزيع جزيئات الدهن. ليبيدومي البلازما البشرية تتكون من حوالي 600 من الدهون متميزة و 22 أنواع جزيئية مختلفة يحتوي موجودة في مختلف الأحجام والأشكال، والكثافة والتراكيب15،16،17 . تستخدم أساليب تحليلية مثل الترا-الطرد المركزي، والرنين المغناطيسي، والتفريد جل التدرج لتوصيف جسيمات LDL و HDL وعلى18،اﻷفخاذ19. بيد أن تطبيق هذه الأساليب يقتصر على دراسات تهدف إلى تحديد تأثير الأدوية في تحوير مورفولوجيا وتجميع جزيئات الدهن. هو صفيف يستند إلى اللوحة cytometer تدفق مقايسة بيوكيميائية فنية المتقدمة للكشف عن وتصور مصل المستمدة من الدهن واميلويد البلاك الجسيمات20. مزايا في المختبر التصوير الأسلوب الموصوفة في هذه الدراسة يمكن تحديد آثار المخدرات تحوير المادة الدهنية في تغيير مورفولوجية وتوزيع جزيئات الكولسترول في عينات من المخزن المؤقت والمصل.
Protocol
1. "إعداد الفلورسنت" المسمى الكوليسترول والأدوية الخافضة للدهون
ملاحظة: تم إعداد المجاميع الكوليسترول المسمى الفلورسنت و statins كما هو موضح في المادة السابقة 21-يرجى الاطلاع على الجدول للمواد لمزيد من التفاصيل من الكواشف، التصوير cytometer التدفق، وكيمياء الغلاف الجوي، وبرامج تحليل البيانات المستخدمة في هذه الدراسة.
- جعل المسمى الفلورسنت الكولسترول المجففة بالتبريد (1 ملغ، Ex/م = 495 نانومتر nm/507) مسحوق في 1 مل كحول 100 ٪.
- الطرد المركزي العينة لمدة 3 دقائق في س 2,040 ز واستخدام سوبيرناتانتس التي تحتوي على المجاميع الكوليسترول المسمى الفلورية القابلة للذوبان في مقايسة الصفيف البلاك.
- تحضيرا للمخدرات، جعل فردياً المساحيق (2 ملغ) من سيمفاستاتين، لوفاستاتين، اتورفاستاتين، ازيتمايب، والأحماض الدهنية أوميغا-3 في 1 مل كحول 100 ٪.
- بعد الطرد المركزي لمدة 3 دقائق في 2,040 س ز، سوبيرناتانتس تحتوي على مخدرات في الفحص استخدام-
- وبالمثل، جعل فردياً من المساحيق (2 ملغ) فلوفاستاتين، rosuvastatin، النياسين، وفي 1 مل مياه لجعل حل أسهم 2 مغ/مل فايبرات.
- بعد الطرد المركزي لمدة 3 دقائق في 2,040 س ز، استخدم supernatants تحتوي على مخدرات في مقايسة الصفيف البلاك.
2. اللوحة "الصفيف المقايسة" "تشكيل جزيئات الكولسترول في المختبر" فحص
- استخدام الكيمياء محلل-1 (انظر الجدول للمواد) لإعداد المقايسة الصفيف اللوحة لتشكيل جزيئات الكولسترول. القيام الفحص في قاع جولة، ملزمة البروتين المنخفض 96-جيدا لوحة باستخدام الكواشف أعدت في القسم 1. المحافظة على حجم الرد النهائي في كل بئر في 200 ميليلتر وإجراء كافة الاختبارات في ثلاث نسخ.
- أولاً، تحميل 194.5 ميليلتر من الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) لكل بئر.
- لكل منها أيضا، إضافة 2.5 ميليلتر (5 ميكروغرام) لكل حل العقاقير الخافضة للدهون ويهز لوحة لمدة 30 ثانية بوضعه على لوحة محلل-1 رد فعل الكيمياء شكل موحد مزيج المخدرات في حل. يتم إضافة أي دواء لعينات مراقبة سلبية.
- أخيرا، إضافة 2 ميليلتر (2 ميكروغرام) الكوليسترول المسمى الفلورسنت الحل الكلي لكل بئر ويهز لوحة لمدة 30 ثانية بوضعه على لوحة الكيمياء رد فعل محلل-1.
- احتضان لوحة على شاكر مختبر ح 2 عند 37 درجة مئوية و 200 لفة في الدقيقة-
- بعد الحضانة، الحصول على صور الجسيمات بالتصوير التدفق الخلوي-
3. التقاط "الصور من الكوليسترول الجسيمات باستخدام التصوير التدفق الخلوي"
- فتح القالب اقتناء البيانات لتحميل إعدادات الأداة الصحيحة. انقر فوق " الملف "، ثم حدد " "فتح قالب" … " وحدد ملف القالب.
- انقر فوق " تحميل فلوش، قفل، " بإعداد الصك لتحميل عينة.
- عند " "تحميل عينة" " يفتح مربع الحوار، انقر فوق " موافق " لتحميل 50 ميليلتر من العينات من كل أعدادا جيدا في القسم 2 إلى سيتوميتير تدفق التصوير. انقر
- " تشغيل | الإعداد " لعرض الجسيمات في مجال التصوير في الوقت الحقيقي- انقر فوق
- عند الجسيمات في مجال التصوير في تركيز جيد، " تشغيل | الحصول على " للحصول على صور لكل كائن في نفس الوقت بطريقة الفائق لحقل الظلام (الجانب مبعثر/SSC) وحقل مشرق (BF) والفلورية الخضراء والأسفار الصفراء-
- كرر الخطوتين 3.2 3.5 للحصول على جسيمات 5,000-10,000 من كل عينة.
- تحليل جميع ملفات الصور raw باستخدام برمجيات تحليل الصور لتحديد كثافة fluorescence الكائن والاختلافات المورفولوجية.
- انقر فوق " أدوات " الموجود في الجزء العلوي من البرنامج تحليل الصورة، ثم حدد " "ملفات البيانات دفعة" " من القائمة المنسدلة، الذي سيفتح " دفعات " نافذة.
- في " دفعات " النافذة، انقر فوق " "إضافة دفعة" " زر، مما سيفتح " تعريف دفعة " نافذة.
- في " تعريف دفعة " النافذة، انقر فوق " "إضافة ملفات" " الزر وحدد ملفات الصور raw، انقر فوق " قالب " الزر وحدد ملف قالب تحليل البيانات المناسبة، ثم حدد " موافق " و " "تقديم دفعات" " للبدء في تجهيز وتحليل ملفات الصور raw.
4. اللوحة "الصفيف مقايسة على أساس التقييم للدهون" خفض "تأثير المخدرات" على "تنقية جزيئات الكوليسترول"
- كما هو موضح في الخطوة 2، 1، إجراء المقايسة تشكيل جزيئات الكولسترول المنقي VLDL LDL و HDL البروتينات الدهنية/الجسيمات باستخدام. إجراء المقايسة الصفيف اللوحة في صفيحة 96-جيدا-
- أولاً، تحميل جميع الآبار مع برنامج تلفزيوني؛ واستخدام وحدة تخزين نهائي 200 ميليلتر لكل بئر.
- للمراقبة السلبية، إضافة 4 ميكروغرام VLDL، LDL، أو الحميد البروتينات/جزيئات منفردة في كل جيدا دون المخدرات ويهز لوحة لمدة 30 س.
- لدراسة أثر العقاقير الخافضة للدهون، إضافة 4 ميكروغرام VLDL، LDL، أو الحميد البروتينات/جزيئات منفردة لكل جيد ويهز لوحة لمدة 30 س.
- لآبار أضيف مع ميكروغرام 4 VLDL LDL أو الكوليسترول الجيد، إضافة 2.5 ميليلتر (5 ميكروغرام) ازيتمايب، لوفاستاتين، سيمفاستاتين، أو النياسين الحل ويهز لوحة لمدة 30 ثانية بوضعه في الكيمياء محلل-1.
- أخيرا، إضافة 2 ميليلتر (2 ميكروغرام) الكوليسترول المسمى fluorescence الحل الكلي لجميع الآبار ويهز لوحة لمدة 30 ثانية بوضعه على لوحة الكيمياء رد فعل محلل-1.
- احتضان لوحة ح 2 في شاكر مختبر عند 37 درجة مئوية و 200 لفة في الدقيقة-
- الحصول على العينات باستخدام التصوير التدفق الخلوي بعد الخطوات 3.1 3.5.
- تحليل ملفات الصور raw باستخدام برنامج تحليل الصور كما هو موضح في الخطوة 3، 7.
- في قالب التحليل، استخدام نظام النابضة التالية لتحديد الفئات السكانية الفرعية جزيئات الكولسترول.
- على قطعة من قناة خضراء مشبعة بكسل العد محور (س) وقناة الحقل المظلم رفض العد بكسل المشبعة المحور (ص)، الكائنات مع واحد أو أكثر بكسل المشبعة في قناة أما.
- مؤامرة الكائنات/الجسيمات دون مشبعة بكسل باستخدام قناة الأخضر كثافة محور (س) وكثافة التعاون بين بلدان الجنوب (المحور الصادي): كائنات تقع في واحدة من المناطق الثلاث (VLDL LDL, HDL) على أساس قناة الأخضر وكثافة التعاون بين بلدان الجنوب-
ملاحظة: هذه البوابات تم إنشاؤها استناداً إلى البيانات المستمدة من تجارب التحكم القيام باستخدام المنقي VLDL LDL و HDL الجسيمات/البروتينات دون المخدرات-
- لتحديد مدى تأثير العقاقير الخافضة للدهون لكل عينة، حساب تركيزات الجسيمات مجموع البروتين الدهني، فضلا عن النسبة المئوية لكل يتدنى (VLDL LDL, HDL) كما هو موضح في الخطوة 6، 5-
- حساب الجسيمات تركيزات (الجسيمات/mL) باستخدام المعادلة التالية:
ملاحظة: VLDL والكولسترول الحميد النابضة المناطق في الأسفار دوت-المؤامرة كشف ~ 80% من هذه الفئات السكانية الفرعية الخاصة بكل منها، وما تبقى ~ 20 ٪ الجسيمات تتداخل مع مناطق أخرى النابضة.
- حساب الجسيمات تركيزات (الجسيمات/mL) باستخدام المعادلة التالية:
5. قياس تركيزات "المادة الدهنية" في "عينات مصلية"
- لتحديد تركيزات الكوليسترول الجيد والكوليسترول، LDL والشحوم بالكيمياء محلل-2، استخدام عينات مصل الدم التي تم الحصول عليها من المواضيع العادية ودسليبيدميا مطابقة العمر.
- تحديد تركيز غير طبيعي الحميد والكوليسترول، LDL والشحوم استناداً إلى تركزها المحددة خارج نطاق القيم المرجعية العليا والسفلي في عينات مصلية.
- اتبع التوصيات القيمة المرجعية العاديةدائرة التنمية الاقتصادية من قبل الشركة المصنعة لكاشف: نسبة الكولسترول في الدم (4-200 ملغ/دل) والحميد (3.0-65 ملغ/دل)، LDL (4-100 مغ/دل) والشحوم (9-200 ملغ/دل).
- تحديد عينات المصل الذي يحتوي على قيمة غير طبيعية، أما أقل من القيمة المرجعية أقل أو أعلى مرجع أعلى قيمة الكولسترول والدهون الثلاثية، واستخدامها للفرز في وجود وعدم وجود الأدوية الخافضة للدهون.
6. تحليل "تأثير المخدرات" على "تكوين جزيئات الكولسترول" في "عينات مصلية"
- استخدام الكيمياء-1 محلل لإعداد المقايسة الصفيف اللوحة لتشكيل جزيئات الكولسترول في عينات مصل الدم. أداء المقايسة في قاع جولة، منخفضة البروتين ملزمة لوحة 96-جيدا. استخدام وحدة تخزين رد نهائي من 200 ميليلتر/جيدا وإجراء كافة الاختبارات في ثلاث نسخ.
- إعداد اللوحة عن طريق تحميل الكواشف بطريقة متدرجة.
- إعداد الآبار التحكم.
- ميليلتر 193 تحميل لبرنامج تلفزيوني لكل بئر.
- إضافة مصل المريض 2.5% (v/v) (عينة مصل واحدة فقط كل بئر) ويهز لوحة 30 s بوضعه على لوحة رد فعل محلل الكيمياء.
- إضافة 2 ميليلتر (2 ميكروغرام) من الأسفار المسماة الكولسترول تجميع الحل في كل بئر ويهز لوحة 30 s بوضعه على لوحة كيمياء رد فعل محلل-1-
- إعداد الآبار مع المخدرات-
- ميليلتر 191 تحميل لبرنامج تلفزيوني لكل بئر.
- إضافة مصل المريض 2.5% (v/v) (عينة مصل واحدة فقط كل بئر) ويهز اللوحة ل 30 s بوضعه على لوحة كيمياء رد فعل محلل-1- باستثناء
- إضافة 2 ميليلتر ازيتمايب، لوفاستاتين، سيمفاستاتين أو النياسين الحل (4 ميكروغرام) لجميع الآبار آبار المراقبة السلبية. إضافة واحد فقط من المخدرات كل بئر ويهز لوحة 30 s بوضعه على لوحة محلل-1 رد فعل كيمياء.
- إضافة 2 ميليلتر من الأسفار المسماة الكولسترول تجميع الحل (2 ميكروغرام) في كل بئر ويهز لوحة لمدة 30 ثانية بوضعه على لوحة الكيمياء رد فعل محلل-1.
- تحميل المخدرات إلا بعد جميع الآبار (التحكم والمعالجة بالعقاقير) كانت محملة على عينات المصل كل منها، وإضافة الكوليسترول المسمى fluorescence في نهاية هذه الخطوة-
- احتضان لوحة ح 2 في شاكر مختبر عند 37 درجة مئوية و 200 لفة في الدقيقة-
- الحصول على العينات من التصوير cytometer تدفق بعد الإعدادات الموضحة في الخطوات 3.1 3.6.
- باستخدام الصورة تحليل البرامج لمعالجة كافة ملفات الصور باستخدام نفس القالب كما هو موضح في الخطوات 3.7 المجموعة.
- القيام بتحليل البيانات عن طريق رسم غيتس على الأرض كما هو موضح في الخطوات 4.5 و 4.6.
- لتحديد المحتوى الدهني لخفض المخدرات التأثير/الاستجابة (منخفضة ومتوسطة وعالية) لكل عينة، حساب تركيز الجسيمات مجموع البروتين الدهني، فضلا عن النسبة المئوية لمجموع الجسيمات ويتألف من VLDL LDL و HDL الفئات السكانية الفرعية.
- مؤامرة سكان VLDL LDL والكوليسترول الجيد في الرسم بياني الكائن ' s مشرق حقل الصورة، والعرض مطروحاً من طول (الطول-العرض)، وبوابة إلى مناطق أما كروي أو الخطية: الكائنات مع (الطول-العرض) ≤ 2 ميكرومتر تندرج المنطقة كروي لحساب النسبة المئوية من كروي وخطية على شكل جسيمات.
- مقارنة النسبة المئوية كروي خطية على شكل LDL و HDL الكولسترول الجزيئات وحددت لكل عينة المصل المحتضنة مع أو بدون كل المخدرات. من بين ثلاث قيم تم الحصول عليها لكل عينة المصل، قبول نسبة كروي وخطية على شكل جسيمات LDL و HDL التي تقع في نطاق ±2 التنمية المستدامة لتحديد تأثير المخدرات-
Representative Results
اللوحة الصفيف مقايسة على أساس تحليل الدهون لخفض آثار المخدرات على تشكيل جزيئات الكولسترول:
لتقييم تأثير statins في تحوير مورفولوجيا جزيئات الكولسترول، المحتضنة المجاميع الكوليسترول المسمى الفلورية كانت منفردة مع وفاستاتين، سيمفاستاتين، اتورفاستاتين، rosuvastatin، وفلوفاستاتين في المخزن المؤقت. تم اقتناء جميع هذه العينات باستخدام التصوير التدفق الخلوي لالتقاط صور لجزيئات الكولسترول لتحليل التشكل كما هو مبين في الشكل 1 و الشكل 2. من المثير للاهتمام، تحليل أثر المخدرات على تكوين جزيئات الكولسترول في المخزن المؤقت أشار إلى أن لوفاستاتين وسيمفاستاتين واتورفاستاتين الحث على تشكيل عدد السكان غير متجانسة من جزيئات الكوليسترول عرض مختلفة الأحجام والأشكال، الشكل 3 ألف --ج. على العكس من ذلك، شكلت جزيئات الكولسترول حضور rosuvastatin, فلوفاستاتين, ومراقبة سلبية (بدون المخدرات) متجانسة في الشكل ومورفولوجيا كما هو موضح في الشكل 3d-f. وبالإضافة إلى ذلك، لوحظ أن لوفاستاتين وسيمفاستاتين واتورفاستاتين الناجمين عن تشكيل جزيئات الكولسترول نستعرض كلا مورفولوجيس حبلا كروي والخطي، بينما rosuvastatin وفلوفاستاتين الناجمين عن تشكيل الكوليسترول جسيمات مع مورفولوجيا كروي فقط. تم العثور على أثر statins على حفز تشكيل خيوط خطية حسب ترتيب % 16 لوفاستاتين و 2% سيمفاستاتين، و 0.2% اتورفاستاتين.
لمواصلة تقييم تأثير الأدوية الخافضة للدهون في تشكيل الجزيئات، المحتضنة المجاميع الكوليسترول المسمى الفلورية كانت منفردة مع ازيتمايب، فايبرات، والنياسين، والأحماض الدهنية أوميغا-3. كما لاحظ الستاتين، هذه الأدوية التي يسببها تشكيل جزيئات الكولسترول غير متجانسة الأحجام والأشكال كما هو معروض في الشكل 4a-د. فيما بينها، ازيتمايب التي يسببها التشكيل جزيئات الكولسترول نستعرض كلا مورفولوجيس حبلا كروي والخطي حين فايبرات، والنياسين، والأحماض الدهنية أوميغا-3 التي يسببها تشكيل جزيئات الكولسترول فقط على شكل كروي. وبناء على ذلك، كان أثر المخدرات على حبلا خطية على شكل تشكيل جزيئات الكولسترول حدود 3 في المائة بالنسبة ازيتمايب، 0% فايبرات، 0% والنياسين، و 0% للأحماض الدهنية أوميغا-3.
وكشف التحليل المورفولوجي كل الجسيمات الكولسترول حبلا كروي أو خطية على شكل تتألف من جسيمات أصغر عديدة مرتبطة معا. أحجام الجسيمات الفلورية الكولسترول كروي الإيجابية المحددة في نطاق 30 ~ 2 ميكرومتر2، بينما أحجام الجسيمات على شكل خطي في حدود 60 ~ 2 ميكرومتر2.
تحليل تأثير الأدوية الخافضة للدهون VLDL المنقي وجسيمات LDL:
لمواصلة النظر في تشكيل جزيئات الكولسترول حضور البروتينات الدهنية، المحتضنة المجاميع الكوليسترول المسمى الفلورسنت كانت منفردة مع المنقي VLDL LDL و HDL بروتينات/الجسيمات. وأظهرت النتائج، مقارنة بالحضانة مع جزيئات LDL والكوليسترول الجيد، أن المجاميع الكوليسترول المحتضنة مع VLDL بروتينات تسبب تشكيل عدد أكبر من جزيئات الكولسترول، الرقم 5. وباﻹضافة إلى ذلك، لوحظت الكسور الرئيسية اثنين من جزيئات الكولسترول في VLDL السكان مما يوحي بتحولها جزئيا إلى كسر LDL أثناء الاحتضان مع المجاميع الكوليسترول المسمى فلوري. تحليل صورة جسيمات يدل على وجود كروي (~ 97 في المائة) وجسيمات (~ 3%) على شكل خطي بين السكان VLDL LDL و HDL. هي النطاقات حجم جسيمات كروي ~ 2-30 ميكرون2، بينما يتراوح حجم الجسيمات الخطي هي ~ 2-60 ميكرومتر2.
لدراسة أثر العقاقير الخافضة للدهون على جزيئات المنقي، المحتضنة جسيمات LDL و VLDL كانت منفردة مع ازيتمايب، لوفاستاتين، سيمفاستاتين، والنياسين. كنتيجة لذلك، مقارنة بتجارب التحكم دون المخدرات، أثر المخدرات لوحظ في تكوين جزيئات VLDL كان أعلى في ازيتمايب، سيمفاستاتين، لوفاستاتين، والنياسين. جسيمات LDL المحتضنة مع المخدرات أظهرت جزء واحد كبير وأثر المخدرات التي يسببها على تشكيل الجزيئات كان أعلى في ازيتمايب، سيمفاستاتين، لوفاستاتين، والنياسين، الرقم 6.
تنويعات آثار المخدرات الخافضة للدهون في تغيير توزيع جزيئات الكولسترول في عينات مصل الدم:
وأجريت التجارب السابقة في حل المخزن المؤقت مع البروتينات الدهنية المنقي لتقييم تأثير المخدرات. ومن ثم، في الخطوة التالية، تم بحث فعالية الأدوية الخافضة للدهون في تكوين جزيئات الكولسترول استخدام 50 مصل عينات جمعت من مواضيع 25 مع دسليبيدميا والمواضيع العادية 25 سن مطابقة. وتم قياس الاستجابة المخدرات في كل عينة المصل استناداً إلى التغييرات في التشكيل الجانبي لتكوين جزيئات الكولسترول في وجود وعدم وجود الأدوية. في مقايسة الصفيف اللوحة، تم فحص كل عينة مصل ضد ازيتمايب، لوفاستاتين، سيمفاستاتين، والمخدرات والنياسين. وكشفت النتائج التفاوت بين هذه العقاقير في تحوير توزيع جزيئات VLDL LDL والكوليسترول الجيد في عينات مصل الدم، وبخاصة تأثيرها على خفض LDL وزيادة تكوين جزيئات الكولسترول الحميد. وترد في الشكل 7ثلاثة ممثلين لعينات مصلية دسليبيدميا نستعرض ردود فريدة من نوعها للأدوية الخافضة للدهون.
تحديد أثر المخدرات على تحوير مورفولوجية المصل المستمدة LDL وجزيئات الكوليسترول:
كشف تحليل النمط الظاهري جزيئات الكولسترول المستمدة من المصل وجود خيوط الخطي و VLDL على شكل كروي، LDL، والفئات السكانية الفرعية الحميد، مؤكدة بذلك مورفولوجيا مماثلة تم تحديدها في التجارب التي يؤديها سواء في المخزن المؤقت و مع جزيئات بروتين دهني المنقي كما هو موضح في الشكل 8. ومع ذلك، توزيع الجمهرات الفرعية جزيئات الكوليسترول على شكل كروي والخطي على نطاق واسع تباين بين دسليبيدميا ومطابقة سن المواضيع العادية. جدير بالذكر أن أظهرت فحوصات مراقبة أداؤها دون المخدرات الاختلافات في توزيع حبلا خطية على شكل جزيئات الكوليسترول LDL بين دسليبيدميا (يعني 2.0 في المائة)، ويقابل العمر العادي (المتوسط 1.3 في المائة) عينات المصل. وبالمثل، لوحظ زيادة مستوى حبلا خطية على شكل جزيئات الكولسترول الحميد في عينات دسليبيدميا (يعني من 18.3 في المائة) مقارنة العمر مطابقة عينات مصل الدم (يعني من 11.1 في المائة). في العلاقة، إجراء فحوصات حضور المخدرات في عينات مصلية دسليبيدميا أظهرت انخفاضا كبيرا في جزيئات تشكيل الكولسترول الحميد على شكل خطي سيمفاستاتين (متوسط 8.3 ٪)، ازيتمايب (يعني من 11.5%)، لوفاستاتين (متوسط نسبة 11.7 في المائة)، وأي تخفيض والنياسين (يعني من 18.3 في المائة). وبالإضافة إلى ذلك، لوحظ انخفاضا في تشكيل خطي جزيئات الكوليسترول LDL على شكل في عينات مصلية دسليبيدميا عندما المحتضنة مع الأدوية المعروضة في الجدول 1.
وعلاوة على ذلك، إجراء فحوصات حضور المخدرات في مراقبة مطابقة العمر المصل عصيدةوأظهرت ليه تخفيض كبير في الخطية على شكل جزيئات الكولسترول الحميد في سيمفاستاتين (يعني 5.0 في المائة)، ازيتمايب (يعني 8.2%)، لوفاستاتين (يعني 8.7 في المائة) والنياسين (متوسط 10.8 في المائة) كما هو مبين في الجدول 2. دسليبيدميا والمصل العادي السن مطابقة عينات العارضة المخدرات التي يسببها انخفاض خطية على شكل LDL و HDL الكولسترول الجسيمات وأظهرت زيادة نسبية في جزيئات الكولسترول على شكل كروي (البيانات لا تظهر).
الشكل 1: رسم تخطيطي يوضح عملية التصور في المختبر للتشكل جزيئات الكولسترول. (أ، ب) إضافة العقاقير الخافضة للدهون في عينات المخزن المؤقت أو المصل. (ج) إضافة المسمى fluorescence الكولسترول القابلة للذوبان المجاميع للعينات. (د) الحصول على العينات الناتجة عن تحليل الخصائص المورفولوجية لجزيئات الكولسترول غير قابلة للذوبان باستخدام التصوير التدفق الخلوي. تغيير حجم أشرطة = 10 ميكرون. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 2: تحديد مورفولوجيس مميزة اثنين من جزيئات الكوليسترول باستخدام التصوير التدفق الخلوي- () الجسيمات فصل في السكان الخطي أو كروي على أساس تحليل التكوينية للصور الميدانية مشرق. على وجه التحديد، دوت-المؤامرة "يعني ح التجانس" (المحور السيني) و "يعني ح الانتروبيا" (المحور الصادي) يحتوي على منطقتين بوابات للكشف عن كروي (أحمر) وحبلا خطية على شكل جزيئات الكوليسترول (أزرق). (ب) صور عرض مورفولوجيا الجسيمات على شكل كروي وحدد عدد السكان 1. (ج) صور حبلا الخطي على شكل جسيمات المحددة في السكان 2. (د) الرسم البياني عرض توزيع جميع جزيئات الكولسترول إيجابية فلورسنت المستخدمة لتحديد تركيز والفئات السكانية الفرعية. تغيير حجم أشرطة = 10 ميكرون. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 3: صورة صالات عرض تأثير statins في تحوير تشكيل جزيئات الكولسترول. يشير الحقل مشرق لمنطقة مماثلة لمنتدى التعاون الأمني في سيتوميتير تدفق التقليدية. قناة الأخضر يشير إلى انبعاث fluorescence اكتشفت في نانومتر 505-560، وقناة الصفراء تشير إلى انبعاث fluorescence اكتشفت في نانومتر 560-595. (أ-ه) صورة صالات عرض مورفولوجيا جزيئات الكولسترول تشكيل حضور لوفاستاتين، سيمفاستاتين، اتورفاستاتين، rosuvastatin، فلوفاستاتين، على التوالي. (و) تشكيل جزيئات الكولسترول في الغياب ستاتين (مراقبة سلبية). تغيير حجم أشرطة = 10 ميكرون. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4: إظهار التفاضلية تأثير الأدوية الخافضة للدهون في تحوير تشكيل جزيئات الكولسترول. (أ-د) صورة صالات عرض مورفولوجيا جزيئات الكولسترول تشكيل حضور ازيتمايب، النياسين، فايبرات، والأحماض الدهنية أوميغا-3، على التوالي. قناة الأخضر يشير إلى انبعاث fluorescence اكتشفت في نانومتر 505-560، وقناة الصفراء تشير إلى انبعاث fluorescence اكتشفت في نانومتر 560-595. تغيير حجم أشرطة = 10 ميكرون. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 5: تحليل VLDL LDL و HDL الكولسترول الجزيئات تشكيل في الغياب المخدرات- دوت-قطع: المحور السيني يعرض طائفة جزيئات الكوليسترول الكشف عنها في قناة الفلورية الخضراء (505-560 نانومتر) ويعرض المحور ص مبعثر الجانب. ويبين مناطق جزيئات VLDL LDL و HDL اكتشفت في الأسفار دوت-القطع النابضة. () تكوين جزيئات الكولسترول حضور VLDL المنقي. (ب) ممثل الصور من جزيئات VLDL. (ج) تكوين جزيئات الكولسترول حضور LDL المنقي. (د) ممثل الصور من جسيمات LDL. (ه) تشكيل جزيئات الكولسترول حضور الحميد المنقي. (و) ممثل الصور من جزيئات الكوليسترول الجيد. تغيير حجم أشرطة = 10 ميكرون. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 6: مما يدل على تأثير الدهن خفض المخدرات على تنقية جزيئات الكوليسترول LDL و VLDL. () VLDL جزيئات دون الدواء. (ب) VLDL جزيئات المحتضنة مع ازيتمايب. (ج) VLDL جزيئات المحتضنة مع وفاستاتين. (د) VLDL جزيئات المحتضنة مع سيمفاستاتين. (ﻫ) VLDL جزيئات المحتضنة مع النياسين. جسيمات (f) LDL المحتضنة دون الدواء. (ز) LDL الجسيمات المحتضنة مع ازيتمايب. (ح) LDL الجسيمات المحتضنة مع وفاستاتين. جسيمات (أنا) LDL المحتضنة مع سيمفاستاتين. (ي) LDL الجسيمات المحتضنة مع النياسين. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 7: Fluorescence دوت-قطع عرض تأثير تفاضلية دهن خفض المخدرات في تحوير VLDL LDL و HDL الكولسترول تشكيل الجسيمات في عينات مصلية. الصف العلوي، وفحص المصل 1 إظهار استجابة المخدرات المستوى المنخفض في زيادة 0 لتشكيل جزيئات الكوليسترول الجيد 15%؛ الصف الأوسط، فحص المصل 2 عرض المخدرات مستوى معتدل استجابة في زيادة 16 إلى 50% جسيمات HDL؛ الصف السفلي، وفحص المصل 3 تظهر استجابة المخدرات مستوى أعلى في زيادة 51 إلى جزيئات الكوليسترول الجيد 100%. (, f, k) عينات المصل دون استخدام العقاقير. (ب، ز، l) عينات مصلية المحتضنة مع ازيتمايب. (ج، ح، م) عينات مصلية المحتضنة مع وفاستاتين. (د، الأول، ن) عينات مصلية المحتضنة مع سيمفاستاتين. (ه، ي، س) عينات مصلية المحتضنة مع النياسين. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 8: صورة صالات عرض مورفولوجيا جزيئات الكولسترول المحددة في مصل الدم عينة 1- قناة الأخضر يعرض صوراً لانبعاث الأسفار من الجسيمات؛ الجانب مبعثر (قناة السماوي) يظهر صور الليزر الإثارة الخفيفة المنتشرة بالجسيمات. () الكوليسترول على شكل كروي وخطي جزيئات شكلت دون الدواء. (ب، ج، د، ه) وشكلت جزيئات الكولسترول حضور ازيتمايب، لوفاستاتين، سيمفاستاتين، النياسين، على التوالي. أشرطة مقياس= ميكرومتر 10- الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
| معرف المصل | دون المخدرات (التحكم) | مع ازيتمايب | مع وفاستاتين | مع سيمفاستاتين | مع النياسين | |||||
| جسيمات LDL الخطي، % | جسيمات HDL الخطي، % | جسيمات LDL الخطي، % | جسيمات HDL الخطي، % | جسيمات LDL الخطي، % | جسيمات HDL الخطي، % | جسيمات LDL الخطي، % | جسيمات HDL الخطي، % | جسيمات LDL الخطي، % | جسيمات HDL الخطي، % | |
| مسؤولات-01 | 1.73 | 45.2 | 0.81 | 18.1 | 0.61 | 16.1 | 0.59 | 13.9 | 2.26 | 33.6 |
| مسؤولات-02 | 2.86 | 35.9 | 1.26 | 30.9 | 1.27 | 22.7 | 0.73 | 15.2 | 3.03 | 37.7 |
| مسؤولات-03 | 2.04 | 35.8 | 0.87 | 4.82 | 1.02 | 4.14 | 0.36 | 3.06 | 0.45 | 9.57 |
| مسؤولات-04 | 2.56 | 32.9 | 1.15 | 21.8 | 1.12 | 18.6 | 0.77 | 17.2 | 3.37 | 36.5 |
| مسؤولات-05 | 0.42 | 29.2 | 0.24 | 5.62 | 0.22 | 8.72 | 0.16 | 9.91 | 0.35 | 22.2 |
| مسؤولات-06 | 1.8 | 28.1 | 0.4 | 16.8 | 0.62 | 15 | 0.42 | 9.27 | 2.28 | 38.4 |
| مسؤولات-07 | 1.8 | 26.5 | 0.85 | 10.5 | 1.18 | 19.9 | 0.62 | 7.32 | 1.29 | 23.4 |
| مسؤولات-08 | 0.98 | 22.8 | 0.86 | 7.28 | 1.55 | 10.2 | 0.14 | 5.98 | 0.59 | 13.3 بوصة |
| مسؤولات-09 | 3.87 | 22.1 | 1.98 | 9.56 | 1.87 | 10.3 | 1.46 | 7.96 | 2.86 | 9.88 |
| مسؤولات-10 | 4.46 | 21.9 | 2.57 | 13.6 | 4.04 | 17.1 | 2.28 | 11.9 | 0.71 | 25.7 |
| مسؤولات-11 | 1.57 | 19.2 | 1.15 | 9.24 | 1.37 | 6.98 | 0.74 | 5.03 | 1.37 | 16 |
| مسؤولات-12 | 1.06 | 16.7 | 0.66 | 4.38 | 0.7 | 4.74 | 0.99 | 6.36 | 1.14 | 4.73 |
| مسؤولات-13 | 4.85 | 16.6 | 1.28 | 30.4 | 1.4 | 32.6 | 0.8 | 16.6 | 4.02 | 31 |
| مسؤولات-14 | 2.08 | 16 | 0.68 | مقاس 15.4 بوصة | 0.64 | 16.5 | 1.97 | 10.2 | 1.25 | 20.11 |
| مسؤولات-15 | 1.5 | 11.9 | 1.14 | 13.3 بوصة | 1.21 | 11.4 | 0.8 | 6.12 | 1.38 | 4.59 |
| مسؤولات-16 | 1.82 | 10.4 | 2.04 | 9.59 | 1.24 | 5.62 | 0.91 | 5.38 | 1.31 | 7.61 |
| مسؤولات-17 | 1.05 | 10.3 | 1.02 | 4.7 | 1.78 | 15.1 | 0.93 | 7.81 | 1.27 | 13 |
| مسؤولات-18 | 1.11 | 8.76 | 0.54 | 3.68 | 0.61 | 3.51 | 1.01 | 5.03 | 1.02 | 6.69 |
| مسؤولات-19 | 1 | 8.52 | 0.75 | 6.67 | 0.76 | 5.86 | 0.91 | 8.36 | 1.22 | 11.9 |
| مسؤولات-20 | 3.54 | 7.92 | 3.78 | 12 | 3.56 | 5.81 | 3.28 | 8.28 | 3.44 | 12.3 |
| مسؤولات-21 | 1.88 | 7.69 | 2.12 | 11.4 | 1.73 | 9.54 | 1.77 | 8.34 | 2.32 | 16.7 |
| مسؤولات-22 | 1.64 | 7.17 | 0.35 | 5.75 | 0.56 | 13.2 | 0.14 | 4.33 | 1.23 | 17.8 |
| مسؤولات-23 | 1.54 | 6.27 | 1.25 | 7.24 | 1.02 | 6.12 | 0.73 | 3.58 | 1.42 | 6.69 |
| مسؤولات-24 | 0.53 | 6.22 | 0.52 | 4.49 | 0.91 | 5.57 | 0.54 | 4.01 | 0.65 | 10.5 |
| مسؤولات-25 | 2.97 | 5.1 | 1.59 | 11 | 1.88 | 9 | 1.03 | 6.54 | 2.61 | 29.1 |
الجدول 1: فحص دسليبيدميا عينات المصل في مقايسة الصفيف البلاك إظهار تأثير الأدوية الخافضة للدهون التفاضلية. بالمقارنة مع عناصر التحكم بدون المخدرات (الأعمدة 2، 3)، عينات مصلية المحتضنة مع ازيتمايب (الأعمدة 4، 5)، لوفاستاتين (أعمدة 6، 7)، سيمفاستاتين (أعمدة 8، 9)، والاختلافات والنياسين (الأعمدة 10، 11) أظهرت على حمل الكوليسترول LDL والكوليسترول الجيد على شكل خطي تشكيل الجسيمات.
| معرف المصل | دون المخدرات | مع ازيتمايب | مع وفاستاتين | مع سيمفاستاتين | مع النياسين | |||||
| جسيمات LDL الخطي، % | جسيمات HDL الخطي، % | جسيمات LDL الخطي، % | جسيمات HDL الخطي، % | جسيمات LDL الخطي، % | جسيمات HDL الخطي، % | جسيمات LDL الخطي، % | جسيمات HDL الخطي، % | جسيمات LDL الخطي، % | جسيمات HDL الخطي، % | |
| تستخدم-01 | 2.05 | 26.8 | 0.62 | 11.9 | 0.56 | 16.9 | 0.52 | 9.28 | 1.4 | 11.9 |
| تستخدم-02 | 1.35 | 26.3 | 1.68 | 21.8 | 2.59 | 23.6 | 0.79 | 6.92 | 2.16 | 29.7 |
| تستخدم-03 | 2.4 | |||||||||
الجدول 2: فحص عينات مصلية مراقبة مطابقة العمر في مقايسة الصفيف البلاك إظهار تأثير الأدوية الخافضة للدهون التفاضلية. بالمقارنة مع عناصر التحكم بدون المخدرات (الأعمدة 2، 3)، عينات مصلية المحتضنة مع ازيتمايب (الأعمدة 4، 5)، لوفاستاتين (أعمدة 6، 7)، سيمفاستاتين (أعمدة 8، 9)، والاختلافات والنياسين (الأعمدة 10، 11) أظهرت على حمل الكوليسترول LDL والكوليسترول الجيد على شكل خطي تشكيل الجسيمات.
Discussion
وبصفة عامة، تتحدد أساسا بالتوزيع والخصائص الوظيفية لجزيئات الكوليسترول VLDL LDL والكوليسترول الجيد في الدورة الدموية الخلوية الأيضية، والوراثية، والأوبئة، والبلازما العوامل22،23. في هذه الدراسة، بدراسة آثار تعديل المادة الدهنية وكشف المخدرات في المخزن المؤقت لأن المخدرات محبتين العالية مثل ازيتمايب، لوفاستاتين، سيمفاستاتين، واتورفاستاتين الناجمين عن تعقيد مستوى أعلى في مورفولوجية جزيئات الكوليسترول مقارنة بمستوى أقل لاحظت مع المخدرات rosuvastatin وفلوفاستاتين ماء عالية. هذه النتائج في اتفاق جيد مع دراستنا السابقة تصف تأثير غير الانزيمية إليه على أساس من الستاتين في تحوير تشكيل جزيئات الكوليسترول LDL والكوليسترول الجيد في المخزن المؤقت والمصل عينات21. وبناء على ذلك، كشفت النتائج من هذه الدراسة إليه غير الانزيمية للعمل ازيتمايب، النياسين، فايبرات، والأحماض الدهنية أوميغا-3 الأدوية التي قد تلعب دوراً مباشرا في تحوير تشكيل جزيئات الكولسترول. فمن الممكن أن التفاعلات بين الأدوية والمجاميع الكوليسترول يؤدي إلى جمعية جزيئات الكوليسترول كبيرة الحجم التي هي 2-60 ميكرومتر2، نستعرض حبلا كروي والخطي مورفولوجيس.
وعلاوة على ذلك، توحي النتائج التي تم الحصول عليها باستخدام جزيئات بروتين دهني المنقي التفاعلات بين مجاميع الكولسترول وعوامل البلازما بما في ذلك البروتينات VLDL LDL و HDL التي قد تغير من التراكيب والخصائص المورفولوجية للكوليسترول جسيمات. أشارت نتائج العلاج المخدرات التي تنطوي على جزيئات بروتين دهني المنقي إلى تأثير المخدرات مستوى أعلى في تكوين جزيئات VLDL مقارنة بأثرها يحتفل به في تكوين جزيئات الكوليسترول LDL. واستخدمت المخدرات لوفاستاتين، سيمفاستاتين، وازيتمايب كالمخدرات المحترفين وعلى جرعات في الاختبارات قد تكون أعلى من التركيزات الفسيولوجية.
من المثير للاهتمام، فحص عينات مصلية وأظهرت وجود اختلافات تأثير المخدرات على تغيير ملفات التعريف لتكوين جزيئات الكوليسترول VLDL LDL و HDL، وبخاصة تأثيرها على التشكيلات من الخطي على شكل جسيمات LDL و HDL. هذه الأدوية الناجم عن التخفيض في خطية على شكل تشكيل جزيئات الكوليسترول LDL والكوليسترول الجيد في دسليبيدميا وعينات المصل العادي مطابقة العمر. آثار المخدرات لوحظ على الحد من تكوين جزيئات على شكل خطي كان أعلى في سيمفاستاتين، ازيتمايب، لوفاستاتين، والنياسين. وتقترح تحديد جزيئات الكولسترول مع مورفولوجيس حبلا كروي والخطي في عينات المصل العادي ودسليبيدميا أن الجزيئات مع مورفولوجيس مماثلة قد تشكل في ظروف في فيفو . وحددت الدراسات السابقة وجود القرص وبلورات الكوليسترول مثل إبرة في لويحات تصلب الشرايين في الإنسان، والذين--/-- ولدلر--/-- الفئران نماذج24،،من2526 ،،من2728.
توجد جسيمات HDL المتداولة في الدم كخليط غير متجانس ومستوى الجزيئات الصغيرة والكبيرة الحجم الحميد جنبا إلى جنب مع الأنشطة الفنية من العوامل الهامة التي تمارس تأثيرها واقية من أمراض القلب عن طريق النقل عكس الكوليسترول مسار29،30. وقد أبرزت الدراسات الحديثة أهمية تحديد اﻷفخاذ الجسيمات الكولسترول الحميد لتوضيح دورها في متعددة الوظائف البيولوجية مثل efflux الكولسترول، المضادة التهاب ومكافحة الخثاريه ومضادات الأكسدة31 . وبالإضافة إلى ذلك، قد أفاد عدد من الدراسات أثر المعالجة الخافضة للدهون في زيادة منخفض إلى متوسط مستوى الكوليسترول الجيد في البلازما1،5،21. وبناء على ذلك، توفر النتائج من هذه الدراسة رؤى جديدة على الخصائص المورفولوجية لجزيئات الكولسترول. جدير بالذكر أن الكشف عن مستوى أعلى من الجسيمات الكولسترول الحميد على شكل الخطي في عينات مصل الدم من مواضيع دسليبيدميا يوحي بأنها قد تكون العلامات البيولوجية يمكن الاعتماد عليها لتشخيص وتقييم الآثار المترتبة على تعديل المادة الدهنية المخدرات في المرضى. ومع ذلك، لا تزال التحقيقات المطلوبة باستخدام عينات سريرية كبيرة لفهم أفضل لجزيئات الكولسترول مع مورفولوجيس متميزة وارتباطها بالرسوم التعويضية.
في مقايسة الصفيف اللوحة لدراسة أثر المخدرات على جمعية جزيئات الكولسترول، استخدمنا 2 ميكروغرام من الأسفار المسماة المجاميع الكوليسترول والمخدرات µgof 5 كل سبب: المخدرات (1) ربط تنافسية لكل الأسفار المسماة الكولسترول و الدهون الذاتية الموجودة في عينات مصل الدم؛ (2) من كل عينة، اكتسبنا جزيئات الكوليسترول 5,000 إلى 10,000 التي يتم تجميعها في أحجام كبيرة وأشكال تتراوح بين 60 ~ 2 μ2؛ (3) لاحظنا تباينات واسعة للاستجابة للمخدرات بين عينات مصلية المحتضنة مع المخدرات (جرعات 300 نغ إلى 5 ميكروغرام) و ~ 1-5% منهم المحتضنة بجرعات عالية لم تظهر أي تغييرات يمكن اكتشافها في التشكيل الجانبي لتكوين جزيئات الكولسترول؛ و (4) التفاعل بين المجاميع الكوليسترول والأدوية الخافضة للدهون هو توسط عملية غير الانزيمية. ومن ثم فقد تكون تركيزات الكواشف المستخدمة في الفحص أعلى من مستواها الفسيولوجية.
وفي الختام، وقد أثبتنا بنجاح مزايا في المختبر التصوير الأسلوب الموصوفة في هذه الدراسة لتحديد تأثير مجموعة واسعة من الأدوية الخافضة للدهون على تحوير مورفولوجيا وتكوين الكوليسترول جسيمات. نهج تصور والتحديد الكمي مورفولوجية جزيئات الدهن باستخدام كوكبة من خوارزميات تحليل الصورة قد تساعد تشخيص تصلب الشرايين وتقييم نتائج العلاج لخفض الدهون في المرضى.
Disclosures
الدكتور ماداسامي تلقي منحة الدعم من بلاكسجين، لجنة التفاوض الحكومية الدولية ومصلحة مالية متنافسة. مؤلفين آخرين قد لا يوجد تضارب المصالح المالية الكشف عن.
Acknowledgments
تم تمويل هذا العمل من البحوث بلاكسجين المنح الممنوحة إلى SM (PLX-1008). ونحن نشكر بالو ألتو معهد بحوث مؤسسة البحوث الطبية لجمع عينات من مصل الدم من مواضيع تصلب الشرايين تحت موافقة مجلس الهجرة واللاجئين.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| TopFluor fluorescent cholesterol | Avanti Polar lipids | store 100 µl aliquots at -20 °C | |
| simvastatin (pro-drug) | Cayman Chemicals | store 100 µl aliquots at -20 °C | |
| lovastatin (pro-drug) | Cayman Chemicals | store 100 µl aliquots at -20 °C | |
| rosuvastatin | Cayman Chemicals | store 100 µl aliquots at -20 °C | |
| atorvastatin | Cayman Chemicals | store 100 µl aliquots at -20 °C | |
| fluvastatin | Cayman Chemicals | store 100 µl aliquots at -20 °C | |
| ezetimibe (pro-drug) | Cayman Chemicals | store 100 µl aliquots at -20 °C | |
| Niacin | MilliporeSigma | store 100 µl aliquots at -20 °C | |
| fibrate | MilliporeSigma | store 100 µl aliquots at -20 °C | |
| omega-3 fatty acid | MilliporeSigma | store 100 µl aliquots at -20 °C | |
| purified VLDL proteins/particles | Lee Bio | ||
| purified LDL proteins/particles | Lee Bio | ||
| purified HDL proteins/particles | Lee Bio | ||
| Human age-matched serum | Dx Biosamples | ||
| Human atherosclerosis serum | Bioserve | ||
| Human normal serum | Stanford Blood center | ||
| LDL measurement reagent pack | Roche Diangostics | ||
| HDL measurement reagent pack | Roche Diangostics | ||
| Total cholesterol measurment | Roche Diangostics | ||
| 96-well microtitre plates | |||
| Triglycerides measurement | Roche Diangostics | ||
| Amnis Imaging Flow cytometer | Amnis Inc | ||
| IDEAS image analysing software | Amnis Inc | ||
| Chemistry Analyzer-1, ChemWel 2902 | Awarness Technology | ||
| Chemistry Analyzer-2, Intergra 400 | Roche Diangostics |
References
- Pahan, K. Lipid-lowering drugs. Cell Mol Life Sci. 63, 1165-1178 (2006).
- Laforest, L., et al. Prevalence of low high-density lipoprotein cholesterol and hypertriglyceridaemia in patients treated with hypolipidaemic drugs. Arch Cardiovasc Dis. 102, 43-50 (2009).
- Roberts, W. C. Preventing and arresting coronary atherosclerosis. Am Heart J. 130, 580-600 (1995).
- Goldstein, J. L., Brown, M. S. A century of cholesterol and coronaries: from plaques to genes to statins. Cell. 16, 161-172 (2015).
- Drexel, H. Statins, fibrates, nicotinic acid, cholesterol absorption inhibitors, anion-exchange resins, omega-3 fatty acids: which drugs for which patients? Fundam Clin Pharmacol. 23, 687-692 (2009).
- Camelia, S., Anca, S. Statins: Mechanism of action and effects. J.Cell.Mol.Med. 5, 378-387 (2001).
- Schaefer, E. J., et al. Comparisons of effects of statins (atorvastatin, fluvastatin, lovastatin, pravastatin, and simvastatin) on fasting and postprandial lipoproteins in patients with coronary heart disease versus control subjects. Am J Cardiol. 93, 31-39 (2004).
- Meyers, C. D., Kamanna, V. S., Kashyap, M. L. Niacin therapy in atherosclerosis. Curr Opin in Lipid. 15, 659-665 (2004).
- Phan, B. A., Dayspringm, T. D., Toth, P. P. Ezetimibe therapy: mechanism of action and clinical update. Vasc Health Risk Mana. 8, 415-427 (2012).
- Leitersdorf, E., Fruchart, J. C. Mechanism of action of fibrates on lipid and lipoprotein metabolism. Circulation. 98, 2088-2093 (1998).
- Backes, J., Anzalone, D., Hilleman, D., Catini, J. The clinical relevance of omega-3 fatty acids in the management of hypertriglyceridemia. Lipids Health Dis. 15, 118 (2016).
- Davidson, M. H. Clinical Significance of Statin Pleiotropic Effects Hypotheses Versus Evidence. Circulation. 111, 2280-2281 (2005).
- Chinetti-Gbaguidi, G., Fruchart, J. C., Staels, B. Pleiotropic effects of fibrates. Curr Atheroscler Rep. 7, 396-401 (2005).
- McTaggart, F., Jones, P. Effects of Statins on High-Density Lipoproteins: A Potential Contribution to Cardiovascular Benefit Effects of Statins on High-Density Lipoproteins: A Potential Contribution to Cardiovascular Benefit. CardiovascDrugs Ther. 22, 321-338 (2008).
- Quehenberger, O., et al. The Human Plasma Lipidome. N Engl J Med. 365, 1812-1823 (2011).
- Lund-Katz, S., et al. Mechanisms responsible for the compositional heterogeneity of nascent high density lipoprotein. J. Biol Chem. 288, 23150-23160 (2013).
- Krauss, R. M. Lipoprotein subfractions and cardiovascular disease risk. Curr Opin Lipidol. 21, 305-311 (2010).
- Krauss, R. M., Burke, D. J. Identification of multiple subclasses of plasma low density lipoproteins in normal humans. J Lipid Res. 23, 97-104 (1982).
- Rosenson, R. S., et al. HDL measures, particle heterogeneity, proposed nomenclature, and relation to atherosclerotic cardiovascular Events. Clinic Chemi. 57, 392-410 (2011).
- Madasamy, S., et al. Plaque array method and proteomics-based identification of biomarkers from Alzheimer's disease serum. Clin Chim Acta. 441, 79-85 (2015).
- Madasamy, S., et al. Nonenzymatic Mechanism of Statins in Modulating Cholesterol Particles Formation. Am J Cardiol. 118, 1187-1191 (2016).
- Peter, O. K. Clinical relevance of the biochemical, metabolic, and genetic factors that influence low-density lipoprotein heterogeneity. Am J Cardiol. 90, 30-47 (2002).
- Weissglas-Volkov, D., Pajukanta, P. Genetic causes of high and low serum HDL-cholesterol. J Lipid Res. 51, 2032-2057 (2010).
- Abela, G. S. Effect of statins on cholesterol crystallization and atherosclerotic plaque stabilization. Am J Cardiol. 107, 1710-1717 (2011).
- Nidorf, S. M., Eikelboom, J. W., Thompson, P. L. Targeting cholesterol crystal-induced inflammation for the secondary prevention of cardiovascular disease. Cardiovasc Pharmacol Ther. 19, 45-52 (2014).
- Thacker, S. G., Zarzour, A., Chen,, et al. High density lipoprotein reduces inflammation from cholesterol crystals by inhibiting inflammasome activation. Immunol. 149, 306-319 (2016).
- Kim, S. H., Lee, E. S., Lee, J. Y., et al. Multiplex coherent anti-stokes Raman Spectroscopy images intact atheromatous lesions and concomitantly identifies distinct chemical profiles of atherosclerotic lipids. Circ Res. 106, 1332-1341 (2010).
- Lim, R. S., Suhalim, J. L., Miyazaki-Anzai, S., et al. Identification of cholesterol crystals in plaques of atherosclerotic mice using hyperspectral CARS imaging. J Lipid Res. 52, 2177-2186 (2011).
- Rothblat, G. H., Phillips, M. C. High-density lipoprotein heterogeneity and function in reverse cholesterol transport. Curr Opin Lipidol. 21, 229-238 (2011).
- Kontush, A. HDL particle number and size as predictors of cardiovascular disease. Front in Pharmacol. , (2015).
- Karathanasis, S. K., Freeman, L. A., Gordon, S. M., Remaley, A. T. The changing face of HDL and the best way to measure it. Clin. Chem. 63, 196-210 (2017).
