Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Differentiella effekter av lipidsänkande läkemedel i modulerande morfologi av kolesterol partiklar

Published: November 10, 2017 doi: 10.3791/56596

Summary

Syftet med denna studie var att utvärdera i vitro lipidsänkande läkemedelseffekter i modulerande morfologi av kolesterol partiklar. Jämförelsen av lipidsänkande läkemedel visade variationer i deras effekt i modulerande de morfologiska egenskaperna av kolesterol partiklar.

Abstract

Behandling av dyslipidemi patienter med lipidsänkande läkemedel leder till en betydande minskning av low-density lipoprotein (LDL) nivå och en låg till måttlig nivå av ökning av high-density lipoprotein (HDL) kolesterol i plasma. Dock är en möjlig roll av dessa läkemedel att förändra morfologi och kolesterol partiklarnas bristfällig. Här beskriver vi i vitro utvärdering av lipidsänkande läkemedelseffekter i modulerande morfologiska egenskaper av kolesterol partiklar med metoden plack array i kombination med imaging flödescytometri. Bild analyser av kolesterol partiklarna indikerade att lovastatin, simvastatin, ezetimib och atorvastatin inducerar bildandet av både klotformig och linjära strand-formade partiklar, medan niacin, fibrater, fluvastatin och rosuvastatin framkalla den bildandet av endast klotformig-formade partiklar. Nästa, renat mycket low-density lipoprotein (VLDL) och LDL-partiklar som inkuberas med dessa läkemedel visade förändringar i morfologi och bild textur av kolesterol partiklar subpopulations. Dessutom visade screening av 50 serumprover förekomst av en högre nivå av linjära formade HDL kolesterol partiklar hos försökspersoner med dyslipidemi (genomsnitt 18,3%) jämfört med åldersmatchade normala (i genomsnitt 11,1%) proverna. Vi observerade också betydande variationer i lipidsänkande läkemedelseffekter på att minska linjära formade LDL och HDL kolesterol partiklar bildas i serumprov. Dessa fynd tyder på att lipidsänkande läkemedel, utöver sin cell-medierad hypolidemiska effekter, direkt kan modulera morfologi av kolesterol partiklar av en icke-enzymatiska verkningsmekanism. Resultaten av dessa resultat har potential att informera diagnos av åderförkalkning och förutsäga optimal lipidsänkande terapi.

Introduction

Ett flertal kliniska studier har visat positiva effekter av lipidsänkande läkemedel minska plasmanivåerna av low-density lipoprotein (LDL) kolesterol och en låg till måttlig nivå ökning av high-density lipoprotein (HDL) kolesterol, som förhindrar både primära och sekundära incidenser av åderförkalkning-relaterade kardiovaskulära händelser1,2,3,4,5. Statiner, en grupp av HMG-CoA reduktas enzym-hämmare, blockera endogen kolesterolsyntes i levern som i sin tur leda till lägre cirkulerande nivåer av LDL-kolesterol i blodet6,7. Likaså medieras den lipidsänkande effekt av niacin av dess direkta och noncompetitive hämning av hepatocyte diglyceridolja acyltransferase-2, en nyckel leverenzym som är inblandade i triglycerid syntes8. Jämförelsevis, minskar ezetimib plasmanivå av LDL genom att begränsa absorptionen av exogent kolesterol genom bindning till Niemann-Pick C1-Like 1 (NPC1L1) protein ligger i epitelceller i tunntarmen9. Fenofibrat, en annan lipidsänkande läkemedel, minskar avsevärt plasmakoncentrationerna av triglycerider och även måttligt minskar LDL-kolesterol genom de peroxisome proliferator-aktiverade receptorer väg10. Omega-3 fettsyra uppges dessutom ha anti-aterosklerotisk effekt på grund av dess förmåga att sänka plasmanivåerna av LDL11.

De lipidsänkande läkemedel, utöver sin primära effekt på att sänka LDL-kolesterol, har ett antal fördelaktiga pleiotropiska effekter inklusive att öka HDL, förbättra endothelial funktioner, minska inflammation och hämma trombocyter aggregeringar12,13,14. Den underliggande mekanismen av dessa läkemedel öka HDL kolesterol partiklar och ändra deras strukturella egenskaper är dock inte helt klarlagda. Eftersom dessa läkemedel är allmänt föreskrivna för att behandla åderförkalkning kardiovaskulära sjukdomar (hjärtklaffarna), är det viktigt att ytterligare undersöka deras möjliga roller för att bestämma morfologiska egenskaper och distribution av lipid partiklarna. Den mänskliga plasma lipidome består av cirka 600 olika lipider och 22 olika molekylära typer av kolesterol som finns i olika storlekar, former, tätheter och kompositioner15,16,17 . Analytiska metoder såsom ultra-centrifugering, NMR och gradient gelelektrofores används för att karakterisera LDL och HDL partiklar och deras och18,19. Tillämpning av dessa metoder är dock begränsat till studier syftar till att fastställa effekten av läkemedel i modulerande morfologi och montering av lipid partiklarna. Flöde cytometer baserat plack matrisen är en funktionell biokemiska test utvecklat för upptäckt och visualisering av serum härrör lipid och amyloid plack partiklar20. Fördelarna med in vitro- imaging metod som beskrivs i denna studie aktivera identifiering av lipid-modulerande läkemedelseffekter att förändra morfologi och partiklarnas kolesterol i buffert-och serumprover.

Protocol

1. beredning av fluorescerande-märkt kolesterol och lipidsänkande läkemedel

Obs: lysrör-märkt kolesterol aggregat och statiner utarbetades som beskrivs i vår tidigare artikel 21. information av reagenser, imaging flödescytometer, kemi analysatorer och data analys programvara som används i denna studie finns Tabell för material.

  1. Solubilize lysrör-märkt frystorkade kolesterol (1 mg, Ex / Em = 495 nm/507 nm) pulver i 1 mL 100% alkohol.
  2. Centrifugera provet för 3 min vid 2 040 x g och använda supernatanterna som innehåller lösliga fluorescens-märkt kolesterol aggregat i plack array analys.
  3. För beredning av läkemedel, individuellt solubilize pulver (2 mg) av simvastatin, lovastatin, atorvastatin, ezetimib och omega-3 fettsyror i 100% alkohol 1 ml.
  4. Efter centrifugering för 3 min vid 2 040 x g, använda supernatanterna som innehåller läkemedel i analysens.
  5. Likaså solubilize individuellt pulver (2 mg) av fluvastatin, rosuvastatin, niacin, och fibrat i 1 mL avjoniserat vatten för att göra en stamlösning av 2 mg/mL.
  6. Efter centrifugering för 3 min vid 2 040 x g, använda supernatanterna som innehåller läkemedel i plack array analys.

2. Plack Array analys för kontrollera In Vitro kolesterol partiklar bildas

  1. Använd kemi analyzer-1 (se tabell för material) för att ställa in plack array analysen för kolesterol partiklar bildas. Utför analysen i en rund botten, plattan med låg protein bindande 96 brunnar har med reagens beredd i avsnitt 1. Upprätthålla den slutliga reaktion volymen i varje brunn på 200 µL och utföra alla analyser i tre exemplar.
    1. Första belastning 194,5 µL av fosfat buffrad saltlösning (PBS) till varje brunn.
    2. Till varje brunn, tillsätt 2,5 µL (5 µg) av varje lipidsänkande läkemedel lösning och skaka plattan för 30 s genom att placera den på kemi analyzer-1 reaktion tallrik att enhetligt blanda läkemedlet i lösning. Inget läkemedel läggs till de negativa kontrollproverna.
    3. Slutligen, tillsätt 2 µL (2 µg) lysrör-märkt kolesterol samlade lösning till varje brunn och skaka plattan för 30 s genom att placera den på kemi analyzer-1 reaktion tallrik.
    4. Inkubera plattan på en lab shaker för 2 h vid 37 ° C och 200 rpm.
    5. Efter inkubation, förvärva bilder av partiklar av imaging flödescytometri.

3. Fånga bilder av kolesterol partiklar använda Imaging Flow flödescytometri

  1. Öppna mallen data förvärv till lasta de rätta instrumentinställningarna. Klicka på " fil " Välj sedan " öppna mall … " och välj mallfilen.
  2. Klicka " Flush, lås, lasten " att förbereda instrumentet för provet lastning.
  3. När den " Ladda prov " dialog öppnas, klicka på " OK " att läsa 50 µL av proverna från var väl förberedd i avsnitt 2 i de imaging flödescytometer.
  4. Klicka " kör | Setup " att Visa partiklarna i området imaging i realtid.
  5. När partiklarna i området imaging är i bra fokus, klicka " kör | Förvärva " att förvärva bilder av varje objekt samtidigt på en hög genomströmning sätt för mörka fält (side scatter/SSC), ljusa fält (BF), grön fluorescens och gul fluorescens.
  6. Upprepa steg 3,2-3,5 att förvärva 5,000-10,000 partiklar från varje prov.
  7. Analysera alla RAW-filer med programmet bild analys för att fastställa objektet fluorescensintensiteten och morfologiska variationer.
    1. Klicka på " verktyg " överst i bild analys programvaran sedan " Batch datafiler " från droppa-ned menyn, som kommer att öppna den " partier " fönster.
    2. i den " partier " fönster, klicka på den " lägga till Batch " knapp, som kommer att öppna den " definiera en Batch " fönster.
    3. i den " definiera en Batch " fönster, klicka på den " Lägg till filer " knappen och välj raw-bildfilerna, klicka på den " mall " knappen och välj filen lämpliga data analys mall och sedan " OK " och " lämna partier " att påbörja behandling och analys av raw-bildfilerna.

4. Plack Array analys baserat utvärdering av lipidsänkande läkemedel effekt på renat kolesterol partiklar

  1. som beskrivs i steg 2.1, utföra kolesterol partiklar bildas analysen använder renat VLDL, LDL och HDL lipoproteiner och partiklar. Utföra plack array analysen i en plattan med 96 brunnar.
    1. Först, ladda alla brunnar med PBS; använda en 200 µL slutlig volym för varje brunn.
  2. För negativkontroll, lägga till 4 µg VLDL, LDL, eller HDL proteiner och partiklar individuellt i varje brunn utan droger och skaka plattan för 30 s.
    1. För att undersöka den lipidsänkande läkemedel effekten, lägga till 4 µg VLDL, LDL, eller HDL proteiner och partiklar individuellt till varje brunn och skaka plattan för 30 s.
    2. För brunnar med 4 µg VLDL, LDL och HDL, tillsätt 2,5 µL (5 µg) ezetimib, lovastatin, simvastatin eller niacin lösning och skaka plattan för 30 s genom att placera den i kemi analyzer-1.
    3. Slutligen, tillsätt 2 µL (2 µg) fluorescens-märkt kolesterol samlade lösning i alla brunnar och skaka plattan för 30 s genom att placera den på kemi analyzer-1 reaktion tallrik.
  3. Inkubera plattan för 2 h i en lab shaker vid 37 ° C och 200 rpm.
  4. Förvärva proverna använda imaging flödescytometri efter steg 3.1-3.5.
  5. Analysera raw-bildfiler med bild analys programvara som beskrivs i steg 3,7.
  6. i mallen analys, använda följande Usenets systemet för identifiering av kolesterol partiklar subpopulations.
    1. På en tomt på gröna kanalen mättad pixelantal (x-axeln) och mörka fält kanal mättade pixelantal (y-axeln), avvisa objekt med en eller flera mättade pixlar i antingen kanal.
    2. Rita objekt/partiklar utan mättade pixlar med gröna kanalen intensitet (x-axeln) och SSC intensitet (y-axeln): objekt delas in i tre regioner (VLDL, LDL, HDL) baserat på deras gröna kanalen och SSC stödnivåer.
      Obs: Dessa portar har skapats utifrån data som genereras från kontroll-experiment som genomförs med hjälp av renat VLDL, LDL och HDL partiklar/proteiner utan drogen.
  7. För att avgöra effekten lipidsänkande läkemedel för varje prov, beräkna de totala lipoprotein partiklar koncentrationerna, samt procentandelen av varje delpopulation (VLDL, LDL, HDL) som beskrivs i steg 6.5.
    1. Beräkna partikeln koncentrationer (partiklar/mL) med hjälp av följande ekvation:
      Equation
      Obs: The VLDL, LDL och HDL gating regioner i fluorescens dot-tomten upptäcka ~ 80% av deras respektive subpopulations, och de återstående ~ 20% av partiklarna överlappar med andra Usenets regioner.

5. Mätning av Lipid koncentrationer i serumprover

  1. för att fastställa koncentrationer av LDL, HDL, kolesterol och triglycerider av kemi analyzer-2, Använd serum produktproverna åldersmatchade normala och dyslipidemi försökspersoner.
  2. Definiera onormal koncentration av LDL, HDL, kolesterol och triglycerider baserat på deras koncentration identifierade bortom de övre och nedre referensvärdena i serumprov.
  3. Följer normala referens värde rekomDED av reagens tillverkaren: kolesterol (4-200 mg/dL), HDL (3.0-65 mg/dL), LDL (4-100 mg/dL) och triglycerider (9-200 mg/dL).
  4. Identifiera serumprov som har ett avvikande värde som antingen under nedre referensvärdet eller ovanför referensen högre värde för kolesterol och triglycerider, och använda dem för screening i närvaro och frånvaro av lipidsänkande läkemedel.

6. Analysera effekten av drogerna på kolesterol partiklar bildas i serumprov

  1. användning kemi analyzer-1 ställa in plack array analysen för kolesterol partiklar bildas i serumprov. Utför analysen i en rund botten, låg protein bindande plattan med 96 brunnar. Använda en slutliga reaktionsvolym 200 µL per brunn och utföra alla analyser i tre exemplar.
  2. Förbereda plattan genom att ladda reagenser i en stegvis sätt.
    1. Förbereda kontrollbrunnarna.
    2. Belastning 193 µL av PBS till varje brunn.
    3. Lägga till 2,5% (v/v) patientens serum (endast ett serumprov per brunn) och skaka plattan för 30 s genom att placera den på kemi analyzer reaktionen tallrik.
    4. Add 2 µL (2 µg) fluorescens-märkt kolesterol aggregera lösning i varje brunn och skaka plattan för 30 s genom att placera den på en tallrik med kemi i analyzer-1 reaktion.
  3. Förbereda brunnarna med droger.
    1. Belastning 191 µL av PBS till varje brunn.
    2. Lägga till 2,5% (v/v) patientens serum (endast ett serumprov per brunn) och skaka plattan för 30 s genom att placera den på en tallrik med kemi i analyzer-1 reaktion.
    3. Add 2 µL ezetimib, lovastatin, simvastatin eller niacin lösning (4 µg) alla brunnar förutom de negativa kontrollbrunnarna. Tillsätt bara en drog per brunn och skaka plattan för 30 s genom att placera den på en tallrik med kemi i analyzer-1 reaktion.
    4. Add 2 µL av fluorescens-märkt kolesterol aggregera lösning (2 µg) i varje brunn och skaka plattan för 30 s genom att placera den på kemi analyzer-1 reaktion tallrik.
  4. Ladda droger endast efter alla brunnar (kontroll och drog-behandlade) har lästs in med deras respektive serumprov, och lägga till fluorescens-märkt kolesterol i slutet av det här steget.
  5. Inkubera plattan för 2 h i en lab shaker vid 37 ° C och 200 rpm.
  6. Förvärva proverna av imaging flödescytometer följande inställningar som beskrivs i steg 3.1-3.6.
  7. Använda bilden analysera programvara för batch-bearbetning alla bildfiler med samma mall som beskrivs i steg 3,7.
    1. Utföra dataanalys genom att rita gates på tomten som beskrivs i steg 4.5 och 4.6.
  8. För att avgöra den lipidsänkande läkemedel effekt/svaren (låg, måttlig och hög) för varje prov, beräkna den totala lipoprotein partikel koncentrationen, samt procentandelen av det totala partiklar bestående av VLDL, LDL och HDL subpopulationer.
  9. Rita VLDL, LDL och HDL befolkningarna på ett histogram för objektet ' s ljusa fältet bild, bredd subtraheras från längd (längd - bredd) och porten till antingen klotformiga eller linjär regioner: objekt med (längd - bredd) ≤ 2 µm faller den klotformig regionen för beräkning av procentsatsen klotformig och linjära formade partiklar.
  10. Jämföra andelen klotformig och linjära formade LDL och HDL kolesterol partiklar identifieras för varje serumprov som inkuberas med och utan varje läkemedel. Bland tre exemplar värden som erhållits för varje serumprov, acceptera procentandelen klotformig och linjära formade LDL och HDL partiklar som faller inom SD ±2 intervall för bestämning av drogen effekten.

Representative Results

Plack Array analys baserad analys av lipidsänkande läkemedelseffekter på kolesterol partiklar bildas:

För att utvärdera effekten av statiner i modulerande morfologi av kolesterol partiklar, inkuberades individuellt lysrör-märkt kolesterol aggregat med lovastatin, simvastatin, atorvastatin, rosuvastatin och fluvastatin i bufferten. Alla dessa prover förvärvades använder imaging flödescytometri för att fånga bilder av kolesterol partiklarna för morfologi analys som visas i figur 1 och figur 2. Intressant, anges analysera den drogen effekten på kolesterol partiklar bildas i buffert att lovastatin, simvastatin och atorvastatin inducerar bildandet av en heterogen befolkning av kolesterol partiklar visar olika storlekar och former, Figur 3a -c. Omvänt, kolesterol partiklar bildas i närvaro av rosuvastatin, fluvastatin, och den negativa kontrollen (utan läkemedel) var homogen form och morfologi som visas i figur 3d-f. Dessutom observerades det att lovastatin, simvastatin och atorvastatin inducerad bildandet av kolesterol partiklar uppvisar båda klotformig och linjära strand morfologier, medan rosuvastatin och fluvastatin inducerad bildandet av kolesterol partiklar med endast klotformiga morfologi. Statiner påverkar inducerande linjär strands bildandet hittades i storleksordningen 16% för lovastatin, 2% för simvastatin och 0,2% för atorvastatin.

För att ytterligare utvärdera effekten av lipidsänkande läkemedel på partiklar bildas, inkuberades individuellt lysrör-märkt kolesterol aggregat med ezetimib, fibrat, niacin, och omega-3 fettsyra. Som observerats med statiner, inducerad dessa läkemedel bildandet av kolesterol partiklar med heterogena storlekar och former som visas i figur 4a-d. Bland dem, ezetimib inducerad bildandet av kolesterol partiklar uppvisar båda klotformig och linjära strand morfologier medan fibrat, niacin, och omega-3 fettsyra inducerad bildandet av enda klotformig-formade kolesterol partiklar. Effekten av läkemedel på den linjära strand formad kolesterol partiklar bildandet var således, i storleksordningen 3% för ezetimib, 0% för fibrat, 0% för niacin och 0% för omega-3 fettsyra.

Morfologiska analyser avslöjade varje klotformiga eller linjär strand formad kolesterol partikel är består av många mindre partiklar kopplas samman. Storleken på fluorescerande positiva klotformiga kolesterol partiklar identifieras är i spänna av ~ 2-30 µm2, medan storleken på de linjära formade partiklarna är i spänna av ~ 2-60 µm2.

Analysera effekten av lipidsänkande läkemedel på renat VLDL och LDL partiklar:

För att ytterligare undersöka kolesterol partiklar bildas i närvaro av lipoproteiner, inkuberades fluorescerande-märkt kolesterol aggregaten individuellt med renat VLDL, LDL och HDL proteiner och partiklar. Resultaten visade, jämfört med ruvning med LDL och HDL partiklar, som kolesterol aggregaten inkuberas med VLDL proteiner orsakat bildandet av ett högre antal kolesterol partiklar, figur 5. Dessutom observerades två stora fraktioner av kolesterol partiklar i VLDL populationer tyder på deras delvis omvandling till en LDL bråkdel under inkubationstiden med lysrör-märkt kolesterol aggregaten. Bildanalys av partiklar anges förekomsten av både klotformiga (~ 97%) och linjära formade (~ 3%) partiklar bland VLDL, LDL och HDL populationer. Storlek spänner av klotformiga partiklar är ~ 2-30 µm2, medan storlek spänner av linjära partiklar är ~ 2-60 µm2.

För att undersöka den lipidsänkande läkemedel effekten på renad partiklar, inkuberades VLDL och LDL partiklarna individuellt med ezetimib, lovastatin, simvastatin och niacin. Som ett resultat, var jämfört med kontroll experiment utan drogen, att läkemedlet effekten som observerats på bildandet av VLDL-partiklar högre i ezetimib, simvastatin, lovastatin och niacin. LDL partiklarna inkuberas med droger visade en stor inre del och läkemedelsinducerad effekten på partiklar bildas var högre i ezetimib, simvastatin, lovastatin och niacin, figur 6.

Variationer av lipidsänkande läkemedelseffekter i att ändra fördelningen av kolesterol partiklar i serumprov:

De föregående experimenten utfördes i buffertlösningen med renat lipoproteiner för att utvärdera effekten drogen. I nästa steg, var effektiviteten av lipidsänkande läkemedel på kolesterol partiklar bildas därför granskas med hjälp av 50 serumprover som tagits från 25 patienter med höga blodfetter och 25 åldersmatchade normala individer. Den narkotika svaren i varje serumprov mättes baseras på förändringar i profilen av kolesterol partiklar bildas i närvaro och frånvaro av läkemedel. I plack array analysen, var varje serumprov avskärmade mot ezetimib, lovastatin, simvastatin och niacin droger. Resultaten visade skillnaderna bland dessa droger i modulerande fördelningen av VLDL, LDL och HDL partiklar i serumprov, särskilt deras effekt på att minska LDL och ökar HDL kolesterol partiklar bildas. Tre företrädare för dyslipidemi serumprover uppvisar unika Svaren till de lipidsänkande läkemedel visas i figur 7.

Identifiering av läkemedlet effekten på modulerande morfologi av Serum härrör LDL och HDL-kolesterol partiklar:

Fenotyp analys av serum-derived kolesterol partiklar avslöjade förekomsten av både linjära kardeler och klotformiga formade VLDL, LDL och HDL subpopulations, vilket bekräftar en liknande morfologi som identifierats i experimenten utförs både i bufferten och med renat lipoprotein partiklar som visas i figur 8. Fördelningen av de klotformiga och linjära formade kolesterol partiklar subpopulationsna varierade dock allmänt bland dyslipidemi och åldersmatchade normala individer. Bland annat visade kontroll analyserna utförs utan droger skillnader i fördelningen av linjära strand formad LDL kolesterol partiklar mellan dyslipidemi (medelvärde på 2,0%) och åldersmatchade normala (medelvärde på 1,3%) serumprov. Likaså en ökad nivå av linjära strand formad HDL kolesterol partiklar observerades i dyslipidemi prover (genomsnitt 18,3%) jämfört med den åldersmatchade serumprover (i genomsnitt 11,1%). I korrelation, analyserna utförs i närvaro av droger i dyslipidemi serumprov visade en betydande minskning av linjära formade HDL kolesterol partiklar bildas för simvastatin (genomsnitt 8,3%), ezetimib (medelvärde på 11,5%), lovastatin (genomsnitt 11,7%), och ingen minskning för niacin (genomsnitt 18,3%). Dessutom observerades en minskning i bildandet av linjära formade LDL kolesterol partiklar i dyslipidemi serumprov när inkuberas med de läkemedel som visas i tabell 1.

Dessutom analyserna utförs i närvaro av droger i åldersmatchade control serum sampLes visade signifikant minskning i den linjära formade HDL kolesterol partiklar i simvastatin (medelvärde av 5,0%), ezetimib (medelvärde 8,2%), lovastatin (medelvärde 8,7%) och niacin (medelvärde 10,8%) som visas i tabell 2. Både dyslipidemi och åldersmatchade normala serum prov uppvisar läkemedelsinducerad minskning av linjära formade LDL och HDL kolesterol partiklarna visade en relativ ökning av klotformiga formade kolesterol partiklar (inga data anges).

Figure 1
Figur 1: Diagram som illustrerar processen för in vitro- visualisering av kolesterol partiklar morfologi. (a, b) Tillägg av lipidsänkande läkemedel i buffert-eller serumprover. (c) tillägg av fluorescens-märkt lösliga kolesterol aggregerar till proverna. (d) förvärva resulterande proverna för Morfologisk analys av olösliga kolesterol partiklar använda imaging flödescytometri. Skala barer = 10 µm. vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.

Figure 2
Figur 2: identifiering av två distinkta morfologier kolesterol partiklar använda imaging flödescytometri. (en) partiklar är uppdelade i linjära eller klotformig populationer baserat på textural analyser av ljusa fält bilder. Specifikt, dot-handlingen i menar H homogenitet (x-axeln) och menar H entropi (y-axeln) innehåller två gated regioner för att upptäcka klotformiga (röd) och linjär strand formad (blå) kolesterol partiklar. (b) bilder visar morfologi av klotformiga formade partiklar som identifierats i befolkningen 1. (c) bilder av linjära strand formade partiklar som identifierats i befolkningen 2. (d) Histogram visar fördelningen av alla fluorescerande positiva kolesterol partiklar används för att bestämma deras koncentration och subpopulations. Skala barer = 10 µm. vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.

Figure 3
Figur 3: bild gallerier som visar effekten av statiner i modulerande kolesterol partiklar bildas. Ljusa fält refererar till området liknar FSC i den konventionella flödescytometer. Grön kanal refererar till fluorescens utsläpp upptäckts i 505-560 nm, och gula kanal hänvisar till fluorescens utsläpp upptäckts i 560-595 nm. (a-e) Bildgallerier visar morfologi av kolesterol partiklar bildas i närvaro av lovastatin, simvastatin, atorvastatin, rosuvastatin och fluvastatin, respektive. (f) kolesterol partiklar bildandet i avsaknad av statin (negativ kontroll). Skala barer = 10 µm. vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.

Figure 4
Figur 4: demonstrera differentiella effekten av lipidsänkande läkemedel i modulerande kolesterol partiklar bildas. (a-d) Bildgallerier visar morfologi av kolesterol partiklar bildas i närvaro av ezetimib, niacin, fibrat, och omega-3 fettsyra, respektive. Grön kanal refererar till fluorescens utsläpp upptäckts i 505-560 nm, och gula kanal hänvisar till fluorescens utsläpp upptäckts i 560-595 nm. Skala barer = 10 µm. vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.

Figure 5
Figur 5: analys av VLDL, LDL och HDL kolesterol partiklar bildas i avsaknad av drog. Dot-tomter: X-axeln visar ett spektrum av kolesterol partiklar upptäcks i kanalen grön fluorescens (505-560 nm) och y-axeln visar side scatter. Gating visar regioner av VLDL, LDL och HDL partiklar som upptäckts i fluorescens dot-tomterna. (en) kolesterol partiklar bildas i närvaro av renat VLDL. (b), representativa bilder av VLDL-partiklar. (c) kolesterol partiklar bildas i närvaro av renat LDL. (d), representativa bilder av LDL-partiklar. (e) kolesterol partiklar bildas i närvaro av renat HDL. (f), representativa bilder av HDL partiklar. Skala barer = 10 µm. vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.

Figure 6
Figur 6: visar effekten av lipidsänkande läkemedel på renat VLDL och LDL kolesterol partiklar. (en) VLDL partiklar utan drogen. (b), VLDL-partiklar inkuberas med ezetimib. (c), VLDL-partiklar inkuberas med lovastatin. (d), VLDL-partiklar inkuberas med simvastatin. (e), VLDL-partiklar inkuberas med niacin. (f), LDL partiklar inkuberas utan drogen. (g), LDL partiklar inkuberas med ezetimib. (h), LDL partiklar inkuberas med lovastatin. (jag) LDL partiklar inkuberas med simvastatin. (j), LDL partiklar inkuberas med niacin. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 7
Figur 7: fluorescens dot-tomter visar en differentiell effekt av lipidsänkande läkemedel i modulerande VLDL, LDL och HDL kolesterol partiklar bildas i serumprov. Översta raden, screening av serum 1 visar låg nivå narkotika svar i ökande 0 till 15% HDL partiklar bildas. mittenraden, screening av serum 2 visar måttlig nivå narkotika svar i ökande 16 till 50% HDL partiklar; Nedersta raden, screening av serum 3 visar högre nivå narkotika svar i ökande 51 till 100% HDL partiklar. (a, f, k) Serumprover utan droger. (b, g, l) Serumprover inkuberas med ezetimib. (c, h, m) Serumprover inkuberas med lovastatin. (d, i, n) Serumprover inkuberas med simvastatin. (e, j, o) Serumprover inkuberas med niacin. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 8
Figur 8: bildgallerier visar morfologi av kolesterol partiklar identifieras i serum prov 1. Grön kanal visar bilder av fluorescens utsläpp från partiklarna; Side scatter (cyan kanal) visar bilder av magnetiseringen laser ljus spridda av partiklar. (en) klotformig och linjära formade kolesterol partiklar bildas utan drogen. (b, c, d, e) Kolesterol partiklar bildas i närvaro av ezetimib, lovastatin, simvastatin och niacin, respektive. Skala barer= 10 µm. vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.

Serum-ID Utan drog (kontroll) Med ezetimib Med Lovastatin Med Simvastatin Med Niacin
% Linjär, LDL-partiklar % Linjär, HDL partiklar % Linjär, LDL-partiklar % Linjär, HDL partiklar % Linjär, LDL-partiklar % Linjär, HDL partiklar % Linjär, LDL-partiklar % Linjär, HDL partiklar % Linjär, LDL-partiklar % Linjär, HDL partiklar
PND-01 1,73 45,2 0,81 18,1 0,61 16,1 0,59 13,9 2.26 33,6
PND-02 2,86 35,9 1.26 30,9 1.27 22,7 0,73 15.2 3.03 37,7
PND-03 2,04 35,8 0,87 4,82 1,02 4.14 0,36 3.06 0,45 9,57
PND-04 2.56 32,9 1.15 21,8 1.12 18,6 0,77 17,2 3.37 36,5
PND-05 0,42 29,2 0,24 5,62 0,22 8,72 0,16 9,91 0,35 22,2
PND-06 1.8 28,1 0,4 16,8 0,62 15 0,42 9,27 2.28 38,4
PND-07 1.8 26,5 0,85 10.5 1.18 19,9 0,62 7,32 1.29 23,4
PND-08 0,98 22,8 0,86 7,28 1,55 10.2 0,14 5,98 0,59 13.3
PND-09 3,87 22,1 1,98 9,56 1.87 10.3 1,46 7,96 2,86 9,88
PND-10 4,46 21,9 2,57 13,6 4.04 17,1 2.28 11,9 0,71 25,7
PND-11 1,57 19,2 1.15 9.24 1,37 6,98 0,74 5,03 1,37 16
PND-12 1,06 16,7 0,66 4,38 0,7 4,74 0,99 6,36 1.14 4,73
PND-13 4,85 16,6 1.28 30,4 1.4 32,6 0,8 16,6 4,02 31
PND-14 2,08 16 0,68 15,4 0,64 16,5 1,97 10.2 1,25 20.11
PND-15 1.5 11,9 1.14 13.3 1.21 11,4 0,8 6.12 1,38 4,59
PND-16 1,82 10.4 2,04 9,59 1.24 5,62 0,91 5,38 1.31 7.61
PND-17 1,05 10.3 1,02 4.7 1,78 15,1 0,93 7,81 1.27 13
PND-18 1.11 8,76 0,54 3,68 0,61 3.51 1,01 5,03 1,02 6,69
PND-19 1 8,52 0,75 6,67 0,76 5,86 0,91 8,36 1,22 11,9
PND-20 3.54 7,92 3,78 12 3.56 5,81 3.28 8,28 3.44 12.3
PND-21 1,88 7,69 2.12 11,4 1,73 9,54 1,77 8,34 2.32 16,7
PND-22 1,64 7.17 0,35 5,75 0,56 13.2 0,14 4.33 1.23 17,8
PND-23 1,54 6.27 1,25 7.24 1,02 6.12 0,73 3.58 1,42 6,69
PND-24 0,53 6.22 0,52 4,49 0,91 5,57 0,54 4.01 0,65 10.5
PND-25 2,97 5.1 1,59 11 1,88 9 1,03 6,54 2,61 29,1

Tabell 1: serumprover i plack array analys Screening av dyslipidemi och Visa differentiella effekten av lipidsänkande läkemedel. Jämfört med kontroller utan drog (kolumnerna 2, 3), inkuberas serumprover med ezetimib (kolumnerna 4, 5), lovastatin (kolumn 6, 7), simvastatin (kolumner 8, 9), och niacin (kolumner 10, 11) visade variationer på inducerande linjär-formade LDL och HDL-kolesterol partiklar bildas.

Serum-ID Utan drog Med ezetimib Med Lovastatin Med Simvastatin Med Niacin
% Linjär, LDL-partiklar % Linjär, HDL partiklar % Linjär, LDL-partiklar % Linjär, HDL partiklar % Linjär, LDL-partiklar % Linjär, HDL partiklar % Linjär, LDL-partiklar % Linjär, HDL partiklar % Linjär, LDL-partiklar % Linjär, HDL partiklar
PNAN-01 2,05 26,8 0,62 11,9 0,56 16,9 0,52 9,28 1.4 11,9
PNAN-02 1,35 26,3 1,68 21,8 2,59 23,6 0,79 6,92 2.16 29,7
PNAN-03 2.4
24,9 0,53 7.54 0,57 13,8 0,55 5,82 1.7 4,71 PNAN-04 1,99 21,5 1,54 9,45 1,56 8,25 0,31 3,74 2.88 20,8 PNAN-05 1,77 18,8 1,49 6,03 1,65 5.5 0,54 4,67 1.2 8.19 PNAN-06 1.12 15.2 0,67 4.42 2,68 13.3 0,5 2,37 1,54 16,3 PNAN-07 1,03 14,4 0,79 6.83 1,45 7,91 0,67 5,36 1,57 12 PNAN-08 0,98 14,3 0,88 4.48 2 7.1 0,19 2,66 1,02 18,1 PNAN-09 2,85 14.1 1,95 12,6 2.34 12.5 0,7 6.24 1.84 18,7 PNAN10 1,01 10.4 0,8 5,07 0,51 5,9 0,87 6.5 1.63 10,9 PNAN-11 0,92 12,4 0,21 9,94 0,29 3.31 0,29 6,52 0,58 10.4 PNAN-12 0,6 10.5 0,56 5,78 1,06 4,74 0,4 3,32 0,91 11,8 PNAN-13 1,25 10.3 0,45 3,79 0,67 6,53 0,27 3.17 0,8 6,28 PNAN-14 1,03 9,86 1.12 8.51 1,05 6,91 0,6 5.94 1,05 8.14 PNAN-15 2.28 8.1 1,93 10.4 2.14 8,86 1,56 6,84 2.31 8,61 PNAN-16 1,98 7,69 0,45 4.36 1 5,46 0,27 2,89 0,49 4.12 PNAN-17 1,72 6.72 0,75 14,8 0,74 9.26 0,49 5,58 1,98 12,8 PNAN-18 2,45 6,38 0,85 16,8 0,89 14,2 0,58 5,9 1.8 20,6 PNAN-19 1,67 5.12 0,58 8,63 0,65 5.7 0,64 8,8 1,88 2,08 PNAN-20 1.17 4.41 0,85 7,77 0,91 6.43 0,69 5.08 1.21 6.12 PNAN-21 0,31 4.18 0,48 6.95 0,19 5.09 0,15 2.1 0,29 5,93 PNAN-22 0,77 4,02 1.24 7,41 0,61 5.02 0,29 3.49 0,42 3,98 PNAN-23 0,4 1,25 0,75 6.25 0,88 5,91 0,9 5,06 0,82 6.71 PNAN-24 0,45 1.1 0,63 2.5 0,55 5,32 0,9 4.3 0,71 3.5 PNAN-25 0,36 1 0,73 2.4 0,66 5.1 0,82 4 0,7 3.4

Tabell 2: Screening av åldersmatchade kontroll serumprover i plack array analys visar differentiella effekten av lipidsänkande läkemedel. Jämfört med kontroller utan drog (kolumnerna 2, 3), inkuberas serumprover med ezetimib (kolumnerna 4, 5), lovastatin (kolumn 6, 7), simvastatin (kolumner 8, 9), och niacin (kolumner 10, 11) visade variationer på inducerande linjär-formade LDL och HDL-kolesterol partiklar bildas.

Discussion

I allmänhet, bestäms distribution och funktionella egenskaper av VLDL, LDL och HDL kolesterol partiklar i blodcirkulationen främst av metabola, genetisk, epidemiologisk, mobilnät och plasma faktorer22,23. I den aktuella studien, att undersöka effekterna av lipidmodifierande droger i bufferten avslöjade att starkt lipofila läkemedel såsom ezetimib, lovastatin, simvastatin och atorvastatin inducerade en högre nivå komplexitet på morfologin av kolesterol partiklar jämfört med den lägre nivå effekten som observerats med mycket hydrofila rosuvastatin och fluvastatin droger. Dessa resultat är bra överens med vår tidigare studie som beskriver en icke-enzymatiska mekanism baserat effekt av statiner i modulerande LDL och HDL kolesterol partiklar bildas i buffert och serum prover21. Således visade resultaten från föreliggande studie en icke-enzymatiska verkningsmekanismen för ezetimib, niacin, fibrat, och omega-3 fettsyra droger som kan spela en direkt roll i modulerande kolesterol partiklar bildas. Det är möjligt att interaktioner mellan läkemedel och kolesterol aggregat leder till montering av stor storlek kolesterol partiklar som är 2-60 µm2, uppvisar klotformig och linjära strand morfologier.

Förutom föreslå de resultat som erhålls med hjälp av renat lipoprotein partiklar interaktioner mellan kolesterol aggregat och plasma faktorer inklusive VLDL, LDL och HDL proteiner som kan förändra kompositioner och morfologiska egenskaper av kolesterol partiklar. Drogen behandlingsresultaten med renat lipoprotein partiklar anges en högre nivå drogen effekt på bildandet av VLDL-partiklar jämfört med deras effekten som observerats på LDL kolesterol partiklar bildas. Lovastatin, simvastatin och ezetimib droger användes som pro-droger och deras doser i analyserna kan vara högre än de fysiologiska koncentrationerna.

Intressant, formade screening av serumprover visade variationer av drogen effekt på att förändra profilerna av VLDL, LDL och HDL kolesterol partiklar bildas, särskilt deras effekt på formationerna av linjära LDL och HDL partiklar. Dessa läkemedel inducerad minskning på linjära formade LDL och HDL kolesterol partiklar bildas i både dyslipidemi och åldersmatchade normala serumprov. De drog effekter som observerats på att minska linjära formade partiklar bildandet var högre i simvastatin, ezetimib, lovastatin och niacin. Identifiering av kolesterol partiklar med klotformig och linjära strand morfologier i de normala och dyslipidemi serumprov antyder att partiklar med liknande morfologier kan bilda i vivo förhållanden. Tidigare studier har identifierat förekomst av skivan och nål-liknande kolesterolkristaller i de aterosklerotiska plack av mänskliga och ApoE- /- och Receptorn- / - möss-modeller24,25,26 ,27,28.

HDL partiklar cirkulerar i blodet finns som en heterogen blandning och nivån av små och stora HDL partiklar tillsammans med funktionell aktivitet är viktiga faktorer för att utöva sin cardio-skyddande effekt via omvänd kolesterol transport väg29,30. Nyligen genomförda studier har belyst vikten av att identifiera HDL kolesterol partikel och för att belysa deras roll i flera biologiska funktioner såsom kolesterol efflux, anti-inflammatoriska, anti-trombotisk och antioxidativ31 . Dessutom har ett antal studier rapporterade effekten av lipidsänkande terapi för att öka en låg till måttlig nivå av HDL i plasma1,5,21. Således ger resultaten från denna studie nya insikter på morfologiska egenskaper av kolesterol partiklar. Särskilt, upptäckt av en högre nivå av linjära formade HDL kolesterol partiklar i serumprover av dyslipidemi ämnen föreslår att de kan vara den pålitliga biomarkören för både diagnos och utvärdera effekterna av lipidmodifierande droger patienter. Ytterligare krävs undersökning dock med stora kliniska prover för att bättre förstå kolesterol partiklar med olika morfologier och deras koppling till CVD.

I plack array analys för att undersöka drogen effekten på montering av kolesterol partiklar, vi använt 2 µg av fluorescens märkt kolesterol aggregat och 5 µgof varje drog eftersom: (1) droger kompetitivt binda till både fluorescens märkt kolesterol och endogena lipider närvarande i serumprover; (2) från varje prov förvärvade vi 5.000 till 10.000 kolesterol partiklar som är monterade i stora storlekar och former allt från ~ 2-60 µ2; (3) vi observerade ett brett varianter av narkotika svar bland serumprover inkuberas med droger (doser 300 ng 5 µg) och ~ 1-5% av dem inkuberas med höga doser visade inga påvisbara förändringar i profilen för kolesterol partiklar bildas. och (4) samspelet mellan kolesterol aggregat och lipidsänkande läkemedel medieras av en icke-enzymatisk process. Koncentrationerna av de reagens som används i analysen kan därför vara högre än deras fysiologiska nivåer.

Sammanfattningsvis har vi framgångsrikt visat fördelarna med en in vitro- imaging metod som beskrivs i denna studie för att fastställa effekten av ett brett spektrum av lipidsänkande läkemedel på modulerande morfologi och sammansättning av kolesterol partiklar. Metoden att visualisera och kvantifiera morfologi av lipid partiklar genom att anställa en konstellation av bild analys algoritmer kan hjälpa båda diagnos av åderförkalkning och att utvärdera resultaten av lipidsänkande behandling till patienter.

Disclosures

Dr. Madasamy fick bevilja stöd från Plaxgen, Inc och har konkurrerande ekonomiska intressen. Andra författarna har inga konkurrerande ekonomiska intressen att avslöja.

Acknowledgments

Detta arbete finansierades av en Plaxgen forskning bidrag till SM (PLX-1008). Vi tackar Palo Alto medicinsk forskning stiftelsen Research Institute för att samla serumprover från åderförkalkning försökspersoner under IRB godkännande.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
TopFluor fluorescent cholesterol Avanti Polar lipids store 100 µl aliquots at -20 °C
simvastatin (pro-drug) Cayman Chemicals store 100 µl aliquots at -20 °C
lovastatin (pro-drug) Cayman Chemicals store 100 µl aliquots at -20 °C
rosuvastatin Cayman Chemicals store 100 µl aliquots at -20 °C
atorvastatin Cayman Chemicals store 100 µl aliquots at -20 °C
fluvastatin Cayman Chemicals store 100 µl aliquots at -20 °C
ezetimibe (pro-drug) Cayman Chemicals store 100 µl aliquots at -20 °C
Niacin MilliporeSigma store 100 µl aliquots at -20 °C
fibrate MilliporeSigma store 100 µl aliquots at -20 °C
omega-3 fatty acid MilliporeSigma store 100 µl aliquots at -20 °C
purified VLDL proteins/particles Lee Bio
purified LDL proteins/particles Lee Bio
purified HDL proteins/particles Lee Bio
Human age-matched serum Dx Biosamples
Human atherosclerosis serum Bioserve
Human normal serum Stanford Blood center
LDL measurement reagent pack Roche Diangostics
HDL measurement reagent pack Roche Diangostics
Total cholesterol measurment Roche Diangostics
96-well microtitre plates
Triglycerides measurement Roche Diangostics
Amnis Imaging Flow cytometer Amnis Inc
IDEAS image analysing software Amnis Inc
Chemistry Analyzer-1, ChemWel 2902 Awarness Technology
Chemistry Analyzer-2, Intergra 400 Roche Diangostics

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Pahan, K. Lipid-lowering drugs. Cell Mol Life Sci. 63, 1165-1178 (2006).
  2. Laforest, L., et al. Prevalence of low high-density lipoprotein cholesterol and hypertriglyceridaemia in patients treated with hypolipidaemic drugs. Arch Cardiovasc Dis. 102, 43-50 (2009).
  3. Roberts, W. C. Preventing and arresting coronary atherosclerosis. Am Heart J. 130, 580-600 (1995).
  4. Goldstein, J. L., Brown, M. S. A century of cholesterol and coronaries: from plaques to genes to statins. Cell. 16, 161-172 (2015).
  5. Drexel, H. Statins, fibrates, nicotinic acid, cholesterol absorption inhibitors, anion-exchange resins, omega-3 fatty acids: which drugs for which patients? Fundam Clin Pharmacol. 23, 687-692 (2009).
  6. Camelia, S., Anca, S. Statins: Mechanism of action and effects. J.Cell.Mol.Med. 5, 378-387 (2001).
  7. Schaefer, E. J., et al. Comparisons of effects of statins (atorvastatin, fluvastatin, lovastatin, pravastatin, and simvastatin) on fasting and postprandial lipoproteins in patients with coronary heart disease versus control subjects. Am J Cardiol. 93, 31-39 (2004).
  8. Meyers, C. D., Kamanna, V. S., Kashyap, M. L. Niacin therapy in atherosclerosis. Curr Opin in Lipid. 15, 659-665 (2004).
  9. Phan, B. A., Dayspringm, T. D., Toth, P. P. Ezetimibe therapy: mechanism of action and clinical update. Vasc Health Risk Mana. 8, 415-427 (2012).
  10. Leitersdorf, E., Fruchart, J. C. Mechanism of action of fibrates on lipid and lipoprotein metabolism. Circulation. 98, 2088-2093 (1998).
  11. Backes, J., Anzalone, D., Hilleman, D., Catini, J. The clinical relevance of omega-3 fatty acids in the management of hypertriglyceridemia. Lipids Health Dis. 15, 118 (2016).
  12. Davidson, M. H. Clinical Significance of Statin Pleiotropic Effects Hypotheses Versus Evidence. Circulation. 111, 2280-2281 (2005).
  13. Chinetti-Gbaguidi, G., Fruchart, J. C., Staels, B. Pleiotropic effects of fibrates. Curr Atheroscler Rep. 7, 396-401 (2005).
  14. McTaggart, F., Jones, P. Effects of Statins on High-Density Lipoproteins: A Potential Contribution to Cardiovascular Benefit Effects of Statins on High-Density Lipoproteins: A Potential Contribution to Cardiovascular Benefit. CardiovascDrugs Ther. 22, 321-338 (2008).
  15. Quehenberger, O., et al. The Human Plasma Lipidome. N Engl J Med. 365, 1812-1823 (2011).
  16. Lund-Katz, S., et al. Mechanisms responsible for the compositional heterogeneity of nascent high density lipoprotein. J. Biol Chem. 288, 23150-23160 (2013).
  17. Krauss, R. M. Lipoprotein subfractions and cardiovascular disease risk. Curr Opin Lipidol. 21, 305-311 (2010).
  18. Krauss, R. M., Burke, D. J. Identification of multiple subclasses of plasma low density lipoproteins in normal humans. J Lipid Res. 23, 97-104 (1982).
  19. Rosenson, R. S., et al. HDL measures, particle heterogeneity, proposed nomenclature, and relation to atherosclerotic cardiovascular Events. Clinic Chemi. 57, 392-410 (2011).
  20. Madasamy, S., et al. Plaque array method and proteomics-based identification of biomarkers from Alzheimer's disease serum. Clin Chim Acta. 441, 79-85 (2015).
  21. Madasamy, S., et al. Nonenzymatic Mechanism of Statins in Modulating Cholesterol Particles Formation. Am J Cardiol. 118, 1187-1191 (2016).
  22. Peter, O. K. Clinical relevance of the biochemical, metabolic, and genetic factors that influence low-density lipoprotein heterogeneity. Am J Cardiol. 90, 30-47 (2002).
  23. Weissglas-Volkov, D., Pajukanta, P. Genetic causes of high and low serum HDL-cholesterol. J Lipid Res. 51, 2032-2057 (2010).
  24. Abela, G. S. Effect of statins on cholesterol crystallization and atherosclerotic plaque stabilization. Am J Cardiol. 107, 1710-1717 (2011).
  25. Nidorf, S. M., Eikelboom, J. W., Thompson, P. L. Targeting cholesterol crystal-induced inflammation for the secondary prevention of cardiovascular disease. Cardiovasc Pharmacol Ther. 19, 45-52 (2014).
  26. Thacker, S. G., Zarzour, A., Chen,, et al. High density lipoprotein reduces inflammation from cholesterol crystals by inhibiting inflammasome activation. Immunol. 149, 306-319 (2016).
  27. Kim, S. H., Lee, E. S., Lee, J. Y., et al. Multiplex coherent anti-stokes Raman Spectroscopy images intact atheromatous lesions and concomitantly identifies distinct chemical profiles of atherosclerotic lipids. Circ Res. 106, 1332-1341 (2010).
  28. Lim, R. S., Suhalim, J. L., Miyazaki-Anzai, S., et al. Identification of cholesterol crystals in plaques of atherosclerotic mice using hyperspectral CARS imaging. J Lipid Res. 52, 2177-2186 (2011).
  29. Rothblat, G. H., Phillips, M. C. High-density lipoprotein heterogeneity and function in reverse cholesterol transport. Curr Opin Lipidol. 21, 229-238 (2011).
  30. Kontush, A. HDL particle number and size as predictors of cardiovascular disease. Front in Pharmacol. , (2015).
  31. Karathanasis, S. K., Freeman, L. A., Gordon, S. M., Remaley, A. T. The changing face of HDL and the best way to measure it. Clin. Chem. 63, 196-210 (2017).

Tags

Medicin fråga 129 kolesterol partiklar morfologi plack array imaging flödescytometri åderförkalkning lipidsänkande läkemedel kardiovaskulär diagnos
Differentiella effekter av lipidsänkande läkemedel i modulerande morfologi av kolesterol partiklar
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Madasamy, S., Liu, D., Lundry, J.,More

Madasamy, S., Liu, D., Lundry, J., Alderete, B., Kong, R., Robinson, J. P., Wu, A. H. B., Amento, E. P. Differential Effects of Lipid-lowering Drugs in Modulating Morphology of Cholesterol Particles. J. Vis. Exp. (129), e56596, doi:10.3791/56596 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter