Summary
בעבר, הקרנה בעלי חיים קטנים בוצעה בדרך כלל ללא יכולת למקד נפח הגידול מוגדרים היטב היטב. המטרה הייתה כדי לחקות את הטיפול של גליובלסטומה אנושי אצל חולדות. באמצעות פלטפורמה הקרנה בעלי חיים קטנים, ביצענו מונחה MRI תלת-ממד קונפורמיים הקרנה עם חיית המחמד המשנה של אמצעי אחסון מבוססי לחיזוק באווירה פרה.
Abstract
במשך עשורים, קרינה בעלי חיים קטנים המחקר בוצע בעיקר באמצעות גולמי למדי setups ניסיוני החלים טכניקות פשוטות חד-קרן ללא היכולת למקד אמצעי אחסון ספציפי או מוגדרים היטב היטב גידול. המסירה של קרינה הושג באמצעות מקורות הקרינה קבוע או מאיצים קוויים הפקת צילומי רנטגן megavoltage (MV). התקנים אלה אינם יכולים להשיג דיוק מילימטר הנדרשים לבעלי-חיים קטנים. יתר על כן, במינונים גבוהים נמסר בריא שמסביב רקמות הכביסה התגובה הערכה. כדי להגדיל את התרגום בין קטן מחקרים שנעשו בבעלי חיים ובבני אדם, המטרה שלנו היה לחקות את הטיפול של גליובלסטומה האנושי במודל של עכברים. כדי לאפשר הקרנה מדויקת יותר באווירה פרה, לאחרונה, דיוק תמונה מונחה קרינה בעלי חיים קטנים מחקר הפלטפורמות פותחו. בדומה למערכות התכנון האנושי, טיפול מתכנן אלה המיקרו-irradiators מבוסס על טומוגרפיה (CT). עם זאת, חדות נמוכה ברקמות הרכות על CT מקל מאוד מאתגרת כדי להתאים לשפה מטרות ברקמות מסוימות, כגון המוח. לפיכך, שילוב דימות תהודה מגנטית (MRI), בעל ניגודיות מצוינת ברקמות הרכות, בהשוואה ל- CT, תאפשר של תיחום מדויק יותר של היעד עבור הקרנה. בחודש האחרון טכניקות הדמיה גם ביולוגי של העשור, כגון טומוגרפיית פליטת פוזיטרונים (PET) צבר ריבית להדרכה טיפול טיפול קרינה. PET מאפשר את החזיית למשל, צריכת גלוקוז, חומצות תחבורה או היפוקסיה, נוכח הגידול. פילוח אותם חלקים מאוד המקדימות או רדיו עמידים של הגידול עם מינון גבוה יותר יכול לתת יתרון הישרדות. השערה זו הובילה המבוא של נפח גידול ביולוגי (BTV), מלבד אמצעי האחסון קונבנציונאלי היעד ברוטו (GTV), אחסון של יעד קליניים (CTV), אחסון של יעד מתוכנן (זאת).
במעבדה הדמיה פרה של אוניברסיטת גנט, זמינות של מיקרו-בעוצמה, חיה קטנה PET ו- 7 T חיה קטנה MRI. המטרה היא לשלב הקרנה מונחה MRI ו מונחה PET אחסון תת לחיזוק במודל חולדה גליובלסטומה.
Introduction
Glioma בדרגה גבוהה הוא הגידול ממאיר במוחו הנפוץ ביותר, האגרסיביים ביותר במבוגרים עם חציון ההישרדות של 1 שנה למרות הקדמה הנוכחי. הטיפול כולל כריתה כירורגית מקסימלי ואחריו טיפול קרינתי חיצוני משולב קרן (RT) temozolomide (TMZ), ואחריו תחזוקה TMZ1,2,3. מאז כניסתה של TMZ עכשיו יותר מאשר לפני 15 שנה, אין שיפורים משמעותיים שנעשו על הטיפול של גידולים אלה. לכן, יישום אסטרטגיות טיפוליות חדשות דחוף אבל כדאי ייחקר תחילה במודלים טיפול לסרטן בבעלי חיים קטנים (בעיקר עכברים וחולדות). מודלים מכרסמים נושאות יכול לשמש כדי לחקור את היעילות של פרוטוקולים חדשים ומורכבים קרינה, ואולי בשילוב עם הסוכנים טיפול (חדש), כדי להעריך את התגובה קרינה או לחקור סוכנים רדיו-מגן. היתרון העיקרי של המחקר קרינה פרה היא היכולת לעבוד תחת תנאים מבוקרים ניסיוני באמצעות קוהורטות גדולות וכתוצאה מכך התשואה נתונים מואצת עקב לכלבים קצר יותר של מכרסמים. הממצאים פרה צריך להיות מתורגם ואז ניסוי קליני בצורה הרבה יותר מהר ויעיל יותר מאשר תרגול הנוכחי4.
ניסויים קרינה בעלי חיים קטנים בעשרות השנים האחרונות בדרך כלל הושגו באמצעות קרינה קבוע מקורות5,6,7, למשל, 137Cs ו- 60Co, איזוטופים, או ליניארית ' מאיצים ' מיועד לשימוש קליני בבני אדם, החלת שדה הקרינה יחיד עם צילומי רנטגן MV6,8,9,10,11. עם זאת, התקנים אלה לא להגיע דיוק מילימטר, אשר נדרש עבור חיות קטנות12. יתר על כן, צילומי רנטגן MV יש מאפיינים מתאים בין מטרות קטנות, כגון שיצטברו מינון-הממשק רקמות אוויר באזור הכניסה של הקורה במידה לפי סדר החיות גודלו4,6 ,8,9,10,11. לאחרון הופך די מאתגר כדי לספק מנה אחידה גידול בעוד חוסך סביב מוח נורמלי רקמות4,8,9,10,11. לכן, לא ברור על אילו מחקרים בבעלי חיים הנוכחי במידה עדיין רלוונטיות RT מודרני תרגול12. במובן זה, פיתחה לאחרונה תלת מימדי (3D) קונפורמיים קטנים בעלי חיים מיקרו-irradiators מבטיחים כדי לגשר על הפער הטכנולוגי בין תלת-ממד תמונה מונחה RT בטכניקות מתקדמות, כגון עוצמת מאופנן הקרנות (IMRT) או קשתות קונפורמיים בשימוש בני אדם הקרנה חיה קטנה הנוכחי4,13. פלטפורמות אלה לעשות שימוש של מקור רנטגן kilovoltage (kV) כדי לקבל חדות penumbras וכדי למנוע הצטברות במינון. פלטפורמות אלה כוללים שלב מבוקר-מחשב לחיה מיצוב, kV מקור רנטגן הדמיה, הקרנות, אסיפה גנטרי הסיבוב כדי לאפשר משלוח קרינה זוויות שונות, ומערכת collimating לעצב את קרן קרינה 4. בשנת 2011 מיקרו-בעוצמה הותקן במעבדה הדמיה פרה של אוניברסיטת גנט (איור 1). מערכת זו דומה לאימון הקרנות האנושית המודרנית, ומאפשרת מגוון רחב של ניסויים פרה, כגון הסינרגיה של קרינה עם טיפולים אחרים, ערכות קרינה מורכבות תמונה מונחה מטרה תת להגביר את לימודי.
טיפול מתכנן אלה המיקרו-irradiators מבוסס על CT, אשר שווה ל האדם תכנון מערכות14,15. גלאי על לוח רנטגן CT הדמיה, משמש בשילוב עם אותו kV שפופרת רנטגן המשמש במהלך הטיפול. CT הדמיה משמש זה מאפשר מיקום בעלי חיים מדויק ומספק מידע הדרושים לחישוב מינון הקרינה בודדים באמצעות פילוח. עם זאת, בשל הניגוד ברקמות הרכות נמוך ב- CT הדמיה, גידולים במוח של חיות קטנות, כמו glioma בדרגה גבוהה, לא יכול בקלות מאפשרת. שילוב של הדמיה מודאליות רב לכן הכרחי עבור תיחום אמצעי אחסון יעד מדויק. בהשוואה ל- CT, MRI מספקת ניגודיות לרקמות רכות מאוד נעלים. זה עושה את זה הרבה יותר קל לדמיין את גבולות הנגע כי תגרום תיחום הרבה יותר מאמצעי האחסון היעד, עוזר כדאי להאיר את הנגע ולהימנע סביב רקמות, כמופיע ב איור 24, 16. יתרון נוסף הוא כי MRI משתמשת מייננת, בניגוד CT שעושה שימוש קרינה מייננת. החסרונות העיקריים של MRI הן ארוכות יחסית רכישת פעמים גבוה עלויות התפעול. חשוב לציין כי סריקות MRI אינם יכולים לשמש עבור חישובים במינון, כפי שהם לא מספקים את המידע צפיפות אלקטרונים נדרשים, למרות התקדמות בתחום זה, גם עם ההתפתחות האחרונה של מר-LINACS. ככזה, dataset CT/MRI משולב היא השיטה של בחירה עבור תכנון של ההקרנה של glioma ממאירים, המכיל שני המידע הנדרש עבור מיקוד (מבוססת MRI כרכים), מנה חישובים (צפיפות אלקטרונים מבוסס-CT).
כדי להקטין את הפער בין הקרנה בעלי חיים קטנים ושגרה קליני, MRI בבירור צריך ניתן לשלב את זרימת העבודה המיקרו-בעוצמה הדורשים רישום הנכון בין MRI ו- CT, וזה רחוק טריוויאלי. בנייר זה, פרוטוקול שלנו עבור מונחה MRI תלת-ממד קונפורמיים הקרנה של F98 גליובלסטומה בחולדות הנדונה, אשר כבר פורסם לאחרונה17.
למרות שילוב CT ו- MRI בזרימת העבודה של המיקרו-בעוצמה הוא צעד ברור קדימה במחקר הקרנה בעלי חיים קטנים, טכניקות דימות אנטומי אלה אינם מאפשרים תמיד הגדרה מלאה של אמצעי האחסון היעד. השינויים הפתולוגיים במוח ב- CT ו- MRI מאופיינים על ידי תוכן מים מוגברת (בצקת) ודליפה של מחסום הדם - מוח או שיפור ניגודיות. עם זאת, ניגודיות-שיפור והן רגשניים אזורים ב- MRI משוקלל T2 אינם תמיד מדד מדויק של היקף הגידול.תאים סרטניים זוהו הרבה מעבר לשוליים של ניגודיות-שיפור12. כמו כן, אף אחת משיטות אלה ניתן לזהות את החלקים האגרסיביים ביותר בתוך הגידול, אשר עשוי להיות אחראי על הישנות הגידול והתנגדות טיפולית. לכן, פרטים נוספים של טכניקות הדמיה מולקולרית כאילו PET יש ערך מוסף עבור RT יעד הגדרת עוצמת הקול כי שיטות אלה מאפשרות להמחיש מסלולים ביולוגיים ויוו12,18, 19.
בשנת 2000, לינג. et al. הציג את המושג של אחסון של יעד ביולוגי (BTV) על-ידי שילוב הדמיה אנטומית ופונקציונלית זרימת העבודה של הקרנות, המוביל אל מה הם קראו הקרנות קונפורמיים רב-ממדי20. זה יוצר את האפשרות לשפר את המינון פילוח על-ידי אספקת מנה לא אחידה לאזור היעד באמצעות לדוגמה תמונות חיות מחמד. הנפוצים ביותר PET מעקב עבור הגידול staging, לעקוב אחר הטיפול התגובה היא עבור חיל הים-18 (18F) הנקרא fluorodeoxyglucose (FDG), אשר מדמיין את חילוף החומרים של הגלוקוז21. ב סרטן הראש והצוואר, מחקרים קודמים הראו כי השימוש 18F-FDG מחמד הוביל אומדן טוב יותר של אמצעי האחסון גידול בפועל, כפי שהוגדרו על ידי דגימות פיפטות, לעומת CT ו- MRI22. במוח ראשוניים גידולים, איפה FDG אינה שימושית בשל האות רקע חזק מאוד מן המוח נורמלי, חומצות אמינו, כגון 11C-מתיונין ולאחרונה 18F-fluoroetthyltyrosine (FET), נחקרו עבור GTV תיחום מסומן לעתים קרובות הבדלים בין חומצה אמינית חיית המחמד, מבוססת MRI GTVs23. עם זאת, אין משפט פוטנציאליים חוקר את המשמעות של ממצא זה בוצעה כבר. במחקר זה, בחרנו חומצה אמינית מעקב 18F-FET ו- מעקב היפוקסיה 18F-fluoroazomycin-arabinoside (18F-FAZA). 18 F-FET ו- 18F-FAZA נבחרו משום ספיגה מוגברת של חומצה אמינית קשורה חזק עם קצב התפשטות גידולים ג'יגה-בתים, ואילו ספיגת של היפוקסיה PET-מעקב הוא מתואם עם התנגדות (כימותרפיה) הקרנות18 , 23. תת נפח לחיזוק באמצעות המיקרו-בעוצמה היה מותאם על ידי מתן מנה קרינה נוספים לחלק מוגדרת על-ידי חיית המחמד של הגידול F98 GB בחולדות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
המחקר אושרה על ידי ועדת האתיקה לניסויים בבעלי חיים (ECD 09/23 ו ECD 12/28). כל הפרטים המסחריים ניתן למצוא טבלה שלחומרים.
1. F98 ג'יגה-בתים עכברוש תא מודל
- התרבות התאים F98 ג'יגה-בתים, המתקבל בקרת האוויר, ב- monolayers שימוש של Dulbecco ששונה נשר בינוני, סרום עגל 10%, 1% פניצילין, סטרפטומיצין 1%, 1%-גלוטמין ו- 0.1% שהוא גוסס b, ומניחים בתוך חממה2 CO (5% CO2 ו- 37 מעלות צלזיוס).
- לחסן את התאים glioma במוח של חולדות נקבות F344 פישר (הגוף משקל 170 גרם).
- להשתמש בכלים סטריליים, ללבוש כפפות סטריליות בכל עת.
- עזים ומתנגד החולדות באמצעות הזרקת תערובת של 74 מ"ג/ק"ג קטמין intrapertioneally חריגות השירותים הווטרינריים 11 מ"ג/ק"ג (IP) עם מזרק אינסולין (1 מ"ל, ג'י 29). האסתטיזציה לאשר את העדר בתגובה רפלקס הנסיגה של האיבר. לשתק העכברושים התקן סטיאוטטי באמצעות נקודות קיבוע עבור האף והאוזניים. במקום יש עין carbomer ג'ל למניעת יובש בעיניים תחת הרדמה.
- לגלח את החולדה מרמת העין לחלק האחורי של הגולגולת, לחטא את העור עם povidone יוד.
- לחשוף את הגולגולת דרך חתך בקרקפת קו האמצע של 2 ס מ, להפוך את 1 מ"מ חור (מקדחת יהלום) 2 מ מ אחוריים 2.5 מ מ לרוחב כדי bregma באונה פרונטלית נכון.
- להכניס מחט האינסולין stereotactically מודרך (29 גרם) ולהזריק µL 5 תא ההשעיה (תאים F98 GB 20,000) עמוק באמצעות לקונטרולר משאבת microsyringe 3 מ מ (הגדרות: להזריק (I50), קצב nL 1/s (001 שם מחשב מארח)).
- לסגת לאט את המזרק וסגור את החתך עם שעווה לאיטום. תפר את העור ולחטא עם povidone יוד.
- ייצוב טמפרטורת הגוף של בעלי חיים לאחר הניתוח באמצעות מנורה אדומה. לפקח על ההתעוררות של העכברוש עד זה שהכרתו מספיק כדי לשמור על recumbency בחזה ובצלעות. אל תשיבו את החיה על החברה של בעלי חיים אחרים עד החלים לחלוטין. שמור כל החיות בתנאים מבוקרים לסביבה (12 h מחזורים/כהה נורמליים, 20-24 ° C ו- 40-70% לחות יחסית) עם מים ואוכל ad libitum. הקפד לעקוב החיות מקרוב על-ידי ניטור ממשקל גופם, מזון, צריכת מים, ואת פעילות, ההתנהגות הרגילה שלהם. השתמש מנה קטלנית של סודיום פנטוברביטל להרדים את החיות (160 מ"ג/ק"ג) אם נצפית ירידה של 20% מהמשקל או כאשר ההתנהגות הרגילה קשות מתדרדר (למשל, חוסר טיפוח).
2. אישור על הגידול
הערה: הערכת הגידול צמיחה 8 ימים לאחר חיסון באמצעות MRI משוקלל T2, MRI משופרת ניגודיות דינמי (DCE-MRI) חדות משופרת MRI T1 משוקלל. כאשר הגידול מגיע בגודל של 2.5 x 2.5 x 2.5 מ מ3, בחר את החולדה לטיפול.
- ראשית, להתחבר מחט 30 G צינור ארוך 60 ס מ, אשר ממוקם לווריד בווריד הזנב לרוחב. עזים ומתנגד העכברושים דרך קונוס האף עם 2% איזופלוריין מעורבב עם חמצן (0.3 L/דקה). לאשר ההרדמה כאשר העכברושים אינם מגיבים רפלקס הנסיגה של האיבר. לכסות את החולדות בשמיכה מחוממת ולמקם אותם על המיטה MRI. השתמש ג'ל עיניים carbomer למניעת יובש.
- למקם את המיטה בעל עם סליל השטח של המוח עכברוש קבוע, והצב את המיטה בתוך סליל המשדר 72 מ מ כל הגוף חולדה.
- בצע סריקה מאתר ואחריו סריקת אקו-ספין משוקלל T2 כדי להעריך את צמיחת הגידול. T2-MRI רצף פרטים: TR/טה 3661/37.1 ms, 109 מיקרומטר איזוטרופיות בתוך המטוס רזולוציה, פרוסה בעובי 600 מיקרומטר, ממוצעים 4, ת א 9 דקות 45 s.
- אם הגידול הוא אישר על הרכישה משוקלל T2, להחדיר סוכן ניגוד גדוליניום המכילות לתוך הצנרת שמוקם לווריד (MRI ניגודיות הסוכן; 0.4 mL/kg) 30 s לאחר תחילת הרכישה DCE-MRI. רוכשים DCE-MRI במהלך 12 דקות באמצעות זווית נמוכה מהיר ירה (פלאש) רצף בפרוסה אחת (1 מ מ עובי הפרוסה). והרזולוציה המרחבית בתוך המטוס של (312 מיקרומטר2) ולהשתמש רזולוציה טמפורלית של 1.34 s.
- שימוש בכלי ניתוח של רצף תמונות, בחר אזור בעל עניין (ROI) בתוך אזור הגידול חשוד כדי להתוות את עוצמת אות לאורך זמן. לאחר מכן, לנתח את צורת העקומה המתקבלת DCE לאשר הנוכחות של גליובלסטומה (איור 3).
- לבסוף, רוכשים את רצף חדות משופרת משוקלל T1 ספין-הד. T1-MRI רצף פרטים: TR/טה 1539/9.7 ms, 117 מיקרומטר איזוטרופיות בתוך המטוס רזולוציה, פרוסה בעובי 600 מיקרומטר, ממוצעים 3, ת א 4 דקות 15 ס' טיפוסי משופרת לעומת זאת מר משוקלל T1 תמונות מוצגות באיור2.
- לאחר השלמת רצף משוקלל T1, החיה יכולים להתעורר תחת פיקוח, עד זה חוזר conciousness מלא.
3. multimodality הדמיה עבור בחירת אמצעי אחסון היעד
הערה: כדי להיות מסוגל לבצע מונחה MRI תלת-ממד קונפורמיים הקרנה של העכברוש F98 GB מודל עם מונחה PET אחסון תת לחיזוק, 3 שיטות צורך לבצע הדמיה. ראשית, להזריק את radiotracer, ואז לבצע MRI במהלך מעקב ספיגת, לאחר מכן לבצע רכישה סטטי של חיית המחמד, טיפול תכנון טי
- עזים ומתנגד החיות באמצעות קונוס האף עם 2% איזופלוריין מעורבב עם חמצן (0.3 L/דקה). לאשר ההרדמה כאשר העכברושים אינם מגיבים רפלקס הנסיגה של האיבר. השתמש ג'ל עיניים carbomer למניעת יובש תחת הרדמה.
- נחדיר קטטר (26 גרם) לתוך הווריד של הזנב, הפעלת ההזרקה של 37 MBq של מחמד מעקב רדיואקטיבי מומס בתוך תמיסת מלח µL 200. להזריק או 18F-FET או 18F-FAZA, 30 דקות או שעתיים לפני הרכישה חיית המחמד, בהתאמה.
- להזריק MRI ניגודיות הסוכן (0.4 mL/kg) דרך הווריד בווריד הזנב בעזרת הצנתר 15 דקות לפני רכישת חיית המחמד.
- במקום החולדות על הפנימי המיטה multimodality ולאבטח באמצעות מהדקים וו ולופ, שמירה על משרה קבועה במהלך דימות, מיקרו-הקרנה (איור 1).
- תקן multimodality שלושה סמנים (נימים מלא במים) מתחת, מעל, מצד ימין של הגולגולת. מקם את החולדה, עדיין קבוע על המיטה multimodality, האוחז סורק MRI של בעלי חיים, לתקן את הסליל השטח של המוח עכברוש והצב זה בתוך סליל לכל הגוף המשדר עכברוש 72 מ מ. בצע סריקה מאתר ולאחריו רצף חדות משופרת משוקלל T1 ספין-הד.
- תחבורה החיה לבצע 18F-FET או 18F-FAZA מחמד רכישה. רוכשים סריקה טומוגרפית סטטי 30 דקות במצב-רשימה. הסריקה צריכה להיות רכשה גם 30 דקות לאחר ההזרקה 18F-FET או 2 h לאחר 18F-FAZA ההזרקה.
4. RT תכנון טיפול
- השתמש הטיפול קליניים תכנון מערכת (PCTPS) לתכנון הטיפול. ה-CT התכנון לייבא PCTPS ואת באופן ידני לפלח את התמונה CT לתוך שלוש מחלקות רקמות שונות: עצם, רקמה רכה, ואוויר. פילוח ידנית זו מבוססת על הגדרת שלושה ספי גריי-ערך שונה בסי. טי התכנון אלה ספי גריי-ערך שנבחרו באופן ידני צריך להיבחר כך אוויר במוח נעדר, את עובי עצם הגולגולת אינו אפס. ברגע ספי אלה מוגדרים, צפיפות חומרים מוקצים כברירת PCTPS עצם, רקמה רכה של אוויר (איור 4).
- אם רק הדרכה MRI יש צורך, לטעון את ה-mri, לרשום בשיתוף עם ה-CT התכנון באמצעות PCTPS.
- השתמש המרות של גוף קשיח (שלושה תרגומים, שלושה סבבים), הסימנים multimodality, הגולגולת. על-ידי השלכת את עוצמת האות מוגברת של הגולגולת ב- CT עם האות שחור ב- MRI, שילוב מדויק יכולה להיות מושגת (איור 5).
- בחר את היעד עבור הקרנה במרכז הגידול לשיפור חדות ב- MRI T1 משוקלל, ראה איור 6 ו- 7 איור.
- כאשר חיית המחמד פרטים נוספים חייב להיות כלול, לכלול רישום משותף CT/MRI/חיית מחמד באמצעות התוכנה כימות תמונה ביו (BIQS).
- השתמש בכלי contouring ב BIQS כדי להשיג חיית המחמד/MRI התמונה פיוז'ן (איור 8). לאחר רישום משותף, בחר את היעד במרכז תפיסה מעקב חיית המחמד מוגברת ב- BIQS (איור 9) ולהיכנס הקואורדינטות באופן ידני PCTPS באמצעות את השינויים הבאים: X → -X, Y ← Z ו- Z ← -Y.
- בחר את המינון הקבוע, מספר קשתות, קשת עמדה, סיבוב טווח הקשתות, ואת גודל קולימטור (איור 10).
- עבור מונחה MRI RT, השתמש בהגדרות הבאות: מנה לפי מרשם של 20 Gy, 3 קשתות מוצב הספה זוויות של-45 ° 0 °, 45 ° עם קשת סבבים של 120 °, וגודל קולימטור של 5 x 5 מ מ.
- עבור חיית המחמד-MRI-מודרכת RT, השתמש בהגדרות הבאות: מנה לפי מרשם של 20 Gy באמצעות קשתות 3 ואת קולימטור של 5 x 5 מ מ Gy 5 תוספת עבור תת נפח לחיזוק באמצעות 3 קשתות מישור של קולימטור 1 x 1 מ מ. בחר סיבוב של 120 ° עבור כל קשתות בזמן שינוי המיקום של הספה (-45 ° 0 °, 45 °).
- לחשב את ההתפלגות במינון בתוך החיה ואת הפרמטרים משלוח קרן למסור את המינון הקבוע היעד באמצעות את PCTPS. לפני הקרנה בפועל, מבחן לסיבובים arc-העמדות הספה שונים כדי למנוע התנגשות כלשהי במהלך הקרנה.
- עבור ההקרנות בפועל, לבחור מסנן 0.15 מ מ נחושת, לקבוע את המתח רנטגן 220 kV, להגדיר את תצלום הרנטגן הנוכחי כדי אמא 13, ואת המיקום קולימטור נכון לפיגום. מבצע של RT באמצעות העברת הפרמטרים משלוח קרן המתאים PCTPS המיקרו-בעוצמה.
- במהלך הליכים אלה, העכברוש נשמרת תחת הרדמה איזופלוריין רציף (איזופלוריין 2%, מעורבב עם חמצן 0.3 L/min). אחרי ההוצאה להורג של הקשת האחרונה החיה יכולים להתעורר תחת פיקוח, עד שזה יחזור להכרה מלאה.
5. במינון נפח היסטוגרמות (DVHs)
הערה: כדי להשוות את המינון בפועל להעביר את אמצעי האחסון המטרה גידול של רקמת מוח נורמלי שמסביב, לחשב את DVHs.
- צייר נפח-של-עניין (VOI) סביב הגידול במוח רגיל על משוקלל T1 משופרת לעומת זאת מר תמונות כדי לחשב ממוצע, מקסימום, מינימום המינון (איור 11).
- בתור פונדקאית עבור מקסימלי, אומר, מינון מינימלי כדי גידול ונפח האחסון רקמת מוח נורמלי, לחשב את D2, ה-D50ו ה-D90. D מציין את המינון שהתקבלו על-ידי x % נפח, מסומן על ידי הכתב התחתי, הנגזרות של DVH וכתוצאה מכך.
6. TMZ וכימותרפיה המזויפים
- כדי לחקות את הטיפול של גליובלסטומה בחולים, לנהל והמצוות כימותרפיה באמצעות זריקות IP של 29 מ"ג/ק"ג ש-TMZ מומס בתוך תמיסת מלח עם 25% dimethylsulfoxide (דימתיל סולפוקסיד) פעם ביום במשך 5 ימים החל מיום הקרנה24, 25. שימוש 1 מל, ג'י 29 מזרק אינסולין כדי להזריק את הזריקה.
- עבור קבוצת בקרה, ניהול הזרקה מהשלב 6.1 ללא TMZ.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
כדי לחקות את המתודולוגיה טיפול אנושי עבור ההקרנות של גליובלסטומה במודל של פרה, הכללה של הקרנות מונחה MRI היה הכרחי. שימוש PCTPS את הממשק מיקרו-בעוצמה הצלחנו לעורר F98 גליובלסטומה בחולדות עם מספר קשתות מישור קונפורמיים פילוח האזור חדות משופרת ב MRI T1 משוקלל17. גוף קשיח המרות בשילוב עם מיטה מודאליות מרובה שימשו לרישום התמונה בין MRI ותכנון טי Isocenter עבור הקרנה נבחר במרכז של אזור הגידול חדות משופרת ב- MRI T1 משוקלל (איור 7).
מינון הפצות, DVHs המצטבר של רשע, מינימלי, מקסימלי המינון של היעד ונפח האחסון רקמת מוח נורמלי חושבו עבור בעלי חיים שונים חמש (איור 12). על סמך הדמיון עם פרוטוקול הקרנה קליניים והפצה של המינון האופטימלי, תוכנית במינון באמצעות שלוש קשתות מישור נבחר. 90% של אמצעי האחסון היעד של החלת האחרון, קיבל את המינון הרצוי, תוך מזעור את המינון ל- רקמת מוח נורמלי17.
לאחר שהם מאשרים את ישימות מונחה MRI הקרנה של המודל גליובלסטומה עכברוש F98, ניסינו לשלב מבוסס-PET אחסון תת לחיזוק בזרימת העבודה פרה לתכנון RT. היינו מסוגלים לשלב 3 שיטות הדמיה, ביצוע ראשון MRI ולאחר מכן חיית המחמד, סוף סוף CT תוך העכברוש קבועה על מיטה multimodality תוצרת ללא צורך במיקור חוץ (איור 1). עבור רישום משותף אחד האופנים האלה, השתמשנו BIQS, הפעלת כלים הרבה יותר עבור נוקשה תואמות (איור 8). החלת שינוי צורה פשוטה, והן מר מבוסס מחמד מבוסס isocenter (איור 9) יכול להיות מועבר את PCTPS. איור 13, מוצגים MRI והן מבוססת-PET isocenter עבור הקרנה לאחר חישוב המינון ב PCTPS. כדי להאיר את אמצעי האחסון כולו לשיפור חדות בחרנו קולימטור של 5 x 5, שלוש קשתות מסתובב ° 120. לחיזוק החלק הפעיל ביותר סמויה הגידול מזוהה על 18F-FET חיית המחמד או חלק הגידול ביותר לפציעה hypoxic שזוהו על 18F-FAZA PET, מנה של 5 Gy שנבחרו, מועברים באמצעות של קולימטור של 1 מ מ קוטר. שוב, 3 קשתות סיבוב 120 ° מוחלים.
איור 1: מיקרו-בעוצמה שילוב שפופרת רנטגן kV gantry מסתובב, שלב רובוטי מבוקר-מחשב, מערכת collimating לצורה הקרן, גלאי CT שטוחים. החיה מושם על 4 מ מ עבה PVC multimodality מיטה כדי למנוע תנועות בין רכישות הדמיה מרובים, כגון בסריקה MRI ואחריו סריקת התכנון, אשר מקלה על התמונה פיוז'ן. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 2: אישור גליובלסטומה. MRI משוקלל T1, T2 משוקלל MRI ו DCE-MRI של חולדה F98 ג'יגה-בתים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 3: עקומת DCE. שימוש בכלי ניתוח של רצף תמונות, רועי ניתן לבחור בסריקה DCE-MRI כדי להתוות את עוצמת אות לאורך זמן. כתוצאה מכך, ניתוח של צורת העקומה המתקבלת DCE הוא מסוגל לאשר הנוכחות של גליובלסטומה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 4: פילוח CT. פילוח המבוסס על CT נעשית על-ידי הגדרה ידנית של מספר ערכי הסף להבחין במדויק אוויר רקמת הריאה, רקמת שומן, עצמות, רקמות אחרות בתוך התמונה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 5: פיוז'ן MRI-CT. על-ידי השלכת את עוצמת האות מוגברת של הגולגולת ב- CT עם האות שחור ב- MRI, שילוב מדויק יכולה להיות מושגת. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 6: קרן חרוט טי שום גידול מוצגת ב- CT, ואי אפשר לבחור את isocenter במרכז של הגידול. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 7: חדות משופרת MRI T1 משוקלל. MRI חדות משופרת משוקלל T1 מדמיין בבירור גידול במוח F98 חולדה. במרכז שיפור הניגודיות נבחר את isocenter לתכנון RT. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 8: MRI-PET פיוז'ן. באמצעות הכלי contouring ב BIQS, PET/MRI התמונה פיוז'ן מושגת.אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 9: בחירת היעד MRI-PET- ה יעד עבור הקרנה נבחרה במרכז ניגודיות-שיפור ב- MRI T1 משוקלל (משמאל). המטרה לחיזוק תת נפח נבחרה במרכז האות מוגברת 18נ-FET PET (מימין). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 10: הקרנות תכנון. כדי לחשב את הקרנות התכנון, בחר את isocenter, מרשם במינון, מספר קשתות, קשת עמדה, סיבוב טווח הקשתות, ואת גודל קולימטור. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 11: חישוב DVH. צייר נפח-של-עניין (VOI) סביב הגידול על משוקלל T1 משופרת לעומת זאת מר תמונות כדי לחשב את DVH באמצעי אחסון זה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 12: התוכנית מנה משתמש משופרת לעומת זאת MRI משוקלל T1 ו arcsto מישור שלושה לספק 20 Gy לאמצעי האחסון היעד. בצד הימין, ניתנת את המצטבר במינון נפח היסטוגרמה (DVH) של אמצעי האחסון הגידול ואת רקמת מוח נורמלי התחום על חדות משופרת MRI T1 משוקלל. דמות זו שונתה מ. Bolcaen et al. 20 אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 13: נבחרת MRI ו מונחה PET isocenter עבור הקרנה. תמונת CT בתצוגת צירית, הילתית הווריד הוא מדמיין עם התוכנית במינון אספקת 20 Gy לאזור היעד (אזור צהוב). Isocenter אשר זוהה על שיפור ניגודיות MRI הוא גלוי (ירוק) והוא isocenter מקומי על החלק הגידול סמויה פעיל המזוהה על 18F-FET מחמד גם גלוי (אדום). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
כדי להשיג הקרנה מדויק של המטרה גידול גליובלסטומה במוח עכברוש, הדרכה CT ב- board של המיקרו-בעוצמה לא היה מספיק. גידולים במוח גלויים בקושי בשל ניגוד רקמות רכות לא מספיק, גם אם אפשר היה שיפור ניגודיות. ככזה, MRI צריך להיכלל כדי לאפשר הקרנה מדויקת יותר. באמצעות רכישת רציפים של מר על מערכת T 7 ורכישה CT על המיקרו-בעוצמה שהצלחנו למקד את המינון לרקמת הגידול לשיפור חדות במוח ולחשב תוכנית במינון באמצעות תכנון בסי-טי זה היה ריאלי לאחר התמונה פיוז'ן והמנה חישובים באמצעות ה-PCTPS17. עם זאת, אותו יש לשמור כי MRI מועדת עיוותים גיאומטריים אשר לא ייתוקנו ב פרוטוקול זה. יתר על כן, לפני תרגום זה פרוטוקול הקרנה לחלקים אחרים של הגוף, מחקר דרוש נוסף. יש לקחת בחשבון את חשיבות פילוח מדויק רקמות עקב השימוש פוטונים באנרגיה kV התחתון. בזמן פילוח לתוך שלוש מחלקות רקמות עשויה להספיק במוח עכברוש, עוד שיעורים רקמות צריך להיות המצוין באזור בית החזה או הבטן של חולדות לספק חישובים במינון מדויק. כדי למנוע תנועה במהלך ההובלה בין מערכות הדמיה שונים, עשינו שימוש מיטה multimodality אשר ממזער את תנועת הראש (איור 1). עם זאת, מאמץ נוסף הכרחי בעת החלת פרוטוקול זה לחלקי גוף אחרים, אזורים או בית החזה או הבטן. הקרנה חיה קטן במיוחד של איברים מושפע תנועה בדרכי הנשימה או מעבר מעיים הוא עדיין מאתגר.
שילוב של מונחה PET אחסון תת לחיזוק הוצגה גם כדי להיות ריאלי, למרות פרוטוקול מהגידולים. יתרון של טכניקות הדמיה גרעינית, כמו חיית המחמד, הוא היכולת תמונה של הטרוגניות בתוך גידולים, אשר מאפשר מיקוד חלקים סמויה מאוד פעיל או קרינה עמיד של הגידול. הצלחנו להגדיל את המינון, דווקא בחרו על האזור הפעיל ביותר מבחינה ביולוגית או ביותר לפציעה hypoxic של הגידול באמצעות 18F-FET חיית המחמד או 18F-FAZA חיית המחמד, בהתאמה. השלב הקריטי בפרוטוקול הוא רישום ושיתוף תמונות. כיום, לא תוכנה הוא אפשרות לרשום באופן אוטומטי משותפת קליניים MRI או CT PET תמונות עם הפארמצבטית ודיוק גבוהה מספיק. באופן כללי, חיית המחמד המשדרים נוירו-אונקולוגיה הצג ספיגה נמוכה של מוח נורמלי זה מסבך את תהליך ההרשמה. היתוך של שלוש שיטות הדמיה (CT MRI PET), העדפנו את BIQS ולא את PCTPS, אשר כיום לא מפותח בקלות לשלב מספר שיטות הדמיה. בנוסף, BIQS יש יותר חכם כלים להתאמת נוקשה. עזרה גדולה היא גם השימוש מיטה מודאליות מרובה, מניעת תנועת החיה בין הרכישות הדמיה שונות. עם זאת, ההרשמה לעבודה ידנית הוא זמן רב ומגדיל את פרק הזמן של הרדמה של בעלי החיים. ברגע הרישום התמונה מושגת, מייצא את נקודות הציון BIQS לתוך PCTPS היה ריאלי על-ידי החלת שינוי צורה פשוטה על הציון של המטרה.
זה לא רק חשוב למקד במדויק את עוצמת הקול של הגידול (ביולוגית): ממעט של רקמת מוח נורמלי שמסביב חייב להילקח בחשבון גם כן. האחרון הוא לעיתים קרובות מוזנח בניסויים בבעלי חיים הקרנות הנוכחי, אבל מאוד חשוב לעשות את הדגם גם הרלוונטית קלינית. זה הושג על-ידי החלת מספר קשתות מישור. לידע שלנו, מרובים arc והקרנות בבעלי חיים קטנים לעולם לא הוחל לפני. לגבי השימוש קרן, מתודולוגיה זו הוא ב סגור את הדמיון עם קליני תמונה מונחה קונפורמיים RT ומקבל עקב השימוש של קשת טיפול המטרה בסופו של דבר את המינון הקבוע, בעוד הרקמות רגילה לקבל רק שבריר מזה. ככזה, צעד ראשון עשוי לצמצם את הפער בין קליניות RT טכנולוגיה17. מגבלה של המיקרו-בעוצמה זו הוא גנטרי הסיבוב הוא מוגבל ל- 120 °. שילוב של קשת סיבובים עם שינוי בעמדה הספה גדל עוד יותר ממעט רקמת מוח נורמלי סביב המטרה גידול.
מתודולוגיה זו היא צעד חשוב לקראת הכללתה של שיטות הדמיה ביולוגי להדרכה הקרנות. עם זאת, פיתוחים חדשים נדרשים כדי לפשט את התמונה קליניים פיוז'ן וכדי לשלב ציור במינון לפי מספרים (DPBN) ביישומים פרה. השימוש הנוכחי של המיקרו-בעוצמה, עתה אנו מסוגלים ליישם תת נפח לחיזוק; עם זאת, DPBN אינו אפשרי עדיין בשל מגבלות מינון חישובים, סיבובים גנטרי, ועיצוב קולימטור. לבסוף, ההתפתחות לדחוס פרה סורקי PET המציע רזולוציה מרחבית מילימטר הוא מבטיח26 התקנים אלה עשוי לספק פתרון אלגנטי מאוד לשלב את חיית המחמד פלטפורמה קרינה בעלי חיים קטנים.
להדגים את הישימות של מודל זה עבור MRI משולב, מונחה חיית המחמד הקרנה וכימותרפיה של גליובלסטומה בחולדות, למחקר עתידי על הרפוי חדש גליובלסטומה. יתר על כן, היישום של מונחה PET אחסון תת לחיזוק הוא צעד ראשון לקראת שיתוף BTV בתכנון קרינה טיפול של מודלים סרטן בעלי חיים קטנים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים יש שאין ניגודי אינטרסים לחשוף
Acknowledgments
המחברים רוצה להודות Stichting לוקה Hemelaere וסורופטימיסט לתמיכה עבודה זו.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| GB RAT model | |||
| F98 Glioblastoma cell line | ATCC | CRL-2397 | |
| Fischer F344/Ico crl Rats | Charles River | N/A | http://www.criver.com/products-services/basic-research/find-a-model/fischer-344-rat |
| Micropump system | World Precision Instruments | UMP3 | Micro 4: https://www.wpiinc.com/products/top-products/make-selection-ump3-ultramicropump/#tabs-1 |
| Stereotactic frame | Kopf | 902 | Model 902 Dual Small Animal Stereotaxic frame |
| diamant drill | Velleman | VTHD02 | https://www.velleman.eu/products/view/?id=370450 |
| Bone wax | Aesculap | 1029754 | https://www.aesculapusa.com/products/wound-closure/hemostatic-bone-wax |
| Insulin syringe Microfine | Beckton-Dickinson | 320924 | 1 mL, 29G |
| InfraPhil IR lamp | Philips | HP3616/01 | |
| Ethilon | Ethicon | 662G/662H | FS-2, 4-0, 3/8, 19 mm |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cell culture | |||
| DMEM | Invitrogen | 14040-091 | |
| Penicilline-streptomycine | Invitrogen | 15140-148 | |
| L-glutamine | Invitrogen | 25030-032 | |
| Fungizone | Invitrogen | 15290-018 | |
| Trypsin-EDTA | Invitrogen | 25300-062 | |
| PBS | Invitrogen | 14040-224 | |
| Falcons | Thermo Scientific | 178883 | 175 cm2 nunclon surface, disposables for cell culture with filter caps |
| Cell freezing medium | Sigma-aldrich | C6164 | Cell Freezing Medium-DMSO, sterile-filtered, suitable for cell culture, endotoxin tested |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Animal irradiation | |||
| Micro-irradiator | X-strahl | SARRP | |
| software for irradiation | X-strahl | MuriPlan | pre-clinical treatment planning system (PCTPS), version 2.0.5. |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Small animal PET | |||
| microPET system possibility 1 | Molecubes | B-Cube | http://www.molecubes.com/b-cube/ |
| microPET system possibility 2 | TriFoil Imaging, Northridge CA | FLEX Triumph II | http://www.trifoilimaging.com |
| PET tracers | In-house made | 18F-FDG, 18F-FET, 18F-FAZA, 18F-Choline | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Small animal MRI | |||
| microMRI system | Bruker Biospin | Pharmascan 70/16 | https://www.bruker.com/products/mr/preclinical-mri/pharmascan/overview.html |
| Dotarem contrast agent | Guerbet | MRI contrast agent, Dotarem 0,5 mmol/ml | |
| rat whole body transmitter coil | Rapid Biomedical | V-HLS-070 | |
| rat brain surface coil | Rapid Biomedical | P-H02LE-070 | |
| Water-based heating unit | Bruker Biospin | MT0125 | |
| 30 G Needle for IV injection | Beckton-Dickinson | 305128 | 30 G |
| PE 10 tubing (60 cm/injection) | Instech laboratories, Inc | BTPE-10 | BTPE-10, polyethylene tubing 0.011 x .024 in (0.28 x 60 mm), non sterile, 30 m (98 ft) spool, Instech laboratories, Inc Plymouth meeting PA USA- (800) 443-4227- http://www.instechlabs.com |
| non-heparinised micro haematocrit capillaries | GMBH | 7493 21 | these capillaries are filled with water to create markers visible on MRI and CT |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Consumables | |||
| isoflurane: Isoflo | Zoetis | B506 | Anaesthesia |
| ketamine: Ketamidor | Ecuphar | Anaesthesia | |
| xylazine: Sedaxyl | Codifar NV | Anaesthesia | |
| catheter | Terumo | Versatus-W | 26G |
| Temozolomide | Sigma-aldrich | T2577-100MG | chemotherapy |
| DMSO | Sigma-aldrich | 276855-100ML | |
| Insulin syringe Microfine | Beckton-Dickinson | 320924 | 1 mL, 29G |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Image analysis | |||
| PMOD software | PMOD technologies LLC | PFUS (fusion tool) | biomedical image quantification software (BIQS), version 3.405, https://www.pmod.com/web/?portfolio=22-image-processing-pfus |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anesthesia-equipment | |||
| Anesthetic movabe unit | ASA LTD | ASA 0039 | ASA LTD, 5 valley road, Keighley, BD21 4LZ |
| Oxygen generator | Veterinary technics Int. | 7F-3 | BDO-Medipass, Ijmuiden |
References
- Stupp, R., et al. Promising survival for patients with newly diagnosed glioblastoma multiforme treated with concomitant radiation plus temozolomide followed by adjuvant temozolomide. J Clin Oncol. 20 (5), 1375-1382 (2002).
- Dhermain, F. Radiotherapy of high-grade gliomas: current standards and new concepts, innovations in imaging and radiotherapy, and new therapeutic approaches. Chin J Cancer. 33 (1), 16-24 (2014).
- Ahmed, R., et al. Malignant gliomas: current perspectives in diagnosis, treatment, and early response assessment using advanced quantitative imaging methods. Cancer Manag Res. 6, 149-170 (2014).
- Verhaegen, F., Granton, P., Tryggestad, E. Small animal radiotherapy research platforms. Phys Med Biol. 56 (12), R55-R83 (2011).
- Kinsella, T. J., Vielhuber, K. A., Kunugi, K. A., Schupp, J., Davis, T. W., Sands, H. Preclinical toxicity and efficacy study of a 14-day schedule of oral 5-iodo-2-pyrimidinone-2-deoxyribose as a prodrug for 5-iodo-2-deoxyuridine radiosensitization in U251 human glioblastoma xenografts. Clin Cancer Res. 6 (4), 1468-1475 (2000).
- Vellimana, A. K., et al. Combination of paclitaxel thermal gel depot with temozolomide and radiotherapy significantly prolongs survival in an experimental rodent glioma model. J Neurooncol. 111 (3), 229-236 (2012).
- Kioi, M., Vogel, H., Schultz, G., Hoffman, R. M., Harsh, G. R., Brown, J. M. Inhibition of vasculogenesis, but not angiogenesis, prevents the recurrence of glioblastoma after irradiation in mice. J Clin Invest. 120 (3), 694-705 (2010).
- Vinchon-Petit, S., Jarnet, D., Jadaud, E., Feuvret, L., Garcion, E., Menei, P. External irradiation models for intracranial 9L glioma studies. J Exp Clin Cancer Res. 29, 142 (2010).
- Yang, W., et al. Convection enhanced delivery of carboplatin in combination with radiotherapy for treatment of brain tumors. J Neurooncol. 101 (3), 379-390 (2011).
- Rousseau, J., et al. Efficacy of intracerebral delivery of cisplatin in combination with photon irradiation for treatment of brain tumors. J Neurooncol. 98 (3), 287-295 (2010).
- Baumann, B. C., et al. An integrated method for reproducible and accurate image-guided stereotactic cranial irradiation of brain tumors using the small animal radiation research platform. Transl Oncol. 5 (4), 230-237 (2012).
- Grosu, A. -L., et al. Implications of IMT-SPECT for postoperative radiotherapy planning in patients with gliomas. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 54 (3), 842-854 (2002).
- Butterworth, K. T., Prise, K. M., Verhaegen, F. Small animal image-guided radiotherapy: Status, considerations and potential for translational impact. Br J Radiol. 88 (1045), 4-6 (2015).
- Aird, E. G. A., Conway, J. CT simulation for radiotherapy treatment planning. Br J Radiol. 75 (900), 937-949 (2002).
- Baker, G. R. Localization: Conventional and CT simulation. Br J Radiol. 79 (Spec No 1). , S36-S49 (2006).
- Corroyer-Dumont, A., et al. MRI-guided radiotherapy of the SK-N-SH neuroblastoma xenograft model using a small animal radiation research platform. Br J Radiol. 90 (1069), 20160427 (2017).
- Bolcaen, J., et al. MRI-guided 3D conformal arc micro-irradiation of a F98 glioblastoma rat model using the Small Animal Radiation Research Platform (SARRP). J Neurooncol. 120 (2), 257-266 (2014).
- Niyazi, M., et al. FET-PET for malignant glioma treatment planning. Radiother Oncol. 99 (1), 44-48 (2011).
- Grosu, A. L., et al. First experience with I-123-alpha-methyl-tyrosine SPECT in the 3-D radiation treatment planning of brain gliomas. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 47 (2), 517-526 (2000).
- Ling, C. C., et al. Towards multidimensional radiotherapy (MD-CRT):biological imaging and biological conformality. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 47 (3), 551-560 (2000).
- Wahl, R. L., Jacene, H., Kasamon, Y., Lodge, M. A. From RECIST to PERCIST: Evolving Considerations for PET response criteria in solid tumors. J Nucl Med. 50 Suppl 1. (5), 122S-150S (2009).
- Daisne, J. F., et al. Tumor volume in pharyngolaryngeal squamous cell carcinoma: comparison at CT, MR imaging, and FDG PET and validation with surgical specimen. Radiology. 233 (1), 93-100 (2004).
- Grosu, A. -L., Weber, W. PET for radiation treatment planning of brain tumours. Radiother Oncol. 96 (3), Elsevier Ireland Ltd. 325-327 (2010).
- Banissi, C., Ghiringhelli, F., Chen, L., Carpentier, A. F. Treg depletion with a low-dose metronomic temozolomide regimen in a rat glioma model. Cancer Immunol Immunother. 58, 1627-1634 (2009).
- Robinson, C. G., et al. Effect of alternative temozolomide schedules on glioblastoma O(6)-methylguanine-DNA methyltransferase activity and survival. Br J Cancer. 103, 498-504 (2010).
- España, S., Marcinkowski, R., Keereman, V., Vandenberghe, S., Van Holen, R. DigiPET: sub-millimeter spatial resolution small-animal PET imaging using thin monolithic scintillators. Phys Med Biol. 59 (13), 3405 (2014).
