Summary
Geçmişte, küçük hayvan ışınlama genellikle iyi arasındadır tümör cilt hedef yeteneği olmadan gerçekleştirildi. Sıçanlarda insan glioblastoma tedavisinde taklit etmek için hedefi oldu. Küçük hayvan ışınlama platformu kullanarak, evde beslenen hayvan tabanlı alt birim preklinik bir ortamda artırılması ile MRI destekli 3D açıkorur ışınlama gerçekleştirilen.
Abstract
On yıllardır, küçük hayvan radyasyon araştırma çoğunlukla belirli veya iyi arasındadır tümör hacmi hedeflemek için yetenek olmadan basit tek lazer teknikleri uygulayarak oldukça ham deneysel kurulumları kullanılarak gerçekleştirildi. Radyasyon teslimini sabit radyasyon kaynakları veya lineer Hızlandırıcılar megavoltage (MV) x-ışınları üreten kullanarak sağlanır. Bu cihazların küçük hayvanlar için gerekli alt milimetrelik hassasiyet elde edemiyoruz. Ayrıca, yüksek dozlarda sağlıklı çevreleyen doku kirli Çamaşırlık yanıt değerlendirmesi için teslim. Küçük hayvan çalışmaları ve insanlar arasında çeviri artırmak bir sıçan modelinde insan glioblastoma tedavisinde taklit etmek için amacımız olduğunu. Preklinik bir ortamda daha doğru bir ışınlama etkinleştirmek için son zamanlarda, hassas küçük hayvan radyasyon resim destekli araştırma platformlar geliştirilmiştir. Benzer şekilde insan planlama sistemleri, bu mikro-irradiators üzerinde planlama tedavi Bilgisayarlı Tomografi (CT) dayanmaktadır. Ancak, düşük yumuşak doku karşıtlık CT'çok zorlu hedefleri beyin gibi bazı dokularda yerelleştirmek için yapar. Bu nedenle, manyetik rezonans görüntüleme (MRG), CT kıyasla mükemmel yumuşak doku kontrast olan birleşmeyle ışınlama için hedef daha kesin bir tarif sağlayacak. Son on yıl da biyolojik görüntüleme teknikleri, Pozitron emisyon tomografisi (PET) gibi radyasyon terapisi tedavi rehberlik için faiz kazandı. Evde beslenen hayvan örneğin, glikoz tüketimi, amino asit taşıma veya hipoksi, tümör mevcut görselleştirme sağlar. Tümör daha yüksek bir doz ile son derece proliferatif veya radyo dayanıklı bölümlerini hedefleme bir hayatta kalma yarar verebilir. Bu hipotez biyolojik tümör hacmi (BTV), geleneksel brüt hedef birimi (otomobil) yanı sıra, klinik hedef birimi (CTV) ve planlanan hedef birimi (PTV) giriş için açtı.
Ghent Üniversitesi preklinik görüntüleme Laboratuvarı bir mikro-irradiator, küçük hayvan evcil hayvan ve 7 T küçük bir hayvan MRG kullanılabilir. Hedefi MRI güdümlü ışınlama ve alt birim evde beslenen hayvan-güdümlü bir glioblastoma sıçan modelinde artırılması dahil oldu.
Introduction
Yüksek dereceli tümörü ile 1 yıl geçerli tedavi şekilleri rağmen medyan sağkalım erişkinlerde en yaygın ve en saldırgan kötü huylu beyin tümörü var. Standart tedavi maksimal cerrahi rezeksiyon kombine dış beam radyasyon tedavisi (RT) tarafından takip ve temozolomide (TMZ), bakım TMZ1,2,3tarafından takip içerir. Giriş TMZ beri şimdi daha çok 15 yıl önce bu tümör tedavisinde önemli hiçbir yenilik yaptık. Bu nedenle, yeni tedavi stratejileri uygulanması acil ama ilk küçük hayvan kanser terapisi modellerinde (çoğunlukla fare ve sıçanlar) araştırılmalıdır. Tümörü taşıyan kemirgen modelleri yeni ve karmaşık radyasyon protokolleri, muhtemelen diğer (yeni) tedavi ajanlarıyla, radyasyon yanıt değerlendirmek için veya radyo-koruyucu maddelerin araştırmak için kombine etkinliğini araştırmak için kullanılabilir. Preklinik radyasyon araştırma önemli bir avantajı büyük tabur hızlandırılmış veri verim kemirgenler kısa katlanacak nedeniyle sonuçlanan kullanarak kontrollü deneysel koşullarda çalışmak için yeteneğidir. Preklinik bulgular sonra içine bir klinik geçerli uygulama4daha çok daha hızlı ve daha verimli bir şekilde tercüme edilmelidir.
Son on yıl içinde küçük hayvan radyasyon deneyler genellikle sağlanmıştır edildi kullanarak sabit radyasyon kaynakları5,6,7, örneğin, 137Cs ve 60Co, izotoplar, veya doğrusal Hızlandırıcılar'ı bir tek radyasyon alan MV x-ışınları6,8,9,10,11ile uygulama insan klinik kullanılmak üzere tasarlanmıştır. Ancak, bu cihazların küçük hayvanlar12için gerekli olan alt milimetrelik hassasiyet ulaşmaz. Bir doz birikmesi hava-doku arayüzüne giriş bölgesi ile bir ölçüde sırasına göre hayvan demetinin boyutu gibi kendisi4,6 Ayrıca, MV x-ışınları özellikleri küçük hedefler, irradiating için uygun olmayan var ,8,9,10,11. İkinci normal beyin doku4,8,9,10,11çevreleyen tutumlu süre bir tümör için Tekdüzen bir doz teslim etmek oldukça zor yapar. Bu nedenle, hangi ölçüde geçerli hayvan çalışmaları hala modern RT uygulama12için ilgilidir için belirsizdir. Bu bağlamda, son zamanlarda gelişmiş üç boyutlu (3D) açıkorur küçük hayvan mikro-irradiators teknolojik gelişmiş 3D görüntü güdümlü RT gibi teknikleri modülasyonlu yoğunluğu radyasyon terapisi (IMRT) arasında köprü için umut verici veya açıkorur kemerler kullanılan insanlar ve geçerli küçük hayvan ışınlama4,13. Bu platformlar yapmak bir kilovoltage (kV) x-ışını kaynağı keskin penumbras elde etmek için ve doz birikmesini önlemek için kullanımı. Bu platformlar için konumlandırma, bir kV hayvan bir bilgisayar kontrollü sahne dahil görüntüleme ve radyasyon tedavisi, çeşitli açılardan ve radyasyon ışını şekle collimating bir sistemi radyasyon teslim izin vermek için bir döngüsel gantry derleme için x-ışını kaynağı 4. 2011 yılında Ghent Üniversitesi (şekil 1) preklinik görüntüleme laboratuarında bir mikro-irradiator yüklendi. Bu sistem modern insan radyoterapi uygulamaya benzer ve preklinik deneyler, radyasyon diğer tedaviler, karmaşık radyasyon düzenleri ve alt hedef görüntü güdümlü artırma çalışmaları ile sinerji gibi çok çeşitli sağlar.
Bu mikro-irradiators üzerinde planlama tedavi insan planlama sistemleri14,15' e denktir CT temel alır. CT görüntüleme için yerleşik bir x-ışını dedektörü tedavi sırasında kullanılan aynı kV x-ışını tüpü ile birlikte kullanılır. Bu doğru hayvan konumlandırma için sağlar ve bireysel radyasyon doz hesaplamalar segmentasyon üzerinden için gerekli bilgileri sağlar gibi CT görüntüleme kullanılır. Ancak, düşük yumuşak doku kontrast CT nedeniyle görüntüleme, tümör gibi yüksek kaliteli tümörü, küçük hayvanların beyindeki kolayca belirlenen değil. Çoklu modalite görüntüleme ve eklenmesi bu nedenle bir doğru hedef birim tarif için gereklidir. CT için karşılaştırıldığında, MRI çok üstün yumuşak doku kontrast sağlar. Bu, çok daha iyi lezyon ışınlatayım ve doku, çevreleyen önlemek için gösterildiği gibi yardımcı hedef birimin bir çok daha iyi tarif neden olur lezyon sınırları görselleştirmek kolaylaştırır Şekil 24, 16. Ek bir avantaj MRI sigara-iyonizan radyasyon, iyonizan radyasyon kullanarak CT aksine kullanmasıdır. MRI önemli dezavantajları nispeten uzun satın alma süreleri ve yüksek operasyonel maliyetler vardır. MRI taramaları doz hesaplamalar için kullanılan çok Bay-LINACS son gelişmeler ile bu alanda ilerleme yapılıyor, ancak onlar gerekli elektron yoğunluğu bilgi vermeyin gibi unutmamak önemlidir. Bu nedenle, kombine CT/MRG veri kümesi her iki doz hesaplamalar (CT tabanlı elektron yoğunluğu) ve (MRI tabanlı birimler) hedefleme için gerekli bilgileri içeren Malign tümörü ışınlama planlama için seçim yöntemidir.
Küçük hayvan ışınlama ve klinik rutin arasındaki boşluğu azaltmak için MRG açıkça mikro-irradiator, iş akışı entegre edilebilir çok saçmadır CT ve Mr arasında doğru bir kayıt gerektiren gerekir. Bu kağıt, MRI güdümlü glioblastoma Sıçanlarda anlatılan, F98 3D açıkorur ışınlama için bizim Protokolü olduğu son zamanlarda17yayınlandı.
CT ve Mr mikro-irradiator iş akışı içinde birleştiren küçük hayvan ışınlama araştırma açık bir adım olmasına rağmen bu anatomik görüntüleme teknikleri her zaman hedef birimin tam bir tanımı izin vermez. Mr ve BT beyin patolojik değişiklikler artan su içerik (ödem) ve kan - beyin bariyerini veya kontrast geliştirme kaçağı ile karakterizedir. Ancak, kontrast geliştirme ve MRG T2 ağırlıklı hiper-yoğun alanlarda her zaman tümör ölçüde doğru bir ölçü değildir.Tümör hücreleri çok kontrast geliştirme12sınırları tespit edildi. Ayrıca, hiçbiri bu tekniklerin en agresif bölümden tedavi direnci ve tümör yineleme için sorumlu olabilir tümör içinde tanımlayabilirsiniz. Bu nedenle, biyolojik yollar vivo içinde12,18görselleştirmek için bu teknikleri etkinleştirmek için ek bilgi--dan evde beslenen hayvan bir katma değer RT için olabilir gibi moleküler görüntüleme teknikleri hedef birim tanımı, 19.
2000'de, Ling vd. anatomik ve fonksiyonel görüntüleme çok boyutlu açıkorur radyoterapi20dedikleri için önde gelen radyoterapi iş akışı içine entegre ederek biyolojik hedef birimi (BTV) kavramı kullanılmaya başlandı. Bu doz örneğin evde beslenen hayvan görüntüleri kullanarak bir hedef bölgesine üniform olmayan doz sunarak hedefleme geliştirmek için olasılık oluşturur. En yaygın evcil hayvan izleyici tümör evreleme için kullanılan. ve tedaviye yanıt fluor-18 (18F) glikoz metabolizması21görüntüler florodeoksiglikoz (FDG), etiketli izlemektir. Baş ve boyun Kanserinde önceki çalışmalar 18F-FDG PET kullanımı gerçek tümör hacim, daha iyi bir tahmin için liderliğindeki CT ve Mr22ile karşılaştırıldığında patolojik numunelerin tarafından tanımlandığı şekilde göstermiştir. Otomobil için birincil Beyin tümörleri, nerede FDG çok güçlü arka plan nedeniyle gelen sinyal normal beyin, amino asitler, 11C-metiyonin ve son zamanlarda 18F-fluoroetthyltyrosine gibi (FET) yararlı değil, soruşturma amino asit evde beslenen hayvan ve MRI tabanlı GTVs23arasında kez belirgin farklılıklar tarif. Ancak, bu bulgu anlamını araştıran prospektif dava henüz yapılmıştır. Bu çalışmada, biz amino asit izleyici 18F-FET ve hipoksi izleyici 18F-fluoroazomycin-arabinoside (18F-FAZA) seçildi. 18 Çünkü artan bir amino asit alımını kuvvetle GB tümörler, nükleer silahların yayılmasına karşı oranı ile ilişkili bir hipoksi evde beslenen hayvan-izleyici alımını direnci (kemoterapi) radyoterapi18 ile ilişkilidir, ancak F-FET ve 18F-FAZA seçildi , 23. mikro-irradiator kullanarak alt birim artırılması en iyi duruma getirilmiş Sıçanlarda F98 GB tümör evde beslenen hayvan tarafından tanımlanan bir parçası için bir ek radyasyon doz vererek.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Çalışma (ECD 09/23 ve ECD 12/28) hayvan deneyleri Etik Komitesi tarafından kabul edildi. Tüm ticari bilgi Malzemeleri tablobulunabilir.
1. F98 GB sıçan hücre modeli
- ATCC Dulbecco'nın değiştirilmiş kartal orta, % 10 buzağı serum, % 1 penisilin, % 1 streptomisin, %1 L-glutamin ve % 0.1 amfoterisin b, kullanarak monolayers elde F98 GB hücreler kültür ve (%5 CO2 ve 37 ° C) bir CO2 kuluçka makinesine koyun.
- Dişi Fischer F344 rats (vücut ağırlığı 170 g) beyin tümörü hücrelerde aşılamak.
- Steril aletlerin kullanın ve her zaman steril eldiven giymek.
- Fareler bir insülin şırınga (1 mL, 29 G) 74 mg/kg ketamin ve 11 mg/kg xylazine intrapertioneally (IP) karışımı enjekte edilerek anestezi. Anesthetization yanıt-e doğru bacak çekilmesi refleks yokluğu tarafından onaylayın. Burun ve kulak için fiksasyon noktalarını kullanarak bir stereotaktik cihaz fareler hareketsiz. Yer karbomer göz jeli anestezi iken altında göz kuruluğu önlemek için.
- Göz seviyesinden sıçan kafatasının arkasına tıraş ve cilt povidone-iyot ile dezenfekte.
- 2 cm kafa derisi Ensizyon kafatasını ortaya çıkarmak ve 1 mm delik (elmas matkap) 2 mm arka ve 2.5 mm için hemen ön yarıküre'deki bregma yanal olun.
- Stereotactically destekli insülin iğne (29 G) ekleyin ve 5 µL hücre süspansiyon (20.000 F98 GB hücreleri) 3 mm microsyringe pompa denetleyicisi kullanarak derin enjekte (ayarları: (I50) enjekte, 1 nL/s (001 SDN) oranı).
- Yavaş yavaş şırınga çekilme ve belgili tanımlık kesme kemik balmumu ile kapatın. Deri dikiş ve povidone-iyot ile dezenfekte.
- Kırmızı bir lamba kullanarak hayvan ameliyat sonrası vücut sıcaklığını dengelemek. Sternal recumbency korumak için yeterli kendine geldi kadar fareyi uyanışını izlemek. Hayvan tamamen iyileşti kadar diğer hayvanlar şirkete iade etmeyin. Çevre kontrollü koşullarda (12 h normal ışık/karanlık döngüleri, 20-24 ° C ve 40-%70 bağıl nem) tüm hayvanlar yiyecek ve su ad libitumile tutun. Hayvanları yakından kendi vücut ağırlığı, gıda, su alımı ve onların etkinliği ve normal bir davranış izleyerek takip ettiğinizden emin olun. Fentobarbital sodyum öldürücü bir doz hayvanlar (160 mg/kg) bir düşüş % 20 vücut ağırlığının gözlenen ya ne zaman normal bir davranış ciddi bir şekilde (örneğin,-sizlik çekmek-in damat) bozulur ötenazi için kullanın.
2. tümör büyüme onay
Not: Tümör büyüme 8 gün sonrası aşılama MRG T2 ağırlıklı, dinamik kontrast-artırılmış MRI (DCE-MRI) ve kontrast-artırılmış T1 ağırlıklı MRG kullanarak değerlendirmek. Tümör 2, 5 x 2.5 x 2.5 mm3ulaştığında, tedavi için fareyi seçin.
- İlk olarak, 30 G iğne intravenöz yanal kuyruk damarda yerleştirilir bir 60 cm uzun tüp takın. Fareler bir burun konisi üzerinden % 2 isoflurane oksijen (0,3 L/dak) ile karışık ile anestezi. Fareler ampütasyonu çekilme refleks yanıt verme zaman anesthetization onaylayın. Isıtmalı battaniye farelerle kapak ve MRI yatakta koyun. Bir karbomer göz jeli kuruluk engellemek için kullanın.
- Yatağın bir sabit sıçan beyin yüzey bobini ile sahibi yerleştirin ve yatakta bir 72 mm sıçan tüm vücut verici bobini konumlandırın.
- Tümör büyüme değerlendirmek için bir spin-Eko T2 ağırlıklı tarama tarafından takip localizer tarama gerçekleştirmek. T2-MRI sıra ayrıntıları: TR/TE 3661/37.1 ms, 109 µm izotropik uçak-çözünürlük, dilim kalınlığı 600 µm, 4 Ortalamalar, TA 9 dk 45 sn.
- Eğer tümör T2 ağırlıklı satın doğruladı, gadolinyum içeren kontrast Ajan intravenöz yerleştirilen tüp içine (Mr kontrast Ajan; 0.4 mL/kg) enjekte 30 s DCE-MRI Alım başladıktan sonra. DCE-Mr 12 dk bir hızlı-düşük açısı (FLASH) sıra tek bir dilim (1 mm dilim kalınlığı) shot kullanarak sırasında elde etmek. Bir uçak-Uzaysal çözünürlük (312 µm2) ve 1,34 zamansal çözünürlük kullanın s.
- Görüntü sırası çözümleme aracını kullanarak, ilgi (ROI) sinyal şiddeti zamanla çizmek için şüpheli tümör bölgesi içinde seçme. Daha sonra glioblastoma (şekil 3) varlığını doğrulamak için elde edilen DCE eğrinin şeklini analiz.
- Son olarak, bir kontrast-artırılmış T1 ağırlıklı spin-Eko serisi elde etmek. T1-MRI sıra ayrıntıları: TR/TE 1539/9.7 ms, 117 µm izotropik uçak-çözünürlük, dilim kalınlığı 600 µm, 3 Ortalamalar, TA 4 dk 15 s. Tipik kontrast-artırılmış T1 ağırlıklı MR görüntüleri Şekil 2' de gösterilmiştir.
- Tam bilinç tekrar yerine geleceğinden T1 ağırlıklı sıra sonuçlandırılması sonra hayvan sürekli gözetim altında uyanabilirsin.
3. Mobil görüntüleme için hedef birim seçimi
Not: F98 GB sıçan açıkorur ışınlama MRI destekli 3D gerçekleştirmek için model alt birim evde beslenen hayvan-güdümlü, artırma ile 3 görüntüleme yöntemleri yapılması gerek. Önce radiotracer enjekte sonra MRI gerçekleştirmek izleyici alımı sırasında daha sonra statik bir evde beslenen hayvan edinme ve CT planlama bir tedavi gerçekleştirmek
- % 2 isoflurane oksijen (0,3 L/dak) ile karışık bir burun konisi kullanarak hayvanları anestezi. Fareler ampütasyonu çekilme refleks yanıt verme zaman anesthetization onaylayın. Bir karbomer göz jeli kuruluk anestezi iken altında engellemek için kullanın.
- Bir kateter (26 G) kuyruk damar içine eklemek, 37 PET MBq radyoaktif izleyici enjeksiyon etkinleştirme 200 µL serum içinde çözünmüş. Sırasıyla 18F-FET veya 18F-FAZA, 30 dk ya da evde beslenen hayvan satın alma önce 2 h enjekte et.
- Mr kontrast ajan (0.4 mL/kg) intravenöz kateter 15dk önce evde beslenen hayvan edinme kullanarak kuyruk ven enjekte et.
- Mobil yatak yapılmış fareler bir kurum içi yer ve kanca ve loop bağlantı elemanları, görüntüleme ve mikro-ışınlama (şekil 1) sırasında sabit bir konuma Bakımı kullanarak güvenli.
- Üç Mobil işaretleri (kılcal su) altında yukarıda ve kafatası sağ tarafında düzeltmek. Hala mobil yatakta MRI tarayıcı hayvan sahibinin sabit fare yerleştirin, sıçan beyin yüzey bobin saptamak ve bu kurulum bir 72 mm sıçan tüm vücut verici bobini getirin. Bir kontrast-artırılmış T1 ağırlıklı spin-Eko sıra ile takip localizer tarama gerçekleştirmek.
- 18F-FET veya 18F-FAZA evde beslenen hayvan edinme gerçekleştirmek için hayvan taşıma. 30 dk statik PET taraması listesi-modunda elde etmek. İnceden inceye gözden geçirmek-meli var olmak ya da 30 dk sonra 18F-FET enjeksiyon veya 2 h 18F-FAZA enjeksiyon sonra satın aldı.
4. RT tedavi planlama
- Önceden klinik tedavi planlama sistemi (PCTPS) tedavi planlaması için kullanın. Planlama CT PCTPS almak ve bu CT görüntü üç farklı doku sınıfa el ile segment: kemik, yumuşak doku ve hava. Bu el ile segmentasyon planlama Tomografide üç farklı gri değeri eşikler tanımlama dayanmaktadır El ile seçilen bu gri değeri eşikleri öyle ki hava beyin yoktur ve bu kemik kalınlığı kafatası sıfırdan farklı seçilmelidir. Bu eşikleri tanımladıktan sonra malzeme yoğunlukları PCTPS kemik, yumuşak doku ve hava (şekil 4) tarafından atanır.
- MRI rehberlik gerekli yalnızca, MRI tarama yük ve PCTPS kullanarak planlama CT ile birlikte kayıt.
- Katı Vücut Dönüşümler (üç çevirileri ve üç rotasyonlar), mobil veri işaretleyicilerini ve kafatası kullanın. MRI üzerinde siyah sinyal ile CT kafatası artan sinyal yoğunluğu overlaying tarafından kesin bir füzyon olabilir (şekil 5) elde.
- T1 ağırlıklı Mr kontrast arttırıcı tümörle ortasına ışınlama için hedef seçin, bkz: şekil 6 ve Şekil 7.
- Ne zaman evde beslenen hayvan daha fazla bilgi dahil edilmelidir bir PET/CT/MRG co-kayıt Biyomedikal görüntü miktar yazılımı (BIQS) kullanarak içerir.
- Evde beslenen hayvan/MRG görüntü fusion (şekil 8) elde etmek için BIQS içinde şekillendirme aracını kullanın. Co-kayıt sonra BIQS (Şekil 9) artan PET izleyici anlamazdın ortasına hedefi seçin ve koordinatları el ile aşağıdaki dönüştürmeleri kullanarak PCTPS girin: X → -X, Y → Z ve Z → -Y.
- Reçete doz, yaylar, yay konum, döndürme çeşitli yaylar ve Kolimatör boyutu (şekil 10) sayısını seçin.
- MRI güdümlü RT için aşağıdaki ayarları kullanın: 20 Gy, 3 yaylar-45 °, 0 ° ile 45 ° kanepe açılarını 120 ° ark rotasyonları ile ve 5 x 5 mm Kolimatör boyut olarak konumlandırılmış öngörülen bir doz.
- Evde beslenen hayvan-Mr-güdümlü RT için aşağıdaki ayarları kullanın: 20 Gy kullanarak 3 kemerler ve 5 x 5 mm Kolimatör ve ekstra 5 Gy 3 koplanar yay ve 1 x 1 mm Kolimatör kullanarak alt birim artırmak için öngörülen bir doz. Kanepede (-45 °, 0 ° ile 45 °) konumunu değiştirirken bir dönüş tüm yaylar için 120 ° seçin.
- Hayvan ve öngörülen doz PCTPS kullanarak hedef teslim etmek ışın teslim parametreleri içinde doz dağıtım hesaplayın. Gerçek Işınlama önce herhangi bir çarpışma sırasında ışınlama önlemek için farklı kanepe pozisyonlarda ark rotasyonlar sınayın.
- Gerçek ışınlama için 0.15 mm bakır filtre seçin, x-ışını voltajı 220'ye ayarlayın kV, ayarla röntgen 13 mA ve pozisyon makas köprüsü üzerinde doğru Kolimatör için geçerli. RT mikro-irradiator PCTPS uygun ışın teslim parametreler aktararak yürütmek.
- Bu işlemler sırasında fare sürekli isoflurane anestezi altında tutulur (%2 isoflurane, oksijen ile karışık 0,3 L/dak). Tam bilincinin tekrar yerine geleceğinden son ark yürütme, hayvan sürekli gözetim altında uyanabilirsin.
5. doz birimi çubuk grafikler (DVHs)
Not: tümör hedef birimleri ve çevresindeki normal beyin dokusu teslim gerçek doz karşılaştırmak için DVHs hesaplayın.
- Cilt--ilgi çekici bir (VOI) tümör ve normal beyin çevresinde ortalama, en yüksek ve en düşük doz (Şekil 11) hesaplamak için T1 ağırlıklı kontrast-artırılmış Bay resimlerin üzerine çizin.
- En büyük, ortalama ve en az doz tümör hacmi ve normal beyin doku birim için bir vekil olarak D2, D50ve D90hesaplayın. D x tarafından alınan doz açılımı hacminin % alt simge tarafından gösterilir ve elde edilen DVH elde edilebilir.
6. TMZ ve Sham kemoterapi
- Glioblastoma hastaların tedavisinde taklit etmek için eşlik eden kemoterapi 29 mg/kg 5 gün ışınlama24, gününde başlayarak günde bir % 25 dimethylsulfoxide (DMSO) Serum içinde TMZ çözünmüş enjeksiyonlari IP kullanarak yönetme 25. kullanım 1 mL, enjeksiyon yönetmek için 29 G insülin şırınga.
- Kontrol grubu için enjeksiyon adım 6.1 TMZ olmadan yönetmek.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Glioblastoma preklinik modelindeki ışınlama insan tedavi yöntemi taklit etmek için MRI güdümlü radyoterapi eklenmesi gerekli. PCTPS ve birden çok açıkorur koplanar olmayan kemerler T1 ağırlıklı MRG17kontrast-artırılmış bölge hedefleme ile F98 glioblastoma Sıçanlarda ışınlatayım başardık mikro-irradiator arabirimi kullanarak. Rigid-vücut dönüşümler bir çok modalite yatak ile birlikte Mr ve tomografi planlama arasında görüntü kaydı için kullanılan Işınlama için isocenter T1 ağırlıklı MRG (Şekil 7)'un kontrast-artırılmış tümör bölgesinde merkezi seçilir.
Doz dağılımları ve toplu DVHs demek, minimum ve maksimum doz hedef birimi ve normal beyin doku hacim beş farklı hayvanlar (şekil 12) için hesaplanır. Klinik ışınlama Protokolü ve en uygun doz dağıtım ile benzerlik dayalı olarak, üç koplanar olmayan kemerler kullanarak bir doz planı seçildi. İkinci uygulama, hedef birimi yüzde 90'ını istenilen doz doz normal beyin doku17en aza indirerek aldı.
MRI güdümlü radyoterapi F98 sıçan glioblastoma modelin fizibilite onayladıktan sonra RT planlama preklinik iş akışı içinde evde beslenen hayvan tabanlı alt birim artırılması dahil etmek çalıştı. Biz önce MRG, sonra evde beslenen hayvan gerçekleştirme 3 görüntüleme yöntemleri, birleştirmek başardık ve sonunda CT fare süre şirket içinde yapılan mobil yatağa (şekil 1) sabit. İçin co-kayıt bu yöntemleri, biz çok daha fazla araç katı eşleşen (şekil 8) etkinleştirme BIQS kullanılır. Uygulama basit bir dönüşümü, hem Bay hem dayalı PET isocenter (Şekil 9) için PCTPS aktarılabilir. Şekil 13' te, Mr ve PET tabanlı isocenter ışınlama doz hesaplama PCTPS sonra gösterilir. Tüm kontrast geliştirme birimi ışınlatayım için biz 5 x 5 Kolimatör seçilen ve üç dönen 120 ° yaylar. 18tarihinde F-FET evde beslenen hayvan tespit en metabolik olarak aktif tümör bölümünü veya 18tarihinde F-FAZA evde beslenen hayvan tespit en hipoksik tümör bölümünü artırmak için bir doz 5 Gy seçili ve 1 mm çapında bir kolimatör kullanılarak teslim. Yine, 120 ° dönen 3 kemerler uygulanır.
Şekil 1: mikro-irradiator entegre bir kV x-ışını tüpü, dönen bir makas köprüsü, bilgisayar kontrollü robot sahne alanı, şekil ışın collimating bir sisteme ve düz panel CT dedektörü. Hayvan hareketleri bir MRI tarama görüntü fusion. kolaylaştıran bir planlama BT ile takip gibi birden çok görüntüleme Devralmalar arasında önlemek için 4 mm kalınlığında PVC mobil yatak yerleştirilir Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 2: Glioblastoma onay. T1 ağırlıklı MRG, T2 ağırlıklı MRG ve DCE-Mr F98 GB sıçan. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3: DCE eğrisi. Görüntü sırası çözümleme aracını kullanarak, bir yatırım Getirisi seçilebilir zaman içinde sinyal şiddeti çizilecek DCE-MRI taramasında. Daha sonra elde edilen DCE eğrinin şeklini analizini glioblastoma varlığını doğrulamak yapabiliyor. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 4: CT segmentasyon. CT tabanlı segmentasyon el ile doğru bir şekilde hava Akciğer doku, yağ doku, kemik ve diğer dokuları resmin içinde ayırmak için eşik değerleri bir dizi tanımlama yoluyla yapılır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 5: MRI-CT füzyon. MRI üzerinde siyah sinyal ile CT kafatası artan sinyal yoğunluğu overlaying tarafından kesin bir füzyon elde edilebilir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 6: koni ışın CT Tümör tümör ortasına isocenter seçmek imkansız hale CT üzerinde görünür. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 7: T1 ağırlıklı Mr kontrast-artırılmış. Kontrast-artırılmış T1 ağırlıklı Mr'ı açıkça bir sıçan F98 beyin tümörü görüntüler. Kontrast geliştirme merkezi RT planlama için isocenter olarak seçilir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 8: MRI-evde beslenen hayvan füzyon. BIQS içinde şekillendirici aracıyla, evde beslenen hayvan/MRG görüntü füzyon elde edilir.Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 9: MRI-evde beslenen hayvan hedef seçimi. Işınlama için hedef kontrast-geliştirme T1 ağırlıklı MRG (solda) üzerinde merkezi seçilmiştir. Alt birim artırılması için hedef tarih 18F-FET PET (sağda) artan sinyal Merkezi seçilmiştir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 10: radyoterapi planlaması. Radyoterapi planlaması hesaplamak için doz, yaylar, yay konum, döndürme çeşitli yaylar ve Kolimatör boyut sayısını reçete isocenter seçin. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 11: DVH hesaplama. Bu birimi içindeki DVH hesaplamak için üzerine T1 ağırlıklı kontrast-artırılmış Bay birim--ilgi çekici bir (VOI) tümör çevresinde çizin. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 12: T1 ağırlıklı Mr kontrast-artırılmış ve üç koplanar arcsto kullanarak doz planı 20 Gy hedef birimine teslim. Sağ tarafta, tümör hacmi ve kontrast-artırılmış T1 ağırlıklı MRG üzerinde belirlenen normal beyin doku toplu doz birimi çubuk grafik (DVH) verilir. Bu rakam Bolcaen ve ark. değiştirildi 20 Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 13: Seçili Mr ve PET güdümlü isocenter ışınlama. Aksiyel, koronal ve sagittal görünümünde CT görüntü 20 Gy hedef bölgesi (sarı bölgesi) teslim doz plan ile görüntülenir. Mr kontrast-geliştirilmesi üzerinde tespit edildi isocenter görünür (yeşil) ve 18tarihinde F-FET evde beslenen hayvan tespit metabolik olarak aktif tümör tarafında lokalize isocenter da görünür (kırmızı). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Sıçan beyin glioblastoma tümör hedef doğru ışınlama elde etmek için mikro-irradiator'ın üstünde-tahta CT rehberlik yeterli değildi. Kontrast geliştirme kullanılacak olsa bile Beyin Tümörleri yetersiz yumuşak doku kontrast nedeniyle zor görünür. Bu nedenle, MRI daha kesin ışınlama izin vermek dahil gerekiyor. 7 T sistemi ve bir CT satın alma için başardık mikro-irradiator üzerinde bir sıralı Bay edinme kullanarak beyin kontrast arttırıcı tümör dokusu doz hedef ve planlama tomografisi kullanan bir doz plan hesapla Bu PCTPS17kullanarak görüntü fusion ve doz hesaplamalar sonra mümkün oldu. Ancak, unutmayın ki MRI bu protokol için düzeltilmez geometrik distorsiyonları eğilimli tutulmalıdır. Ayrıca, vücudun diğer bölümlerine bu ışınlama Protokolü çeviri önce daha fazla araştırma gereklidir. Alt kV enerji fotonlar kullanılması dolayısıyla bir doğru doku ayrılmasını önemini dikkate alınmalıdır. Segmentasyon üç doku sınıflara sıçan beyninde yeterli olabilir, daha fazla doku sınıfları doğru doz hesaplamalar sağlamak için fareler göğüs veya karın bölgesinde gösterilir gerekir. Farklı görüntüleme sistemleri arasındaki aktarım sırasında hareketi önlemek için yaptık hangi kafa (şekil 1) hareketinin en aza indirgemek bir mobil yatak kullanın. Ancak, ek bir çaba bu iletişim kuralı diğer vücut parçaları, göğüs ve karın bölgeleri uygularken gereklidir. Solunum hareketi veya bağırsak transit tarafından etkilenmiş organlarda özellikle küçük hayvan ışınlama hala meydan okuyor.
Alt birim evde beslenen hayvan-güdümlü artırılması ana ayrıca rağmen emek yoğun bir iletişim kuralı uygulanabilir olduğu gösterilmiştir. Tümör metabolik olarak son derece etkin ve radyasyon dayanıklı bölümlerini hedefleme sağlayan heterojenite tümörler içinde resim yeteneği gibi evde beslenen hayvan, nükleer görüntüleme teknikleri bir avantajdır. Özellikle 18F-FET evde beslenen hayvan ya da 18F-FAZA PET, sırasıyla kullanarak tümör en biyolojik olarak aktif veya en hipoksik bölgeye hedef doz artırmak başardık. Kritik protokolündeki görüntü co-kayıt adımdır. Şu anda, yazılım otomatik olarak önceden klinik MRI ya da PET görüntüleri ile CT yeterince yüksek hassasiyet ve tekrarlanabilirlik ile birlikte kayıt yapabiliyor. Genel olarak, evde beslenen hayvan tarayıcıları nöro-Onkoloji içinde düşük alımı kayıt sürecini karmaşıklaştırır normal beyinde göster. Üç görüntüleme yöntemleri (PET/CT/MRG) Fusion için şu anda kolayca birden çok görüntüleme yöntemleri birleştirmek için değil gelişmiş PCTPS yerine BIQS tercih etti. Ayrıca, BIQS sert eşleştirmek için daha akıllı araçları vardır. Büyük bir yardım da farklı görüntüleme satın almalar arasında hayvan hareketi engelleyen bir çok modalite yatak kullanımıdır. Ancak, el ile co-kayıt zaman alıcıdır ve hayvanların anestezi süresi artar. Görüntü kayıt elde sonra koordinatları BIQS PCTPS verme hedef koordinatları üzerinde basit bir dönüştürme uygulayarak uygulanabilir.
Sadece (biyolojik) tümör birim kesin olarak hedeflemek önemli değildir: çevresindeki normal beyin dokusunun tutumlu de dikkate alınmak zorundadır. İkinci kez geçerli hayvan radyoterapi deneylerde ihmal edilen ama model Ayrıca klinik olarak ilgili yapmak çok önemli. Bu birden fazla koplanar olmayan kemerler uygulayarak sağlanır. Bilgimizi, birden çok ark kranyal ışınlama küçük hayvanlarda asla önce uygulandı. Işın kullanımı ile ilgili olarak, bu yöntem klinik görüntü güdümlü açıkorur RT ile benzerlik kapatın ve normal dokuların sadece bir kısmını almak iken ark tedavi kullanımı nedeniyle hedef sonuçta öngörülen doz alan mevcuttur. Bu nedenle, ilk adım preklinik ve klinik RT teknolojisi17arasındaki boşluğu en aza indirmek için yapılır. Bu mikro-irradiator bir sınırlama gantry döndürme 120 ° ile sınırlı olmasıdır. Ark rotasyonlar kanepe pozisyon değişikliği ile birleştirerek daha fazla tümör hedef çevreleyen normal beyin dokusunun tutumlu arttı.
Bu metodoloji radyoterapi rehberlik için biyolojik görüntüleme yöntemleri dahil önemli bir adımdır. Ancak, yeni gelişmeler sayıları tanımlanarak preklinik uygulamaları (DPBN) tarafından önceden klinik görüntü fusion basitleştirmek için ve doz resim dahil etmek için gereklidir. Geçerli mikro-irradiator kullanarak, biz alt birim arttırılması uygulayabilirsiniz; Ancak, DPBN henüz doz hesaplamalarında, makas köprüsü rotasyonlar ve Kolimatör tasarım sınırlamaları nedeniyle mümkün değildir. Son olarak, geliştirme preklinik PET tarayıcılar alt milimetre Uzaysal çözünürlük gelecek vaat eden26 yaşında ve bu cihazlar evde beslenen hayvan bir küçük hayvan radyasyon platforma entegre etmek için çok şık bir çözüm sağlayabilir sunan kompakt.
Bu modelin uygulanabilirliği kombine Mr ve PET güdümlü ışınlama ve glioblastoma Sıçanlarda ve yeni glioblastoma therapeutics gelecekteki araştırma için kemoterapi için gösterdi. Ayrıca, alt birim evde beslenen hayvan-güdümlü artırılması uygulama radyasyon tedavisi küçük hayvan kanser modelleri planlamasında bir BTV birleşme yolunda ilk adım olduğunu.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar hiçbir ifşa etmek çıkar çatışması var.
Acknowledgments
Yazarlar Stichting Luka Hemelaere ve uluslararası Soroptimist Bu eser destek için teşekkür etmek istiyorum.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| GB RAT model | |||
| F98 Glioblastoma cell line | ATCC | CRL-2397 | |
| Fischer F344/Ico crl Rats | Charles River | N/A | http://www.criver.com/products-services/basic-research/find-a-model/fischer-344-rat |
| Micropump system | World Precision Instruments | UMP3 | Micro 4: https://www.wpiinc.com/products/top-products/make-selection-ump3-ultramicropump/#tabs-1 |
| Stereotactic frame | Kopf | 902 | Model 902 Dual Small Animal Stereotaxic frame |
| diamant drill | Velleman | VTHD02 | https://www.velleman.eu/products/view/?id=370450 |
| Bone wax | Aesculap | 1029754 | https://www.aesculapusa.com/products/wound-closure/hemostatic-bone-wax |
| Insulin syringe Microfine | Beckton-Dickinson | 320924 | 1 mL, 29G |
| InfraPhil IR lamp | Philips | HP3616/01 | |
| Ethilon | Ethicon | 662G/662H | FS-2, 4-0, 3/8, 19 mm |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cell culture | |||
| DMEM | Invitrogen | 14040-091 | |
| Penicilline-streptomycine | Invitrogen | 15140-148 | |
| L-glutamine | Invitrogen | 25030-032 | |
| Fungizone | Invitrogen | 15290-018 | |
| Trypsin-EDTA | Invitrogen | 25300-062 | |
| PBS | Invitrogen | 14040-224 | |
| Falcons | Thermo Scientific | 178883 | 175 cm2 nunclon surface, disposables for cell culture with filter caps |
| Cell freezing medium | Sigma-aldrich | C6164 | Cell Freezing Medium-DMSO, sterile-filtered, suitable for cell culture, endotoxin tested |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Animal irradiation | |||
| Micro-irradiator | X-strahl | SARRP | |
| software for irradiation | X-strahl | MuriPlan | pre-clinical treatment planning system (PCTPS), version 2.0.5. |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Small animal PET | |||
| microPET system possibility 1 | Molecubes | B-Cube | http://www.molecubes.com/b-cube/ |
| microPET system possibility 2 | TriFoil Imaging, Northridge CA | FLEX Triumph II | http://www.trifoilimaging.com |
| PET tracers | In-house made | 18F-FDG, 18F-FET, 18F-FAZA, 18F-Choline | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Small animal MRI | |||
| microMRI system | Bruker Biospin | Pharmascan 70/16 | https://www.bruker.com/products/mr/preclinical-mri/pharmascan/overview.html |
| Dotarem contrast agent | Guerbet | MRI contrast agent, Dotarem 0,5 mmol/ml | |
| rat whole body transmitter coil | Rapid Biomedical | V-HLS-070 | |
| rat brain surface coil | Rapid Biomedical | P-H02LE-070 | |
| Water-based heating unit | Bruker Biospin | MT0125 | |
| 30 G Needle for IV injection | Beckton-Dickinson | 305128 | 30 G |
| PE 10 tubing (60 cm/injection) | Instech laboratories, Inc | BTPE-10 | BTPE-10, polyethylene tubing 0.011 x .024 in (0.28 x 60 mm), non sterile, 30 m (98 ft) spool, Instech laboratories, Inc Plymouth meeting PA USA- (800) 443-4227- http://www.instechlabs.com |
| non-heparinised micro haematocrit capillaries | GMBH | 7493 21 | these capillaries are filled with water to create markers visible on MRI and CT |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Consumables | |||
| isoflurane: Isoflo | Zoetis | B506 | Anaesthesia |
| ketamine: Ketamidor | Ecuphar | Anaesthesia | |
| xylazine: Sedaxyl | Codifar NV | Anaesthesia | |
| catheter | Terumo | Versatus-W | 26G |
| Temozolomide | Sigma-aldrich | T2577-100MG | chemotherapy |
| DMSO | Sigma-aldrich | 276855-100ML | |
| Insulin syringe Microfine | Beckton-Dickinson | 320924 | 1 mL, 29G |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Image analysis | |||
| PMOD software | PMOD technologies LLC | PFUS (fusion tool) | biomedical image quantification software (BIQS), version 3.405, https://www.pmod.com/web/?portfolio=22-image-processing-pfus |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anesthesia-equipment | |||
| Anesthetic movabe unit | ASA LTD | ASA 0039 | ASA LTD, 5 valley road, Keighley, BD21 4LZ |
| Oxygen generator | Veterinary technics Int. | 7F-3 | BDO-Medipass, Ijmuiden |
References
- Stupp, R., et al. Promising survival for patients with newly diagnosed glioblastoma multiforme treated with concomitant radiation plus temozolomide followed by adjuvant temozolomide. J Clin Oncol. 20 (5), 1375-1382 (2002).
- Dhermain, F. Radiotherapy of high-grade gliomas: current standards and new concepts, innovations in imaging and radiotherapy, and new therapeutic approaches. Chin J Cancer. 33 (1), 16-24 (2014).
- Ahmed, R., et al. Malignant gliomas: current perspectives in diagnosis, treatment, and early response assessment using advanced quantitative imaging methods. Cancer Manag Res. 6, 149-170 (2014).
- Verhaegen, F., Granton, P., Tryggestad, E. Small animal radiotherapy research platforms. Phys Med Biol. 56 (12), R55-R83 (2011).
- Kinsella, T. J., Vielhuber, K. A., Kunugi, K. A., Schupp, J., Davis, T. W., Sands, H. Preclinical toxicity and efficacy study of a 14-day schedule of oral 5-iodo-2-pyrimidinone-2-deoxyribose as a prodrug for 5-iodo-2-deoxyuridine radiosensitization in U251 human glioblastoma xenografts. Clin Cancer Res. 6 (4), 1468-1475 (2000).
- Vellimana, A. K., et al. Combination of paclitaxel thermal gel depot with temozolomide and radiotherapy significantly prolongs survival in an experimental rodent glioma model. J Neurooncol. 111 (3), 229-236 (2012).
- Kioi, M., Vogel, H., Schultz, G., Hoffman, R. M., Harsh, G. R., Brown, J. M. Inhibition of vasculogenesis, but not angiogenesis, prevents the recurrence of glioblastoma after irradiation in mice. J Clin Invest. 120 (3), 694-705 (2010).
- Vinchon-Petit, S., Jarnet, D., Jadaud, E., Feuvret, L., Garcion, E., Menei, P. External irradiation models for intracranial 9L glioma studies. J Exp Clin Cancer Res. 29, 142 (2010).
- Yang, W., et al. Convection enhanced delivery of carboplatin in combination with radiotherapy for treatment of brain tumors. J Neurooncol. 101 (3), 379-390 (2011).
- Rousseau, J., et al. Efficacy of intracerebral delivery of cisplatin in combination with photon irradiation for treatment of brain tumors. J Neurooncol. 98 (3), 287-295 (2010).
- Baumann, B. C., et al. An integrated method for reproducible and accurate image-guided stereotactic cranial irradiation of brain tumors using the small animal radiation research platform. Transl Oncol. 5 (4), 230-237 (2012).
- Grosu, A. -L., et al. Implications of IMT-SPECT for postoperative radiotherapy planning in patients with gliomas. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 54 (3), 842-854 (2002).
- Butterworth, K. T., Prise, K. M., Verhaegen, F. Small animal image-guided radiotherapy: Status, considerations and potential for translational impact. Br J Radiol. 88 (1045), 4-6 (2015).
- Aird, E. G. A., Conway, J. CT simulation for radiotherapy treatment planning. Br J Radiol. 75 (900), 937-949 (2002).
- Baker, G. R. Localization: Conventional and CT simulation. Br J Radiol. 79 (Spec No 1). , S36-S49 (2006).
- Corroyer-Dumont, A., et al. MRI-guided radiotherapy of the SK-N-SH neuroblastoma xenograft model using a small animal radiation research platform. Br J Radiol. 90 (1069), 20160427 (2017).
- Bolcaen, J., et al. MRI-guided 3D conformal arc micro-irradiation of a F98 glioblastoma rat model using the Small Animal Radiation Research Platform (SARRP). J Neurooncol. 120 (2), 257-266 (2014).
- Niyazi, M., et al. FET-PET for malignant glioma treatment planning. Radiother Oncol. 99 (1), 44-48 (2011).
- Grosu, A. L., et al. First experience with I-123-alpha-methyl-tyrosine SPECT in the 3-D radiation treatment planning of brain gliomas. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 47 (2), 517-526 (2000).
- Ling, C. C., et al. Towards multidimensional radiotherapy (MD-CRT):biological imaging and biological conformality. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 47 (3), 551-560 (2000).
- Wahl, R. L., Jacene, H., Kasamon, Y., Lodge, M. A. From RECIST to PERCIST: Evolving Considerations for PET response criteria in solid tumors. J Nucl Med. 50 Suppl 1. (5), 122S-150S (2009).
- Daisne, J. F., et al. Tumor volume in pharyngolaryngeal squamous cell carcinoma: comparison at CT, MR imaging, and FDG PET and validation with surgical specimen. Radiology. 233 (1), 93-100 (2004).
- Grosu, A. -L., Weber, W. PET for radiation treatment planning of brain tumours. Radiother Oncol. 96 (3), Elsevier Ireland Ltd. 325-327 (2010).
- Banissi, C., Ghiringhelli, F., Chen, L., Carpentier, A. F. Treg depletion with a low-dose metronomic temozolomide regimen in a rat glioma model. Cancer Immunol Immunother. 58, 1627-1634 (2009).
- Robinson, C. G., et al. Effect of alternative temozolomide schedules on glioblastoma O(6)-methylguanine-DNA methyltransferase activity and survival. Br J Cancer. 103, 498-504 (2010).
- España, S., Marcinkowski, R., Keereman, V., Vandenberghe, S., Van Holen, R. DigiPET: sub-millimeter spatial resolution small-animal PET imaging using thin monolithic scintillators. Phys Med Biol. 59 (13), 3405 (2014).
