Summary
Hier beschriebenen sind orthotopen Eierstock Transplantation Protokolle für Eierstockkrebs Einfluss auf die Physiologie der Empfänger Maus ändern. Dieses Operationsverfahren wird verwendet, um weibliche Mäuse auf verschiedene Arten von Eierstockkrebs Einfluss aussetzen und umfassen Heterochronic Transplantationen und Transplantation der Eierstöcke, die verschiedene ex Vivo Behandlungen unterzogen wurden.
Abstract
Eierstöcke Transplantation wurde zunächst an der Utah State University im Jahr 1963 durchgeführt. In neueren Arbeiten ist Heterochronic Transplantation von Säugetieren Eierstöcke verwendet wird, um die Gesundheit schützende Effekte der jungen Eierstöcke bei jungen Frauen zu untersuchen. Die derzeitigen Verfahren beschäftigen eine orthotopen Haartransplantation Methode, wo allogenen Eierstöcke zurück in ihre ursprüngliche Position in der Eierstöcke Bursa verpflanzt werden. Dies steht im Gegensatz zu den häufiger verwendeten heterotopisch Transplantation der Eierstöcke/Eierstockgewebe subkutan oder unter der Kapsel der Niere. Alle drei Standorte ermöglichen effiziente Revaskularisation des transplantierten Gewebes. Allerdings orthotopen Transplantation bietet der Eierstock mit der Signalisierung Natur und ist das einzige Verfahren, das bietet die Möglichkeit für das Tier natürlich postoperativ zu reproduzieren. Zu achten, um alle endogen Eierstockgewebe während der Ovariectomy Verfahren zu entfernen. Wenn körpereigene Gewebe bleibt oder wenn nur ein Eierstock entfernt wird, wird das transplantierte Gewebe inaktiv bleiben, bis das bestehende Gewebe seneszenten wird. Während die Revaskularisation der transplantierten Ovarien sehr schnell erfolgt, kann der Transplantempfänger nehmen eine beträchtliche Menge an Zeit zur Anpassung an eine neue Hypothalamus/Hypophyse/Gonaden/Nebennieren (HPG/A) Achse Signalisierung Regime im Zusammenhang mit der transplantierten Gewebe. Dieser Vorgang dauert normalerweise etwa 100 Tage in der Maus. Daher sollten Transplantation Experimente entwickelt werden, um dieser Anpassungszeit unterzubringen. Typische Ergebnisse mit Eierstockkrebs Transplantation gehören Veränderungen in der Gesundheit des Empfängers, die das Alter des transplantierten Eierstocks, anstatt dem chronologischen Alter des Empfängers zu reflektieren.
Introduction
Der Einfluss der Reproduktion auf Gesundheit und Lebensdauer ist oft fälschlicherweise dachte an als nur auf den Zeitraum umfasst reproduktive Kompetenz beschränkt. Während den Lebensstil und die Phänotypen zugeordnete reproduktiv zuständigen Phase der Lebensdauer leicht aus den vor- und postreproduktiven Phasen unterschieden sind, beeinflusst die reproduktiven Status Gesundheit in allen Phasen der Lebensdauer. Die Zeit der reproduktive Kompetenz ist oft als die reproduktive Lebensdauer, unterscheiden sich von der chronologischen Lebensdauer bezeichnet. Diese Terminologie eignet sich für eine künstliche Trennung der beiden Lebensdauer Bezeichnungen in der Realität, beide sind eng gebunden an einander mit Ereignissen betroffen, mehr als oft nicht, beeinflussen auch die andere.
Im letzten Jahrzehnt deutet darauf hin, dass ein Individuum reproduktiven Status verbunden mit einem erhöhten Risiko der Entwicklung von chronischen gesundheitlichen Bedingungen1. Eine Studie dokumentiert einen Zusammenhang zwischen kürzeren Lebensdauer und reproduktiven Ausfall für eine Kohorte von Männern2. Der Verein wird noch deutlicher bei Frauen. Herz-Kreislauf-Krankheit ist selten bei Frauen vor den Wechseljahren3, aber Ovarialinsuffizienz erhöht Herz-Kreislauf-Krankheit stark bei Wechseljahre4 und bei jungen Frauen mit vorzeitiger Ovarialinsuffizienz5. Insulin-Resistenz6 und Knochen-Verlust bei Wechseljahre7 erhöhen und fast zwei Drittel der Amerikaner mit der Alzheimer-Krankheit sind Frauen8. Klar definierte Veränderungen im Eierstock Signalisierung markieren den Übergang von einem Zustand vor den Wechseljahren, widerstandsfähiger gegen Krankheiten, zu einem Zustand postmenopausalen, Krankheit belastet. Diese stabilen Übergang bietet die Möglichkeit, die Mechanismen zu identifizieren, die Krankheitsrisiken im Altern beschleunigen.
Vor kurzem, Transplantation von kryokonservierten ovariellen Gewebe wurde zur Fruchtbarkeit bei Frauen wiederherzustellen, die medizinische Verfahren zu unterziehen, die Linie Keimzellen wie Chemotherapie gefährden könnten. Transplantation von Eierstockgewebe kann auch verwendet werden, um lebensfähige Nachkommen bei Tieren mit nicht-Ovar basierend Unfruchtbarkeit, darunter transgene Mäuse9zu produzieren. Eierstöcke Transplantation ist eine effiziente Methode, um den Einfluss der Fortpflanzungsfunktion oder reproduktive Alterung von Chronologische Alterung per se zu trennen.
Die etablierte unterstützende Rolle für Eierstockhormone in vielen Aspekten der weiblichen Gesundheit impliziert den Verlust der Hormonproduktion von aktiv Radfahren Keimzellen, als die Hauptursache des erhöhten Krankheitsrisiken in den Wechseljahren. Während der Wert der ovariellen Hormone im weiblichen Gesundheit unbestreitbar ist, wurde ersetzen diese Hormone in peri- und postmenopausalen Frauen unzuverlässig in der Wiederherstellung des gesundheitlichen Nutzens von jungen Frauen mit jungen Eierstöcke genossen. Diese gesundheitlichen Vorteile werden zuverlässig durch Heterochronic Transplantation von jungen Eierstöcke postreproduktiven weiblichen Mäusen10,11,12,13,14wiederhergestellt.
Reproduktiven Status von Spender und Empfänger Mäusen sollte vor und nach Transplantation oder Ovariectomy Verfahren bestimmt werden. Mutmaßlichen postreproduktiven Mäuse, die Zeichen der Gonaden Eingang vor der Operation im Alter von 12 Monaten sind von diesen Experimenten ausgeschlossen. Gonaden Eingabe wird durch vaginale Zytologie bestimmt. Daten auf vaginale Zytologie werden für mindestens 10 Tage vor der Operation um einen postreproduktiven Staat im Empfänger Mäuse und aktiv Radfahren Eierstöcke bei Mäusen Spender zu gewährleisten. Eine estrous Zyklus ist definiert als der Zeitraum ab dem Tag Epithelzellen kernhaltige zuerst angezeigt werden (d.h. Proestrus) bis zum Tag vor der nächsten Auftritt der kernhaltigen Epithelzellen in der vaginalen Abstrich, vorausgesetzt, es ein Zeitraum von leukocytic gibt Präsenz (d.h. Diestrus) dazwischen. Östrus wird durch das Vorhandensein von großen, Plattenepithelkarzinom Epithelzellen, mit oder ohne Kerne bestimmt. Mäuse anzeigen, die keine zyklische Aktivität für einen Zeitraum von 10 Tagen vor oder nach der Operation sind entschlossen, keine Gonaden Eingabe genannten Zeitraum haben. Mäusen angezeigt, die mindestens einen volles Estrous Zyklus in einem Zeitraum von 10 Tagen vor oder nach der Operation sind entschlossen, Gonaden eingangs genannten Zeitraum haben. Weibliche Mäuse sollten in Gegenwart von männlichen Mäusen untergebracht oder ausgesetzt verschmutzte Bettwäsche aus einem männlichen Käfig um konsequente Belichtung auf Zyklus-induzierende Stimuli zu gewährleisten.
Diese Transplantationsverfahren sind am effizientesten mit zwei Chirurgen arbeiten gleichzeitig an Spender und Empfänger Mäusen durchgeführt. Jedoch sind die Verfahren leicht mit Spender Eierstöcke erholte sich in den meisten Fällen vor Beginn des Ovariectomy-Verfahrens auf die Empfänger Maus von einem Chirurgen durchgeführt. Dieses Protokoll beschreibt das Verfahren für den einzelnen Chirurgen. Exposition der Fortpflanzungsorgane und der Schließung des Standortes erfolgt normalerweise ohne ein Mikroskop, während der aus- und Einbau der Eierstöcke erfolgt unter dem Mikroskop. Wie mit jedem chirurgischen Eingriff zu lernen, Einschnitt Websites möglicherweise größer und Operationen können während der ersten Lernverfahren länger dauern und wird in der Regel sinken Sie mit Erfahrung.
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Protocol
Alle hier beschriebene Methoden wurden unter National Research Council entwickelt Leitlinien gefunden in der Guide für die Pflege und Verwendung von Labortieren und von der Utah State University institutionelle Animal Care und Use Committee genehmigt worden.
Hinweis: Eierstöcke Transplantationsverfahren können Mäuse (CBA/J-Stamm) aus 21 Tage alt 18 Monate des Alters betreffen. Mäuse von der CBA/J-Stamm werden reproduktiv zuständigen zwischen 45 und 60 Tage alt und reproduktiv seneszenten zwischen 10 und 12 Monate alt.
(1) Transplantation von intakten Eierstöcke Alter Mäuse
Hinweis: Dieses ersten Protokoll beschreibt die Vorgehensweise bei der Übertragung der Eierstöcke von einer jungen Maus (60 Tage alt), eine weibliche Postreproductive (12 Monate) von dem gleichen Inzucht Stamm. Das gleiche Verfahren wird für Eierstockkrebs Transplantation zwischen jeden zwei weiblichen Mäusen verwendet.
- Wiegen und betäuben Spendertieres durch intraperitoneale (i.p., 27 Ga-Nadel) Injektion, zum Beispiel mit einem Cocktail von Ketamin, Xylazin und Acepromazine (65 mg/kg Ketamin, 13 mg/kg Xylazin 2,0 mg/kg, Acepromazine; cocktail Dosis - 6,5 ml/kg). Zurückkehren Sie das Tier zu den beheizten Haus Käfig, bis die Betäubung wirksam geworden ist.
- Betäubt, das Tier aus dem Hause Käfig und auf beheizten Küchenpapier entfernen. Clippers entfernen (#40 Klinge bevorzugt), die Haare ein paar mm seitlich an der Mittellinie auf jeder Seite, beginnend unterhalb der Rippen und Umzug nach distal, Vorbereitung eine abgeschnittene "ca. 2-3 cm Platz auf beiden Seiten der anfällig Maus, so dass einen Streifen des Haares patch" ca. 1-2 cm über der Mittellinie.
- Leicht wischen Sie die abgeschnittenen Bereiche mit 70 % Ethanol und gelten Sie Betadine Lösung für abgeschnittene Ortsbild mit einem Tupfer Baumwolle gekippt.
- Antibiotika Gel zum Schutz der Augen anwenden und verwalten Meloxicam (2,0 mg/kg) subkutan (S.C., 27 Ga-Nadel) an der lateralen Seite des den Hals des Tieres für postoperative Schmerzlinderung.
- Legen Sie das Tier in Bauchlage auf einem beheizten sterilen OP-Feld, und wischen Sie den beschnittenen Bereich mit einer 70 % Ethanol getränkten 2 x 2 cm Baumwolle Gaze.
- Einen 1,0-1,5 cm Paralumbar Einschnitt machen und die Haut von der darunter liegenden Faszie unverblümt zu sezieren. Machen Sie ein weiterer Einschnitt durch die Faszie. Unverblümt sezieren Sie seitlich unter dieser Faszien als oberflächlich bis zum Erreichen der Bauchhöhle
- Ort eine kleine chirurgische drapieren über den Einschnitt (aus 2 x 2 cm Gaze geschnitten) und nassen Tuch mit steriler Kochsalzlösung.
- Kleine Zange verwenden, suchen Sie das Fettgewebe, das den Eierstock in die Bauchhöhle umgibt und sanft extrahieren Sie die Fettpolster und Eierstock und legen Sie es auf die benetzten Gaze drapieren. Die Eierstöcke Fettlappen erscheint "weißer" als das umliegende Fettgewebe.
- Legen Sie eine 1,5 Zoll-Bulldog-Klemme auf die Fettpolster (kümmert sich nicht um die Eierstöcke Bursa behindern) um den Darm-Trakt während des Verfahrens zu fixieren.
- Bewegen der sezierenden Mikroskops einrastet und die Eierstöcke Bursa eindeutig zu identifizieren. Die Bursa mit zwei Uhrmacher Pinzetten erfassen und Einschneiden der Eierstöcken Bursa gegenüber der Eierstöcke Hilum des Eierstocks aussetzen. Wenden Sie vorgesehenen Bereich des Schleimbeutels stark durchblutet ist, einen Tropfen Adrenalin (1: 100.000) mit einer Spritze zu reduzieren, Blutung zum Zeitpunkt des heftig Zerreißens Bursitis Oberfläche.
- Schonend entfernen Sie der Eierstöcke aus dem Eierstock Bursa und Verbrauchsteuern Sie des Eierstocks klemmend auf die Eierstöcke Hilum mit einer Uhrmacher-Pinzette, Blutungen zu verhindern.
- Legen Sie den Spender Eierstock in Uhrglas mit 4° C sterile Kochsalzlösung gefüllt, locker abdecken und beiseite bis bereit für die Transplantation. Idealerweise legen Sie das Uhrglas unter einer zusätzlichen sezierenden Mikroskop, so dass die Eierstöcke leicht durch den Chirurgen zum Zeitpunkt der Transplantation erfasst werden können.
- An dieser Stelle entweder einzuschläfern oder beiseite stellen die Spender-Maus (müssen kontinuierlich überwacht werden) und einer transplantierten Eierstock, Gewebe, Zellen oder eine Platzhalter-Glasperle zu einem späteren Zeitpunkt erhalten.
- Mit einer sauberen Operationsfeld und Instrumente ovariectomize der Empfänger Tieres wie oben beschrieben. Ältere Mäuse haben tendenziell eine erhöhte Menge an Fettgewebe und erfordern eine erhöhte Betäubung Dosis (bis zu 20 %).
- Legen Sie nach Exzision des Eierstocks vom Empfänger ein kleines Stück des hämostatischen Schaumstoff-Pad in den leeren Schleimbeutel zu kontrollieren, Blutungen und Hilfe bei der Blutgerinnung und platzieren Sie ein kleines Stück von Kochsalzlösung getränkten Gaze über die exponierten Standort.
- Suchen Sie einen Spender Eierstock (oder Gewebe, Zellen, Platzhalter Glasperle) mit einem Uhrmacher Pinzette in einer hand und ziehen in das Mikroskop Field-of-View. Entfernen Sie mit einem anderen Zangen in der gegenüberliegenden Hand die Gaze und entfernen Sie gleichzeitig blutstillende Schaumstoff-Pad aus der Bursa während des Einsetzens der neuen Eierstock in den Schleimbeutel.
- Passt die neue Eierstock nicht innerhalb der Empfänger Bursa, schneiden Sie die Spender Eierstock in die Hälfte (1/3 oder 1/4) und in den Schleimbeutel in Stücke. Wenn der Schleimbeutel der gesamten Eierstock nicht vollständig abdecken, legen Sie eine Naht durch die Bursa, durch den Eierstock und zurück durch die Bursa um den Eierstock zu fixieren (siehe Diskussion).
Hinweis: Der Platzhalter-Glasperlen kann schwierig zu handhaben mit Uhrmacher Pinzette. - Beim Platzieren einer Glasperle in der Bursa holen Sie den Wulst mit größeren Zange und legen Sie auf die Fettpolster neben der Eierstöcke Bursa. Rollen Sie die Perle in den Schleimbeutel.
- Ein Castroviejo Nadelhalter bereits geladen mit einer konischen Nadel und 9-0 oder 10-0 Monofile Faden holen, suchen Sie zerrissenen Rand des Schleimbeutels und die Bursa mit ein oder zwei Halsted Nähte schließen.
Hinweis: Nähen kann alternativ mit Uhrmacher oder andere kleine Zange durchgeführt werden. - Bewässern Sie die Website leicht mit steriler Kochsalzlösung zu, entfernen Sie die Fett-Pad-Klemme und wieder dem Eierstock/Fett-Pad auf den Bauch.
- Entfernen Sie das Tuch und schließen Sie die Bauchdecke mit 6-0 Chromsäure Darm oder Vicryl. Dieser Schritt kann mit oder ohne dem Mikroskop erfolgen.
- Bewegen Sie das Mikroskop beiseite (wenn nicht im vorherigen Schritt verschoben) und schließen Sie die Haut mit 9 mm Wunde Clips.
- Legen Sie das Tier in einem beheizten Erholung Käfig aus Licht im Schatten und überwachen Sie das Tier ständig bis zur Genesung aus der Narkose zu. Zusätzliche Meloxicam kann 24 Stunden postoperativ, wenn angegeben verwendet werden. Entfernen Sie die Wunde Clips etwa neun Tage postoperativ.
Hinweis: Keine immunsuppressiven Techniken eingesetzt und keine Beweise von Graft - Versus - Host-Seuche nach Transplantation oder Tod erkannt wurde.
2. Transplantation Keimzelle erschöpft Eierstöcke intakt Mäuse.
Hinweis: Dieses Protokoll beinhaltet die Übertragung der Eierstöcke von einer jungen, Keimzelle erschöpft Maus zu einem postreproduktiven Weibchen. In diesem Protokoll sind die Eierstock-Empfänger und die Ovariectomy und Transplantation Verfahren wie oben beschrieben mit der Ausnahme, dass die transplantierten Ovarien chemisch wurden erschöpft der ursprüngliche und primäre Follikel/Keimzellen. Verbleibende Sekundär- und antrale Follikel durchläuft Rekrutierung/Atresie verlässt den Eierstock frei von Keimzellen. Keimzelle Erschöpfung mit 4-Vinylcyclohexene Diepoxide (VCD) ist gut beschrieben16. VCD ist ein Toxin. Da die VCD-behandelten Eierstöcke eine unbehandelte Maus verpflanzt wird sind, profitiert dieses Verfahren aus einer VCD-behandelten Eierstock in eine Maus, die toxische Wirkung von VCD nicht ausgesetzt. Dieses Protokoll beschreibt das Verfahren zur Keimzelle-Erschöpfung bei jungen, Eierstock-Spender-Mäusen.
- Verdünnen Sie VCD (64 mg/mL) in Sesamöl für Einspritzung und Speicher bei 4° C bis zur Verwendung.
- Injizieren Sie Eierstock Spender einmal täglich mit VCD I.P (160 mg/kg) für 15 Tage ab 28 Tage alt. Kontroll-Mäusen mit Sesamöl nach dem gleichen Zeitplan zu injizieren.
- Überprüfen Sie in 50 Tage alt VCD-Öl-nur-behandelt und Mäuse für die Einstellung der reproduktiven Zyklizität für 10 Tage wie oben beschrieben. In 60 Tage alt sollte VCD-behandelten Mäusen keine zytologische Nachweis der Gonaden Eingabe angezeigt werden.
- 60 Tage alte Mäuse Eierstöcke erholen und wie oben beschrieben zu verpflanzen.
- Bestimmen Sie erfolgreiche Transplantation von Keimzelle erschöpften Eierstöcke durch Erkennung von mangelnder reproduktiven Radfahren und erhöhte Niveau der zirkulierenden Androstendion. Androgen: Östrogen-Verhältnisse erhöhen deutlich, nach Erschöpfung der Keimzelle mit VCD17.
- Initiieren Sie vaginale Zytologie 10-14 Tage postoperativ und sammeln Sie Daten für mindestens 10 aufeinander folgenden Tagen um genaue Bestimmung der Zyklizität zu gewährleisten.
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Representative Results
Ovariectomy im Alter von 21 Tagen wird große Up-Regulierung des reproduktiven Systems zu Beginn der Pubertät vermeiden und beseitigen andere Einflüsse, die die weiblichen Gonade zusätzlich zu direkten Auswirkungen der Gonaden Hormone haben könnten. Reproduktive Rückgang der CBA/J Mäusen beginnt meistens mit unregelmäßigen Zyklen bei 8-10 Monate alt. 11 Monate alt haben die meisten Frauen in dieser Linie der Mäuse einen Punkt der reproduktiven Ausfall15 mit einem vollständigen Verlust der reaktionsschnelle Eizellen von 12 Monaten erreicht. Diese Altersgruppen unterscheiden sich in verschiedene Stämme von Mäusen. Bilateralen Ovariectomy/Eierstöcke Transplantation führt normalerweise zu Aktivierung der transplantierten Ovarien innerhalb von ein paar Tagen. Bei Nichtbeachtung sowohl des Empfängers endogenen Eierstöcke (Hemi-Ovariectomy) vor der Transplantation zu entfernen wird die transplantierten Eierstock verbleibenden inaktiv, bis die restlichen endogene Eierstock entfernt wird. Chirurgische Eingriffe werden in den meisten Fällen auf freiem Feld (exteriorizing der Darm-Trakt) und unter dem sezierenden Mikroskop (Ovariectomy und Transplantation Verfahren) durchgeführt.
Verlängerung der Lebensdauer
Die mittlere Lebensdauer für weiblichen Mäusen CBA/J ist 644 Tage18. Mäuse, die (Schein [Eierstock entfernen und Sofortersatz] oder Transplantation) operiert wurden ausgewählt, um zumindest auf die Zeit der Operation Leben. Je nach dem Experiment war zwischen 11 und 18 Monate alt. In ersten Experimenten19, Operationen wurden durchgeführt, im Alter von 11 Monaten und Sham Mäuse lebten durchschnittlich 728 Tage (393 Tage nach Operation) und intakte Mäusen, die neue Eierstöcke erhalten lebten 811 Tage (476 Tage vorbei Chirurgie, GC-TX-1, Abbildung 1). In einem neueren Experiment wurden Operationen am Alter von 17 Monaten durchgeführt und Mäuse, die neue Eierstöcke erhalten lebten 798 Tagen (281 Tage vorbei Chirurgie, GC-TX-2). Mäuse, die Keimzelle erschöpften Eierstöcke erhielten dies auf eine mittlere Lebensdauer von 880 Tage verlängert (363 Tage postoperativ).
Erweiterung der Gesundheit span
Mäuse, dass empfangene neue, Keimzelle-haltigen Eierstöcke deutlich verminderte kardiovaskuläre Erkrankungen10 und orthopädische Krankheit11 angezeigt und deutliche Verbesserung von mehreren Gesundheit zeigte umfassen Parameter. Postreproduktiven Mäuse, die erhielt neue Eierstöcke am Alter von 12 Monaten und im Alter von 16 Monaten untersucht wurden gezeigt, verminderte Sarkopenie12, verbesserte immun- und renale Funktion13, und verbesserte kognitive Verhalten und sensorische Funktion14 .
Überprüfung der Keimzelle Erschöpfung
Behandlung von 28 Tage alten weiblichen CBA/J Mäusen für 15 Tage mit VCD führt zu Erschöpfung der ursprüngliche und primäre (Keimzelle-haltigen) Follikel. CBA/J Mäusen analysiert nur 37 Tage nach Einleitung des VCD Behandlung bereits angezeigten Einstellung der reproduktiven Zyklizität (persistent vaginale Verhornungsstörungen), reduzierte ovarielle Gewichte (1,7 mg in Öl-nur vs. 0,9 mg in VCD behandelt) und erschöpft Primordial und primären Follikel, im Vergleich zu Kontrollen (Abbildung 2).
Abbildung 1: Einfluss der jungen Eierstöcke auf Lebensdauer in postreproduktiven Empfänger. Junge Eierstöcke transplantiert, 11 Monate alten Mäusen verlängert Lebensdauer um 11 % (GC-Tx-1 n = 14, erhalten 60 Tage alten, Keimzelle, enthält neue Eierstöcke 11 Monate alt). Transplantation von jungen Eierstöcke im Alter von 17 Monaten produziert keine Änderung in Verlängerung der Lebensdauer (GC-Tx-2 n = 5, erhalten 60 Tage alten, Keimzelle, enthält neue Eierstöcke 17 Monate alt). Zum Abbau der Keimzellen von jungen Eierstöcke vor der Transplantation die Verlängerung der Lebensdauer um 21 % verdoppelt (GD-Tx n = 5, 60 Tage alten, erhielt neue Eierstöcke Keimzelle erschöpft, 17 Monate alt). Alter bei Tod: AAD. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 2: VCD Erschöpfung der kleine Follikel bei Mäusen CBA/J. H & E-gefärbten Sektionen (25 X) zeigt (A) reichlich kleine Follikel in Öl behandelt (n = 6) Mäuse, (B) reduziert die Anzahl von kleinen Follikeln in VCD-behandelt (n = 4) Mäuse und (C) und signifikante Unterschiede im ursprünglichen und Grund- Follikel zahlen. Pfeile zeigen die ursprüngliche und primäre Follikel. Fehler Bars stellen se Klicken Sie bitte hier, um eine größere Version dieser Figur.
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Discussion
Ovariectomy und Transplantation von intakt und Keimzelle erschöpften Eierstöcke haben bei Mäusen von 21 Tagen bis hin zu 18 Monaten durchgeführt. Wenn Sie eine Ovariectomy durchführen, wo ist es wünschenswert, die Eierstöcke Bursa intakt zu halten, muss darauf geachtet werden, wenn die Bursitis Gewebe einritzen. Bei Mäusen, die älter als sechs Monate alt wird ein Großteil der Bursa mit Fettpolster, überlagert, die die Bereiche begrenzt, die für den Zugriff verwendet werden kann. In diesen Fällen ist es oft vorteilhaft, den Schleimbeutel im grenznahen Bereich Fettlappen aufreißen. Diese Methode lässt oft eine leichter zugängliche "Tasche" Bursitis Gewebe, "die neue Eierstock in der Bursa tuck". Dieser Ansatz kann auch erfordern weniger Nähen um die Bursitis Gewebe zu schließen. Die Öffnung in der Bursa seitlich drehen kann auch helfen, die neuen Eierstock während Nähen in Position zu halten.
Gelegentlich muss die Bursitis Gewebe weithin wegen übermäßigen Fettlappen Berichterstattung, ungewöhnliche Ausrichtung des Traktes geöffnet werden oder zu schwierig abrufen Eierstockgewebe Fragmente zu erholen. In diesen Fällen kann die neue Eierstock nicht effektiv "in den Schleimbeutel verstaut werden". Wenn der Fruchtknoten sich oben auf der offenen Bursa befindet und mehr als die Hälfte des Eierstocks fällt unter das restliche Bursitis Gewebe, wird eine Tabaksbeutelnaht gut über den zerrissenen Rand des Schleimbeutels und rund um den Eierstock platziert. Geldbörse-String langsam angezogen wird, der Fruchtknoten ist in den restlichen Schleimbeutel nach unten gedrückt und die Bursa ist weit genug um den Eierstock in Position zu halten geschlossen, aber möglicherweise nicht vollständig geschlossen. Wenn der Fruchtknoten sich oben auf der offenen Bursa befindet und weniger als die Hälfte des Eierstocks unter das restliche Bursitis Gewebe fällt, ist eine Naht gut über den zerrissenen Rand des Schleimbeutels auf der einen Seite durch den Eierstock durch die Bursa auf der gegenüberliegenden Seite gelegt und verknotet übertrieben des Eierstocks. Diese Methode möglicherweise mehrere Nähte und führt keine vollständige Abdeckung des Eierstocks durch Bursitis Gewebe. Allerdings wird diese Methode halten Sie den Eierstock und ermöglichen effiziente Revaskularisation und eventuelle Wiederaufnahme der ovariellen Aktivität.
Wenn Sie eine Ovariectomy durchführen, wo ist es wünschenswert, die Eierstöcke Bursa intakt zu halten, muss auch darauf geachtet werden, um sicherzustellen, alle auf die endogen Eierstockgewebe entfernt. Dies kann mit einer großen endogenen Eierstock schwierig sein. Um wie viel Bursitis Gewebe möglichst zu schonen, können große Eierstöcke in Stücken entfernt werden. Jedoch, wenn Sie diese Methode verwenden, muss zusätzliche Wachsamkeit verwendet werden, um sicherzustellen, dass alle endogen Eierstockgewebe entfernt wird. Dies kann schwierig sein, nach dem Teil des Eierstocks entfernt wird und die Bursa mit Blut gefüllt hat. Ein kleines Stück des hämostatischen Schaumstoff-Pad kann in den offenen Schleimbeutel zu verdrängen das Blut und Hilfe bei der Blutgerinnung in den Schleimbeutel platziert werden. Nach 30-60 s, blutstillende Schaumstoff-Pad entfernt und die Bursa wird geprüft (die Bursa kann auch gespült werden leicht mit Kochsalzlösung) auf das Vorhandensein von jedem Eierstock Fragmente.
Eierstockkrebs, Transplantation erfordert, dass die transplantierten Eierstock der etablierten Blutversorgung getrennt werden und Revaskularisation des Eierstocks in seiner neuen Heimat ist nicht unmittelbar. Aus diesem Grund durchläuft die transplantierten Eierstock einige Nekrose, vor allem mit Reife und/oder rekrutierten Follikel. Jedoch die überwiegende Mehrheit der transplantierten Ovarien anzeigen zyklische Aktivität kurz nach der Transplantation und einige Empfänger weiterhin bis Tod fahren. Daher erscheint der Verlust der Follikel durch Transplantation Nekrose nicht die Einrichtung der transplantierten Eierstock Integration in seinem neuen Wirt stark beeinflussen.
Eine vorherrschende Meinung bei Säugetieren Altern ist, dass Östrogen die einzig wichtigen reproduktiven Einfluss auf die Gesundheit darstellt. Die dramatischen Veränderungen beobachtet in der Gesundheit der alten, dass Mäuse, die neue Eierstöcke erhielten als eine einfache Wiederherstellung der zirkulierende Östrogenspiegel leicht abgetan werden konnte. Allerdings hatte 17-α-Estradiol in einer aktuellen Studie, unabhängig von drei Labore20repliziert, keine Wirkung auf weibliche Lebensdauer wenn ab 10 Monaten gefüttert. Dies ist sicherlich nicht das gleiche Hormon das bekanntere 17-β-Estradiol, aber viele der Gesundheit verbundenen Effekte von Östrogen 17-α-Estradiol Signalisierung21zugeschrieben haben. Östrogen-Therapie hat gezeigt, dass sowohl positive als auch negative Einflüsse auf viele altersbedingte Krankheiten bei postmenopausalen Frauen haben und besitzt eindeutig nicht den gleichen Einfluss bei postmenopausalen Frauen, wie es bei jungen Frauen. Während Keimzelle stimuliert Östrogen-Produktion entscheidend für die Reproduktion in der Menopause, ist Keimzelle erschöpften Eierstöcke noch besitzen gesundheitsfördernde Eigenschaften, wie Entfernung der postreproduktiven Eierstöcke weiter erhöht die Rate von Sterblichkeit, einschließlich altersbedingte Krankheiten22. Ovariectomized Mäuse haben etwas kürzere Lebensdauer als Schein-Chirurgie-Mäuse (715 Tage vs. 728 Tage, bzw.19). Wenn die Mechanismen Einfluss auf Langlebigkeit evolutionär konserviert sind, spricht sich Beweise von Modellorganismen gegen eine Östrogen-nur Erklärung für Gesundheit umfassen Erweiterung bei Säugetieren.
Transplantation der Eierstöcke mit und ohne aktive Keimzellen restauriert nutzen für die Gesundheit auf eine Ebene, die Hormontherapie allein zu kämpfen hat, zu erreichen. Viele Aspekte der Gesundheit, die durch die Alterung bei Frauen negativ beeinflusst werden, können Wiedereinsetzung in den vorigen aktiven Ovarfunktion bei gealterten Mäusen positiv beeinflusst werden. Pilot-Studien legen jedoch nahe, dass diese Effekte auch, zu einem gewissen Grad unabhängig von Eierstockkrebs Keimzelle Hormone sein mag.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Acknowledgments
Forschung, die in dieser Publikation berichtet wurde durch ein großzügiges Geschenk der 14 Monate alten weiblichen CBA-Mäusen aus dem National Institute on Aging, im Alter von Nagetier Kolonie (Nancy Nadon) und Utah State University, School of Veterinary Medicine, Department of Animal, Molkerei unterstützt. und Veterinär-Wissenschaft.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dissecting microscope | Any dissecting scope with an adjustable working distance. | ||
| Warm Water Recirculator and appropriate pad for your size surgical/recovery field. | Stryker/Gaymar | TP700 | Circulating water pads produce even and consistent temperature operating and recovery fields. |
| Surgical instruments-dissection instruments for access to the reproductive tract | Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific | ||
| Surgical instruments-fine instruments for the transplantation procedure. | Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific | ||
| Suture material for abdominal wall | eSutures | G3756K: 6-0 MILD CHROMIC GUT 18" HE-7 CUTTING, DOUBLE ARMED | |
| Suture material for ovarian bursa | eSutures | 2809G: 9-0 or 2810G: 10-0 ETHILON BLACK 5" BV130-5 TAPER | 10-0 suture can be difficult to locate if dropped on the surgery field. |
| Absorbable gelatin sponge | PFIZER. | Gelfoam- PFIZER 09-0315-08. | cut into small (~2mm) pieces under sterile conditions. |
| Staples for skin closure | Becton Dickinson | MikRon Autoclip 9mm (BD 427631) | |
| Eye ointment. | MWI Veterinary Supply Co. | Puralube sterile opthalmic ointment | |
| Syringes for anesthesia, analgesia and epinephrine | MWI Veterinary Supply Co. | BD 305536 | 27g x 3/8in,Intradermal Bevel 1/2ml |
| Syringes for saline. | MWI Veterinary Supply Co. | BD 309657. | 3ml syringe, luer-lok tip, 27g needle |
| Clippers/blade | Andis | Super AGR+™ Cordless Detachable Blade Clipper and a CeramicEdge® #40 blade. | Any clippers with a fine blade. |
| Ethanol | University chemical supply | dilute to 70% for use. | |
| Betadine solution | MWI Veterinary Supply Co. | 003233 | |
| 2x2 gauze pads | MWI Veterinary Supply Co. | 003073 | autoclaved with surgery packs |
| Borosilicate glass beads | Sigma-Aldrich Co. | Z273619 | Autoclave in sintilation vials |
| 4-vinylcyclohexene diepoxide | Sigma-Aldrich Co. | 94956 | |
| Sesame oil | Sigma-Aldrich Co. | S3547 |
References
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