Summary
Orthotopique de protocoles ovaire transplantation pour modifier ovarien influence sur la physiologie de la souris bénéficiaire, sont décrites ici. Cette intervention chirurgicale est utilisée pour exposer des souris femelles à divers types d’influence ovarienne et peut-être inclure hétérochronique transplantations d’organes et la transplantation des ovaires qui ont fait l’objet de divers traitements ex vivo .
Abstract
Transplantation d’ovaire a tout d’abord procédée à Utah State University en 1963. Dans des travaux plus récents, hétérochronique transplantation d’ovaires chez les mammifères est utilisée pour étudier les effets de la protection de la santé des jeunes ovaires chez les femmes jeunes. Les procédures actuelles d’emploient une méthode de transplantation orthotopique, où les ovaires allogènes sont transplantés à leur position d’origine dans la bourse ovarienne. Cette méthode diffère la plus couramment utilisée transplantation transplantation de tissu ovarien/ovaires par voie sous-cutanée ou sous la capsule rénale. Tous les trois endroits fournissent une revascularisation efficace des tissus transplantés. Toutefois, une transplantation orthotopique fournit l’ovaire avec l’environnement de signalisation plus naturel et est la seule procédure qui prévoit la possibilité pour l’animal à se reproduire naturellement après l’opération. On doit veiller à enlever tous les tissus ovariens endogène au cours de la procédure de l’ovariectomie. Si n’importe quel tissu endogène reste ou si seulement un seul ovaire est enlevé, le tissu greffé restera inactif jusqu'à ce que le tissu existant devient sénescent. Alors que la revascularisation des ovaires transplantés se produit très rapidement, le bénéficiaire de la greffe peut prendre énormément de temps pour s’adapter au nouvel axe hypothalamus/hypophyse/gonadiques/surrénales (HPG/A) signalisation régime associé à la transplantation tissus. Cela prend normalement environ 100 jours chez la souris. Par conséquent, des expériences de transplantation devraient être conçus pour accueillir cette période d’adaptation. Résultats typiques avec ovaire transplantation comprendra les modifications apportées à la santé du receveur qui reflètent l’âge de l’ovaire transplanté, plutôt que l’âge chronologique du destinataire.
Introduction
L’influence de reproduction sur la santé et de la durée de vie est souvent à tort pensé aussi restreint qu’à la période entourant la compétence reproduction. Tandis que le mode de vie et les phénotypes associés à la phase sexuellement compétente de la durée de vie sont facilement différenciés des phases préalables- et reproduction, statut reproductif influence santé pendant toutes les phases de la durée de vie. La période de reproduction compétence est souvent dénommée la durée de vie reproductive, se différencie de la durée de vie chronologique. Cette terminologie se prête à une séparation artificielle des deux désignations de durée de vie alors qu’en réalité, les deux sont étroitement liés entre eux avec des événements ayant une incidence sur celui, plus souvent qu’autrement, touchant aussi bien l’autre.
Preuves ces dix dernières années indiquent que le statut reproductif de l’individu est associée à un risque accru de développer des conditions de santé chroniques1. Une étude documentée une association entre les durées de vie plus courtes et échec de la reproduction pour une cohorte d’hommes2. L’association est encore plus frappante chez les femmes. Maladies cardiovasculaires sont rare chez les femmes préménopausées3, mais l’insuffisance ovarienne augmente les maladies cardiovasculaires nettement à la ménopause4 et chez les jeunes femmes avec une insuffisance ovarienne prématurée5. L’insuline résistance6 et la perte osseuse augmentent à la ménopause7 et presque deux-tiers des américains avec la maladie d’Alzheimer sont des femmes,8. Des changements bien définis dans les ovaires de signalisation marquent la transition d’un état de préménopause, résistant aux maladies, à un état après la ménopause, accablés de maladie. Cette transition stable, offre une occasion d’identifier les mécanismes qui permettent d’accélérer les risques de maladie au cours du vieillissement.
Récemment, la transplantation de tissu ovarien cryopréservé a été utilisée pour restaurer la fertilité des femmes qui subissent des procédures médicales qui peuvent mettre en danger les cellules germinales, tels que la chimiothérapie. Transplantation de tissu ovarien peut également être utilisée pour produire une descendance viable chez les animaux non-ovarien infertilité basés, y compris des souris transgéniques9. Transplantation d’ovaire est une méthode efficace pour séparer l’influence de la fonction de reproduction ou reproduction vieillissement du vieillissement chronologique en soi.
Le rôle de soutien bien établi pour les hormones ovariennes dans de nombreux aspects de la santé féminine implique la perte de production d’hormones du cyclisme activement les cellules germinales, comme la principale cause des risques accrus de maladie à la ménopause. Alors que la valeur des hormones ovariennes dans santé féminine est incontestable, remplaçant ces hormones en péri - et les femmes ménopausées a été peu fiable dans la restauration des avantages dont bénéficie les jeunes femmes avec jeunes ovaires. Ces bienfaits sont fiable restaurés par transplantation hétérochronique de jeunes ovaires de souris femelles reproduction10,11,12,13,14.
Statut reproductif des souris donneur et du receveur doit être déterminée avant et après la transplantation ou procédures de l’ovariectomie. Souris de reproduction présomptives qui affichent des signes de gonades d’entrée avant l’intervention chirurgicale à l’âge de 12 mois sont exclus de ces expériences. Gonadique est déterminée par la cytologie vaginale. Données sur la cytologie vaginale sont prélevées avant l’intervention afin d’assurer un état de reproduction chez les souris destinataires et activement-recyclage des ovaires chez les souris de donateurs au moins 10 jours consécutifs. Un cycle oestral est défini comme la période de la journée nucléées cellules épithéliales apparaissent d’abord (c.-à-d., pro-oestrus) à la veille de la prochaine comparution de cellules épithéliales nucléées dans le frottis vaginal, s’il y a une période de leucocytaire présence (c.-à-d., dioestrus) entre les deux. Oestrus est déterminée par la présence de cellules épithéliales grands, squameuses, avec ou sans noyaux. Souris qui n’affichent aucune activité cyclique pour une période de 10 jours avant ou après la chirurgie sont déterminés à n’avoir aucune entrée gonadique pour ladite période. Souris qui affichent au moins un cycle oestral complet dans un délai de 10 jours avant ou après la chirurgie sont déterminés d’avoir entrée gonadique pour ladite période. Des souris femelles doivent être logés en présence de souris mâles ou exposés à la litière souillée de la cage du mâle pour assurer une exposition uniforme aux stimulations inductrices de cycle.
Ces procédures de transplantation sont mieux réalisées avec deux chirurgiens travaillant simultanément sur les donateurs et les bénéficiaires souris. Toutefois, les procédures sont facilement réalisées par un chirurgien, avec les ovaires de donateurs plus souvent récupérés avant de commencer la procédure de l’ovariectomie sur la souris destinataire. Ce protocole décrit la procédure pour le seul chirurgien. Exposition de l’appareil reproducteur et la fermeture du site se faites normalement sans microscope, tandis que l’enlèvement et le remplacement des ovaires se fait sous un microscope. Comme avec l’apprentissage de toute intervention chirurgicale, les sites d’incision peuvent être plus grands et chirurgies peuvent prendre plus de temps tout en premier apprentissage de la procédure et sera généralement diminuer avec l’expérience.
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Protocol
Toutes les méthodes décrites ici ont été élaborées en vertu de la National Research Council directives trouvent dans le Guide pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire et ont été approuvés par le Comité de l’emploi et de Utah State University Institutional Animal Care.
NOTE : Procédures de transplantation ovarienne peuvent impliquer une souris (souche CBA/J) depuis l’âge de 21 jours à l’âge de 18 mois. Souris de la souche CBA/J deviennent sexuellement compétent entre 45 et 60 jours d’âge et reproductivement sénescentes entre 10 et 12 mois d’âge.
1. transplantation d’ovaires intacts à des souris âgées
NOTE : Ce premier protocole décrit la procédure utilisée pendant le transfert des ovaires d’une jeune souris (60 jours d’âge) à un postreproductive femelle (12 mois) de la même souche consanguine. La même procédure est utilisée pour transplantation d’ovaire entre les deux souris femelles.
- Peser et anesthésier l’animal donneur par voie intrapéritonéale (I.P., 27 ga aiguille) injection, par exemple à l’aide d’un cocktail de kétamine, xylazine et acepromazine (65 mg/kg de kétamine, 13 mg/kg de xylazine 2,0 mg/kg, acépromazine ; cocktail dose - 6,5 ml/kg). Retourner l’animal à la cage chauffée jusqu'à ce que l’anesthésie a pris effet.
- Une fois anesthésié, enlevez l’animal de la maison cage et le déposer sur des essuie-tout chauffée. En utilisant les clippers (lame #40 préféré), enlever les cheveux quelques mm latéraux à la ligne médiane de chaque côté, commençant juste sous les côtes et se déplaçant dans la partie distale, préparer un coupé « patch » environ 2-3 cm carrés de chaque côté de la souris sujette, laissant une bande de cheveux environ 1-2 cm sur la ligne médiane.
- Légèrement essuyez les zones coupées avec l’éthanol à 70 % et appliquer la bétadine solution au site coupé avec un coton-tige.
- Appliquez le gel antibiotique pour une protection oculaire et administrer le meloxicam (2,0 mg/kg) par voie sous-cutanée (S.C., 27 ga aiguille) sur la face latérale du cou de l’animal pour soulager la douleur postopératoire.
- Placez l’animal en position couchée sur un champ opératoire stérile chauffée et essuyer la zone coupée avec une gaze de coton imbibé d’éthanol 2 cm sur 2 cm 70 %.
- Faire une incision placé de 1,0 à 1,5 cm et disséquer carrément la peau de l’aponévrose sous-jacente. Faire une incision à travers le fascia. Carrément disséquer latéralement sous cette aponévrose aussi superficiellement possible jusqu'à arriver à la cavité abdominale
- Place un petit drap chirurgical sur l’incision (coupe de gaze 2 x 2 cm) et humide drapé avec du sérum physiologique stérile.
- À l’aide de petites pinces, localiser le tissu adipeux qui entoure l’ovaire dans la cavité abdominale et doucement extraire les coussinets adipeux et ovaire et placez-le sur le drapé de gaze humidifiée. L’ovaire coussinets adipeux paraîtra plus « blancs » que le tissu adipeux environnant.
- Placer une pince Bulldog de 1,5 pouce sur les coussinets adipeux (prenant soin de ne pas entraver la bourse ovarienne) pour maintenir le tube en place au cours de la procédure.
- Déplacez le microscope à dissection en place et d’identifier clairement la bourse ovarienne. Saisir la bourse avec deux pinces d’horloger et inciser la bourse ovarienne en face du hile ovarien d’exposer l’ovaire. Si la zone d’accès prévue de la bourse est très vascularisée, appliquez une goutte d’épinéphrine (1/100 000) avec une seringue à la surface bursite pour réduire le saignement au moment de la déchirure.
- Délicatement enlever l’ovaire de la bourse ovarienne et d’accise de l’ovaire en pinçant à hile ovarien avec une pince d’horloger pour prévenir les saignements.
- Placer l’ovaire donneur en verre de montre, rempli de solution saline stérile de 4° C, plus ou moins couvrir et mis de côté jusqu’au moment de la transplantation. Idéalement, placez le verre de montre sous un microscope à dissection supplémentaire afin que les ovaires peuvent être facilement saisies par le chirurgien au moment de la transplantation.
- À ce stade, soit euthanasier ou mis de côté la souris donneur (doit être surveillée de façon continue) pour recevoir un ovaire transplanté, de tissus, de cellules ou d’une perle de verre d’espace réservé à un moment ultérieur.
- Avec un champ propre chirurgical et instruments, ovariectomize l’animal receveur comme indiqué ci-dessus. Les souris âgées ont tendance à avoir une plus grande quantité de tissu adipeux et peuvent nécessiter une anesthésie augmentation de dose (jusqu'à 20 %).
- Après l’excision de l’ovaire par le bénéficiaire, placer un petit morceau de mousse hémostatique tampon à l’intérieur de la bourse vide pour contrôler le saignement et aider à la coagulation et placez un petit morceau de gaze imbibée d’une solution saline sur le site exposé.
- Localiser un ovaire donateur (ou les tissus, cellules, perle de verre espace réservé) avec un horloger forceps dans une main et se déplacer dans la champ-de-vue au microscope. Avec une autre pince dans la main opposée, retirer la gaze et simultanément retirer le coussin de mousse hémostatique de la bourse tout en mettant l’ovaire de nouveau à l’intérieur de la bourse.
- Si l’ovaire nouvelle ne correspond pas à l’intérieur de la bourse destinataire, coupez l’ovaire de donneur dans la moitié (1/3 ou 1/4) et placez-les dans la bourse en morceaux. Si la bourse ne couvre pas complètement l’ovaire entier, placez une suture par l’intermédiaire de la bourse, par le biais de l’ovaire et retour par l’intermédiaire de la bourse pour maintenir l’ovaire en place (voir la section « Discussion »).
Remarque : Les perles de verre porte-lieu peuvent être difficiles à gérer avec une pince de l’horloger. - Lorsque vous placez une perle de verre à l’intérieur de la bourse, ramasser la perle avec une pince plus et déposez sur le dessus de la grosse touche à côté de la bourse ovarienne. Rouler le boudin dans la bourse.
- Ramasser un porte-aiguille de Castroviejo déjà chargé avec une aiguille conique et suture de monofilament 9-0 ou 0-10, recherchez le bord déchiré de la bourse et fermer la bourse à l’aide d’un ou deux sutures Halsted.
NOTE : Suture peut par ailleurs être effectuée avec horloger ou autres petites pinces. - Irriguer le site légèrement avec du sérum physiologique stérile, ôter la bride de graisse-pad et retourner le coussin de l’ovaire/graisse à l’abdomen.
- Enlever le drap et la paroi abdominale par 6-0 gut chromique ou vicryl à proximité. Cette étape peut être faite avec ou sans le microscope.
- Redresser le microscope côté (si ne pas déplacé à l’étape précédente) et refermer la peau avec des clips de 9 mm enroulé.
- Placer l’animal dans une cage de récupération chauffée ombragée de la lumière et de surveiller l’animal en continu jusqu'à de l’anesthésie. Meloxicam supplémentaire peut être utilisé 24 heures après l’opération si indiqué. Retirer les clips de plaie environ neuf jours après l’opération.
Remarque : Aucun immunosuppresseurs techniques ne sont employées, et aucun signe de graft - versus - host disease n’a été détectée après la transplantation ou au moment du décès.
2. la transplantation de cellules germinales appauvri ovaires de souris intactes.
Remarque : Ce protocole implique le transfert des ovaires par un jeune, pauvre en cellules germinales de souris à une femelle de reproduction. Dans le présent protocole, les destinataires de l’ovaire et les procédures de l’ovariectomie et transplantation d’organes sont comme ci-dessus à l’exception que les ovaires transplantés ont été chimiquement appauvri des cellules des follicules/germinales primordiales et primaire. Restant des follicules secondaires et antrales subira recrutement/atrésie quitte l’ovaire dépourvu de cellules germinales. L’épuisement des cellules germinales avec 4-vinylcyclohexène diépoxyde (VCD) est bien décrit16. VCD est une toxine. Parce que les ovaires imprégnées de VCD sont être transplantés à une souris non traitées, cette procédure bénéficie d’un ovaire imprégnées de VCD dans une souris ne pas exposé aux effets toxiques du VCD. Ce protocole décrit la procédure pour l’appauvrissement de la couche des cellules germinales chez les jeunes, ovaire-donateurs.
- Diluer VCD (64 mg/mL) huile de sésame pour l’injection et conserver à 4° C jusqu'à l’utilisation.
- Injecter les donateurs ovaire une fois par jour avec VCD I.P. (160 mg/kg) pendant 15 jours commençant à 28 jours d’âge. Injecter des souris témoins d’huile de sésame, suivant le même calendrier.
- 50 jours après la naissance, vérifier la souris VCD-traitées et huile-seulement cessation de reproduction cyclicité pendant 10 jours comme indiqué ci-dessus. 60 jours après la naissance, chez les souris traitées VCD ne doivent afficher aucune preuve cytologique d’entrée gonadique.
- Récupérer des ovaires de souris âgées de 60 jours et la transplantation comme indiqué ci-dessus.
- Déterminer une transplantation réussie d’ovaires de cellules germinales appauvri par la détection d’un manque de cyclisme reproduction et accroissement de la circulation androstènedione. Ratio androgènes : oestrogène augmente de manière significative après épuisement des cellules germinales avec VCD,17.
- Ouvrir la cytologie vaginale 10-14 jours après l’opération et collecter des données au moins 10 jours consécutifs afin d’assurer la détermination précise de la cyclicité.
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Representative Results
Ovariectomie à 21 jours d’âge évitera majeur vers le haut-règlement du système reproducteur au début de la puberté et éliminer les autres influences que la gonade femelle devra peut-être en outre les effets directs des hormones gonadiques. Baisse de reproduction chez des souris CBA/J commence habituellement avec des cycles irréguliers, à l’âge de 8-10 mois. À l’âge de 11 mois, la plupart des femelles de la lignée de souris ont atteint un stade d’infécondité15 avec une perte complète d’ovocytes sensibles de l’âge de 12 mois. Ces âges varient dans différentes souches de souris. Une ovariectomie bilatérale/ovaire transplantation entraîne normalement l’activation des ovaires transplantés dans les prochains jours. Pour enlever les deux ovaires d’endogène du destinataire (hémi-ovariectomie) avant la transplantation entraînera dans l’ovaire transplanté restant inactifs jusqu'à ce que l’ovaire restant endogène est supprimé. Interventions chirurgicales sont effectuées le plus souvent en plein champ (extériorisation du tractus) et sous un microscope à dissection (ovariectomie et greffe de procédures).
Extension de durée de vie
La durée de vie moyenne pour les femelles souris CBA/J est 644 jours18. Souris qui subit une intervention chirurgicale (transplantation ou imposture [ovaire dépose et remplacement immédiat]) ont été choisis pour vivre au moins au moment de l’intervention. Selon l’expérience, c’était entre 11 et 18 mois d’âge. Initial des expériences19, interventions chirurgicales ont été réalisées à l’âge de 11 mois et imposture souris vivaient en moyenne 728 jours (393 jours suivant le moment de la chirurgie) et souris intactes qui reçoivent des ovaires nouveau vécu 816 jours (471 jours après chirurgie, GC-TX-1, Figure 1). Dans une expérience plus récente, interventions chirurgicales ont été réalisées à l’âge de 17 mois et souris qui reçoivent des ovaires nouveau vécu 793 jours (286 jours après chirurgie, GC-TX-2). Souris qui ont reçu des ovaires appauvri en cellules germinales cela prolongé pour une durée de vie moyenne de 880 jours (363 jours après l’opération).
Prolongation de la durée de la santé
Souris qu’ovaires ont reçu de nouveaux, contenant des cellules germinales affichent une baisse significative des maladies cardiovasculaires10 et maladie orthopédique11 et a démontré une amélioration significative de la santé de plusieurs couvrent les paramètres. Souris post-parturition qui a reçu le nouveau ovaires à l’âge de 12 mois et ont été testés à l’âge de 16 mois a démontré une diminution de la sarcopénie12, amélioration de la fonction rénale et immunitaire13et comportement cognitive améliorée et fonction sensorielle14 .
Vérification de la déplétion des cellules germinales
Traitement des souris CBA/J femelles de 28 jours pour 15 jours avec VCD se traduit par l’appauvrissement de la couche de primaires et primordiales des follicules (contenant des cellules germinales). Des souris CBA/J analysés à seulement 37 jours après l’ouverture de la cessation de traitement déjà affichée VCD de reproduction cyclicité (kératinisation vaginale persistante), réduit le poids ovariens (1,7 mg dans huile seule contre 0,9 mg à VCD-traités) et appauvri primordial et follicules ovariens primaires, comparées aux témoins (Figure 2).
Figure 1 : Influence des jeunes ovaires sur la durée de vie chez les receveurs post-parturition. Jeunes ovaires transplantés à 11 mois souris prolongé la durée de vie de 11 % (GC-Tx-1 n = 14, reçu âgés de 60 jours, contenant des cellules germinales des ovaires nouvelles à l’âge de 11 mois). Transplantation d’ovaires jeunes à l’âge de 17 mois a produit aucun changement dans la prolongation de la durée de vie (GC-Tx-2 n = 5, a reçu 60 jour âgé, contenant des cellules germinales des ovaires nouvelles à l’âge de 17 mois). Appauvrissant les cellules germinales de jeunes ovaires avant la greffe a doublé la prolongation de la durée de vie à 21 % (GD-Tx n = 5, reçue le jour 60-vieux, pauvre en cellules germinales nouveau ovaires à l’âge de 17 mois). Âge au décès : AAD. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 2 : épuisement des VCD de petits follicules chez des souris CBA/J. H & E-teint Articles (25 X) montrant (A) abondants petits follicules traitées à l’huile (n = 6) souris, (B) réduit le nombre de petits follicules à VCD-traités (n = 4) souris et (C) et des différences significatives en primordial et primaire numéros de follicule. Les flèches indiquent les follicules primordiaux et primaires. Représentent d’erreur de barres SE. s’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
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Discussion
Ovariectomie et transplantation des ovaires intacts et appauvri en cellules germinales ont été menées chez des souris allant de 21 jours à l’âge de 18 mois. Lorsque vous effectuez une ovariectomie où il est souhaitable de maintenir la bourse ovarienne intact, il faut quand Inciser le tissu bursite. Chez les souris âgées de six mois d’âge, une grande partie de la bourse devient superposée avec le coussin de graisse, qui limite les domaines qui peuvent être utilisés pour l’accès. Dans ces cas, il est souvent avantageux de déchirer la bourse près de la frontière de coussinets adipeux. Cette méthode laisse souvent une « poche » plus facilement accessible du tissu bursite de « rentrer » l’ovaire de nouveau à l’intérieur de la bourse. Cette approche peut également exiger moins de suture pour fermer le tissu bursite. Tournant l’ouverture dans la bourse latéralement peut aussi aider à garder l’ovaire de nouveau en place pendant la suture.
Parfois, le tissu bursite doit ouvrir largement en raison de la couverture excessive de garniture, orientation inhabituelle des voies ou de récupérer des fragments de tissu ovarien difficile à récupérer. Dans ces cas, l’ovaire nouvelle ne peut pas efficacement être « rentré » dans la bourse. Si l’ovaire est situé au sommet de la bourse ouverte et plus de la moitié de l’ovaire est couvert par le tissu restant bursite, une suture en bourse est placée bien en retrait du bord déchiré de la bourse et entourant l’ovaire. Comme la chaîne-sac à main est serrée lentement, l’ovaire est poussé vers le bas dans la bourse restante et la bourse est fermée vers le bas assez loin pour garder les ovaires en place, mais ne peut pas fermer complètement. Si l’ovaire est définie sur le dessus de la bourse ouverte et moins de la moitié de l’ovaire est couvert par le tissu restant bursite, une suture est placée bien en retrait du bord déchiré de la bourse d’un côté, par le biais de l’ovaire, par l’intermédiaire de la bourse du côté opposé et nouée sur le dessus de l’ovaire. Cette méthode peut nécessiter plusieurs sutures et ne donneront pas lieu à une couverture complète de l’ovaire par le tissu bursite. Toutefois, cette méthode tiendra l’ovaire en place et permettent de revascularisation efficace et l’éventuelle reprise de l’activité ovarienne.
Lorsque vous effectuez une ovariectomie où il est souhaitable de maintenir la bourse ovarienne intact, également veiller à s’assurer que tous les tissus ovariens endogène est supprimé. Cela peut être difficile avec un gros ovaire endogène. Conserver comme tissu bursite autant que possible, gros ovaires peuvent être enlevées en morceaux. Toutefois, lorsque vous utilisez cette méthode, une vigilance supplémentaire doit être utilisée pour s’assurer que tous les tissus ovariens endogène sont supprimé. Cela peut être difficile après la partie de l’ovaire est enlevé et la bourse a rempli de sang. Un petit morceau de mousse hémostatique peut être placé dans la bourse ouverte pour déplacer le sang et aide à la coagulation à l’intérieur de la bourse. Après 30 à 60 s, le coussin de mousse hémostatique est retiré et la bourse est inspectée (la Bourse peut aussi être rincée légèrement avec du sérum physiologique) pour la présence d’aucun fragment d’ovaire restant.
Transplantation d’ovaire nécessite que l’ovaire transplanté soit séparé de son approvisionnement en sang établis et revascularisation de l’ovaire à son nouveau domicile n’est pas immédiate. Pour cette raison, l’ovaire transplanté subit quelques nécroses, impliquant principalement des follicules matures et/ou recrutés. Cependant, la grande majorité des ovaires transplantés présentent une activité cyclique peu de temps après la transplantation et certains receveurs continuera à vélo jusqu'à la mort. Par conséquent, la perte des follicules en raison de la nécrose de la greffe ne semble pas influencer fortement la mise en place de l’intégration de l’ovaire transplanté dans son nouvel hôte.
Un qui a prévalu au cours du vieillissement chez les mammifères est que l’oestrogène représente l’influence de reproduction uniquement important sur la santé. Les bouleversements observés dans la santé de vieilles souris qui ont reçu des ovaires nouvelles pourraient être facilement rejetés comme une restauration simple consistant à diffuser les niveaux d’oestrogène. Toutefois, dans une étude récente, répliquée indépendamment par trois laboratoires20, 17-α-estradiol a eu aucun effet sur la durée de vie féminine quand alimenté par 10 mois d’âge. Ce n’est certainement pas la même hormone comme le plus bien connu 17-β-estradiol, mais beaucoup d’effets liés à la santé de l’oestrogène ont été attribuées à la 17-α-estradiol signalisation21. La thérapie d’oestrogène s’est avérée avoir des influences positives et négatives sur nombreuses pathologies liées au vieillissement chez les femmes ménopausées et clairement ne possède pas la même influence chez la femme ménopausée comme il le fait chez les jeunes femmes. Tandis que la production d’oestrogènes stimulée par des cellules germinales est essentielle pour la reproduction, à la ménopause, les ovaires appauvri en cellules germinales possèdent encore attributs de promotion de la santé, comme l’ablation des ovaires reproduction plus augmente les taux de mortalité, y compris 22de maladies liées au vieillissement. Les souris ovariectomisées ont des durées de vie légèrement plus courtes que les souris de chirurgie sham (715 jours contre 728 jours, respectivement19). Si les mécanismes qui influencent la longévité évolutionnaires conservées, preuve d’organismes modèles milite contre une explication oestrogène seule pour santé span extension chez les mammifères.
Transplantation d’ovaires avec et sans les cellules germinales actives a rétabli les prestations de santé à un niveau que seul l’hormonothérapie a du mal à atteindre. Beaucoup d’aspects de la santé, qui est négativement influencés par le vieillissement chez les femmes, peut être influencée positivement par le rétablissement de la fonction ovarienne active chez les souris âgées. Cependant, des études pilotes récents suggèrent que ces effets peuvent être, dans une certaine mesure, indépendante des cellules germinales ovariennes hormones.
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Disclosures
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Acknowledgments
Recherche rapporté dans cette publication a été financée par un don généreux de souris CBA femelles de 14 mois du National Institute on Aging, colonie de rongeurs âgés (Nancy Nadon) et Utah State University, School of Veterinary Medicine, Department of Animal, produits laitiers et Sciences vétérinaires.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dissecting microscope | Any dissecting scope with an adjustable working distance. | ||
| Warm Water Recirculator and appropriate pad for your size surgical/recovery field. | Stryker/Gaymar | TP700 | Circulating water pads produce even and consistent temperature operating and recovery fields. |
| Surgical instruments-dissection instruments for access to the reproductive tract | Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific | ||
| Surgical instruments-fine instruments for the transplantation procedure. | Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific | ||
| Suture material for abdominal wall | eSutures | G3756K: 6-0 MILD CHROMIC GUT 18" HE-7 CUTTING, DOUBLE ARMED | |
| Suture material for ovarian bursa | eSutures | 2809G: 9-0 or 2810G: 10-0 ETHILON BLACK 5" BV130-5 TAPER | 10-0 suture can be difficult to locate if dropped on the surgery field. |
| Absorbable gelatin sponge | PFIZER. | Gelfoam- PFIZER 09-0315-08. | cut into small (~2mm) pieces under sterile conditions. |
| Staples for skin closure | Becton Dickinson | MikRon Autoclip 9mm (BD 427631) | |
| Eye ointment. | MWI Veterinary Supply Co. | Puralube sterile opthalmic ointment | |
| Syringes for anesthesia, analgesia and epinephrine | MWI Veterinary Supply Co. | BD 305536 | 27g x 3/8in,Intradermal Bevel 1/2ml |
| Syringes for saline. | MWI Veterinary Supply Co. | BD 309657. | 3ml syringe, luer-lok tip, 27g needle |
| Clippers/blade | Andis | Super AGR+™ Cordless Detachable Blade Clipper and a CeramicEdge® #40 blade. | Any clippers with a fine blade. |
| Ethanol | University chemical supply | dilute to 70% for use. | |
| Betadine solution | MWI Veterinary Supply Co. | 003233 | |
| 2x2 gauze pads | MWI Veterinary Supply Co. | 003073 | autoclaved with surgery packs |
| Borosilicate glass beads | Sigma-Aldrich Co. | Z273619 | Autoclave in sintilation vials |
| 4-vinylcyclohexene diepoxide | Sigma-Aldrich Co. | 94956 | |
| Sesame oil | Sigma-Aldrich Co. | S3547 |
References
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