Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Bioengineering
Click here for the English version

Bioengineering

اليد التنظير السريرية نظام تصوير للوقت الحقيقي تصوير الحيوانات الصغيرة غير الغازية

Published: October 16, 2017 doi: 10.3791/56649
Automatic Translation
1, 1, 1
1School of Chemical and Biomedical Engineering, Nanyang Technological University

Summary

سوف يتجلى التنظير يده سريرية نظام تصوير للوقت الحقيقي تصوير الحيوانات الصغيرة غير الغازية.

Abstract

ترجمة تصوير التنظير إلى العيادة يشكل تحديا رئيسيا. نظم التصوير المحمولة التنظير السريرية في الوقت الحقيقي نادرة جداً. هنا، نحن التقرير الجمع بين التنظير والموجات فوق الصوتية السريرية نظام التصوير من خلال دمج مسبار الموجات فوق الصوتية مع التسليم الخفيفة لتصوير الحيوانات الصغيرة. ونحن تثبت هذا بعرض تصوير العقدة الليمفاوية الحارس في الحيوانات الصغيرة جنبا إلى جنب مع التوجيه كسبها إبرة في الوقت الحقيقي. منصة سريرية بالموجات فوق الصوتية مع إمكانية الوصول إلى البيانات الخام قناة يسمح تكامل التنظير التصوير مما يؤدي إلى التنظير سريرية في الوقت الحقيقي يده، نظام التصوير. تم استخدام الميثيلين الأزرق لتصوير العقدة الليمفاوية الحارس في الطول الموجي نانومتر 675. بالإضافة إلى ذلك، تبين إبرة التوجيه مع المزدوج مشروط بالموجات فوق الصوتية والتصوير بالتنظير باستخدام نظام التصوير. تصوير عمق يصل إلى 1.5 سم تجلى بليزر 10 هرتز في التنظير التصوير معدل الإطار 5 إطارات في الثانية الواحدة.

Introduction

لكشف والتدريج للسرطان، تتوفر تقنيات التصوير المختلفة. بعض طرائق التصوير المستخدمة على نطاق واسع هي التصوير بالرنين المغناطيسي (التصوير بالرنين المغناطيسي)، والأشعة السينية المقطعي (CT)، الأشعة السينية، الموجات فوق الصوتية (الولايات المتحدة)، والتصوير المقطعي بالبوزيترون (PET)، والأسفار التصوير، إلخ1،2، 3 , 4. ولكن، بعض تقنيات التصوير الموجودة أما الغازية، يكون الإشعاع الضار، أو بطيئة ومكلفة وضخمة، أو ودي للمرضى. ومن ثم، هناك حاجة مستمرة لتطوير جديدة وتقنيات التصوير وسريعة وفعالة من حيث التكلفة ل التشخيص والعلاج5.

التنظير التصوير (PAI) وهي تقنية تصوير ناشئة، الذي يجمع بين تباين بصرية غنية بالموجات فوق الصوتية عالية في أعمق تصوير عمق5،6،،من78، 9. في PAI، يتم استخدام نبضة ليزر قصيرة تشعيع الأنسجة. يحصل على استيعاب الضوء بالانسجة مما يؤدي إلى ارتفاع درجة حرارة صغيرة. نظراً للتوسع في ثيرمولاستيك، تتولد موجات الضغط (في شكل الموجات الصوتية) داخل الأنسجة. يتم الحصول على الموجات الصوتية التي تم إنشاؤها (يعرف أيضا باسم موجات التنظير (السلطة الفلسطينية)) مع محول بالموجات فوق الصوتية الاتساع (أوست) خارج حدود الأنسجة. يمكن استخدام هذه الإشارات المكتسبة من السلطة الفلسطينية لإعادة بناء السلطة الفلسطينية الصور، والكشف عن المعلومات الهيكلية والوظيفية داخل الأنسجة. الباي لديها مجموعة واسعة من التطبيقات، بما في ذلك: تصوير الأوعية الدموية، وتصوير العقدة الليمفاوية الحارس، تصوير المفرج الدماغ، تصوير الأورام، التصوير الجزيئي، إلخ10،،من1112، 13،،من1415 الباي له العديد من التطبيقات بسبب مزاياه، إلا وهي: عمق تغلغل أعمق والقرار المكانية جيدة، والأنسجة اللينة عالية التباين. يمكن أن يكون التباين في PAI الذاتية من الدم، الميلانين، إلخ. عندما التباين الذاتية ليست قوية بما يكفي، عوامل التباين خارجية مثل الأصباغ العضوية، والجسيمات النانوية، والكم النقاط، إلخ16،17،،من1819، 20 , 21 يمكن استخدامها لتحسين التباين.

على الرغم من أن أي فوائد عديدة بالنسبة إلى غيرها من تقنيات التصوير، الترجمة السريرية ما زال يشكل تحديا كبيرا جداً. القيود الرئيسية هي طبيعة ضخمة من أشعة الليزر المستخدمة، ومعظم أوستس المستخدمة للحصول على البيانات غير متوافقة مع نظم الولايات المتحدة السريرية، وعدم توافر المتاحة تجارياً السريرية الولايات المتحدة نظم التصوير الذي منح حق الوصول إلى القناة الخام البيانات. إلا في الآونة الأخيرة، أصبحت آلات الولايات المتحدة السريرية التجارية مع الوصول إلى البيانات الأولية المتاحة22. في هذا العمل، ونحن نهدف إلى إثبات جدوى الباي مع هيكل المحمولة باستخدام منصة سريرية في الولايات المتحدة. ونحن نهدف إلى إثبات هذا بعرض تصوير غير الغازية للحارس الليمفاوية (سلنس) في نموذج حيوانات صغيرة.

أورام الثدي الغازية واحدة من الأسباب الرئيسية للموت من السرطان بين النساء. تشخيص والتدريج سرطان الثدي في وقت مبكر أمر حيوي لتحديد استراتيجيات المعالجة، التي تلعب دوراً مهما في تشخيص المريض. للثدي السرطان التدريج الحارس العقدة الليمفاوية خزعات (سلنب) عادة تستخدم23،24. SLN العقدة الليمفاوية الأولية حيث هو إمكانية إيجاد خلايا السرطان أعلى بسبب ورم خبيث. سلنبس تشمل الحقن صبغة أو تتبع مشعة، تليها قطع مفتوحة في المنطقة مع شق صغير، وثم تحديد موقع SLN بصريا في حالة الصبغات أو بالمساعدة من عداد غايغر، في حالة الراسم مشعة. بعد تحديد، تتم إزالة SLN بضع دراسات نسيجية24،25. سلنب إيجابية تشير إلى أن الورم قد انتشر إلى الغدد الليمفاوية القريبة، وربما إلى الأجهزة الأخرى. سلنب سلبي يشير إلى أن احتمال ورم خبيث لا تذكر26. سلنب العديد المضاعفات المرتبطة به مثل خدر الذراع، اللمفية إلخ27 للقضاء على التعقيدات المرتبطة سلنب، هناك حاجة إلى تقنية تصوير غير الغازية.

لتعيين SLN في البشر والحيوانات الصغيرة، السلطة الفلسطينية التصوير تم استكشافها على نطاق واسع مع المساعدة من التباين مختلف وكلاء15،،من2829،30،31 , 32-ومع ذلك، لا يمكن استخدام النظم المستخدمة حاليا في سيناريو السريري كما سبقت الإشارة. هو مصدر قلق آخر معالجة العملية الجراحية المتورطين في سلنب28. تكييف الإجراءات كسبها لغرامة إبرة تطلع خزعة ضروري (فناب) لتقليل وقت الاسترداد والآثار الجانبية للمرضى. تم استخدام نظام الولايات المتحدة سريرية في هذا العمل، لكان يستخدم التصوير الجمع بين الولايات المتحدة والسلطة الفلسطينية. لسهولة الاستخدام في الإعداد السريرية، مخصص بيده صمم حامل للإسكان الألياف الضوئية واوست. الميثيلين الأزرق (ميغابايت) كانت تستخدم لتحديد ورسم خرائط سلنس. بالإضافة إلى ذلك، للقضاء على المضاعفات المرتبطة بعملية جراحية سلنب، وغير الغازية إبرة في الوقت الحقيقي تتبع يتجلى أيضا.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

أجريت جميع التجارب على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية المعتمدة ولوائح لجنة العناية بالحيوان واستخدام المؤسسية التابعة لجامعة نانيانغ التكنولوجية، وسنغافورة (الحيوان رقم البروتوكول المنتدى الإقليمي للاسيان--SBS/ NIE-A0263)-

1-السريرية في الوقت الحقيقي يده السلطة الفلسطينية ونظام التصوير لنا

  1. التخطيطي من يده السريرية بأي نظام 33 هو مبين في الشكل 1 ألف. وهو يتألف من الليزر الضوئية حدودي المذبذب (OPO) ضخها بتردد النانوسيكند تضاعف نابض nd: yag مضخة ليزر، حزمة ألياف الضوئية سيوصف ( الشكل 1b)، طباعة 3D مصنوعة خصيصا مسبار يده حامل ( الشكل 1 ج) 33 والسريرية نظام الولايات المتحدة والسلطة الفلسطينية مشروط المزدوج ومجموعة خطي متوافقة سريرياً أوست (انظر الجدول للمواد)-
  2. تشغيل البرامج توفرها الشركة المصنعة في النظام الأمريكي السريرية بالنقر على أيقونة البرنامج من على سطح المكتب-
  3. من شاشة تعمل باللمس، حدد ' البحوث ' الزر لتشغيل نظام الولايات المتحدة في وضع البحث. انقر على الجمع بين الولايات المتحدة والسلطة الفلسطينية تصوير البرنامج النصي من قائمة البرامج النصية ثم انقر فوق الزر تشغيل للتصوير في وضع مجتمعة.
  4. مزامنة نظام السريرية في الولايات المتحدة مع الليزر استخدام المشغل الليزر بها أو الضوئي.
    ملاحظة: الاتصال المزامنة الثابتة بها من الليزر لمزامنة نظام الولايات المتحدة في. تأكد من توفر الترانزستور الترانزستور منطق (TTL) إشارة إيجابية كإشارة المزامنة. يمكن أيضا استخدام إشارة الضوئي لغرض المزامنة. مزامنة نظام الولايات المتحدة في متصل بالكاشف الضوئي باستخدام وحدة نمطية تحيز الضوئي. كلما الليزر على، الضوئي يعطي إشارة لتشغيل المزامنة الليزر ونظام الولايات المتحدة. تنفيذ هذه الخطوة في كل مرة.
  5. لتشغيل الليزر، التبديل على التيار المتردد، وتشغيل المفتاح لليسار على وحدة التحكم بالليزر. ابدأ الليزر بعد التأكد من التكرار هو معدل 10 هرتز (F10 سيتم عرض على الشاشة) والتأخير Q-تبديل منخفضة تصل إلى 170 المايكروثانيه ضمان الليزر منخفض الطاقة. لتعيين التأخير، اضغط مفتاح الاختيار حتى ترى التأخير القيمة وزيادته إلى 170-
    ملاحظة: الليزر يأخذ ما يقرب من 20 دقيقة إلى المكياج. الحارة
  6. فتح واجهة البرنامج على جهاز كمبيوتر وفي الانتقال إلى إدخال القائمة الطول الموجي ك 675 نانومتر والصحافة ' ابدأ ' الزر لتعيين الطول الموجي في 675 نانومتر.
    ملاحظة: يمكن ضبطها الليزر من 670 إلى 2500 فرد نانومتر، بيد أنها غير مستقرة في 670 نانومتر.
  7. الضغط على زر الالتقاط وتشغيل الليزر باستخدام رمز التبديل إلى محاذاة شعاع الليزر للألياف الإدخال.
  8. باستخدام عدسة محدبة بلانو قطرها 1 بوصة (2.5 سم) البعد البؤري 15 ملم، تركيز شعاع الليزر في حزمة الألياف مثل أن يسقط جميع الضوء في نهاية إدخال الألياف.
    ملاحظة: الألياف الضوئية قد 1,600 الألياف الصغيرة المجمعة معا. هو انقسم في الوسط مع طرفي الإنتاج مستطيلة لها كل 800 الألياف الضوئية. الألياف 800 معبأة في مساحة 0.1 x 4 سم، تتطابق مع أبعاد أوست. قطر كل الألياف البصرية الأساسية هو مكم 185، مع فتحه عددية من 0.22.
  9. إيقاف تشغيل الليزر بعد المحاذاة.
    10. اختر
  10. من 4 التحقيق المكلفين بزوايا مختلفة من الإضاءة (0°، 5°، 10° و 15°) صاحب التحقيق المناسبة استناداً إلى التطبيق (عمق التصوير، وحجم الكائن، والشكل للكائن، وموقع الكائن).
    ملاحظة: تم تصميم المكلفين بالتحقيق وطباعة 3D في المعمل. ويضم ثلاث فتحات، اثنان للألياف الضوئية سيوصف وواحدة مركزية أوست. البعد لصاحب التحقيق استند إلى أبعاد الألياف الضوئية واوست. محاكاة مونتي كارلو أجريت دراسة على الإضاءة الخفيفة اللازمة للتصوير سلنس في عمق أعلى. دائرة الاستخبارات الوطنية كان أعلى في الأعماق السفلي لإضاءة 15 ° 33-
  11. تناسب الألياف الضوئية سيوصف صاحب التحقيق مطبوع ثلاثي الأبعاد بزاوية إضاءة خفيفة من 15˚-
    12. إدراج
  12. في أوست في الفتحة مركز حامل.
    ملاحظة: يظهر الشكل 1 د صورة صاحب التحقيق مع الألياف الضوئية واوست. خطي صفيف أوست قد 128 عناصر الصفيف. تواتر مركز أوست 8.5 ميجا هرتز وكسور عرض النطاق الترددي هو 95%. طول أوست 3.85 سم. ومع ذلك، النظام بيانات موازية فقط 64-اقتناء الأجهزة ويتطلب اثنين بالليزر البقول لجمع البيانات من جميع العناصر 128. ولذلك، معدل الإطار الفعال للنظام هو نصف معدل تكرار النبضة من الليزر، وهو 5 الإطارات في الثانية 34-
    13. ضبط المسافة بين أوست وإنهاء الألياف 1 سم بتخفيف الخناق على الجانب
  13. وتشديد عليه بعد ضبط المسافة بالضبط.
    ملاحظة: المعلمات هي الأمثل ل SLN التصوير بالمحاكاة والتجارب الوهمية 33. ويمكن تأمين في أوست مع مسامير اثنين على صاحب التحقيق. وهذا يعطي مرونة تختلف المسافة بين الألياف الضوئية وفي أوست-
  14. التبديل على بقعة بالليزر والتأكد من الحصول على شعاع ليزر مستطيل أمام أوست-
  15. التبديل قبالة الليزر. زيادة طاقة الليزر (عن طريق زيادة التأخير) إلى القيمة المطلوبة لغرض التصوير-
    ملاحظة: تشير إلى الدليل للتأخير القصوى التي يمكن تعيينها لليزر nd: yag. تم تعيين قيمة التأخير المطلوب لهذا النظام لتصوير SLN إلى 210-

2. وصف القرار

  1. تأخذ لوح أنسجة الدجاج متوفرة تجارياً، وقطع عليه في لوح 2 سم 6 × 6. باستخدام سكين قطع إلى شرائح سميكة 0.5 سم.
  2. وضع كائن نقطة، مثل إبرة ز 23 قطرها 0.6 مم، علاوة على أنسجة الثدي الدجاج.
  3. التبديل على الليزر-
    تنبيه: يجب أن تلبس نظارات واقية عندما تعمل بالليزر لما تبقى البروتوكول. أجرى استثناء أثناء عملية المحاذاة، نظراً لضعف طاقة الليزر-
  4. الثدي الصور "تتخذ السلطة الفلسطينية" من الإبرة في أعماق مختلفة من التراص الدجاج متعددة شرائح الأنسجة من سمك 0.5 سم واحداً تلو الآخر يصل إلى 3 سم. جل تطبيق الولايات المتحدة بين طبقات الأنسجة الدجاج تحسين لنا اقتران.
  5. حفظ وتخزين الصور شكلت شعاع كملف.mat.
  6. إيقاف تشغيل الليزر.
  7. معالجة البيانات مع التعليمات البرمجية الداخلية باستخدام الصورة تجهيز البرمجيات 17-
    ملاحظة: لتحديد القرار المحوري والجانبية، العثور على وظيفة نقطة الانتشار من إشارات السلطة الفلسطينية تم تسويتها على طول التوجيهات الخاصة بكل منها ويصلح لهم ل دالة توزيع غاوسي 17. الحصول على عرض كامل نصف كحد أقصى. للحصول على وظيفة نقطة انتشار، فإنه مطلوب لصورة نقطة. ومع ذلك، هناك طريقة أخرى للحصول على وظيفة نقطة نشر عند التصوير نقطة هدفا صعب (كما في حالتنا هذه، لهدف نقطة صغيرة جداً الإشارة صغيرة جداً وذلك نستخدم هدفا أكبر قليلاً). إذا كان الهدف كبير، بدلاً من مباشرة الحصول على النقطة نشر الدالة، يمكنك الحصول على وظيفة حافة انتشار. ثم بأخذ أول مشتق من الدالة حافة تنتشر، واحدة يمكن الحصول على دالة نقطة نشر. ولذلك، ليس من الضروري استخدام نقطة هدفا لحساب القرار 22-

3. إعداد الحيوانات للتصوير SLN

< الفئة p = "jove_conخيمة "> ملاحظة: نظام التصوير المحمولة السريرية المذكورة أعلاه قد تجلى لتصوير الحيوانات الصغيرة SLN. للتجارب، وتم شراء 6-8 أسبوع صحي، والإناث الفئران (NTac:Sprague داولي، 220 ± 30 جرام). وتستخدم الفئران الإناث نظراً لحدوث سرطان الثدي في الفئران الذكور أقل تواترا. ومع ذلك، يمكن أيضا استخدام الفئران الذكور للدراسات. بالإضافة إلى ذلك، تستخدم إناث الفئران في الأدب، على نطاق واسع لتصوير SLN.

  1. أنيسثيتيزيشن فأر
    1. قبل التصوير، تخدير الفئران مع الحل التخدير، الذي يحتوي على خليط من الكيتامين (100 مغ/مل)، إكسيلازيني (20 ملغ/مل)، وحقن المحلول الملحي في نسبة 2:1:1. إضافة 0.2 مل كوكتيل كل 100 غرام وزن الحيوان للمحاقن معقمة جراحية 1 مل بإبرة (27 ز، نصف بوصة)-
    2. القفا عنق الفئران باليد وتطهير رباعي اليمين السفلي من البطن مع مسحه الكحول. الحل التخدير بحقن الجسم الحيواني.
    3. التأكد من أن الحيوان هو فظاعتها بالتحقق من منعكس في قرصه تو.
  2. SLN للتصوير، وإزالة الشعر من المنطقة للاهتمام بلطف مع كريم لإزالة الشعر المتوفرة تجارياً. استخدام بقدر ما يلزم لتغطية المنطقة تماما. إزالة الكريم مع مسحه القطن رطب بعد 3-5 دقائق للتطبيق. لمنع العيون من جفاف وتلف عرضي الليزر، تطبيق مرهم المسيل للدموع الاصطناعية.
    3. الأزرق مكان
  3. أونديرباد على الطاولة وموقف الحيوان جانبية على ذلك. إدارة التخدير الاستنشاق عن طريق الآنف مخروط (0.75 في المائة إيسوفلوراني جنبا إلى جنب مع الأكسجين (1.2 لتر/دقيقة)) للمحافظة على هذا الحيوان تحت التخدير أثناء التجارب. مقطع نبضي إلى مخلب هند من الفئران لرصد معدل ضربات القلب وتشبع الأكسجين هامشية طوال التجارب.
    ملاحظة: تأكد من الحيوان الحارة استخدام لوحة تدفئة الموافقة على استخدام الحيوان.

4. في فيفو التصوير SLN من الفئران

  1. قبل التصوير، تطبيق 0.5 إلى 1 مل جل الولايات المتحدة على الجلد باستخدام المحاقن وانتشر أيضا باستخدام المحاليل. ضع شريحة أنسجة سميكة الدجاج 0.5 سم من حجم 6 سم × 6 سم في مجال التصوير وتطبيق أكثر الولايات المتحدة جل على أنسجة الدجاج تحسين اقتران.
    ملاحظة: توجد لنس تحت الجلد (في حدود 2-3 مم) في الفئران. في البشر، لنس على عمق من 1 سم. ومن ثم، يوضع الدجاج الأنسجة في مجال التصوير من الفئران لتقليد السيناريو التصوير البشرية. وبدلاً من ذلك، يمكن استخدام أنسجة محاكاة أشباح بدلاً من أنسجة الدجاج.
  2. التبديل على الليزر. مكان صاحب التحقيق يده على رأس أنسجة الدجاج ومسح تكنولوجيا المعلومات (نقل صاحب اليمين إلى اليسار) في وضع الولايات المتحدة والسلطة الفلسطينية مجتمعة-
    ملاحظة: فيما يتعلق بشعاع الليزر حوالي 3 سم 2 ويحسب فلوينس لتكون حوالي 8 مللي جول/سم 2، وأقل من الحد الأقصى لسلامة معهد المعايير الوطنية الأمريكية (ANSI) (20 مللي جول/سم 2) 35 . يتم تعيين عمق التصوير إلى 2 سم في نظام السريرية في الولايات المتحدة. يجب أن تلبس نظارات واقية في هو الليزر جميع الأوقات عندما تحولت.
  3. تعيين عمق التصوير إلى 2 سم للسلطة الفلسطينية التصوير-
  4. الحصول على صورة عنصر تحكم للمنطقة موضع الاهتمام، أعلاه الساق الأمامية في منطقة الصدر، بتحريك المسبار يده من جنبا إلى جنب قبل حقن عامل التباين.
    ملاحظة: كل ما يتم حفظ البيانات في شكل شعاع البيانات اكتب لمزيد من المعالجة.
  5. حقن 0.2 مل من التباين عامل، (أي، ميغابايت (10 مغ/مل)) في فوربو للحيوان والتدليك جيدا 2 دقيقة لتسهيل حركة عامل التباين إلى الغدد الليمفاوية عن طريق الأوعية الليمفاوية.
    6. مسبار
  6. الفحص بعد 5 دقائق مع يده على طول الأنسجة الدجاج لتحديد موقع SLN مع مساعدة إشارة السلطة الفلسطينية-
    ملاحظة: يتم حفظ كافة الإطارات في نوع البيانات شكلت شعاع.
  7. انقر فوق ' تجميد ' زر من عناصر التحكم الموجودة في النظام الأمريكي وانقر ' تصدير الإطارات المحددة ' زر من شاشة تعمل باللمس لتصدير البيانات المسجلة.
    ملاحظة: يمكن تخزين البيانات في تنسيقات مختلفة هما شعاع شكلت، تفحص تحويلها، قناة، والذكاء
  8. إضافة 2 طبقات أكثر من 0.5 سم شرائح الأنسجة الدجاج سميكة على رأس الحيوان واحداً تلو الآخر وتحديد موقع SLN لإثبات جدوى عمق التصوير يصل إلى 1.5 سم.
  9. وبعد التصوير، وإزالة جميع شرائح الأنسجة الدجاج
  10. إيقاف تشغيل الليزر.

5. مطيافية SLN السلطة الفلسطينية

  1. كاهل شريحة أنسجة سميكة الدجاج 0.5 سم الفئران.
  2. تعيين الطول الموجي الليزر ك 670 نانومتر باستخدام البرمجيات-
  3. التبديل على الليزر. المسح الضوئي مع المجس على طول أنسجة الثدي الدجاج في المنطقة لتحديد موقع SLN مع مساعدة إشارة السلطة الفلسطينية-
  4. إجراء التحقيق مستقرة بعد التعرف SLN.
  5. الليزر ضبط البرامج المقدمة، أدخل الطول الموجي ك 800 نانومتر في برنامج الليزر، تعيين السرعة ك 10 نيوتن متر/ثانية، ثم انقر فوق ' ابدأ ' زر.
    ملاحظة: هذا سوف تختلف في الطول الموجي من 670 نانومتر إلى 800 نانومتر بسرعة 10 نيوتن متر/ثانية. الطول الموجي تكون متنوعة تعتمد على طيف امتصاص عامل تباين المستخدمة. ميغا بايت قد حاد ذروة حوالي 670 نانومتر.
  6. مراقبة التغيير في إشارة السلطة الفلسطينية مع تغير الطول الموجي.
  7. إيقاف تشغيل الليزر.
  8. إزالة الشريحة أنسجة الدجاج.

6. في الوقت الحقيقي "إبرة تعقب استخدام بأي"

  1. مكان 0.5 سم سميكة الدجاج الثدي الأنسجة شريحة على الحيوان. تعيين الطول الموجي إلى 675 نانومتر.
  2. التبديل على الليزر. نقل التحقيق معه لتحديد موقع وهوية SLN على الشاشة مع مساعدة إشارة السلطة الفلسطينية-
  3. إبرة في الوقت الحقيقي تتبع
    1. حقن إبرة ز 23، من أبعاد 0.6 × 32 مم 2، في موازاة أوست من خلال أنسجة الدجاج في الحيوان تصل إلى SLN، بينما توجيه ذلك في الوقت الحقيقي على مراقبة النظام الأمريكي السريرية.
  4. بعد تجارب، إيقاف الليزر. إزالة أنسجة الدجاج ونبض التاكسج من الحيوان ونقل الحيوان في هيئة العمل. تنظيف الجل الموجات فوق الصوتية على الفئران مع مناديل القطن-
  5. وضع الحيوان على الأسرة، ورصد ذلك حتى أنه يستعيد وعيه.
  6. إرجاع الحيوان إلى قفصة بعد سلوكه العادي.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Figure 1
رقم 1: وصف النظام. (أ) التمثيل التخطيطي للنظام بأي مع النظام الأمريكي السريرية مشروط المزدوج. OPO-مذبذب حدودي البصرية، من-حزمة الألياف الضوئية، FH-حامل الألياف، USM-الإله الأميركية السريرية. صاحب الألياف يدمج في أوست وهما حزمة الألياف الضوئية في الإخراج. آلة التخدير توريد isoflurane والأكسجين تستخدم لإبقاء الحيوان تحت التخدير أثناء التجارب. (ب) صورة فوتوغرافية للألياف الضوئية سيوصف. أنا/ف إلى نهاية الإدخال من الألياف و O/P تشير إلى إخراج اثنين ينتهي الألياف. (ج) صورة فوتوغرافية لصاحب الألياف مع ثلاث فتحات، اثنتان للألياف الضوئية وواحد أوست. (د) صورة فوتوغرافية أوست وينتهي من ثابتة في حامل الألياف. (ه) القرار المحوري تتميز في أعماق مختلفة محسوبة من عرض كامل نصف كحد أقصى. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

وصف القرار المحوري والجانبية لنظام التصوير، استخدمت إبرة قطرها 0.6 مم. إشارة السلطة الفلسطينية على طول اتجاه محوري والجانبية المرسومة وتركيبها لدالة توزيع الضبابي. وحسبت العرض الكامل في نصف الحد الأقصى في أعماق مختلفة 1 سم 1.5 سم، 2 سم، 2.5 سم و 3 سم. ويبين الشكل 1eالمؤامرة للقرار المحوري. وحسبت القرار المحوري لتكون 207 ± 45 ميكرومتر. يقتصر القرار الجانبية من الملعب العنصر أوست. من الناحية النظرية، أن القرار الأفقي هو 300 ميكرومتر، وهو حجم العنصر أوست. وكان القرار الجانبية محسوبة من صورة السلطة الفلسطينية المكتسبة من الإبرة ميكرومتر 351.

ميغا بايت هو غذاء والدواء (FDA) وافقت صبغ لتصوير SLN ويستخدم على نطاق واسع سريرياً سلنب. ولذلك، قد استخدمت ميغابايت للتصوير موسع تابع لشركة النيكل مع الباي على نطاق واسع. الطول موجي أمثل من 675 نانومتر مصممة على أساس الطيف البصري والقيود المفروضة على ألواح الليزر36. يبين الشكل 2 ألف صورة فوتوغرافية لمنطقة حلق من الفئران لتصوير SLN. يظهر خط متقطع أحمر الطائرة التصوير التقريبي للجمع بين الولايات المتحدة والسلطة الفلسطينية التصوير. جميع الجمع بين السلطة الفلسطينية والولايات المتحدة الصور أظهرت لقطات مأخوذة من مراقب النظام الأمريكي السريرية. يظهر الشكل 2b مجتمعة صورة الولايات المتحدة والسلطة الفلسطينية قبل الحقن ميغا بايت. يمكن الإشارة إلى أن هناك أي إشارة السلطة الفلسطينية في الصورة. من الولايات المتحدة، وصور الليمفاوية يمكن التعرف، لكن فقط عن طريق مدرب عين كما التباين رديئة للغاية. بالإضافة إلى ذلك، مع الصور أمريكي عادي ولا متباينة SLN من الليمفاوية الأخرى. يبين الشكل 2 (ج) مجتمعة صورة الولايات المتحدة والسلطة الفلسطينية بعد حقن ميغابايت. من هذه الصورة، يمكن التعرف SLN بسهولة جداً بسبب إشارة السلطة الفلسطينية قوية من ميغابايت في SLN.

Figure 2
رقم 2: تحديد SLN. (أ) منطقة التصوير حلق من الفئران ل SLN التصوير، خط منقط أحمر تظهر الصورة التقريبية الطائرة الأمريكية ب-المسح الضوئي، فضلا عن الباي؛ (ب) دمج صورة الولايات المتحدة والسلطة الفلسطينية قبل الحقن ميغابايت، (ج) مجتمعة صورة الولايات المتحدة والسلطة الفلسطينية بعد حقن ميغابايت. يمثل الشريط مقياس على المحور X و Y بنفس الطول. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

يمكن أن يتم التحليل الطيفي السلطة الفلسطينية في الوقت الحقيقي مع السلطة الفلسطينية السريرية نظام التصوير باختلاف الطول الموجي الليزر أثناء التصوير. ميغا بايت قد ذروة امتصاص حاد حوالي 670 نانومتر. ذلك، باختلاف الطول الموجي من 670 نانومتر إلى 800 نانومتر، إشارة السلطة الفلسطينية من SLN سوف تختفي ببطء. الشكل 3 ألف ج- يبين SLN 670 نانومتر، 700 نانومتر، و 800 نانومتر، على التوالي.

Figure 3
الشكل 3: التحليل الطيفي "السلطة الفلسطينية في الوقت الحقيقي"- (أ) SLN على 670 نانومتر، (ب) SLN على 700 نانومتر، (ج) SLN 800 نانومتر. شريط مقياس على X والمحور Y يمثل بنفس الطول. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

سلنس تقع عادة بين 1-2 سم عمق من سطح الجلد في البشر. في الحيوانات الصغيرة، ويمكن الاطلاع على SLN تحت الجلد فقط. ولذلك، لمحاكاة سيناريو تصوير SLN بشرية، وضع أنسجة الثدي الدجاج على رأس السطح الجلد من الفئران. بالإضافة إلى ذلك، لإثبات زيادة عمق التصوير، وسمك أنسجة الثدي الدجاج في خطوات 0.5 سم يصل إلى 1.5 سم. يصل إلى 1.5 سم عمق التصوير وقد لوحظ مع الإعداد الحالي. يمكن زيادة تحسين عمق التصوير مع ارتفاع طاقة الليزر.

Figure 4
الشكل 4: توجيه إبرة في الوقت الحقيقي- (أ) صورة الولايات المتحدة عرض إبرة التوجيه تتميز بالسهم الأصفر، (ب) لقطة شاشة للجمع بين لنا وصورة السلطة الفلسطينية عرض توجيه إبرة SLN مليئة ميغابايت. شريط مقياس على X والمحور Y يمثل بنفس الطول. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

تحديد عدم الغازية، جنبا إلى جنب مع فناب SLN، سوف يقلل من المضاعفات المرتبطة بجراحه سلنب. الموجات فوق الصوتية هو الأسلوب الأكثر شيوعاً لتوجيه إبرة حتى الآن37. ولكن، على النقيض من الولايات المتحدة ضعيف للغاية لتصور توجيه إبرة في الأنسجة. عدم الغازية، توجيه إبرة في الوقت الحقيقي لخزعة SLN مع الباي يظهر هنا. يظهر الشكل 4a صورة إبرة التوجيه بتصوير أمريكي فقط إلى SLN. فمن الواضح أن التباين قدمتها الولايات المتحدة ليست جيدة ويحتاج مدرب عين لتتبع وتوجيه الإبرة بشكل صحيح. ويبين الشكل 4b مجتمعة صورة الولايات المتحدة والسلطة الفلسطينية من إبرة التوجيه في فيفو. مع السلطة الفلسطينية التصوير، التباين التي تم الحصول عليها من الإبرة عالية جداً، ويمكن رصدها بسهولة وتعقب في فيفو. يظهر S1 فيلم فيديو للسلطة الفلسطينية التصوير لابره فيفو في تتبع. حالما تصل الإبرة SLN، يمكن أخرج جزء صغير من الأنسجة SLN لمزيد من الفحص النسيجي.

S1 الفيلم:Please انقر هنا لتنزيل هذا الملف.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

تكلفة الفحص والتشخيص والعلاج من السرطان حاليا عالية جداً. وهناك مختلف الطرائق التي تستخدم للكشف عن السرطان والتشخيص التصوير. بيد أن الكثير من تقنيات التصوير هذه القيود بما في ذلك حجم آلة ضخمة، وتشخيص الغازية، واﻹغراق متطلب المرضى، مكلفة للغاية، من الإشعاع المؤين، أو استخدام عوامل التباين المشعة. ولذلك، مطلوب كثير تصوير بكفاءة وفعالية من حيث التكلفة وفي الوقت الحقيقي، وتوجيه النظام. تصوير الولايات المتحدة والسلطة الفلسطينية مجتمعة هو تقنية التي يمكن استخدامها لفحص فعال وغير الغازية والتشخيص والتدريج للسرطان. ويمكن إجراء السلطة الفلسطينية السريرية التصوير أكثر قابلية للتحقيق مع إدارة الأغذية والعقاقير المعتمدة على النقيض عوامل مثل ميغابايت. كما السلطة الفلسطينية التصوير إجراء غير الغازية، فإنه يلغي مضاعفات تتصل بجراحه سلنب.

وهناك بعض التحديات التي تحتاج إلى اهتمام من قبل الباي السريرية تصبح ناجحة. أولاً، حجم الليزر المستخدمة لأي يجب أن يكون أكثر أحكاما. وهي كبيرة وثقيلة، وغالباً ما تتطلب جدولاً ضوئية لإيواء لهم. وأيضا حساسة للتغيرات الصغيرة جداً في محاذاة، ومن ثم لم تكن محمولة للاستخدام السريري. ليزر أشباه الموصلات الصغيرة تعطي طاقة منخفضة جداً مقارنة بأجهزة الليزر OPO ضخمة وغالباً ما لا تكون الانضباطي. في الآونة الأخيرة، بذلت المحمولة OPO الليزر المتاحة. وهذا يمكن إلى حد كبير حل مشكلة قابلية. ثانيا، دمج التسليم الخفيفة مع المسبار الأميركي مع ارتفاع الضوء اقتران الكفاءة مهمة صعبة. ليزر أشباه الموصلات الصغيرة قد أدمجت ضمن أوست نفسها. ومع ذلك، القوة أقل بكثير ويتطلب تعديلات العرف في أوستس مما يجعل حتى أكثر تكلفة38. اقتران الخارجية الفعالة الخفيفة والجامعة يلزم القيام به. وثالثاً، توافر تجارية سريرية نظام الولايات المتحدة تصوير لأي بالوصول إلى بيانات القناة الخام ومتوافق مع أوستس للحصول على البيانات. في الآونة الأخيرة، قد أصبحت هذه النظم المتاحة تجارياً.

تحديات أخرى طفيفة تتمثل في زيادة معدل الإطار التصوير الفعلي. وهذا ينحصر حاليا بمعدل تكرار نبض الليزر. معظم OPO الليزر قد نبض معدل تكرار لما يصل إلى 200 هرتز. نبضات صمام ثنائي ليزر يكون معدل تكرار نبضة أعلى بكثير من بضعة كيلو هرتز. استخدام أشعة الليزر هذه ستساعد في تحسين الإطار التصوير إلى حد كبير معدل34. أيضا، توافر عوامل التباين إدارة الأغذية والعقاقير المعتمدة قليلة جداً (مثل ميغابايت) قيد آخر لأي السريرية. تجري الكثير من الأبحاث في إيجاد واختبار عوامل التباين مختلفة لأي. جوانب ثانوية أخرى أيضا بحاجة إلى أن تؤخذ في الاعتبار أثناء أداء السلطة الفلسطينية المحمولة التصوير. كما أننا نستخدم تحقيق يده على الحيوان، سيكون هناك بعض الخطأ بسبب حركة اليدين أثناء التعامل مع الحامل. ينبغي اتخاذ أقصى قدر من العناية للتقليل من هذا الخطأ. أيضا، حين تبين إبرة في الوقت الحقيقي تتبع، موضع الإبرة بالضبط في الطائرة إلى مركز أوست حاسم جداً الحصول على إشارة السلطة الفلسطينية الحد الأقصى من الإبرة، وتتبع ذلك بنجاح. بالتغلب على كل هذه التحديات، بأي يمكن أن يكون أداة صالحة لتصوير السريري لتطبيقات واسعة النطاق (الخلية العضيات للأجهزة) بما في ذلك تصوير الأوعية الدموية والمفرج الدماغ، أورام، SLN، المثانة، ويتناقل ورم الخلايا.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

المؤلفين لها أية مصالح مالية ذات الصلة في المخطوطة ولا غيرها احتمال تضارب المصالح بالكشف عن.

Acknowledgments

يود المؤلفون أن تقر بالدعم المالي من الطبقة 1 منحة البحوث الممولة من وزارة التعليم في سنغافورة (RG48/16: M4011617) والطبقة 2 منحة بحثية ممولة من وزارة التربية والتعليم في سنغافورة (ARC2/15: M4020238). الكتاب يود أن ينوه "الدكتور رون دينزو النمسا" لمساعدته مع التعامل مع الحيوانات.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Q-switched Nd:YAG laser Continuum Surelite Pump laser
Optical parametric oscillator Continuum OPO laser
Clinical ultrasound imaging system Alpinion E-CUBE 12R Dual modal ultrasound and photoacoustic imaging system
Linear array ultrasound transducer Alpinion L3-12 128 element linear array transducer with centre frequency of 8.5 MHz, fractional bandwidth of 95%,
Bifurcated optical fiber CeramOptec Custom made To couple the light from the laser to the handheld fiber holder
Lens Thorlabs LB1869 Focus light from the laser to the optical fiber
Ultrasound gel Progress/parker acquasonic gel PA-GEL-CLEA-5000 Acoustic coupling
Image Processing software Mathworks Matlab Home made program using Matlab
Anesthetic Machine medical plus pte ltd Non-Rebreathing Anaesthesia machine with oxygen concentrator. Supplies oxygen and isoflurane to animal
Pulse Oxymeter portable Medtronic PM10N with veterinary sensor Monitors the pulse oxymetry of the animal
Animal distributor In Vivos Pte Ltd, Singapore Animal distributor that supplies small animals for research purpose.
Breathing mask Custom made Used along with animal holder to supply anesthesia mixture to the animal
chicken breast tissue Pasar Used to add depth to mimic human imaging scenario
23G needle BD Precisionglide 23G,1 and half inch Used for realtime needle guidance
Holder for the fiber optic cable Custom made To hold the input end of the bifurcated cable
Handheld probe Custom made 3D printed With two slots for the two output ends of the optical fiber and one slot for the ultrasound transducer
Methylene blue (10 mg/mL) Sterop Contrast agent for PA imaging
Laser tuning software Surelite OPO PLUS SLOPO Software to tune the wavelength of OPO laser
Photodiode Thorlabs SP05/M To detect the laser pulse to trigger the ultrasound system
Photodiode bias module Thorlabs PBM42 To amplify the photodiode signal to tigger ultrasound signal
Depilatory cream Reckitt Benckiser Veet Used to remove hair from the imaging area
Laser power meter Ophir Starlite, p/n: 7Z01565 Used to measure the laser power

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Yun, S. H., Kwok, S. J. Light in diagnosis, therapy and surgery. Nat. Biomed. Eng. 1, 0008 (2017).
  2. Tseng, J., et al. Clinical accuracy of preoperative breast MRI for breast cancer. J. Surg. Oncol. , (2017).
  3. Baran, P., et al. Optimization of propagation-based x-ray phase-contrast tomography for breast cancer imaging. Phys. Med. Biol. 62 (6), 2315 (2017).
  4. Huzarski, T., et al. Screening with magnetic resonance imaging, mammography and ultrasound in women at average and intermediate risk of breast cancer. Hered. Cancer Clin. Pract. 15 (1), 4 (2017).
  5. Upputuri, P. K., Pramanik, M. Recent advances toward preclinical and clinical translation of photoacoustic tomography: a review. J. Biomed. Opt. 22 (4), 041006 (2017).
  6. Wang, L. V., Yao, J. A practical guide to photoacoustic tomography in the life sciences. Nat. Methods. 13 (8), 627-638 (2016).
  7. Wang, L. V., Gao, L. Photoacoustic microscopy and computed tomography: from bench to bedside. Annu Rev Biomed Eng. 16, 155-185 (2014).
  8. Beard, P. Biomedical photoacoustic imaging. Interface Focus. 1 (4), 602-631 (2011).
  9. Yao, J., Wang, L. V. Photoacoustic tomography: fundamentals, advances and prospects. Contrast Media Mol Imaging. 6 (5), 332-345 (2011).
  10. Hai, P., et al. Label-free high-throughput detection and quantification of circulating melanoma tumor cell clusters by linear-array-based photoacoustic tomography. J. Biomed. Opt. 22 (4), 041004 (2017).
  11. Upputuri, P. K., Kalva, S. K., Moothanchery, M., Pramanik, M. Pulsed laser diode photoacoustic tomography (PLD-PAT) system for fast in vivo imaging of small animal brain. Proc Spie. , 100645O (2017).
  12. Fakhrejahani, E., et al. Clinical report on the first prototype of a photoacoustic tomography system with dual illumination for breast cancer imaging. PLoS One. 10 (10), e0139113 (2015).
  13. Wang, L. V., Hu, S. Photoacoustic Tomography: In Vivo Imaging from Organelles to Organs. Science. 335 (6075), 1458-1462 (2012).
  14. Pan, D., et al. Molecular photoacoustic imaging of angiogenesis with integrin-targeted gold nanobeacons. FASEB J. 25 (3), 875-882 (2011).
  15. Erpelding, T. N., et al. Sentinel Lymph Nodes in the Rat : Noninvasive Photoacoustic and US imaging with a clinical US system. Radiology. 256 (1), 102-110 (2010).
  16. Gawale, Y., et al. Carbazole-Linked Near-Infrared Aza-BODIPY Dyes as Triplet Sensitizers and Photoacoustic Contrast Agents for Deep-Tissue Imaging. Chem. Eur. J. 23 (27), 6570-6578 (2017).
  17. Sivasubramanian, K., et al. Near Infrared light-responsive liposomal contrast agent for photoacoustic imaging and drug release applications. J. Biomed. Opt. 22 (4), 041007 (2017).
  18. Huang, S., Upputuri, P. K., Liu, H., Pramanik, M., Wang, M. A dual-functional benzobisthiadiazole derivative as an effective theranostic agent for near-infrared photoacoustic imaging and photothermal therapy. J. Mater. Chem. B. 4 (9), 1696-1703 (2016).
  19. Huang, S., Kannadorai, R. K., Chen, Y., Liu, Q., Wang, M. A narrow-bandgap benzobisthiadiazole derivative with high near-infrared photothermal conversion efficiency and robust photostability for cancer therapy. Chem. Comm. 51 (20), 4223-4226 (2015).
  20. Wu, D., Huang, L., Jiang, M. S., Jiang, H. Contrast Agents for Photoacoustic and Thermoacoustic Imaging: A Review. Int. J. Mol. Sci. 15 (12), 23616-23639 (2014).
  21. Pramanik, M., Swierczewska, M., Green, D., Sitharaman, B., Wang, L. V. Single-walled carbon nanotubes as a multimodal-thermoacoustic and photoacoustic-contrast agent. J. Biomed. Opt. 14 (3), 034018 (2009).
  22. Kim, J., et al. Programmable Real-time Clinical Photoacoustic and Ultrasound Imaging System. Sci. Rep. 6, 35137 (2016).
  23. McMasters, K. M., et al. Sentinel lymph node biopsy for breast cancer: a suitable alternative to routine axillary dissection in multi-institutional practice when optimal technique is used. J. Clin. Oncol. 18 (13), 2560-2566 (2000).
  24. Krag, D., et al. The sentinel node in breast cancer - a multicenter validation study. N. Engl. J. Med. 339 (14), 941-946 (1998).
  25. Borgstein, P. J., Meijer, S., Pijpers, R. Intradermal blue dye to identify sentinel lymphnode in breast cancer. The Lancet. 349 (9066), 1668-1669 (1997).
  26. Ung, O. A., South, N., Breast, W., Hospital, W. Australasian Experience and Trials in Sentinel Lymph Node Biopsy: The RACS SNAC Trial. Asian J. Surg. 27 (4), 284-290 (2004).
  27. Purushotham, A. D., et al. Morbidity after sentinel lymph node biopsy in primary breast cancer: results from a randomized controlled trial. J. Clin. Oncol. 23 (19), 4312-4321 (2005).
  28. Kim, C., et al. Handheld array-based photoacoustic probe for guiding needle biopsy of sentinel lymph nodes. J. Biomed. Opt. 15 (4), 046010 (2010).
  29. Garcia-Uribe, A., et al. Dual-Modality Photoacoustic and Ultrasound Imaging System for Noninvasive Sentinel Lymph Node Detection in Patients with Breast Cancer. Sci. Rep. 5, 15748 (2015).
  30. Kim, C., Song, K. H., Gao, F., Wang, L. V. Sentinel Lymph Nodes and Lymphatic Vessels: Noninvasive Dual-Modality in Vivo Mapping by Using Indocyanine Green in Rats-Volumetric Spectroscopic Photoacoustic Imaging and Planar Fluorescence Imaging. Radiology. 255 (2), 442-450 (2010).
  31. Pan, D., et al. Near infrared photoacoustic detection of sentinel lymph nodes with gold nanobeacons. Biomaterials. 31 (14), 4088-4093 (2010).
  32. Song, K. H., Kim, C., Cobley, C. M., Xia, Y., Wang, L. V. Near-infrared gold nanocages as a new class of tracers for photoacoustic sentinel lymph node mapping on a rat model. Nano Lett. 9 (1), 183-188 (2009).
  33. Sivasubramanian, K., Periyasamy, V., Wen, K. K., Pramanik, M. Optimizing light delivery through fiber bundle in photoacoustic imaging with clinical ultrasound system: Monte Carlo simulation and experimental validation. J. Biomed. Opt. 22 (4), 041008 (2017).
  34. Sivasubramanian, K., Pramanik, M. High frame rate photoacoustic imaging at 7000 frames per second using clinical ultrasound system. Biomed. Opt. Express. 7 (2), 312-323 (2016).
  35. Laser Institute of America. American National Standard for Safe Use of Lasers. ANSI Standard Z136.1-2007. , NY. (2007).
  36. Prahl, S. Tabulated molar extinction coefficient for methylene blue in water. , Available from: http://omlc.ogi.edu/spectra/mb/mb-water.html (2016).
  37. Chapman, G. A., Johnson, D., Bodenham, A. R. Visualisation of needle position using ultrasonography. Anaesthesia. 61 (2), 148-158 (2006).
  38. Daoudi, K., et al. Handheld probe integrating laser diode and ultrasound transducer array for ultrasound/photoacoustic dual modality imaging. Opt. Express. 22 (21), 26365-26374 (2014).

Tags

الهندسة الحيوية، 128 مسألة، التصوير بالتنظير، وتصوير الحيوانات الصغيرة، ونظام التصوير السريري، تصوير العقدة الليمفاوية الحارس، إبرة التوجيه، تصوير غير الغازية
اليد التنظير السريرية نظام تصوير للوقت الحقيقي تصوير الحيوانات الصغيرة غير الغازية
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Sivasubramanian, K., Periyasamy, V., … More

Sivasubramanian, K., Periyasamy, V., Pramanik, M. Hand-held Clinical Photoacoustic Imaging System for Real-time Non-invasive Small Animal Imaging. J. Vis. Exp. (128), e56649, doi:10.3791/56649 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter