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Neuroscience

क्षणिक रिसेप्टर संभावित Vanilloid प्रकार 1 के Ultrapotent एगोनिस्ट के साथ एक शुद्ध छोटे फाइबर न्यूरोपैथी के एक माउस मॉडल की स्थापना

Published: February 13, 2018 doi: 10.3791/56651
Automatic Translation
1,2, 3, 1,2
1Department of Anatomy, School of Medicine, College of Medicine, Kaohsiung Medical University, 2Department of Medical Research, Kaohsiung Medical University Hospital, 3Department of Medical Research, Ultrastructural Laboratory, Kaohsiung Medical University Hospital

Summary

यह अध्ययन resiniferatoxin (RTX) के साथ शुद्ध छोटे फाइबर न्यूरोपैथी की एक प्रयोगात्मक मॉडल स्थापित करता है । RTX (५० µ g/kg) की एक अनूठी खुराक रोगी विशेषताओं की नकल करता है और nociceptive आणविक महत्व अंतर्निहित neuropathic दर्द की जांच में मदद कर सकता है कि एक छोटे फाइबर न्यूरोपैथी मॉडल विकसित करने के लिए इष्टतम है ।

Abstract

मधुमेह (डीएम) के साथ रोगियों या कीमोथेरेपी एजेंटों के neurotoxic प्रभाव का अनुभव करने वाले छोटे व्यास संवेदी न्यूरॉन्स के अध: पतन और चोट के कारण सनसनी विकारों विकसित हो सकता है, छोटे फाइबर न्यूरोपैथी के रूप में संदर्भित. छोटे फाइबर न्यूरोपैथी के वर्तमान पशु मॉडल दोनों बड़े और छोटे व्यास संवेदी तंतुओं को प्रभावित और इस तरह एक neuropathology भी ठीक से घायल छोटे व्यास संवेदी तंतुओं के प्रभाव का आकलन करने के लिए जटिल बना । इसलिए, यह पर्याप्त रूप से इन समस्याओं की जांच करने के लिए शुद्ध छोटे फाइबर न्यूरोपैथी की एक प्रयोगात्मक मॉडल विकसित करने के लिए आवश्यक है । इस प्रोटोकॉल का एक प्रयोगात्मक मॉडल का वर्णन करता है छोटे फाइबर न्यूरोपैथी विशेष रूप से प्रभावित छोटे व्यास संवेदी तंत्रिकाओं के साथ resiniferatoxin (RTX), एक ultrapotent एगोनिस्ट के क्षणिक रिसेप्टर संभावित vanilloid प्रकार 1 (TRPV1), की एक एकल खुराक के माध्यम से intraperitoneal इंजेक्शन, RTX न्यूरोपैथी के रूप में भेजा. इस RTX न्यूरोपैथी रोग अभिव्यक्तियाँ और व्यवहार विषमता है कि छोटे फाइबर न्यूरोपैथी के साथ रोगियों की नैदानिक विशेषताओं की नकल, intraepidermal तंत्रिका फाइबर सहित (IENF) अध कि, विशेष रूप से चोट में दिखाया छोटे व्यास न्यूरॉन्स, और थर्मल hypoalgesia और यांत्रिक allodynia की प्रेरण. इस प्रोटोकॉल RTX की तीन खुराकों का परीक्षण किया (२००, ५०, और 10 µ g/किग्रा, क्रमशः) और निष्कर्ष निकाला कि RTX की एक महत्वपूर्ण खुराक (५० µ g/किलोग्राम) ठेठ छोटे फाइबर न्यूरोपैथी अभिव्यक्तियों के विकास के लिए आवश्यक है, और एक संशोधित immunostaining प्रक्रिया तैयार करने के लिए IENF अध कि और न्यूरॉन सोमा चोट की जांच. संशोधित प्रक्रिया तेज, व्यवस्थित और आर्थिक है । neuropathic दर्द के व्यवहार मूल्यांकन के लिए छोटे व्यास संवेदी नसों के समारोह प्रकट महत्वपूर्ण है । प्रयोगात्मक कुतर में यांत्रिक थ्रेसहोल्ड का मूल्यांकन विशेष रूप से चुनौतीपूर्ण है और इस प्रोटोकॉल एक स्वनिर्धारित धातु जाल है कि कुतर में इस प्रकार के आकलन के लिए उपयुक्त है का वर्णन करता है । संक्षेप में, RTX न्यूरोपैथी एक नया और आसानी से स्थापित प्रयोगात्मक मॉडल आणविक महत्व और उपचारात्मक एजेंटों के विकास के लिए neuropathic दर्द अंतर्निहित हस्तक्षेप का मूल्यांकन करने के लिए है ।

Introduction

neuropathic दर्द को शामिल छोटे फाइबर न्यूरोपैथी, जो IENFs के अध कि द्वारा स्पष्ट है, स्थितियों के विभिन्न प्रकार में आम है, जैसे डीएम, और कीमोथेरेपी एजेंटों के neurotoxic प्रभाव का एक परिणाम के रूप में1,2, 3,4,5. IENFs पृष्ठीय रूट गैंग्लिया (डीआरजी) में स्थित छोटे व्यास न्यूरॉन्स के परिधीय टर्मिनलों हैं, और IENF अध6के मामलों में समानांतर में प्रभावित कर रहे हैं. उदाहरण के लिए, बदल ऊपर के आनुवंशिक प्रतिलेखन के न्यूरॉन सोमता प्रतिलेखन फैक्टर-3 (ATF3)6,7को सक्रिय करने के ऊपर से प्रदर्शित किया गया है । इसके अलावा, त्वचा बायोप्सी के साथ IENFs इन्नेर्वतिओन का मूल्यांकन छोटे फाइबर न्यूरोपैथी के निदान के लिए उपयोगी है5,8,9. परंपरागत रूप से, त्वचा की बायोप्सी पर IENFs की प्रोफाइल प्रोटीन जीन उत्पाद ९.५ (९.५)1,10,11के immunohistochemical प्रदर्शन पर निर्भर है । एक साथ लिया, डीआरजी और IENFs के रोग प्रोफाइल छोटे फाइबर न्यूरोपैथी अंतर्निहित कार्यात्मक शर्त को प्रतिबिंबित और छोटे व्यास ंयूरॉंस पर न्यूरोपैथी के इस प्रकार के कार्यात्मक परिणामों के लिए एक संकेतक हो सकता है ।

पहले, कई प्रयोगात्मक मॉडल कीमोथेरेपी-प्रेरित न्यूरोपैथी के मामलों में IENF अध कि12,13 और तंत्रिका चोट संपीड़न या transection14,15 के कारण के मुद्दे को संबोधित किया है , 16. ये प्रयोगात्मक मॉडल भी बड़े व्यास नसों प्रभावित; यह था, इसलिए मनाया छोटे फाइबर न्यूरोपैथी में प्रभावित बड़े व्यास नसों के योगदान को बाहर करने के लिए संभव नहीं; उदाहरण के लिए, हानिकारक वापसी द्वारा thermosensation विकार की परीक्षा कार्यात्मक मोटर तंत्रिका तंतुओं पर निर्भर करता है17,18,19. इस प्रकार, एक शुद्ध छोटे फाइबर न्यूरोपैथी मॉडल की स्थापना और व्यवस्थित दोनों के रोग की स्थिति की जांच न्यूरॉनी सोमता और उनके परिधीय चमड़े के नीचे तंत्रिका तंतुओं में छोटे व्यास न्यूरॉन्स आवश्यक और अनिवार्य हैं.

RTX एक capsaicin एनालॉग और क्षणिक रिसेप्टर संभावित vanilloid रिसेप्टर 1 (TRPV1), जो मध्यस्थता nociceptive प्रसंस्करण के लिए एक शक्तिशाली एगोनिस्ट है20,21,22. हाल ही में, परिधीय RTX उपचार तंत्रिकाजन्य दर्द से राहत मिली23,24,25 और RTX के एक intraganglionic इंजेक्शन डीआरजी ंयूरॉंस की अपरिवर्तनीय नुकसान22। परिधीय RTX प्रशासन के प्रभाव खुराक पर निर्भर है20,26,27, जो क्षणिक संवेदीकरण या IENFs के अध... पेचीदा, व्यवस्थित उच्च खुराक RTX उपचार neuropathic दर्द के लिए नेतृत्व किया28, छोटे फाइबर न्यूरोपैथी का एक लक्षण. इन निष्कर्षों का सुझाव है कि उपचार मोड और RTX की खुराक अलग रोग प्रभाव और न्यूरॉन प्रतिक्रियाओं का उत्पादन; बुद्धि के लिए, परिधीय प्रशासन स्थानीय प्रभाव29 से दर्द संचरण रोका और neuropathic व्यवहार विकसित किया है कि6ंयूरॉन सोमता प्रभावित । सामूहिक रूप से, इन निष्कर्षों से संकेत मिलता है कि RTX एक multipotency प्रभाव है और मुद्दा उठाया कि क्या RTX की एक विशिष्ट खुराक है कि व्यवस्थित परिधीय नसों जैसे परिधीय IENFs और केंद्रीय न्यूरॉन सोमता को प्रभावित कर सकता है । यदि ऐसा है, RTX एक संभावित एजेंट विशेष रूप से छोटे व्यास ंयूरॉंस को प्रभावित करने और क्लिनिक में छोटे फाइबर न्यूरोपैथी की नकल हो सकता है । उदाहरण के लिए, क्लिनिक में डीएम चयापचय विकार और परिधीय नसों के neuropathology, जो छोटे फाइबर न्यूरोपैथी की मुख्य विशेषताएं हैं सहित एक जटिल मुद्दा है. डीएम के तंत्र-संबंधित छोटे फाइबर न्यूरोपैथी चयापचय विकार है कि मुख्य एजेंट परिधीय नसों को प्रभावित नहीं हो सकता है के योगदान को बाहर नहीं कर सका । इसलिए, डीएम-एसोसिएटेड छोटे फाइबर न्यूरोपैथी एक शुद्ध पशु मॉडल है कि व्यवस्थित चयापचय विकार के प्रभाव को बाहर कर सकता की आवश्यकता है । संशोधित immunostaining विश्लेषण द्वारा प्रदर्शित के रूप में IENF अध और छोटे व्यास ंयूरॉन चोट, सहित एक ठेठ छोटे फाइबर न्यूरोपैथी मॉडल, विकसित करने के लिए RTX के काम खुराक का वर्णन इस प्रोटोकॉल ।

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Protocol

सभी वर्णित प्रक्रियाओं प्रयोगशाला जानवरों के लिए नैतिक दिशा निर्देशों के अनुसार कर रहे हैं30, और प्रोटोकॉल काऊशुंग चिकित्सा विश्वविद्यालय, काऊशुंग, ताइवान की पशु समिति द्वारा अनुमोदित किया गया है.

1. RTX न्यूरोपैथी की स्थापना

सावधानी: RTX neurotoxic और खतरनाक है । संपर्क पर, यह आंखों के लिए एक अड़चन के रूप में कार्य करता है, श्लेष्मा झिल्ली, और ऊपरी श्वसन तंत्र । साँस लेना से बचें और RTX तैयारी के दौरान प्रयोगशाला चश्मा और कोट पहनते हैं । त्वचा से संपर्क करें या हैंडलिंग के बाद के मामले में पानी के बहुत से कुल्ला ।

  1. जोड़ें 1 के बीच ८० और निरपेक्ष इथेनॉल के बराबर मात्रा के मिश्रण के एक २०० µ एल के लिए RTX पाउडर की मिलीग्राम (प्रत्येक विलायक के लिए १०० µ एल) ।
  2. Aliquot RTX समाधान (12 µ एल/शीशी) और स्टोर पर-20 ° c, अप करने के लिए 3 महीने के लिए । इस RTX स्टॉक का गठन; समाप्ति पर शेष RTX समाधान छोड़ें ।
  3. ६०० µ एल के एक अंतिम मात्रा के लिए सामांय खारा के साथ RTX शेयर पतला RTX समाधान की अंतिम एकाग्रता ०.०१% होनी चाहिए, जो 10 µ l वाहन समाधान में 1 µ g RTX के बराबर होती है ।
  4. प्रायोगिक जानवरों के रूप में 8 सप्ताह पुराने वयस्क पुरुष ICR चूहों (35-40 ग्राम) का प्रयोग करें और RTX समाधान की एक खुराक (खुराक: २००, ५०, और 10 µ जी/किलो, क्रमशः) intraperitoneally (आईएफसआई) चूहों को एक microinjection सिरिंज के साथ । चूहों में गहरी संज्ञाहरण के लिए 5% isoflurane के साथ इनहेलर द्वारा anesthetized किया गया था । चूहों RTX इंजेक्शन के दौरान उग्रवाद की वापसी कार्रवाई दिखाई देता है, चूहों संज्ञाहरण की लंबी साँस लेना चाहिए.
    उदाहरण: यदि माउस का वजन ४० ग्राम है, तो उसे RTX समाधान के 20 µ l प्राप्त होंगे, ५० µ ग्राम की खुराक का प्रतिनिधित्व/
  5. चूहों के एक समूह वाहन के एक समान मात्रा (10% के बीच ८० और खारा समाधान में 10% निरपेक्ष इथेनॉल), एक नियंत्रण के रूप में दे ।
  6. RTX इंजेक्शन के बाद, चूहों को एक प्लास्टिक पिंजरे में एक 12-h प्रकाश/12-h अंधेरे चक्र पर लौटें और भोजन और पानी विज्ञापन libitumप्रदान करते हैं ।

2. Neuropathic व्यवहार का मूल्यांकन

नोट: इंजेक्शन के बाद वसूली की अनुमति देने के लिए एक आरामदायक वातावरण (चरण १.६) में जानवरों को बनाए रखने. दिन में 7 पोस्ट RTX इंजेक्शन (D7), प्रत्येक जानवर गर्म थाली और वॉन Frey बाल रेशा परीक्षण एक ही दिन में समय पूर्वाग्रह को कम करने और व्यवहार परीक्षणों की दक्षता को बढ़ावा देने के लिए प्रदर्शन करती है । पशु acclimatization के अनुकूलन के लिए एक स्थिर आर्द्रता (४०%) और तापमान (27 डिग्री सेल्सियस) पर बनाए रखा है कि एक शांत कमरे में जानवरों को लाने और व्यवहार परीक्षण के दौरान पर्यावरणीय प्रभाव को कम करने । परीक्षण अवधि के दौरान जानवरों को परेशान मत करो; व्यवहार परीक्षण साप्ताहिक निर्धारित कर रहे हैं ।

  1. हॉट प्लेट टेस्ट के साथ थर्मल विलंब का मापन
    1. एक पारदर्शी Plexiglas पिंजरे (लंबाई × चौड़ाई × ऊंचाई: 22 cm × 22 cm × 25 सेमी के साथ एक धातु गर्म प्लेट (27 सेमी × 29 सेमी) पर धीरे जानवर प्लेस; चित्र 1a) । ५२ डिग्री सेल्सियस के लिए धातु गर्म थाली के तापमान सेट करें ।
    2. एक बार जानवर के hindpaws गर्म थाली को छूने, और पशु की hindpaws की प्रतिक्रियाओं का पालन करें-on, गर्म थाली के टाइमर में निर्मित के साथ गर्म थाली पर जानवर के थर्मल विलंबता की अवधि को मापने शुरू करते हैं । यदि पशु मिलाते हुए पता चलता है, hindpaws के चाट, या गर्म थाली पर जबकि कूद, इसे हटा दें और अवधि है कि जानवर गर्म थाली पर रह रिकॉर्ड । इस समय की अवधि एक व्यक्ति जानवर के थर्मल विलंबता को परिभाषित करता है । ०.१ s निकटतम करने के लिए थर्मल विलंबता रिकॉर्ड ।
    3. प्रत्येक परीक्षण सत्र के लिए, पिछले हॉट प्लेट परीक्षण के बाद प्रतिक्रिया सामान्यता के लिए 30-ंयूनतम अंतराल के साथ तीन परीक्षण निष्पादित करें । यदि पशु गर्म थाली पर कोई प्रतिक्रिया से पता चलता है, सत्र के बाद 25 एस रोकने के लिए संभावित ऊतक नुकसान से बचने के ।
  2. वॉन Frey बाल रेशा परीक्षण के साथ यांत्रिक सीमा का मापन
    1. अनुकूलित धातु जाल पर पशु रखो (मेष आकार: 5 मिमी × 5 मिमी) एक अर्द्ध पारदर्शी सिलेंडर Plexiglas पिंजरे के साथ (व्यास: 13 सेमी; ऊंचाई: 12 सेमी) (चित्र 1bके लिए acclimatization के लिए कम से 2 ज ।
    2. वॉन Frey बाल तंतुओं के विभिंन कैलिबर अप के साथ hindpaw के तल क्षेत्र में लागू करें-और नीचे विधि31। 5-8 एस के रेशा आवेदन की एक अवधि के लिए वॉन Frey बाल रेशा के एक सेट के मध्य बल से प्रारंभिक आवेदन प्रारंभ करें ।
    3. पशु सामान्यीकरण ऑप्टिमाइज़ करने के लिए रेशा अनुप्रयोगों के बीच एक 2 न्यूनतम अंतराल का उपयोग करें. पशु की अंतिम प्रतिक्रिया के आधार पर अनुप्रयुक्त रेशा बल परिवर्तित करें.
      नोट: वॉन Frey बाल तंतु का एक सेट ०.०६४, ०.०८५, ०.१४५, ०.३२, ०.३९, १.१, और १.७ जी बल आवेदन के होते हैं । उदाहरण के लिए, यदि hindpaw वापसी ०.३२ g के प्रारंभिक बल के साथ हुई है, तो ०.१४५ g लागू करें । पंजा वापसी के अभाव में, एक ०.३९ g बल फिर लागू किया जाता है । इसके बाद पूर्ववर्ती प्रतिक्रियाओं के आधार पर बदलती सेनाओं के चार अतिरिक्त रेशा लागू किए जाते हैं और यांत्रिक सीमा को प्रकाशित सूत्र के अनुसार31परिकलित किया जाता है ।
    4. प्रत्येक परीक्षण सत्र के लिए, द्विपक्षीय hindpaws शामिल हैं । प्रत्येक hindpaw के लिए तीन परीक्षण निष्पादित करें । प्रत्येक जानवर का मतलब यांत्रिक दहलीज (एमजी) के रूप में इन छह यांत्रिक थ्रेसहोल्ड के औसत व्यक्त करते हैं ।

Figure 1
चित्र 1. कस्टम निर्मित Plexiglas पिंजरे और resiniferatoxin (RTX) के माउस मॉडल में neuropathic दर्द के मूल्यांकन के लिए धातु जाल-प्रेरित छोटे फाइबर न्यूरोपैथी. (A, B) इन रेखांकन को मापने के लिए इस्तेमाल किया उपकरण दिखाने (एक) एक धातु गर्म थाली (एक पारदर्शी Plexiglas पिंजरे लंबाई × चौड़ाई × ऊंचाई के साथ (27 सेमी × 29 सेमी) द्वारा थर्मल विलंब: 22 cm × 22 cm × 25 cm) और (B) एक स्वनिर्धारित मेटा द्वारा यांत्रिक सीमा का मूल्यांकन एल मेष (मेष आकार: 5 मिमी × 5 मिमी) एक अर्द्ध पारदर्शी सिलेंडर Plexiglas पिंजरे के साथ (व्यास: 13 सेमी; ऊंचाई: 12 सेमी) RTX-प्रेरित छोटे फाइबर न्यूरोपैथी के साथ चूहों में. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

3. त्वचा बायोप्सी तैयारी और IENFs इन्नेर्वतिओन का मूल्यांकन

  1. व्यवहार के परीक्षण के बाद, 5% isoflurane के साथ जानवरों anesthetize और ०.१ एम फॉस्फेट बफर (पंजाब) (पीएच ७.४) के साथ intracardiac छिड़काव द्वारा पशुओं के बलिदान ०.१ एम पंजाब में 4% paraformaldehyde (4p) द्वारा पीछा किया ।
  2. छिड़काव के बाद दो hindpaws के पहले footpads कट और उंहें 4p में एक और 6 घंटे के लिए निर्धारण footpad ऊतक ०.१ एम पंजाब के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर लंबी अवधि के भंडारण के लिए स्थानांतरण ।
  3. Cryoprotect footpads पंजाब में 30% सुक्रोज के साथ रात भर और 30 में तल सतह तरीके से एक ऊर्ध्वाधर में कटौती-µm मोटी स्लाइसें । footpad अनुभागों को क्रमिक रूप से लेबल करें, और तब एंटीफ्रीज़र में-20 ° c में संग्रहीत है ।
    नोट: एंटीफ्रीज़र संरचना इस प्रकार है: आसुत जल, ईथीलीन ग्लिसरॉल, ग्लिसरॉल, और 2x पंजाब एक 3:3:3:1 अनुपात में ।
  4. पर्याप्त नमूना सुनिश्चित करने के लिए, footpad के हर तीसरे खंड का चयन करें ।
    1. लेपित ग्लास स्लाइड और हवा सूखी उंहें पर चुना footpad वर्गों रखो ।
    2. मानक immunostaining प्रक्रियाओं के साथ स्लाइड और प्रक्रिया पर एक प्लास्टिक coverplate कवर ।
      1. footpad अनुभागों को 1% h2O2 के साथ मेथनॉल में 30 मिनट के लिए और ०.५% नोनफेट ड्राई मिल्क और ०.१% ट्राइटन X-१०० के साथ 1 h के लिए ०.५ M Tris बफर (Tris) में बुझाएं ।
      2. पैन axonal मार्कर के खिलाफ antisera के साथ footpad वर्गों की मशीन, ९.५ (खरगोश में उठाया; 1:1000), रातोंरात 4 डिग्री सेल्सियस पर ।
      3. एक biotinylated बकरी विरोधी खरगोश आईजीजी माध्यमिक एंटीबॉडी के साथ कमरे के तापमान (rt) पर 1 एच के लिए footpad वर्गों, और फिर ४५ मिनट के लिए आरटी में avidin-बायोटिन परिसर के साथ मशीन ।
      4. ४५ एस के लिए ०.०५% 3, 3 '-diaminobenzidine (ढाब) समाधान के साथ प्रतिक्रिया उत्पाद कल्पना । फिर आसुत जल और हवा के साथ footpad वर्गों धो उंहें बढ़ते के लिए शुष्क ।
        नोट: प्राथमिक और माध्यमिक antisera ०.५ मीटर Tris में ०.५% नोनफेट ड्राई मिल्क के साथ पतला कर रहे हैं ।

4. डीआरजी अनुभाग तैयारी और घायल छोटे व्यास न्यूरॉन्स का मूल्यांकन

  1. काटना 4गु और 5गु काठ का डीआरजी और दूसरा 2 ज के लिए बाद फिक्स ।
  2. Cryoprotect डीआरजी ऊतकों को पंजाब में 30% सुक्रोज के साथ रातोंरात और एक 8-µm मोटाई में कटौती क्रमिक, माइक्रोस्कोप स्लाइड पर जगह है, और लेबल । एक-८० डिग्री सेल्सियस फ्रीजर में डीआरजी वर्गों की दुकान ।
  3. Immunostain डीआरजी अनुभागों में ८० µm-अंतराल पर्याप्त नमूना सुनिश्चित करने के लिए.
    1. डबल-लेबलिंग immunofluorescent कार्यविधियों के अलावा उन footpad अनुभागों के रूप में डीआरजी immunostaining कार्यविधियां निष्पादित करें । वैकल्पिक रूप से, ATF3 शामिल (खरगोश में उठाया; 1:100), एक चोट मार्कर, और peripherin (माउस में उठाया; 1:800), प्राथमिक antisera में एक छोटे व्यास के न्यूरॉन मार्कर.
    2. 4 डिग्री सेल्सियस पर रातोंरात प्राथमिक antisera के मिश्रण के साथ डीआरजी वर्गों की मशीन ।
  4. या तो टेक्सास लाल या fluorescein isothiocyanate (FITC)-संयुग्मित माध्यमिक antisera (1:200), 1 एच के लिए आर टी पर उचित प्राथमिक antisera करने के लिए इसी के साथ डीआरजी वर्गों, और फिर ठहराव के लिए माउंट ।

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Representative Results

यह प्रोटोकॉल RTX न्यूरोपैथी के एक उपन्यास माउस मॉडल का वर्णन करता है, जो विशेष रूप से IENF अध कि संवेदी विकारों (चित्रा 2) के साथ जुड़े सहित छोटे व्यास न्यूरॉन्स, को प्रभावित करती है । यहां वर्णित प्रोटोकॉल के बाद, पशुओं थर्मल hypoalgesia और यांत्रिक allodynia D7 पोस्ट RTX इंजेक्शन पर प्रदर्शन किया । इस छोटे फाइबर न्यूरोपैथी मॉडल की स्थापना करने के लिए, RTX की तीन खुराक: २००, ५०, और 10 µ g/kg आईएफसआई मार्ग द्वारा प्रशासित किया गया था । RTX खुराक (५० µ g/kg) महत्वपूर्ण समझा गया था और प्रारंभिक अध्ययन से पता चला है कि उच्च खुराक RTX (२०० µ g/kg) उच्च माउस मृत्यु दर (चित्रा 3) का कारण बना ।

Figure 2
चित्र 2. resiniferatoxin (RTX) के माउस मॉडल की योजना-प्रेरित छोटे फाइबर न्यूरोपैथी. योजना स्थापित RTX-प्रेरित छोटे फाइबर न्यूरोपैथी के प्रोटोकॉल से पता चलता है. व्यवस्थित मूल्यांकन, व्यवहार मूल्यांकन, और neuropathological परीक्षा के लिए, यह गर्म थाली और वॉन Frey परीक्षण, और डबल लेबल immunostaining अध्ययन, क्रमशः शामिल थे । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 3
चित्र 3. खुराक-resiniferatoxin के प्रभाव (RTX) पशु मृत्यु दर और व्यवहार में शिथिलता पर. (क) RTX की विविध खुराकों को intraperitoneal (आईएफसआई) इंजेक्शन द्वारा प्रशासित किया गया. खुराक प्रभाव की घातकता खुराक पर निर्भर था; उदाहरण के लिए, RTX (२०० µ g/किग्रा) की एक उच्च खुराक १००% घातकता का कारण बना । (ख, ग) ताप विलंब और यांत्रिक थ्रेसहोल्ड का मूल्यांकन गर्म प्लेट (बी) और वॉन Frey रेशा परीक्षणों (सी) के साथ क्रमशः किया गया. वाहन की तुलना में RTX प्रेरित थर्मल hypoalgesia और यांत्रिक allodynia के ५० µ g/किग्रा-प्रशासित समूह और 10 µ g/ खुला वर्ग, वाहन; खुला वृत्त, ५० µ g/ खुला हीरा, 10 µ जी/ (B) में डैश्ड रेखा, हॉट प्लेट टेस्ट की कटऑफ टाइम पॉइंट । p < ०.००१ । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

रोग, वहां IENF अध... था और ATF3 प्रेरण चिह्नित । डबल लेबलिंग अध्ययनों से पता चला है कि घायल न्यूरॉन्स विशेष रूप से peripherin थे (+) छोटे व्यास न्यूरॉन्स. इसके विपरीत, RTX की कम खुराक (10 µ g/किग्रा) छोटे फाइबर न्यूरोपैथी स्थापित नहीं किया, सहित IENF इन्नेर्वतिओन में कोई परिवर्तन नहीं (चित्रा 4) और कोई न्यूरॉनल चोट (ATF3 प्रेरण) (चित्रा 5). तदनुसार, इस प्रोटोकॉल को ५० µ g/केजी खुराक महत्वपूर्ण छोटे फाइबर न्यूरोपैथी के माउस मॉडल की स्थापना के लिए मानता है.

संक्षेप में, एक ५० µ g/किग्रा खुराक के साथ व्यवस्थित RTX प्रशासन विशेष रूप से प्रभावित छोटे तंत्रिका तंतुओं । उदाहरण के लिए, यह ंयूरॉंस सोमा चोट और परिधीय IENF अध..., जो संवेदी विकारों के साथ जुड़े रहे है के लिए नेतृत्व किया ।

Figure 4
चित्र 4. resiniferatoxin (RTX) न्यूरोपैथी में intraepidermal तंत्रिका तंतुओं (IENFs) के अध... (A-C) चूहों की footpad त्वचा से ऊतक वर्गों विरोधी प्रोटीन जीन उत्पाद ९.५ (के साथ immunostained थे ९.५) वाहन में antisera (एक), ५० µ g/किग्रा-(B), और 10 µ g/kg-प्रशासित (C) समूह । 9.5 (+) IENFs एक ठेठ वैरिकाज़ उपस्थिति के साथ subepidermal तंत्रिका जाल से उठता है । ९.५ (+) IENFs के रूप में चिह्नित कर रहे हैं, ५० µ g/kg, लेकिन 10 µ g/kg समूह में नहीं । (घ) IENFs ए-सीके immunohistochemical परिणामों के अनुसार quantitated थे. खुला वर्ग, वाहन; खुला वृत्त, ५० µ g/ खुला हीरा, 10 µ जी/ वाहन समूह की तुलना में p < ०.००१ । स्केल बार, ५० µm. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें.

Figure 5
चित्र 5. resiniferatoxin (RTX) न्यूरोपैथी में छोटे व्यास ंयूरॉन चोट की विशिष्टता । (A-C) डबल-लेबलिंग immunofluorescent धुंधला विरोधी के साथ प्रदर्शन किया गया प्रतिलेखन कारक-3 सक्रिय (ATF3; a-c, in green) और peripherin (a-c, red में) वाहन में (a), ५० µ g/kg-(B), और 10 µ g/kg-प्रशासित (C) समूह । (D) आरेख ATF3 (+) न्यूरॉन्स के घनत्व परिवर्तन को इंगित करता है । ATF3 (+) न्यूरॉन्स में वृद्धि की गई ५० µ जी/किलो, लेकिन वाहन में नहीं और 10 µ जी/ खुला वर्ग, वाहन; खुला वृत्त, ५० µ g/ खुला हीरा, 10 µ जी/ वाहन समूह की तुलना में p < ०.००१ । स्केल बार, 25 µm. इस आंकड़े का बड़ा वर्शन देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें.

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Discussion

क्लिनिक में छोटे फाइबर न्यूरोपैथी की प्रभावोत्पादक थेरेपी कार्यात्मक वसूली और रोगियों के जीवन की गुणवत्ता को बढ़ावा देने के लिए आवश्यक है । वर्तमान में, वहां एक चिकित्सीय सेंसर छोटे फाइबर आणविक तंत्र की व्यापक समझ की कमी के कारण छोटे व्यास न्यूरॉन की चोट अंतर्निहित के साथ जुड़े विकार को निशाना लगाने गाइड की कमी है । न्यूरोपैथी के पिछले मॉडल आमतौर पर दोनों बड़े-और छोटे व्यास संवेदी नसों प्रभावित; उदाहरण के लिए, कीमोथेरेपी प्रेरित न्यूरोपैथी के मॉडल12,३२,३३ और यांत्रिक प्रेरित न्यूरोपैथी३४,३५. इस प्रकार, मोटर कमजोरी और बड़े व्यास संवेदी तंत्रिका क्षति का योगदान पूरी तरह से इन न्यूरोपैथी मॉडल के व्यवहार परीक्षण में शामिल नहीं किया जा सका । वर्तमान प्रोटोकॉल चूहों में छोटे फाइबर न्यूरोपैथी के एक नए मॉडल का वर्णन है, जो केवल IENFs अध कि रोग और कार्यात्मक सबूत प्रदान करके छोटे व्यास संवेदी नसों को प्रभावित करता है.

RTX TRPV1 और एक capsaicin एनालॉग के एक ultrapotent एगोनिस्ट है, जो संस्कृति में peptidergic डीआरजी न्यूरॉन्स की हानि के कारण हो सकता है३६ और vivo सिस्टम्स18,19में. RTX और capsaicin पर पिछले अध्ययन मुख्य रूप से रूपात्मक या कार्यात्मक डीआरजी न्यूरॉन्स कोशिका निकायों, जो थर्मल ट्रांसमिशन रिस्पांस३७,३८,३९में TRPV1 की भूमिका से पता चला की कार्यशील हानि पर ध्यान केंद्रित किया है । इसके अलावा, एक पिछले अध्ययन व्यवस्थित उच्च खुराक RTX उपचार (२०० µ जी/चूहों में, प्रेरित यांत्रिक allodynia और थर्मल hypoalgesia, संभवतः बड़े व्यास तंत्रिका तंतुओं की विकृति के कारण28का प्रदर्शन किया । २०० µ जी की खुराक/किलो, तथापि, चूहों में एक घातक खुराक है और इस वर्तमान प्रोटोकॉल RTX खुराक (५० µ g/kg) को कम करके एक शुद्ध छोटे फाइबर न्यूरोपैथी मॉडल विकसित. RTX की यह खुराक (५० µ g/kg) एक शुद्ध छोटे फाइबर न्यूरोपैथी मॉडल की स्थापना के लिए महत्वपूर्ण है, जो कि पहले रिपोर्ट28के लिए बेहतर है, के रूप में यह बड़े फाइबर18बख्शी. कि है, यह केवल छोटे तंत्रिका तंतुओं को प्रभावित करता है; बुद्धि के लिए, केवल छोटे व्यास न्यूरॉन्स घायल हो गए थे, के रूप में ATF36,४० पर लघु व्यास डीआरजी न्यूरॉन्स और IENFs अध...6,18,19 ,संवेदी विकारों के साथ जुड़े४१। इन रोग अभिव्यक्तियाँ व्यापक छोटे फाइबर न्यूरोपैथी के नैदानिक लक्षणों की नकल. इसके अलावा, इस मौजूदा मॉडल छोटे फाइबर न्यूरोपैथी के ठेठ neuropathology और neuropathic दर्द प्रोफ़ाइल प्रेरित और प्रभाव 8 सप्ताह के बाद RTX उपचार6,18,19के लिए चली । neuropathology और neuropathic दर्द की अवधि के बराबर थे और तंत्रिका विकास कारक (NGF)18,४०,४१के संश्लेषण को बढ़ावा देने के द्वारा उलट जा सकता है । सामूहिक रूप से, इस प्रोटोकॉल दोनों एक शुद्ध छोटे फाइबर न्यूरोपैथी मॉडल की स्थापना की और NGF की संभावित चिकित्सीय क्षमता पर प्रकाश डाला.

चिकित्सकीय, छोटे व्यास nociceptive नसों8,9 को प्रभावित न्यूरोपैथी की जांच के लिए सोने के मानक त्वचा इन्नेर्वतिओन के मूल्यांकन के लिए अंग त्वचा की बायोप्सी है । हमारी वर्तमान रिपोर्ट प्रयोगात्मक पशुओं के footpad त्वचा के लिए इस तकनीक लागू एक छोटे फाइबर न्यूरोपैथी मॉडल की त्वचा इन्नेर्वतिओन का मूल्यांकन करने के लिए, जो क्लिनिक में IENFs की विकृति नकल सकता है, और भी डीआरजी के रूपात्मक प्रोफाइल की जांच की चोट मार्कर के साथ वर्गों, ATF3, न्यूरॉनिक सोमता की रोग स्थिति प्रकट करने के लिए. विशेष रूप से, एपिडर्मिस के भीतर IENFs के स्थानिक वितरण अत्यधिक बंटी और गिनती मानदंड प्रमुख समूहों के बीच अंतर सांख्यिकीय के लिए अग्रणी कारक हैं । उदाहरण के लिए, हमारे वर्तमान प्रोटोकॉल केवल dermis और IENFs में एक एकल IENF14,18,19के रूप में एपिडर्मिस के भीतर अंक शाखाओं में बंटी के साथ अंक शाखाओं में बंटी के साथ प्रत्येक IENF गिना । इस कसौटी पर अंय समूहों की तुलना में हमारी जांच में IENFs के एक कम घनत्व का कारण हो सकता है । हम तैयार है और हमारे वर्तमान संशोधित प्रोटोकॉल के साथ एक व्यवस्थित और भारी मूल्यांकन फैशन में त्वचा और प्रयोगात्मक पशुओं के डीआरजी वर्गों संसाधित । तदनुसार, IENF अध कि और ंयूरॉंस की चोट की इन व्यवस्थित जांच कार्यात्मक और छोटे फाइबर न्यूरोपैथी में छोटे व्यास ंयूरॉंस की रोग की स्थिति के stereological पूर्वाग्रह से बचने के सकता है ।

व्यवहार परीक्षण के साथ छोटे व्यास नसों के कार्यात्मक मूल्यांकन, विशेष रूप से innoxious वॉन Frey बाल रेशा आवेदन के साथ, परंपरागत रूप से यांत्रिक संवेदनशीलता अंतर्निहित छोटे फाइबर के निदान के लिए रोगियों की त्वचा के लिए लागू किया गया है न्यूरोपैथी. प्रायोगिक पशुओं में यांत्रिक allodynia का अवलोकन धातु मेष, जो exogenous यांत्रिक उत्तेजना माना जाता है पर पैर जमीन के कारण चुनौतीपूर्ण है, और जानवरों परीक्षणों के दौरान अत्यधिक सक्रिय हैं । वर्तमान प्रोटोकॉल एक अर्द्ध में एक विशिष्ट आकार मेष तार फर्श (5 मिमी × 5 मिमी) के व्यवहार परीक्षण के लिए प्रयोगात्मक पशुओं के पर्यावरण अनुकूलन के लिए एक अर्ध पारदर्शी प्लास्टिक पिंजरे में अनुकूलित । मेष मंजिल के इस आकार के पैर जमीन की exogenous उत्तेजना को कम करने और पैर छोड़ने से बचने सकता है ।

न्यूरोपैथी के इस RTX माउस मॉडल छोटे फाइबर न्यूरोपैथी के विभिन्न प्रकार के लिए लागू किया जा सकता, जैसे मधुमेह, जो IENF अध1,४२के साथ जुड़ा हुआ है. हालांकि, यह मॉडल सीमित रहता है । उदाहरण के लिए, क्लिनिक में radiculopathy के रूप में संदर्भित छोटे फाइबर न्यूरोपैथी की विशेषताओं के साथ रीढ़ की हड्डी तंत्रिका बंधाव४३ के पशु मॉडल, रीढ़ की हड्डी rootlet में बड़े तंतुओं को भी प्रभावित कर सकते हैं ।

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है

Acknowledgments

यह काम विज्ञान और प्रौद्योगिकी मंत्रालय (106-2320-बी-037-024), काऊशुंग चिकित्सा विश्वविद्यालय (KMU-M106028, KMU-S105034) और शीर्ष विश्वविद्यालयों अनुदान (TP105PR15), काऊशुंग चिकित्सा विश्वविद्यालय, ताइवान के लिए उद्देश्य से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Chemical reagent
Resiniferatoxin Sigma R8756
Tween 80 Sigma P1754
3,3’-diaminobenzidine Sigma D8001
avidin-biotin complex Vector PK-6100
Name Company Catalog Number Comments
Primary Antisera
Peripherin Chemicon MAB-1527
ATF3 Santa Cruz SC-188
PGP9.5 UltraClone RA95101
Name Company Catalog Number Comments
Secondary Antisera
Biotinylated goat anti-rabbit IgG Vector BA-1000
Texas Red-conjugated goat anti-mouse Jackson ImmunoResearch 115-075-146
Isothiocyanate (FITC)-conjugated donkey anti-rabbit Jackson ImmunoResearch 711-095-152
Name Company Catalog Number Comments
Equipment
Hot plate IITC Model 39
von Frey filament Somedic Sales AB 10-600-0001
Name Company Catalog Number Comments
Material
Shandon coverplate Thermo scientific 72110017
Slide rack Thermo scientific 73310017

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References

  1. Shun, C. T., et al. Skin denervation in type 2 diabetes: correlations with diabetic duration and functional impairments. Brain. 127 (Pt 7), 1593-1605 (2004).
  2. Polydefkis, M., et al. The time course of epidermal nerve fibre regeneration: studies in normal controls and in people with diabetes, with and without neuropathy. Brain. 127 (Pt 7), 1606-1615 (2004).
  3. Holland, N. R., et al. Small-fiber sensory neuropathies: clinical course and neuropathology of idiopathic cases. Ann Neurol. 44 (1), 47-59 (1998).
  4. Chaudhry, V., Rowinsky, E. K., Sartorius, S. E., Donehower, R. C., Cornblath, D. R. Peripheral neuropathy from taxol and cisplatin combination chemotherapy: clinical and electrophysiological studies. Ann Neurol. 35 (3), 304-311 (1994).
  5. Mellgren, S. I., Nolano, M., Sommer, C. The cutaneous nerve biopsy: technical aspects, indications, and contribution. Handb Clin Neurol. 115, 171-188 (2013).
  6. Hsieh, Y. L., Chiang, H., Lue, J. H., Hsieh, S. T. P2X3-mediated peripheral sensitization of neuropathic pain in resiniferatoxin-induced neuropathy. Exp Neurol. 235 (1), 316-325 (2012).
  7. Fukuoka, T., et al. Re-evaluation of the phenotypic changes in L4 dorsal root ganglion neurons after L5 spinal nerve ligation. Pain. 153 (1), 68-79 (2012).
  8. Joint Task Force of the, E., et al. European Federation of Neurological Societies/Peripheral Nerve Society Guideline on the use of skin biopsy in the diagnosis of small fiber neuropathy. Report of a joint task force of the European Federation of Neurological Societies and the Peripheral Nerve Society. J Peripher Nerv Syst. 15 (2), 79-92 (2010).
  9. Hsieh, S. T. Pathology and functional diagnosis of small-fiber painful neuropathy. Acta Neurol Taiwan. 19 (2), 82-89 (2010).
  10. Kennedy, W. R., Wendelschafer-Crabb, G. Utility of the skin biopsy method in studies of diabetic neuropathy. Electroencephalogr Clin Neurophysiol Suppl. 50, 553-559 (1999).
  11. Kennedy, W. R. Opportunities afforded by the study of unmyelinated nerves in skin and other organs. Muscle Nerve. 29 (6), 756-767 (2004).
  12. Verdu, E., et al. Physiological and immunohistochemical characterization of cisplatin-induced neuropathy in mice. Muscle Nerve. 22 (3), 329-340 (1999).
  13. Ko, M. H., Hu, M. E., Hsieh, Y. L., Lan, C. T., Tseng, T. J. Peptidergic intraepidermal nerve fibers in the skin contribute to the neuropathic pain in paclitaxel-induced peripheral neuropathy. Neuropeptides. 48 (3), 109-117 (2014).
  14. Hsieh, S. T., Chiang, H. Y., Lin, W. M. Pathology of nerve terminal degeneration in the skin. J Neuropathol Exp Neurol. 59 (4), 297-307 (2000).
  15. Tseng, T. J., Hsieh, Y. L., Ko, M. H., Hsieh, S. T. Redistribution of voltage-gated sodium channels after nerve decompression contributes to relieve neuropathic pain in chronic constriction injury. Brain Res. 1589, 15-25 (2014).
  16. Hsieh, Y. L., Lin, W. M., Lue, J. H., Chang, M. F., Hsieh, S. T. Effects of 4-methylcatechol on skin reinnervation: promotion of cutaneous nerve regeneration after crush injury. J Neuropathol Exp Neurol. 68 (12), 1269-1281 (2009).
  17. Tseng, T. J., Chen, C. C., Hsieh, Y. L., Hsieh, S. T. Effects of decompression on neuropathic pain behaviors and skin reinnervation in chronic constriction injury. Exp Neurol. 204 (2), 574-582 (2007).
  18. Hsieh, Y. L., Chiang, H., Tseng, T. J., Hsieh, S. T. Enhancement of cutaneous nerve regeneration by 4-methylcatechol in resiniferatoxin-induced neuropathy. J Neuropathol Exp Neurol. 67 (2), 93-104 (2008).
  19. Hsieh, Y. L., et al. Role of Peptidergic Nerve Terminals in the Skin: Reversal of Thermal Sensation by Calcitonin Gene-Related Peptide in TRPV1-Depleted Neuropathy. PLoS One. 7 (11), e50805 (2012).
  20. Neubert, J. K., et al. Peripherally induced resiniferatoxin analgesia. Pain. 104 (1-2), 219-228 (2003).
  21. Almasi, R., Petho, G., Bolcskei, K., Szolcsanyi, J. Effect of resiniferatoxin on the noxious heat threshold temperature in the rat: a novel heat allodynia model sensitive to analgesics. Br J Pharmacol. 139 (1), 49-58 (2003).
  22. Karai, L., et al. Deletion of vanilloid receptor 1-expressing primary afferent neurons for pain control. J Clin Invest. 113 (9), 1344-1352 (2004).
  23. Apostolidis, A., et al. Capsaicin receptor TRPV1 in urothelium of neurogenic human bladders and effect of intravesical resiniferatoxin. Urology. 65 (2), 400-405 (2005).
  24. Helyes, Z., et al. Antiinflammatory and analgesic effects of somatostatin released from capsaicin-sensitive sensory nerve terminals in a Freund's adjuvant-induced chronic arthritis model in the rat. Arthritis Rheum. 50 (5), 1677-1685 (2004).
  25. Kissin, I., Bright, C. A., Bradley, E. L. Jr Selective and long-lasting neural blockade with resiniferatoxin prevents inflammatory pain hypersensitivity. Anesth Analg. 94 (5), table of contents 1253-1258 (2002).
  26. Helyes, Z., et al. Inhibitory effect of anandamide on resiniferatoxin-induced sensory neuropeptide release in vivo and neuropathic hyperalgesia in the rat. Life Sci. 73 (18), 2345-2353 (2003).
  27. Kissin, I. Vanilloid-induced conduction analgesia: selective, dose-dependent, long-lasting, with a low level of potential neurotoxicity. Anesthesia and analgesia. 107 (1), 271-281 (2008).
  28. Pan, H. L., Khan, G. M., Alloway, K. D., Chen, S. R. Resiniferatoxin induces paradoxical changes in thermal and mechanical sensitivities in rats: mechanism of action. J Neurosci. 23 (7), 2911-2919 (2003).
  29. Iadarola, M. J., Mannes, A. J. The vanilloid agonist resiniferatoxin for interventional-based pain control. Current topics in medicinal chemistry. 11 (17), 2171-2179 (2011).
  30. Zimmermann, M. Ethical guidelines for investigations of experimental pain in conscious animals. Pain. 16 (2), 109-110 (1983).
  31. Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw. J Neurosci Methods. 53 (1), 55-63 (1994).
  32. Cliffer, K. D., et al. Physiological characterization of Taxol-induced large-fiber sensory neuropathy in the rat. Ann Neurol. 43 (1), 46-55 (1998).
  33. Lipton, R. B., et al. Taxol produces a predominantly sensory neuropathy. Neurology. 39 (3), 368-373 (1989).
  34. Bennett, G. J., Xie, Y. K. A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man. Pain. 33 (1), 87-107 (1988).
  35. Ko, M. H., Hsieh, Y. L., Hsieh, S. T., Tseng, T. J. Nerve demyelination increases metabotropic glutamate receptor subtype 5 expression in peripheral painful mononeuropathy. Int J Mol Sci. 16 (3), 4642-4665 (2015).
  36. Jeftinija, S., Liu, F., Jeftinija, K., Urban, L. Effect of capsaicin and resiniferatoxin on peptidergic neurons in cultured dorsal root ganglion. Regul Pept. 39 (2-3), 123-135 (1992).
  37. Caudle, R. M., et al. Resiniferatoxin-induced loss of plasma membrane in vanilloid receptor expressing cells. Neurotoxicology. 24 (6), 895-908 (2003).
  38. Acs, G., Biro, T., Acs, P., Modarres, S., Blumberg, P. M. Differential activation and desensitization of sensory neurons by resiniferatoxin. J Neurosci. 17 (14), 5622-5628 (1997).
  39. Athanasiou, A., et al. Vanilloid receptor agonists and antagonists are mitochondrial inhibitors: how vanilloids cause non-vanilloid receptor mediated cell death. Biochem Biophys Res Commun. 354 (1), 50-55 (2007).
  40. Wu, C. H., Ho, W. Y., Lee, Y. C., Lin, C. L., Hsieh, Y. L. EXPRESS: NGF-trkA signaling modulates the analgesic effects of prostatic acid phosphatase in resiniferatoxin-induced neuropathy. Mol Pain. 12, (2016).
  41. Hsiao, T. H., Fu, Y. S., Ho, W. Y., Chen, T. H., Hsieh, Y. L. Promotion of thermal analgesia and neuropeptidergic skin reinnervation by 4-methylcatechol in resiniferatoxin-induced neuropathy. Kaohsiung J Med Sci. 29 (8), 405-411 (2013).
  42. Chao, C. C., et al. Pathophysiology of neuropathic pain in type 2 diabetes: skin denervation and contact heat-evoked potentials. Diabetes Care. 33 (12), 2654-2659 (2010).
  43. Kim, S. H., Chung, J. M. An experimental model for peripheral neuropathy produced by segmental spinal nerve ligation in the rat. Pain. 50 (3), 355-363 (1992).

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तंत्रिका विज्ञान अंक १३२ Resiniferatoxin (RTX) वॉन Frey बाल रेशा गर्म प्लेट परीक्षण यांत्रिक allodynia थर्मल hypoalgesia क्षणिक रिसेप्टर संभावित vanilloid प्रकार 1 (TRPV1) छोटे फाइबर न्यूरोपैथी तंत्रिका चोट प्रतिलेखन सक्रिय भाज्या-३ (ATF3)
क्षणिक रिसेप्टर संभावित Vanilloid प्रकार 1 के Ultrapotent एगोनिस्ट के साथ एक शुद्ध छोटे फाइबर न्यूरोपैथी के एक माउस मॉडल की स्थापना
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Lee, Y. C., Lu, S. C., Hsieh, Y. L.… More

Lee, Y. C., Lu, S. C., Hsieh, Y. L. Establishing a Mouse Model of a Pure Small Fiber Neuropathy with the Ultrapotent Agonist of Transient Receptor Potential Vanilloid Type 1. J. Vis. Exp. (132), e56651, doi:10.3791/56651 (2018).

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