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Immunology and Infection

अवर वेना कावा का एक प्रकार का रोग: गहरी नस घनास्त्रता के एक Murine मॉडल

Published: December 22, 2017 doi: 10.3791/56697
Automatic Translation
1, 1
1Institute of Cardiovascular Sciences, College of Medical and Dental Sciences, University of Birmingham

Summary

हम यहां गहरी नस घनास्त्रता के एक murine मॉडल के रूप में अवर वेना कावा में एक प्रकार का रोग का वर्णन । इस मॉडल recapitulates रक्त प्रवाह प्रतिबंध, मनुष्यों में शिरापरक घनास्त्रता के प्रमुख ट्रिगर में से एक ।

Abstract

गहरी नस घनास्त्रता (DVT) और इसकी विनाशकारी जटिलता, फुफ्फुसीय शल्यता, उच्च मृत्यु दर के साथ एक गंभीर स्वास्थ्य समस्या है । नसों में थक्का गठन के तंत्र अस्पष्ट रहते हैं । गतिशीलता की कमी (जैसे, सर्जरी या लंबी दौड़ उड़ानों के बाद) मुख्य DVT के लिए अग्रणी कारकों में से एक है । गतिशीलता की कमी के pathophysiological परिणाम शिरापरक वाल्व में रक्त प्रवाह ठहराव है । यहां, एक मॉडल वर्णित है कि एक घनास्त्रता ड्राइविंग कारक के रूप में इस तरह के प्रवाह अशांति नकल । इस मॉडल में, अवर वेना कावा (IVC) में आंशिक प्रवाह प्रतिबंध (एक प्रकार का रोग) बनाया जाता है । IVC लुमेन के बारे में ९०% के बंद होने के विकास में ४८ एच परिणाम के लिए संरचनात्मक रूप से मनुष्यों में उन लोगों के समान थ्रोम्बी. समानताएं हैं: i) थक्का मात्रा के अधिकांश लाल है, यानी, लाल रक्त कोशिकाओं और फाइब्रिन के होते हैं, ii) एक सफेद भाग की उपस्थिति (Zahn की लाइनें), iii) गैर-नग्न endothelial monolayer, iv) ऊंचा प्लाज्मा डी-डिमर स्तर, और वी) संभावना को रोकने के लिए घनास्त्रता द्वारा कम आणविक भार हेपरिन. सीमाएं थ्रोम्बी के चर आकार और तथ्य यह है कि जंगली प्रकार चूहों का एक निश्चित प्रतिशत (0-35%) एक थक्का उत्पादन नहीं हो सकता है शामिल हैं । दृश्य अवलोकन और मापन के अलावा, थ्रोम्बी गैर इनवेसिव प्रौद्योगिकियों, जैसे ट्रा, जो थक्का विकास की गतिशीलता की निगरानी के लिए अनुमति देता है द्वारा visualized किया जा सकता है । छोटे समय अंक (1-6 ज) पर, intravital माइक्रोस्कोपी सीधे घटनाओं का पालन करने के लिए लागू किया जा सकता है(उदा., पोत दीवार के लिए कोशिकाओं की भर्ती) पूर्ववर्ती थक्का गठन । दुनिया भर में कई टीमों द्वारा इस विधि का उपयोग यह DVT दीक्षा के बुनियादी तंत्र को उजागर करने के लिए संभव बना दिया है और संभावित लक्ष्य है कि इसकी रोकथाम के लिए फायदेमंद हो सकता है की पहचान ।

Introduction

गहरी शिरा घनास्त्रता (DVT) गहरी नसों में थ्रोम्बी का विकास है, आमतौर पर (लेकिन न केवल) पैरों में । फुफ्फुसीय शल्यता के साथ संयोजन के रूप में (पीई; शिरापरक Thromboembolism के रूप में नामित, VTE) यह सालाना लगभग ९००,००० अमेरिकियों में विकसित करता है और एक गंभीर स्वास्थ्य मुद्दे और किफायती समस्या1,2का प्रतिनिधित्व करती है । पीई, DVT की जटिलता, तब होता है जब एक थक्का अपने प्रारंभिक स्थान से अलग हो जाता है और फेफड़ों तक पहुंच जाता है, जो सांस की कमी और मौत का कारण हो सकता है । VTE से मरने वालों की मौत एड्स, स्तन कैंसर और यातायात दुर्घटनाओं से मृत्यु दर से अधिक है, संयुक्त3।

प्रमुख कारण कैंसर या आघात जैसे ज्ञात कारणों के अलावा DVT के कारण कारक, गतिशीलता की कमी है 4,5. इस सर्जरी (विशेष रूप से आर्थोपेडिक), पक्षाघात, लंबी दौड़ उड़ानों या अंय कारणों से परिणाम हो सकता है । नसों में रक्त का प्रवाह मांसपेशी पंप पर निर्भर करता है और इसलिए शिरापरक वाल्व, जो घनास्त्रता की ओर जाता है में स्थिर रक्त प्रवाह में अंगों का जमावड़ा परिणाम होता है । यहाँ वर्णित विधि का प्रयोजन ऐसे रक्त प्रवाह विकृति६,७दोहराऊंगा करना है. अवर वेना कावा (IVC) में आंशिक प्रवाह प्रतिबंध मानव शिरापरक वाल्व और एक संरचना में मानव थ्रोम्बी के लिए इसी तरह के थक्का के गठन में परिणाम में बनाई गई शर्तों की नकल6। एक थक्का का बड़ा हिस्सा लाल होता है और इसमें लाल रक्त कोशिकाएं, फाइब्रिन और प्लेटलेट्स शामिल होते हैं । थ्रोम्बी एक छोटा सा "सफेद भाग" प्लेटलेट्स में समृद्ध है (चित्रा 1), जो "Zahn की लाइनें" के समान मानव शिरापरक थ्रोम्बी में वर्णित है । थक्का के दोनों भागों में भी न्यूट्रोफिल8, जो पहली कोशिकाओं के बीच भविष्य थक्का6,9की साइट पर भर्ती होने के लिए होते हैं । लाल भाग में न्यूट्रोफिल न्युट्रोफिल extracellular जाल (जाल) को निष्कासित, जबकि सफेद भाग में न्यूट्रोफिल के लिए8जाल से रहित होने लगते हैं । इसी प्रकार मानव DVT के लिए, चूहों में घनास्त्रता ऊंचा प्लाज्मा डी-डिमर स्तर (चित्रा 2) के साथ है । कम आणविक भार हेपरिन (enoxaparin), रोगियों में DVT प्रोफिलैक्सिस के लिए प्रयुक्त, भी चूहों में घनास्त्रता रोकता है. इस विधि का एक महत्वपूर्ण लाभ endothelial अनाच्छादन9, जो मानव DVT10की विशेषता है की अनुपस्थिति है । यह सुविधा IVC एक प्रकार का रोग से DVT के एक अधिक नैदानिक प्रासंगिक मॉडल बनाता है, उदाहरण के लिए, घाट क्लोराइड द्वारा घनास्त्रता की प्रेरण, जो endothelial अनाच्छादन लाती है और जिसमें थ्रोम्बी प्लेटलेट्स की मुख्य रूप से मिलकर बनता है11, 12,13. IVC में पूर्ण ठहराव का एक मॉडल कई टीमों द्वारा पसंद किया जाता है14,15,16। एक प्रकार का रोग के विपरीत, जिसमें अवशिष्ट प्रवाह पोत में बनाए रखा है, ठहराव के आवेदन पूरी तरह से प्रवाह बंद हो जाता है और इस तरह घनास्त्रता साइट के लिए प्रणालीबद्ध प्रशासित पदार्थों की पहुंच सीमा । इसके अलावा, ऐसा लगता है कि एक प्रकार का रोग और ठहराव द्वारा प्रेरित घनास्त्रता अंतर्निहित तंत्र अलग हैं: स्थानीय सूजन के विकास में रोग का परिणाम (endothelium के सक्रियकरण, Weibel-Palade शरीर की सामग्री की रिहाई, प्रतिरक्षा कोशिकाओं की भर्ती और प्लेटलेट्स पोत दीवार के लिए) के कारण "immunothrombosis"6,9,17, जबकि ठहराव के बजाय प्रेरित घनास्त्रता आधारित लगता है, विशेष रूप से, ऊतक कारक और अन्य जमावट पर और fibrinolysis-संबंधित तंत्र18,19,20. इस प्रकार, रोग और ठहराव मॉडल शिरापरक थक्का विकास के थोड़ा अलग पहलुओं को प्रतिबिंबित, हालांकि उनके तंत्र निश्चित रूप से ओवरलैप कर सकते हैं । DVT21,22 के इलेक्ट्रोलाइटिक IVC मॉडल (एिां) एक थक्का केवल आंशिक रूप से पोत दीवार occluding लाती है । इसलिए, यह थक्का वृद्धि पर विभिन्न दवाओं के प्रणालीगत प्रशासन के प्रभाव का परीक्षण करने के लिए सुविधाजनक है । इस मॉडल, तथापि, IVC दीवार अखंडता के विघटन मान लिया (एक सुई की प्रविष्टि) और बिजली के वर्तमान से घनास्त्रता की प्रेरण इस तंत्र की pathophysiological प्रासंगिकता बनाने के कम से विवादित ।

Protocol

पशु कल्याण एथिकल रिव्यू बॉडी और यूके होम ऑफिस (यूके, प्रोजेक्ट लाइसेंस 40/3745) द्वारा सभी पशु प्रक्रियाओं को मंजूरी दी गई । C57BL पर चूहों/6 पृष्ठभूमि, 8-12 सप्ताह पुराना है, 19-25 जी शरीर के वजन, दोनों लिंगों का उपयोग किया जाता है ।

1. पशु संज्ञाहरण

  1. एक प्रेरण चैंबर में एक माउस प्लेस और १००% ऑक्सीजन के साथ 5% isoflurane का एक मिश्रण से संज्ञाहरण प्रेरित । ०.५ L/मिनट की एक प्रवाह दर का उपयोग करें जब तक प्रतीक्षा करें माउस पूरी तरह से चलती बंद हो जाता है और सांस लेने की इसकी आवृत्ति दुर्लभ हो जाता है ।
  2. चैंबर से माउस निकालें और एक बिजली के क्लिपर के साथ पेट दाढ़ी । उदर गुहा के संक्रमण से बचने के लिए यथासंभव अच्छी तरह से पेट से बाल निकालें ।
  3. लापरवाह स्थिति में माउस प्लेस और एक संज्ञाहरण प्रणाली से जुड़े शंकु में माउस की नाक जगह है । 2-3% के लिए isoflurane का प्रतिशत घटाएं (सटीक प्रतिशत थोड़ा जानवर से पशु से अलग हो सकता है) । सुनिश्चित करें कि पशु अपनी श्वसन दर के साथ सो रहा है सामान्य से कम लेकिन हांफते से परहेज किया जा रहा है । अगर हांफना होता है, ०.५% से isoflurane का प्रतिशत कम ।
    1. उचित anesthetization की पुष्टि करें और यह नकारात्मक है तभी सर्जरी शुरू करने के लिए पेडल पलटा की जाँच करें । आंखों पर पशु चिकित्सक मरहम लागू सूखापन को रोकने के लिए ।
  4. माउस के पेट पर एक विरोधी जीवाणुनाशक समाधान (1% Hibitane) लागू करें और एक परिपत्र फैशन में बाहर करने के लिए, अंदर बाहर करने के लिए (उदाहरणके लिए), सर्जिकल साइट की क्षमता पुनः संदूषण को छोड़कर एक तरह से बाँझ कपास कली का उपयोग कर क्षेत्र पोंछ । दोहराएं 3 बार ।

2. IVC एक प्रकार का रोग और माउस वसूली के आवेदन

नोट: सभी उपकरणों के रूप में अच्छी तरह के रूप में सामग्री (कपास कलियों, धुंध, खारा आदि) सर्जरी के क्षेत्र के साथ संपर्क में आ रहा बाँझ होना चाहिए. ऑपरेटर साफ़ करना चाहिए सर्जरी से पहले और प्रक्रिया के दौरान बाँझ दस्ताने और गाउन पहनते हैं । माइक्रोस्कोप हैंडल एक बाँझ पंनी में लपेटा जाना चाहिए ।

  1. चूहों एक विरोधी दर्द उपचार सर्जरी से पहले और पूरे प्रयोगात्मक अवधि के दौरान दे । उदाहरण के लिए, शल्य चिकित्सा से पहले buprenorphine ०.१ मिलीग्राम/kg के चमड़े के नीचे 30 मिनट का उपयोग करें और फिर हर 12 घंटे तक पशु euthanized है । इस विधि में घनास्त्रता के रूप में इसी प्रकार विकसित करने के लिए सूजन बाँझ, एक दवा के रूप में विरोधी भड़काऊ दवाओं का उपयोग करने से बचें ।
  2. एक बाँझ कपड़े के साथ माउस को कवर और सर्जरी की साइट को बेनकाब करने के लिए पर्दे में एक छेद कर. कैंची का प्रयोग, उरोस्थि से नीचे उदर midline, १.५ सेमी के साथ एक चीरा बनाते हैं । कपास कलियों का उपयोग करने के लिए माउस के बाएं हाथ की ओर आंतों exteriorize और उंहें बाँझ धुंध गर्म (३७ डिग्री सेल्सियस) खारा में लथपथ के साथ कवर बाहर सुखाने से बचने के लिए ।
  3. IVC और इसके पक्ष शाखाओं की पहचान करें (वहां 0, 1 या उनमें से 2) छोड़ दिया गुर्दे की नस के साथ IVC के संलयन की साइट से caudal दिशा में हो सकता है । संभव के रूप में IVC के करीब के रूप में 7-0 निष्क्रिय Prolene टांके के साथ सभी दिखाई पक्ष शाखाओं Ligate ।
    1. संदंश सीधे के साथ की ओर शाखाओं पकड़ नहीं बल्कि उंहें खींच ऊपर वसा उंहें एक हाथ में संदंश के साथ आसपास के ऊतकों को पकड़ और दूसरे हाथ में संदंश के साथ शाखा के नीचे एक सुरंग बनाने की कोशिश करो । वापस शाखाओं बंद मत करो ।
  4. संदंश के साथ आसपास के ऊतकों होल्डिंग, IVC खींच और IVC और महाधमनी के बीच छोटे क्षेत्र में तनाव उत्पादन छोड़ दिया बिल्कुल IVC और बाईं गुर्दे की नस के बीच कोण पर । खाते में ले कि यह वस्तुतः IVC से भी 2-3 mm नीचे (caudal दिशा में) से महाधमनी अलग असंभव है ।
  5. अपने दाहिने हाथ में संदंश युक्तियों के साथ आंदोलनों हट जाना का उपयोग महाधमनी और IVC के बीच एक छेद बना । ध्यान रखें कि अधिक आंदोलनों बनाया, अधिक पोत को नुकसान पहुंचाने का मौका । आदर्श रूप में, 3-5 करने के लिए आंदोलनों की संख्या को कम करने का प्रयास करें ।
  6. के बारे में 2 सेमी लंबे समय के 7-0 निष्क्रिय Prolene सीवन का एक टुकड़ा तैयार करें । इसे माउस के पेरिटोनियल गुहा में IVC के आसपास के क्षेत्र में ऑपरेटर के बाएं हाथ की ओर रखें ।
  7. IVC को ऊपर खींचो और फिर से छोड़ दिया । महाधमनी और IVC के बीच छेद में अपने सही संदंश युक्तियों डालें ताकि सुझावों IVC के दूसरे पक्ष पर दिखाई देते हैं । टांका ले लो और यह छेद के माध्यम से वापस खींच (चित्रा 3ए) ।
  8. सीवन के साथ एक अनंतिम गांठ बनाओ, लेकिन इसे बंद नहीं है । प्लेस 30G सुई ("एक स्पेसर") गाँठ में एक हुक के रूप में तुला और अब इसे बंद (चित्रा 3बी).
  9. स्पेसर (चित्र 3C) निकालें ।
  10. आंतों को वापस कपास की कली से पेरिटोनियल गुहा में लौटाएं और उंहें समान रूप से वितरित करें ।
  11. सतत छोरों का उपयोग 6-0 vicryl टांका के साथ बंद करो । एक गांठ के रूप में पहली और आखिरी छोरों बंद करो ।
  12. बंद त्वचा धातु स्टेपल का उपयोग कर ।
  13. शरीर के तरल संतुलन को बहाल करने के लिए गर्म (३७ डिग्री सेल्सियस) ग्लूकोज खारा के ०.५ मिलीलीटर के साथ माउस सुई ।
  14. एक गर्म (25 डिग्री सेल्सियस) कक्ष या कमरे में एक व्यक्ति के पिंजरे में माउस प्लेस और पिंजरे के अंदर खाना और जेल पानी डाल दिया । निरीक्षण जब तक माउस पूरी तरह से (आम तौर पर, 1 घंटे के आसपास) बरामद किया है ।

Representative Results

साथ ही, IVC में प्रवाह विकृति द्वारा प्रेरित DVT के एक मॉडल का वर्णन किया गया है । IVC में एक प्रकार का रोग की प्रेरण विरूपण और रक्त प्रवाह के ठहराव शुरू होता है और कुछ समय के बाद (इस मामले में, ४८ ज) एक थक्का के विकास में परिणाम, संरचनात्मक रूप से मानव DVT थ्रोम्बी के समान (चित्रा 1). IVC के अंदर एक थक्का की उपस्थिति आसानी से पता लगाने में नेत्रहीन है (चित्रा 1बी) । मॉडल और मानव DVT के बीच एक महत्वपूर्ण समानता ऊंचा प्लाज्मा डी डिमर स्तर (चित्रा 2) है । D-डिमर फाइब्रिन क्षरण और रक्त में अपनी उपस्थिति का एक उत्पाद है पता चलता है कि एक सक्रिय थ्रोम्बोटिक प्रक्रिया चल रही है ।

मॉडल चित्रा 3ए-सीमें कदम दर कदम प्रस्तुत किया है । IVC ध्यान से उजागर किया जाता है, IVC और महाधमनी के बीच एक छेद बना दिया है और एक टांका (Prolene 7-0) IVC के नीचे छेद के माध्यम से खींचा जाता है । फिर IVC को एक स्पेसर (30G सुई, चित्रा 3डी) पर सीवन से ligated है, जिसके बाद स्पेसर निकल जाता है । इस प्रक्रिया के बारे में ९० IVC शेष 10% पेटेंट छोड़ने लुमेन के बंद% के लिए अनुमति देता है । यह अंततः घनास्त्रता के लिए अग्रणी रक्त प्रवाह ठहराव सुनिश्चित करता है ।

चित्रा 4 मॉडल, चर थक्का आकार के प्रमुख नुकसान दर्शाता है । इन सभी थ्रोम्बी एक ही मूल, आयु और इसी तरह के शरीर के वजन के जंगली प्रकार के पुरुष चूहों पर प्रदर्शन किया एक ही प्रयोग में प्राप्त किया गया । हालांकि चूहों के सभी थ्रोम्बी उत्पादन (१००%) के घनास्त्रता प्रसार, उनके आकार स्पष्ट रूप से एक विस्तृत श्रृंखला में बदलता रहता है ।

Figure 1
चित्र 1: प्रतिनिधि थक्का बाद ४८ h प्रतिबन्ध/ (क) एक ठेठ थक्का के बाद ४८ h IVC एक प्रकार का रोग । नोट लाल (लाल रक्त कोशिका समृद्ध) और सफेद (प्लेटलेट समृद्ध) भागों । (B) IVC के साथ (बाएं) या बिना (दाएं) एक थक्का । स्केल सलाखों = 2 मिमी. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.

Figure 2
चित्र 2 : IVC एक प्रकार का रोग आवेदन के बाद उन्नत प्लाज्मा डी-डिमर स्तर. चूहों IVC एक प्रकार का रोग के अधीन थे । रक्त संकेत दिया समय बिंदुओं पर लिया गया था, ३.८% सोडियम साइट्रेट के साथ 1:9 स्थिर, प्लाज्मा केंद्रापसारक द्वारा तैयार किया गया था (२,३०० एक्स जी, 5 मिनट) और डी डिमर स्तर एक एलिसा किट द्वारा निर्धारित किया गया था निर्माता के निर्देशों के अनुसार । हलकों निर्दिष्ट अन्तर्वासना-संचालित चूहों, IVC प्रकार का रोग नामित पार. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 3
चित्र 3: चूहों में DVT के अवर वेना कावा (IVC) मॉडल में प्रवाह प्रतिबंध/ मॉडल के लगातार चरणों प्रस्तुत कर रहे हैं । (क) IVC और महाधमनी के बीच एक छेद बना दिया है और एक सीवन IVC के आसपास इसके माध्यम से खींच लिया है । (B) एक गाँठ एक स्पेसर (30 ग्राम सुई) के ऊपर बंद हो जाती है । (ग) स्पेसर हटा दिया जाता है: अंतिम दृश्य है कि सर्जन माउस को बंद करने से पहले देखता है । धराशायी पीली लाइन ने IVC को demarcates । LRV बाईं गुर्दे की नस के लिए खड़ा है । स्केल पट्टियां = ०.२ mm. (D) स्पेसर (30 ग्राम सुई) । स्केल सलाखों = 2 मिमी. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.

Figure 4
चित्र 4 . थक्का आकार की परिवर्तनशीलता ।
चूहों ४८ एच IVC एक प्रकार का रोग के अधीन थे । प्रस्तुत एक ही प्रयोग में प्राप्त थ्रोम्बी हैं. स्केल बार्स 2 मिमी. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें.

Discussion

यहां, IVC एक प्रकार का रोग है, जो रक्त प्रवाह विकृति, DVT के लिए एक प्रमुख ट्रिगर कारक नकल की एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया है । IVC का एक प्रकार का रोग ४८ एच और 2-6 एच के भीतर चूहों के 25-50% के भीतर C57BL/6 चूहों के 65-100% में थ्रोम्बी के विकास उत्प्रेरण6,8,23 (Brill एक, अप्रकाशित डेटा, २०१६) । विधि की एक प्रमुख सीमा थक्का आकार24 (चित्रा 4) में परिवर्तनशीलता है, जो दोनों अल्पकालिक (6h) और लंबी अवधि (४८ एच) IVC प्रकार का रोग के बाद मनाया जाता है । ऐसी परिवर्तनशीलता के लिए कारण (यह देखते हुए कि ऐसी स्पेसर, संज्ञाहरण आदि के रूप में एक ही स्थिति, उपयोग किया जाता है) अस्पष्ट रहते हैं, लेकिन एक है कि चूहों के बीच शारीरिक विविधताओं अटकलें हो सकता है (जैसे, IVC की चौड़ाई, संख्या और दोनों पक्ष और पीठ के स्थान गेल्या) आबाद ही घटना. थक्का आकार में परिवर्तनशीलता घनास्त्रता व्यापकता (एक थक्का के साथ चूहों का प्रतिशत) मुख्य परिणाम बनाता है । घनास्त्रता प्रसार एक आकस्मिक तालिका और फिशर सटीक परीक्षण का उपयोग कर तुलना की जा सकती है । प्रयोगों में से एक एक अपवाद था जब podoplanin बाधा एंटीबॉडी के इंजेक्शन के बाद ही घनास्त्रता प्रसार के साथ थक्का आकार कम 7मनाया गया था ।

शिरापरक घनास्त्रता दीक्षा का अध्ययन किया है, जब यह विधि विशेष रूप से उपयोगी है । यह पोत दीवार में प्रारंभिक घटनाओं की जांच के लिए अनुमति देता है, ऐसे कोशिकाओं की भर्ती के रूप में, अंततः घनास्त्रता के लिए अग्रणी । प्रो या विरोधी दवाओं के थ्रोम्बोटिक प्रभाव घनास्त्रता व्यापक एक प्राथमिक readout जा रहा है के साथ इस मॉडल का उपयोग कर मूल्यांकन किया जा सकता है । ४८ एच के लिए एक प्रकार का रोग एक विरोधी थ्रोम्बोटिक phenotype प्रकट करने के लिए लागू है, जबकि 6 एच प्रकार का रोग अगर एक prothrombotic phenotype की उंमीद है इस्तेमाल किया जा सकता है । थक्का और आसपास के IVC वॉल का ऊतकीय एनालिसिस भी किया जा सकता है ।

सवाल है कि पक्ष शाखाओं ligated होना चाहिए या छोड़ दिया पेटेंट खुला रहता है । एक समूह से पता चला है कि साइड शाखाओं के बंधाव थक्का आकार और एक पक्ष शाखा के स्थान में वृद्धि नहीं करता है करीब १.५ mm से IVC बंधाव साइट नाटकीय रूप से बिगड़ा थक्का विकास25। साइड शाखाओं के बंद होने से उन में endothelial चोट पैदा हो सकती है और26सर्जरी का समय भी बढ़ सकता है । हमारे हाथ में, पक्ष शाखा बंद की कमी काफी घनास्त्रता प्रसार घट जाती है (नीचे 10-30% करने के लिए ४८ h प्रकार का रोग के बाद; Brill, अप्रकाशित) और इसलिए हम सभी दिखाई पक्ष शाखाओं ligate ।

आदर्श रूप में, littermate नियंत्रण चूहों के रूप में इस्तेमाल किया जाना चाहिए, यहां तक कि एक ही पृष्ठभूमि पर लेकिन विभिन्न स्रोतों से, थोड़ा अलग घनास्त्रता प्रसार हो सकता है. यदि किसी भी मापदंडों पर स्वयं DVT का प्रभाव (उदाहरण के लिए, जैव रासायनिक) का अध्ययन किया जाता है, तो शम-संचालित पशुओं का प्रयोग किया जाना चाहिए. अन्तर्वासना संचालित चूहों एक ही प्रक्रिया से गुजरना, लेकिन IVC के आसपास संयुक्ताक्षर शिथिल बंद कर दिया है और एक प्रकार का रोग उत्पादन के बिना वहाँ रह गया.

सबसे अक्सर गलती (एक महत्वपूर्ण कदम) इस प्रोटोकॉल में एक महाधमनी और IVC ठीक नहीं जहाजों के बीच कोण पर लेकिन थोड़ा कम है, जो आमतौर पर रक्तस्राव में परिणाम को अलग करने के लिए प्रयास है । जब एक बड़े पैमाने पर रक्तस्राव होता है, माउस की अच्छी वसूली की संभावना नहीं हो जाता है और यह प्रयोग रोकने के लिए सिफारिश की है और पशु euthanize । आम तौर पर, चूहों अच्छी तरह से ठीक हो, पिंजरे के अंदर ले जाएँ और काफी वजन कम नहीं है । हम दोनों पुरुषों और महिलाओं के लिए 20 जी ऊपर चूहों का उपयोग करने और लड़ाई और चोट से बचने के लिए प्रयोग के अंत तक सर्जरी के बाद व्यक्तिगत पिंजरों में जानवरों (विशेष रूप से पुरुषों) रखने की सलाह देते हैं । यह DVT के एक अन्य (इलेक्ट्रोलाइटिक) मॉडल में बताया गया है कि नर चूहों में महिलाओं की तुलना में बड़े थ्रोम्बी का उत्पादन होता है27. हमारे डेटा का विश्लेषण पुरुष और मादा चूहों (Brill, अप्रकाशित) के बीच घनास्त्रता प्रसार में पर्याप्त अंतर का पता नहीं चला है । इसलिए, शोधकर्ताओं ने दोनों लिंग के चूहों पर IVC प्रकार का रोग मॉडल का उपयोग कर प्रयोगों को प्रोत्साहित किया जाता है.

उधड़ते और/या स्टेपल के लंबे प्रयोगों (एक सप्ताह और अधिक) में विशेष रूप से इंकार नहीं किया जा सकता है । इस प्रकार, चूहों की जांच की जानी चाहिए एक दिन में दो बार विशेष रूप से टांका अखंडता के लिए और एक विशेष ध्यान पिंजरे बिस्तर पर रक्त के निशान की उपस्थिति के लिए दिया जाना चाहिए ।

यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि, किसी भी अंय पशु मॉडल की तरह, IVC का एक प्रकार का रोग मनुष्यों में अनुवाद के संदर्भ में अपनी सीमाएं हैं । उदाहरण के लिए, murine IVCs वाल्व नहीं है, जबकि मानव DVT शिरापरक वाल्व के अंदर विकसित करता है । इसके अलावा, मनुष्य मांसपेशी पंप नसों में रक्त के प्रवाह में तेजी लाने के एक महत्वपूर्ण तंत्र होने के साथ ऊर्ध्वाधर रीढ़ की हड्डी का उन्मुखीकरण किया है । इसके विपरीत, चूहों दिल पर रक्त वापसी का समर्थन करने में मांसपेशी पंप की कोई भूमिका के साथ क्षैतिज रीढ़ की हड्डी के उन्मुखीकरण है. इन सीमाओं पर विचार किया जाना चाहिए जब मानव रोग के लिए माउस डेटा का अनुवाद ।

Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

यह काम ब्रिटिश हार्ट फाउंडेशन (PG/13/60/30406) और बर्मिंघम विश्वविद्यालय द्वारा समर्थित किया गया था ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
C57BL/6 mice Charles River 8 - 10 weeks old, bothe genders
Scissors WPI 15922
Scissors WPI 14003
Dumont 5/45 forceps FST 11251-35
7-0 Prolene suture Ethicon W8725
6-0 Vicryl suture Ethicon W9981
Cotton buds Spar
Millswabs sterile  Millpledge veterinary  611950
Drapes Kruuse 141765
Glucose Saline-Aqupharm3 Animal Care XVD589
Clear H20 HydroGel 98% sterile water  Clearh2o
Buprenorphine National Veterinary Supplies
Isoflurane vaporizer General Anaesthetic Services
IsoFlo 100% W/W inhalation vapour, liquid National Veterinary Supplies
Sterilizer Steri350 Inotech
Microscope Olympus SZX10 Olympus

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Heit, J. A. The epidemiology of venous thromboembolism in the community. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (3), 370-372 (2008).
  2. Huang, W., Goldberg, R. J., Anderson, F. A., Kiefe, C. I., Spencer, F. A. Secular trends in occurrence of acute venous thromboembolism: the Worcester VTE study (1985-2009). Am J Med. 127 (9), 829-839 (2014).
  3. House of Commons Health Care Committee. The Prevention of Venous Thromboembolism in Hospitalised patients. The House of Commons. , (2005).
  4. Kuipers, S., et al. Travel and venous thrombosis: a systematic review. J Intern Med. 262 (6), 615-634 (2007).
  5. Lopez, J. A., Chen, J. Pathophysiology of venous thrombosis. Thromb Res. 123, Suppl 4 30-34 (2009).
  6. Brill, A., et al. von Willebrand factor-mediated platelet adhesion is critical for deep vein thrombosis in mouse models. Blood. 117 (4), 1400-1407 (2011).
  7. Payne, H., Ponomaryov, T., Watson, S. P., Brill, A. Mice with a deficiency in CLEC-2 are protected against deep vein thrombosis. Blood. 129 (14), 2013-2020 (2017).
  8. Brill, A., et al. Neutrophil extracellular traps promote deep vein thrombosis in mice. J Thromb Haemost. 10 (1), 136-144 (2012).
  9. von Bruhl, M. L., et al. Monocytes, neutrophils, and platelets cooperate to initiate and propagate venous thrombosis in mice in vivo. J Exp Med. 209 (4), 819-835 (2012).
  10. Sevitt, S. The structure and growth of valve-pocket thrombi in femoral veins. J Clin Pathol. 27 (7), 517-528 (1974).
  11. Witsch, T., et al. A novel hollow and perforated flexible wire allows the safe and effective local application of thrombolytic therapy in a mouse model of deep vein thrombosis. J Thromb Thrombolysis. 37 (4), 450-454 (2014).
  12. Shaya, S. A., et al. Comparison of the effect of dabigatran and dalteparin on thrombus stability in a murine model of venous thromboembolism. J Thromb Haemost. 14 (1), 143-152 (2016).
  13. Ni, H., et al. Persistence of platelet thrombus formation in arterioles of mice lacking both von Willebrand factor and fibrinogen. J Clin Invest. 106 (3), 385-392 (2000).
  14. Wrobleski, S. K., Farris, D. M., Diaz, J. A., Myers, D. D., Wakefield, T. W. Mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis. J Vis Exp. (52), (2011).
  15. Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model. J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).
  16. Siefert, S. A., et al. Enhanced venous thrombus resolution in plasminogen activator inhibitor type-2 deficient mice. J Thromb Haemost. 12 (10), 1706-1716 (2014).
  17. Schulz, C., Engelmann, B., Massberg, S. Crossroads of coagulation and innate immunity: the case of deep vein thrombosis. J Thromb Haemost. 11, Suppl 1 233-241 (2013).
  18. Day, S. M., et al. Macrovascular thrombosis is driven by tissue factor derived primarily from the blood vessel wall. Blood. 105 (1), 192-198 (2005).
  19. Diaz, J. A., et al. Impaired fibrinolytic system in ApoE gene-deleted mice with hyperlipidemia augments deep vein thrombosis. J Vasc Surg. 55 (3), 815-822 (2012).
  20. Zhou, J., May, L., Liao, P., Gross, P. L., Weitz, J. I. Inferior vena cava ligation rapidly induces tissue factor expression and venous thrombosis in rats. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 29 (6), 863-869 (2009).
  21. Diaz, J. A., et al. Electrolytic inferior vena cava model (EIM) of venous thrombosis. J Vis Exp. (53), e2737 (2011).
  22. Diaz, J. A., et al. The electrolytic inferior vena cava model (EIM) to study thrombogenesis and thrombus resolution with continuous blood flow in the mouse. Thromb Haemost. 109 (6), 1158-1169 (2013).
  23. Brill, A., et al. Extrahepatic high-density lipoprotein receptor SR-BI and apoA-I protect against deep vein thrombosis in mice. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (8), 1841-1847 (2012).
  24. Diaz, J. A., et al. Critical review of mouse models of venous thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).
  25. Brandt, M., et al. Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches. Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).
  26. Geddings, J., et al. Strengths and weaknesses of a new mouse model of thrombosis induced by inferior vena cava stenosis: communication from the SSC of the ISTH. J Thromb Haemost. 12 (4), 571-573 (2014).
  27. Alvarado, C. M., et al. Male mice have increased thrombotic potential: sex differences in a mouse model of venous thrombosis. Thromb Res. 127 (5), 478-486 (2011).

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इम्यूनोलॉजी अंक १३० गहरी नस घनास्त्रता murine मॉडल अवर वेना कावा एक प्रकार का रोग
अवर वेना कावा का एक प्रकार का रोग: गहरी नस घनास्त्रता के एक Murine मॉडल
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Payne, H., Brill, A. Stenosis of the … More

Payne, H., Brill, A. Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis. J. Vis. Exp. (130), e56697, doi:10.3791/56697 (2017).

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