Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Cancer Research

Inrättandet av en primär kultur av patientderiverade mjukdelssarkom

Published: April 11, 2018 doi: 10.3791/56767

Summary

Följande protokoll är inriktad på inrättande av en primär kultur av patientderiverade mjukdelssarkom (STS). Denna modell kunde hjälpa oss att bättre förstå de molekylära bakgrunden och farmakologiska profilen av dessa sällsynta maligniteter och skulle kunna utgöra en utgångspunkt för vidare forskning som syftar till att förbättra STS management.

Abstract

Mjukdelssarkom (STS) representerar ett spektrum av heterogena maligniteter med en svår diagnos, klassificering och hantering. Hittills har har mer än 50 histologiska subtyper av dessa sällsynta solida tumörer identifierats. Således, på grund av sin extraordinära mångfald och låg incidens, vår förståelse av biologi av dessa tumörer är fortfarande begränsad. Patientderiverade kulturer utgör den idealiska plattformen att studera STS patofysiologi och farmakologi. Vi således framkallade en human preklinisk modell av STS start från tumör prover skördas från patienter som genomgår kirurgisk resektion. Patientderiverade STS cellkulturer var erhållits från kirurgiska exemplaren av kollagenas matsmältning och isoleras genom filtrering. Cellerna var räknade, seedade, och kvar i 14 dagar i standard enskiktslager kulturer och sedan bearbetas av nedströms analys. Innan du utför molekylär eller farmaceutiska analyser, inrättandet av STS primära kulturer bekräftades genom utvärderingen av cytomorphologic funktioner och, om tillgängligt, immunhistokemiska markörer. Denna metod representerar ett användbart verktyg (1) för att studera den naturliga historien om dessa dåligt utforskade maligniteter och 2) att testa effekterna av olika droger i ett försök att lära dig mer om deras verkningsmekanismer.

Introduction

Mjukdelssarkom (STS) inkluderar ett spektrum av heterogena lesioner av mesenkymala ursprung står för 1 procent av alla solida tumörer1,2, och den nya WHO-klassifikationen erkänner förekomsten av mer än 50 olika subtyper3. Bland dessa är de vanligaste histotypes fettceller sarkom eller liposarcoma och leiomyosarkom, står för 15% och 11% av alla vuxna STS, respektive4,5. Även om STS kan utvecklas i olika delar av kroppen, är extremiteter och retroperitoneum de vanligaste platser, som förekommer i 60% och 20% av fallen, respektive6.

Hörnstenen i behandling för lokaliserad sjukdom är bred kirurgisk resektion, medan fördelarna med adjuvant och neoadjuvant kemoterapi är fortfarande oklart och anses endast i utvalda fall7. I inställningen för metastaserande kemoterapi är vårdstandard men visar begränsade resultat8. En bättre förståelse för molekylärbiologi av STS skulle bidra till att förbättra nuvarande differentialdiagnos, optimera de tillgängliga behandlingarna och identifiera nya mål för behandling.

I detta sammanhang har forskning om cancer utförts under många år använder förevigade cell linjer9. Dessa experimentella modeller är normalt odlade i standard enskiktslager stöder eller implanteras i nedsatt immunförsvar gnagare att upprätta i vivo xenograft-modeller10. Förevigade cellinjer representerar ett lätthanterligt och lätt-to-store material som ett stort antal forskningsexperiment kan utföras. De är, i själva verket det billigaste och mest använda verktyget i prekliniska studier11.

Dock cell-linje baserat cancer modeller har också vissa begränsningar, t.ex. långvarig kultur i en enskiktslager system tillsammans med ett ökande antal passager inducerar fenotypisk och genetisk drift, göra celler mindre sannolikt för att recapitulate nyckel tumör funktioner. Dessutom misslyckas cellkulturer linje att reproducera cell till cell i samspelet och signalering molekyl överhörning som efterliknar den biologiska beteenden av tumörer och karaktärisera den tumör mikromiljö. Dessa frågor utgör grunden för klyftan mellan prekliniska och kliniska resultat12.

Mot bakgrund av har intresset för patientderiverade primära kulturer ökat13. Faktiskt minskar excision av malign och normal vävnad risken att förlora cancer cell fenotyp och heterogenitet, erbjuder därmed utgångsmaterial som är mer representativ för den tumör mikromiljö. Dessutom kan användningen av färsk tumör prover skördas från patienter som genomgår kirurgisk resektion oss att undersöka enda tumörer och jämföra olika lesioner från samma del av en patients kropp14. Av ovanstående skäl ge vävnad-derived cellkulturer ett värdefullt material för att studera tumören patofysiologi och farmakologi15,16,17, särskilt i STS i cellinjer som kommersiellt tillgängliga sarkom är begränsad18. Vi har därmed optimerat en metod för att upprätta en patientderiverade STS primära cellkultur start från kirurgiskt exciderad tumör vävnad13,19,20. Vår metod består av upphöra tumör preparatet i små vävnad fragment följt av övernattning enzymatisk vävnad dissociation att erhålla en enda cellsuspension. Följande dag, enzymatisk nedbrytning stoppas genom att lägga till färska kultur media och erhållna suspensionen filtreras för att ta bort vävnad fragment, cell-aggregat, och överskott matrismaterial eller skräp. Slutligen, en bråkdel av isolerade tumörceller är cytospinned på objektglas, fast och lagras för efterföljande analys syftar till att bekräfta inrättandet av STS primära kultur av cytomorphological, immunhistokemiska och molekylär cytogenetiska utvärdering (t.ex. fisk analys av MDM2 förstärkning representerar standard differentialdiagnos för en väl differentierad liposarcoma och den dedifferentiated liposarcoma) 4. återstående cellerna är seedade i en standard enskiktslager kultur för gen uttryck profilering och farmakologiska studier. Alla experimenten utförs med låg passage primära kulturer att undvika urvalet av specifika cancer subkloner och analyseras av en erfaren sarkom patolog. Därmed har vi skapat en helt human STS ex-vivo modell13,19,20. Denna mycket mångsidig, lätt att handtag modell skulle kunna utgöra ett användbart verktyg för olika typer av preklinisk forskning, t.ex. att identifiera nya molekylära markörer för diagnos och prognos eller för att få en djupare förståelse av verksamheten och verkningsmekanismer åtgärd av standard och nya läkemedel som används i hanteringen av STS.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

STS celler isoleras från en tumör massa kirurgiskt utskurna från patienter med STS. Protokollet har godkänts av den lokala etiska kommittén och utförs enligt god klinisk sed riktlinjer och Helsingforsdeklarationen. Alla patienter gav skriftligt informerat samtycke att delta i studien. De kirurgiska proverna analyseras av en erfaren sarkom patolog och bearbetas inom 3 timmar efter kirurgi.

1. tumör provtagning och behandling:

  1. Samla tumör prover med hjälp av en sarkom patolog i en 100 mL steril urin behållare med 50 mL DMEM låg glukos medium förseglade med en paraffin film.
  2. Förvara proverna vid 4 ° C i högst 3 h efter tumörresektion.
  3. Utföra alla de följande stegen under sterila vävnadsodling huva.
    1. Sterilisera huven med 70% etanol och bära sterila handskar.
    2. Sterilisera stål inox pincett med 70% etanol (Använd en steril gasbinda).
    3. Ta bort paraffin filmen från urin behållare och kassera.
    4. Tvätta utsidan av urin behållaren med 70% etanol.
    5. Öppna en fyrkantig petriskål.
    6. Öppna behållaren urin och överför tumör exemplaren till fyrkantig petriskål med den steriliserade stål inox pincetten.
  4. Tvätta tumör exemplaren med PBS två gånger.
  5. Öppna en sterila kirurgiska skalpell.
    1. Fint strimla tumör exemplaren i 1-2 mm3 bitar.
    2. Samla in en fjärdedel av det totala urvalet i en 2 mL tub.
    3. Tillsätt 1 mL trizol reagens (köpt) till röret och omedelbart fryser vid-80 ° C (provet kommer att användas i den efterföljande analysen för STS gen uttryck utvärdering).
  6. Samla in resten av finstrimlad tumör materialet i en 15 mL tub.
    1. Tillsätt 4 mL kollagenas typ I lösning (kollagenas typ jag är upplöst i PBS, med en koncentration på 4 µg/mL).
    2. Späd kollagenas typ I lösning med 4 mL DMEM hög kultur media (slutlig koncentration av kollagenas typ I är 2 µg/mL).
    3. Stänger 15 mL röret och försegla med paraffin film.
    4. Satte 15 mL röret i en rullande shaker i en inkubator vid 37 ° C under omrörning förhållanden för 15 min till aktivera matsmältningen.
    5. Efter 15 min förvara tuben i den rullande shakern under omrörning villkor i rumstemperatur över natten.
  7. Dagen efter satte 15 mL röret under sterila huven.
  8. Försiktigt filtrera cellsuspensionen genom 100 µm sterila filter knutna till toppen av en 50 mL tub.
  9. Tvätta filtret med DMEM hög kultur media kompletteras med 10% fetalt bovint serum, 1% glutamin och 1% penicillin/streptomycin.
  10. Kassera det 100 µm sterila filtret, nära 50 mL rör och centrifugera vid 225 x g i 5 minuter vid rumstemperatur.
  11. Kassera supernatanten genom att invertera röret.
  12. Slamma upp cellerna med 1-2 mL DMEM hög kultur media kompletteras med 10% fetalt bovint serum, 1% glutamin och 1% penicillin/streptomycin.
    Obs: Volymen beror på mängden tumör prov bearbetas.
  13. Räkna cellerna med en Neubauer kammare.
    1. Späd provet 1:2 i trypan blå och använda 10 µL av utspädning för att räkna celler.
    2. Räkna minst två gånger och beräkna medelvärdet av de replikeras till vet det totala genomsnittliga antalet celler samlas in.
  14. Platta celler i en standard enskiktslager kultur med en täthet av 80 000 celler/cm2.
    Obs: Inkludera alltid kontroller i experiment. Utför minst 3 tekniska replikat för varje villkor. Utför minst 2 biologiska replikat. För prekliniska farmakologi, genuttryck och protein uttryck analyser, bör försök utföras med ett lågt antal kultur passager inom 30-45 dagar efter cell sådd för att undvika att förlora cancer cell fenotyper.
  15. Cytologiska provberedning.
    1. Samla in 100 000 celler i 200 µL DMEM hög kultur media kompletteras med 10% fetalt bovint serum, 1% glutamin och 1% penicillin/streptomycin.
    2. Pipett lösningen (200 µL pipett) i en disponibel tratt utrustad med ett filter och monteras med en glasskiva.
    3. Öppna cytocentrifuge och infoga proverna.
    4. Kör cytocentrifuge 18,6 x g i 20 min.
    5. Kassera tratten utrustade med filter.
    6. Fixa bilderna i aceton för 10 min följt av kloroform i 5 min.
    7. Lagra bilder på-20 ° C.
      Obs: Tina och återfukta proverna innan färgning och utföra färgningen efter tillverkarens anvisningar. Bered minst 3 tekniska replikat.

2. STS Cell Cultures:

  1. Ändra media en gång i veckan (DMEM hög kultur media kompletteras med 10% fetalt bovint serum, 1% glutamin och 1% penicillin/streptomycin).
    1. Kassera odlingssubstratet med 200-1000 µL pipett.
    2. Lägg till nytt färskt medium med 200-1000 µL pipett.
    3. Cell passage:
      1. Lossa cellerna när sammanflödet ligger cirka 90%:
        Obs: STS cell kultur förstärkning bör utföras en gång i veckan på grundval av villkor som kultur.
      2. Kassera medium, tvätta med PBS och tillsätt 2-3 mL av trypsin 1 x i PBS
        Obs: Volymen av trypsin som används beror på mängden odlade celler erhålls.
      3. Inkubera cellerna under 3-5 minuter vid 37 ° C.
      4. Samla in fristående celler från plattan med 200-1000 µL pipett.
      5. Pipettera fristående cellerna i en 15 mL tub och tillsätt 4 mL DMEM hög kultur media kompletteras med 10% fetalt bovint serum, 1% glutamin och 1% penicillin/streptomycin att stoppa enzymatisk reaktion.
      6. Centrifugera vid 225 x g under 5 minuter i rumstemperatur.
      7. Kassera supernatanten.
      8. Återsuspendering cellpelleten genom att tillsätta 1 mL DMEM hög kultur media kompletteras med 10% fetalt bovint serum, 1% glutamin och 1% penicillin/streptomycin.
      9. Kärna ur cellerna i en ny kultur-platta eller en kolv med en slutlig volym enligt tillverkarens anvisningar.
        Obs: Inte dela celler mer än 1:3.

3. nedströms analyser:

Obs: En mängd olika experiment kan utföras med hjälp av denna modell (se nedan). Det är därför avgörande att välja under konstruktionsfasen av studien som analyser kommer att utföras så att ett tillräckligt antal prover och replikat kan förberedas.

  1. Spridning analyser såsom MTT 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium metylbromid
  2. Apoptotiska analyser såsom terminal deoxynucleotidyl transferas (TdT) nick slutet märkning (TUNEL) analys
  3. Immunhistokemisk analys
  4. Gen uttryck analys
  5. Western blot analys
  6. ELISA-testet
  7. Fluorescens-aktiverad cell sortering (FACS) analys
  8. In vivo xenograft modell

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Vi har utformat en enkel metod att få inrättandet av en primär kultur av patientderiverade mjukdelssarkom och rapportera här ett exempel på resultat som erhållits på en specifik STS tidstrender13. Protokollet användes för inrättandet av primära kulturer av olika STS histotypes inklusive väl differentierade liposarcoma, dedifferentiated liposarcoma, myxoid liposarcoma, pleomorfa liposarcoma, myxofibrosarkom, odifferentierade pleomorfa sarkom, GIST och desmoid fibromatosis.

Framgång för etableringen av primära kulturer var 54% (13 primära kulturer från 24 STS kirurgiska prov) för kirurgiska prover från patienter som behandlades med kemoterapi, strålbehandling eller inte behandlas. Omvänt, det var 72% (13 primära kulturer från 18 STS kirurgiska prover) för kirurgiska prover som härrör endast från obehandlade patienter.

Tumörceller isolerades från en brunn-differentiated/dedifferentiated liposarcoma (ALT/DDLPS) opereras bort från en 54-årig patient. MDM2 förstärkning analys, för närvarande utförs för standard differentialdiagnos av ALT/DDLPS och granskas av en erfaren sarkom patolog, var positiv, bekräftar förekomsten av en ALT/DDLPS lesion (figur 1A). Cytologisk analys av MDM2 amplifiering i isolerade tumörceller bekräftade inrättandet av en patientderiverade ALT/DDLPS primära kultur (94,6% av odlade celler var positiva för MDM2 amplifiering) (figur 1B). Primärkulturen fortsatte föröka efter passager i standard enskiktslager kulturer och cellernas viabilitet övervakades av MTT och Tunel assay.

Denna modell aktiverad oss att testa känsligheten för ALT/DDLPS primärkulturen olika läkemedel används för närvarande eller under klinisk utvärdering för behandling av ALT/DDLPS såsom ifosfamid (IFO), epirubicin (EPI), kombinationen IFO + EPI, trabektedin (TRABE), och eribulin (ERI), utförs med MTT-analys. Resultaten bekräftade känsligheten av kulturer till kemoterapi (figur 2A). Mest aktiva behandlingen var IFO + EPI, en första linjens terapi används vid avancerad eller metastaserande ALT/DDLPS. Dessutom undersöktes cellmorfologi efter läkemedelsexponering, resultat i ing av morfologiska förändringar i primärkulturen avseende kontroll och resultaten av den cytotoxiska assay (figur 2B). Som nämns i protokollet, kan flera efterföljande analyser utföras med denna modell. Figur 3 ger en schematisk representation av metoden och inkluderar en tidslinje där experimenten bör utföras för att erhålla translationell resultat.

Figure 1
Figur 1 . Etablering av patientderiverade primära kultur av ALT/DDLPS. (A) In situ hybridisering (FISH) utförs för att upptäcka MDM2 förstärkning i patientens vävnad prov (100 X bild). B) In situ hybridisering (FISH) utförs för att upptäcka MDM2 förstärkning i en primär kultur (100 X förstoring). Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 2
Figur 2 . Kemoterapi i en ALT/DDLPS primära kultur. (A) cellerna behandlades med: ifosfamid (IFO), epirubicin (EPI), IFO + EPI, trabektedin (TRABE), och eribulin (ERI). Tre oberoende replikat utfördes för varje experiment. Data presenteras som medelvärde ± medelfel (SE), som sagt, med n som indikerar antalet replikat. Skillnader mellan grupperna bedömdes av en tvåsidiga Students t-test, * p < 0,05. B) bilder av ALT/DDLPS primära kultur efter läkemedelsexponering (2 X förstoring). Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 3
Figur 3 : STS primärkulturen modell. Schematisk bild av den prekliniska modellen av STS primära kultur inklusive tidslinjen och de efterföljande analyserna som möjligt. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Väldefinierade prekliniska modeller behövs för att klarlägga molekylära bakgrunden av tumörer, förutsäga dålig prognos och utveckla nya terapeutiska strategier för cancerpatienter. Detta är särskilt viktigt för sällsynta tumörer som STS vars höga heterogenitet vad gäller morfologi, aggressiv potential, och kliniska beteende utmanar vår förståelse av STS biologi och patienthantering21. Dessutom begränsar de kommersiella sarkom cell raderna tillgängliga prekliniska undersökningar i denna grupp av mesenkymala tumörer18. Ex vivo modeller representerar därmed en värdefull forskning resurs för STS. Vi utvecklat en helt human in vitro- modell av STS start från kirurgiskt avlägsnande tumörvävnad (figur 3). Under optimering av metoden, var flera kritiska frågor behandlas och lösas. Det första problemet gällde tidsintervallet mellan kirurgisk behandling och prov bearbetning. Inledningsvis när tumören exemplar kom vårt biovetenskaper laboratorium efter en viss tid, var de lagras över natten vid 4 ° C och bearbetas nästa dag. STS celler isolerade från dessa prover uppvisade låg spridning aktivitet och dålig lönsamhet i standard enskiktslager kultur. Detta kan delvis tillskrivas faktumen att hela tumören prov hålls under en längre tid i urin behållaren innan de behandlas. Vi ändrade också starttiden för provet bearbetning till högst 3 h efter operationen för att säkerställa att primärkulturen fortsatte att föröka sig i standard enskiktslager kultur och uppvisar god lönsamhet. Vi har också optimerat cell uppdelning processen: små homogen vävnad fragment behövs för att underlätta enzymatisk nedbrytning, och detta uppnåddes med en skalpell. Dessutom även om protokollet arbetat med exemplar av olika storlekar, inrättandet av en primär kultur start från exemplar av begränsade storlek (< 2 cm) är svårare att uppnå. Kollagenas koncentrationen var en annan viktig fråga eftersom för hög anenzyme koncentration kan orsaka cellulär stress, vilket leder till fenotypiska förändringar i STS primärkulturen eller en minskning av tumören cellöverlevnad. Bra enzymatisk nedbrytning krävs att separera celler från matrismaterial och skräp. Vi optimerat slutligen enzym koncentration att använda i fasen matsmältningen. Dessutom begränsa cellulär stress och ge näring för STS celler under fasen isolering avbrutit vi åter enzymet i kultur media i stället för andra reagens såsom PBS. Flera experiment utförs på olika STS primära kulturer såsom liposarcoma och myxofibrosarkom visade slutligen förändringar i genuttryck över tid och ökad känslighet för kemoterapi13,20. Dessa fynd är hänförligt till långvarig kulturen av patientderiverade STS celler i en enskiktslager system tillsammans med ett ökande antal passager, både som inducerar fenotypisk och genetisk drift. Minskande tillförlitligheten i denna kultur systemet över tid att sammanfatta tumörvävnad, som tidigare visat, representerar en av de viktigaste begränsningarna av ex vivo modeller22,23. Vi har därmed optimerat protokollet genom att minska tiden att utföra experiment (inom 30-45 dagar av tumör cell sådd) och använda låg passage kulturer för att få reproducerbara och translationell resultat. Dessutom de primära kulturerna kan frysas, men deras efterföljande livskraft är beroende av flera faktorer, inklusive tumör läge, STS tidstrender, kirurgiska exemplaret och antal kultur passager utförs.

Vårt system har ett antal fördelar, dvs det är en helt human preklinisk modell, i motsats till andra murint-baserade sarkom cell linje modeller24,25,26,27. Dessutom samtidigt bekräftelse av etableringen av STS primära kulturer, uppnås genom cytomorphological, immunhistokemiska och molekylär cytogenetiska utvärdering, är med stöd av en erfaren sarkom patolog, obligatorisk i vårt protokoll , detta är inte alltid fallet för andra STS primärkulturen modeller. I några papper utfördes nedströms analys av celler som återhämtat sig från kirurgiska prover utan att bekräfta diagnos STS cell procentsatsen i primära kulturer28. Vårt system är också mångsidig, reproducerbar och kan användas för att utföra en mängd olika experiment. Dessutom kan cell sådd och yttre stimuli ändras för att studera specifika funktioner och svaren. Utvecklingen av denna modell gjort det möjligt för oss att undersöka känsligheten hos patientderiverade STS celler till olika droger används för närvarande eller under klinisk utvärdering för behandling av STS. Denna modell, därför utgör ett viktigt prekliniska verktyg för att förutsäga respons på behandling och om ytterligare optimerats, skulle kunna användas till att förbättra personlig terapi. Det kunde också användas för att identifiera diagnostiska eller prognostiska molekylära markörer, särskilt viktigt i STS där det finns några specifika biomarkörer. En av begränsningarna i protokollet är den relativt korta tid som är tillgängliga för att utföra efterföljande analys efter etableringen av den primära kulturen. Protokollet kan förbättras genom att utföra gen uttryck profilering och klustring analys för både tumör och primära kulturer härstammar från samma patient över tid att bedöma primärkulturen förmåga att härma heterogena tumörvävnad, speciellt för dessa STS histotypes som en diagnostisk markör inte finns. Sådana analyser skulle också bidra till att ytterligare karakterisera hur cellerna i den erhållna kulturen skiljer sig från dem härstammar direkt från tumörprover.

Sammanfattningsvis, är inrättandet av robust prekliniska modeller viktigt att avancera vår förståelse av tumör patologi. Vi tror att vår modell hjälper till att avslöja de molekylära mekanismer som ansvarar för den dåliga prognosen för STS och kommer att bidra till identifiering av nya terapeutiska strategier.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Författarna har inga intressekonflikter avslöja.

Acknowledgments

Författarna vill tacka Gráinne Tierney för redaktionellt stöd.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
DMEM High Glucose EuroClone ECB7501L
Fetal bovine serum EuroClone ECS0180D
Glutamine Gibco 25030-024
Paraformaldehyde 4% aqueous solution, EM grade Electron Microscopy Sciences 157-4-100
Penicillin streptomycin Gibco 15140122
Triazol reagent Ambion Life-Technologies 15596018
Trypsin EuroClone ECB3052D

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics. CA Cancer J Clin. 66 (1), 7-30 (2016).
  2. Linch, M., Miah, A. B., Thway, K., Judson, I. R., Benson, C. Systemic treatment of soft-tissue sarcoma gold standard and novel therapies. Nat Rev Clin Oncol. 11 (4), 187-202 (2014).
  3. Fletcher, C. D. The evolving classification of soft tissue tumours - an update based on the new 2013 WHO classification. Histopathology. 64 (1), 2-11 (2014).
  4. De Vita, A., et al. Current classification, treatment options, and new perspectives in the management of adipocytic sarcomas. Onco Targets Ther. 9 (12), 6233-6246 (2016).
  5. Recine, F., et al. Update on the role of trabectedin in the treatment of intractable soft tissue sarcomas. Onco Targets Ther. 10, 1155-1164 (2017).
  6. Ducimetière, F., et al. Incidence of sarcoma histotypes and molecular subtypes in a prospective epidemiological study with central pathology review and molecular testing. PLoS One. 6 (8), 20294 (2011).
  7. Nussbaum, D. P., et al. Preoperative or postoperative radiotherapy versus surgery alone for retroperitoneal sarcoma: a case-control, propensity score-matched analysis of a nationwide clinical oncology database. Lancet Oncol. 17 (7), 966-975 (2016).
  8. The ESMO/European Sarcoma Network Working Group. Soft tissue and visceral sarcomas: ESMO clinical practice guidelines for diagnosis, treatment and follow-up. Ann Oncol. 25, Suppl 3 102-112 (2014).
  9. Paul, J. The Cancer Cell in Vitro: A Review. Cancer Research. 22, 431-440 (1962).
  10. Morton, C. L., Houghton, P. J. Establishment of human tumor xenografts in immunodeficient mice. Nat Protoc. 2 (2), 247-250 (2007).
  11. Centenera, M. M., Raj, G. V., Knudsen, K. E., Tilley, W. D., Butler, L. M. Ex vivo culture of human prostate tissue and drug development. Nat Rev Urol. 10 (8), 483-487 (2013).
  12. Vannucci, L. Stroma as an Active Player in the Development of the Tumor Microenvironment. Cancer Microenviron. 8 (3), 159-166 (2015).
  13. De Vita, A., et al. Activity of Eribulin in a Primary Culture of Well-Differentiated/Dedifferentiated Adipocytic Sarcoma. Molecules. 3 (12), 1662 (2016).
  14. Failli, A., et al. The challenge of culturing human colorectal tumor cells: establishment of a cell culture model by the comparison of different methodological approaches. Tumori. 95 (3), 343-347 (2009).
  15. Steinstraesser, L., et al. Establishment of a primary human sarcoma model in athymic nude mice. Hum. Cell. 23, 50-57 (2010).
  16. Raouf, A., Sun, Y. J. In vitro methods to culture primary human breast epithelial cells. Methods Mol. Biol. 946, 363-381 (2013).
  17. Daigeler, A. Heterogeneous in vitro effects of doxorubicin on gene expression in primary human liposarcoma cultures. BMC Cancer. 29, 313 (2008).
  18. Pan, X., Yoshida, A., Kawai, A., Kondo, T. Current status of publicly available sarcoma cell lines for use in proteomic studies. Expert Rev Proteomics. 13 (2), 227-240 (2016).
  19. Liverani, C., et al. Innovative approaches to establish and characterize primary cultures: an ex vivo. 3D system and the zebrafish model. Biol Open. 15 (2), 309 (2017).
  20. De Vita, A., et al. Myxofibrosarcoma primary cultures: molecular and pharmacological profile. Ther Adv Med Oncol. 9 (12), 755-767 (2017).
  21. Blay, J. Y., Ray-Coquard, I. Sarcoma in 2016: Evolving biological understanding and treatment of sarcomas. Nat Rev Clin Oncol. 14 (2), 78-80 (2017).
  22. Dairkee, S. H., Deng, G., Stampfer, M. R., Waldman, F. M., Smith, H. S. Selective cell culture of primary breast carcinoma. Cancer Res. 55 (12), 2516-2519 (1995).
  23. Kar, R., Sharma, C., Sen, S., Jain, S. K., Gupta, S. D., Singh, N. Response of primary culture of human ovarian cancer cells to chemotherapy: In vitro individualized therapy. J Cancer Res Ther. 12 (2), 1050-1055 (2016).
  24. Ravi, A., et al. Proliferation and Tumorigenesis of a Murine Sarcoma Cell Line in the Absence of DICER1. Cancer Cell. 21 (6), 848-855 (2012).
  25. Zhong, X. Y., et al. Effect of vegf gene knockdown on growth of the murine sarcoma cell line MS-K. Cells. 16 (6), 625-638 (2011).
  26. Kidani, T., Yasuda, R., Miyawaki, J., Oshima, Y., Miura, H., Masuno, H. Bisphenol A Inhibits Cell Proliferation and Reduces the Motile Potential of Murine LM8 Osteosarcoma Cells. Anticancer Res. 37 (4), 1711-1722 (2017).
  27. Sugiyasu, K., et al. Radio-sensitization of the murine osteosarcoma cell line LM8 with parthenolide, a naturalinhibitor of NF-κB. Oncol Lett. 2 (3), 407-412 (2011).
  28. Daigeler, A., et al. Heterogeneous in vitro effects of doxorubicin on gene expression in primary human liposarcoma cultures. BMC Cancer. 29 (8), 313 (2008).

Tags

Cancerforskning fråga 134 patientderiverade primära kultur mjukdelssarkom human preklinisk modell in vitro- sällsynt tumör kirurgiska preparatet
Inrättandet av en primär kultur av patientderiverade mjukdelssarkom
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

De Vita, A., Mercatali, L.,More

De Vita, A., Mercatali, L., Miserocchi, G., Liverani, C., Spadazzi, C., Recine, F., Bongiovanni, A., Pieri, F., Cavaliere, D., Fausti, V., Amadori, D., Ibrahim, T. Establishment of a Primary Culture of Patient-derived Soft Tissue Sarcoma. J. Vis. Exp. (134), e56767, doi:10.3791/56767 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter