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Cancer Research

환자에서 파생 된 연 조직 육 종의 기본 문화 설립

doi: 10.3791/56767 Published: April 11, 2018

Summary

다음 프로토콜 환자 파생 된 연 조직 육 종 (STS)의 주 문화는의 설립에 집중 한다. 이 모델 분자 배경 및 약리 프로필 이러한 드문 악성 종양의 더 나은 이해를 우리를 도울 수 및 STS 관리를 개선 하기 위한 추가 연구에 대 한 출발점을 대표할 수 있었다.

Abstract

연 조직 sarcomas (STS) 어려운 진단, 분류 및 관리와 함께 다른 유형의 악성의 스펙트럼을 나타냅니다. 날짜 하려면,이 드문 단단한 종양의 50 이상 조직학 하위 확인 되었습니다. 따라서, 그들의 특별 한 다양성 및 낮은 발병 률,이 종양의 생물학의 우리의 이해 여전히 제한 됩니다. 환자 파생 문화 STS 이상과 약리학 연구에 이상적인 플랫폼을 나타냅니다. 우리는 따라서 종양 표본을 외과 절제술을 받은 환자에서가 걷이에서 시작 하는 STS의는 인간의 전 임상 모델을 개발 했다. STS 세포 배양 환자 파생 콜라 소화에 의해 수술 표본에서 얻은 고 여과 의해 분리. 셀 계산, 시드, 그리고 표준 단층 문화에서 14 일에 대 한 되었고 다운스트림 분석 처리. 분자 또는 제약 분석을 수행 하기 전에 STS 주 문화의 설립 cytomorphologic 기능, 그리고 가능한 경우, 평가 통해 확인 되었다 immunohistochemical 마커. 이 메서드는 1)이 제대로 탐험된 악성의 자연의 역사를 공부 하 고 2) 그들의 행동의 메커니즘에 대 한 자세한 노력에 다른 약물의 효과 테스트 하는 유용한 도구를 나타냅니다.

Introduction

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모든 고체 종양1,2, 1%에 대 한 간 엽 기원 회계의 이질적인 장애의 스펙트럼을 포함 하는 부드러운 조직 sarcomas (STS) 그리고 이상의 50의 존재를 인식 하는 새로운 세계 보건 기구 분류 다른 하위3. 이 중, 가장 일반적인 histotypes 있으며 체형 육 종 또는 liposarcoma leiomyosarcoma, 15%와 모든 성인 STS, 각각4,5의 11%를 차지. STS는 신체의 다른 부분에서 개발할 수 있습니다, 비록 사지 그리고 retroperitoneum 60%와 20%의 경우, 각각6에서 발생 하는 가장 일반적인 사이트는.

지역화 된 질병에 대 한 치료의 초석은 넓은 외과 절제술, 보조 및 neoadjuvant 요법의 혜택은 아직 명확 하지 않다 고7선택 된 경우만 간주 됩니다. 전이성 설정에서 화학 요법 치료의 표준 이지만 제한 된 결과8를 보여줍니다. STS의 분자 생물학의 더 나은 이해는 현재 차별 진단 개선, 사용 가능한 치료를 최적화 하 고 치료를 위한 새로운 표적 식별에 도움이 될.

이 컨텍스트 내에서 불멸 하 게 셀 라인9를 사용 하 여 몇 년 동안 암에 대 한 연구를 수행 하고있다. 이러한 실험 모델 일반적으로 표준 단층 지원에 배양 또는 vivo에서 이 종이 식10모델 확립 immunodeficient 설치류에 이식. 불멸 하 게 셀 라인 관리 및 매장이 쉬운 자료를는 연구 실험의 충분 한 번호를 수행할 수 있습니다 나타냅니다. 그들은, 실제로, 가장 저렴 하 고 가장 널리 전 임상 연구11에 도구를 사용.

그러나, 셀 라인 기반 암 모델도 몇 가지 제한이, 구절의 증가 함께 단층 시스템에서 예: 연장 문화 유도 phenotypic 및 유전적 부동, 만들기에 정리 주요 종양을 적은 셀 기능입니다. 또한, 셀 라인 문화 셀 상호 작용 및 신호 분자 크로스 토크는 종양의 생물 학적 행동을 모방 하 고 종양 microenvironment 특성화를 재현 하지. 이러한 문제는 전 임상 및 임상 결과12사이 기존 하는 격차의 기초를 형성 합니다.

위의 감안할 때, 환자 파생 주 문화에 관심13을증가 했다. 실제로, 악성과 정상적인 직물의 절단 암 세포 표현 형 및 따라서 종양 microenvironment의 대표는 시작 물자를 제공 하 고이 잃기의 위험을 줄여줍니다. 또한, 외과 절제술을 받은 환자에서 수확 한 신선한 종양 견본의 사용 단일 종양을 조사 하 고 다른 병 변 환자의 몸14의 동일한 부분에서 비교 하 있습니다. 위의 이유로 조직 파생 셀 문화 종양 이상과 약리학15,16,17, 특히 어떤 상용 육 종 세포 라인에 STS를 연구 하는 귀중 한 자료를 제공 제한 된18있습니다. 우리는 따라서 환자 파생 STS 1 차 셀 문화 수술 삭제 종양 조직13,,1920에서 시작을 설정 하는 방법을 최적화 합니다. 우리의 방법 뒤에 단일 세포 현 탁 액을 얻기 위해 하룻밤 효소 조직 분리 하는 작은 조직 조각으로 종양 견본 disaggregating 이루어져 있다. 다음 날, 효소 소화 신선한 문화 미디어를 추가 하 여 중지 되 고 얻은 서 스 펜 션 조직 파편, 셀 집계 및 초과 매트릭스 또는 파편을 제거 하도록 필터링 됩니다. 마지막으로, 격리 된 종양 세포의 일부분은 유리 슬라이드, 고정 및 cytomorphological, immunohistochemical 및 분자 cytogenetic 평가 STS 주 문화 설립을 확인 하기 위한 다운스트림 분석에 대 한 저장에 cytospinned (MDM2 증폭의예: 물고기 분석이 나타냅니다 잘 차별화 liposarcoma 및 dedifferentiated liposarcoma 표준 차별 진단을) 4. 나머지는 유전자 식 프로 파일링 및 약리 연구에 대 한 표준 단층 문화로 시드. 실험 낮은 사용 하 여 수행 됩니다 모든 구절을 피하기 위해 특정 암 subclones의 선택 주 문화 그리고 경험된 육 병리학 자에 의해 분석. 우리는 완전히 인간 STS ex vivo 모델13,19,20를 따라서 만들었습니다. 이 높게 다재 다능 한, 쉽게 핸들 모델의 전 임상 연구, 예를 들어 진단 및 예 후에 대 한 새로운 분자 마커를 식별 하거나 활동의 깊은 이해 및 메커니즘의 종류에 대 한 유용한 도구를 나타낼 수 STS의 관리에 사용 되는 표준 및 새로운 약물의 액션.

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Protocol

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STS 세포 대량 수술 환자 STS에서에서 excised 종양 으로부터 격리 됩니다. 프로토콜 로컬 윤리 위원회에 의해 승인 되었습니다 하 고 좋은 임상 연습 가이드라인과 헬싱키 선언에 따라 수행 됩니다. 모든 환자는 연구에 참여 하는 것 서 면된 동의 했다. 수술 표본 경험된 육 병리학 자에 의해 분석 하 고 수술의 3 시간 이내에 처리 됩니다.

1. 종양 표본 수집 및 처리:

  1. DMEM 낮은 포도 당 매체 파라핀 필름으로 밀봉의 50 mL를 100 mL 무 균 소변 용기에 육 병리학의 도움으로 종양 표본을 수집 합니다.
  2. 종양 절제 후 3 h의 최대 4 ° C에서 샘플을 저장 합니다.
  3. 메 마른 조직 문화 후드 아래 모든 다음 단계를 수행 합니다.
    1. 70% 에탄올과 후드를 소독 하 고 멸 균 장갑을 착용.
    2. 70% 에탄올 (사용 멸 균 거 즈)와 철강 inox 족집게를 소독.
    3. 파라핀 영화 소변 컨테이너에서 제거 하 고 삭제.
    4. 70% 에탄올과 소변 컨테이너의 외부 세척.
    5. 광장 페 트리 접시를 엽니다.
    6. 소변 컨테이너를 열고 멸 균된 강철 inox 핀셋을 사용 하 여 사각형 페 트리 접시에 종양 견본을 전송 합니다.
  4. PBS와 종양 표본 두 번 씻는 다.
  5. 무 균 수술 메스를 엽니다.
    1. 1-2 m m3 조각으로 종양 표본을 잘게 잘게.
    2. 2 mL 튜브에 총 샘플의 1/4을 수집 합니다.
    3. Trizol 시 약 (구입) 튜브의 1 mL을 추가 하 고 즉시-80 ° C (샘플에에서 사용 됩니다 다운스트림 분석 STS 유전자 식 계산에 대 한)에서 동결.
  6. 15 mL 튜브에 가늘게 파쇄 된 종양 재료의 나머지를 수집 합니다.
    1. 콜라의 4 개 mL를 추가 유형 I 솔루션 (콜라 유형 내가 4 µ g/mL의 농도에서 PBS에 용 해).
    2. 희석 된 콜라 DMEM 높은 문화 미디어의 4 mL와 함께 솔루션 타입 (최종 농도 콜라 종류의 나는 2 µ g/mL).
    3. 15 mL 튜브 닫고 파라핀 영화와 함께 인감.
    4. 소화를 활성화 하기 위해 15 분 교 반 조건에서 37 ° c 배양 기에서 압 연 통에 15 mL 튜브를 넣어.
    5. 15 분 후 하룻밤 실 온에서 교 반 조건 아래 압 통에 튜브를 저장 합니다.
  7. 다음 날 살 균 후드 15 mL 튜브를 넣어.
  8. 부드럽게 50 mL 튜브의 상단에 연결 된 100 µ m 살 균 필터를 통해 세포 현 탁 액을 필터링 합니다.
  9. 10% 태아 둔감 한 혈 청, 1% 글루타민, 및 1% 페니실린/스 보충 DMEM 높은 문화 미디어 필터를 세척.
  10. 100 µ m 살 균 필터, 실 온에서 5 분 동안 50 mL 튜브 및 225 x g에서 원심 분리기를 닫습니다.
  11. 튜브를 거꾸로 하 여는 상쾌한을 삭제 합니다.
  12. 다시 1-2 mL DMEM 높은 문화 미디어 10% 태아 둔감 한 혈 청, 1% 글루타민, 및 1% 페니실린/스 보충 셀을 일시 중단 합니다.
    참고: 볼륨 처리 종양 샘플의 크기에 따라 달라 집니다.
  13. Neubauer 챔버와 셀을 계산 합니다.
    1. Trypan 파랑의 1:2 샘플을 희석 하 고 희석의 10 µ L를 사용 하 여 셀의 개수.
    2. 두 번 이상 계산 하 고 셀 수집된의 평균 총 알아야 복제의 평균을 계산.
  14. 80000 셀/c m2의 조밀도에 표준 단층 문화에 플레이트 세포.
    참고: 항상 실험에 컨트롤을 포함 합니다. 각 조건에 대해 3 기술 복제를 수행 합니다. 2 생물 복제를 수행 합니다. 전 임상 약리학, 유전자 발현 및 단백질 표정 분석, 실험 한다 실시 문화 통로의 낮은 수와 함께 셀 손실 암 세포 고기를 뿌리기의 30-45 일 이내.
  15. Cytological 샘플 준비입니다.
    1. DMEM 높은 문화 미디어 10% 태아 둔감 한 혈 청, 1% 글루타민, 1% 페니실린/스와 보충의 200 µ L에 100000 세포를 수집 합니다.
    2. 피펫은 일회용 깔때기로 솔루션 (200 µ L 피 펫) 필터를 장착 하 고 유리 슬라이드와 함께 탑재.
    3. cytocentrifuge를 열고 예제를 삽입 합니다.
    4. 18.6 x g 20 분에 cytocentrifuge를 실행 합니다.
    5. 필터를 장착 하는 깔때기를 삭제 합니다.
    6. 10 분 뒤에 5 분에 대 한 클로 프롬 아세톤에 슬라이드를 수정.
    7. -20 ° c.에 슬라이드 저장
      참고: 해 동 하 고 얼룩이 지기 전에 샘플 화 얼룩 제조업체의 지침에 따라 수행. 3 기술 복제를 준비 합니다.

2. STS 세포 배양:

  1. 일주일에 한 번 (DMEM 높은 문화 미디어 10% 태아 둔감 한 혈 청, 1% 글루타민과 1% 페니실린/스 보충) 미디어를 변경 합니다.
    1. 200-1000 µ L 피 펫을 사용 하 여 문화 매체를 버리십시오.
    2. 200-1000 µ L 피 펫을 사용 하 여 새로운 신선한 매체를 추가 합니다.
    3. 셀 통로:
      1. 합류는 약 90% 세포 분리:
        참고: STS 셀 문화 증폭 문화 조건에 따라 일주일에 한 번 수행 되어야 한다.
      2. 폐기 매체, PBS로 세척 및 트립 신 1의 2-3 mL를 추가 PBS에 x
        참고: 트립 신 사용의 볼륨 얻은 배양된 세포의 크기에 따라 달라 집니다.
      3. 37 ° c.에 3-5 분에 대 한 셀을 품 어
      4. 200-1000 µ L 피 펫을 사용 하 여 접시에서 분리 된 세포를 수집 합니다.
      5. 15 mL 튜브로 분리 된 세포를 플라스틱 고 DMEM 높은 문화 미디어 10% 태아 둔감 한 혈 청, 1% 글루타민, 효소 반응을 중지 하 1% 페니실린/스와 보충의 4 mL를 추가 합니다.
      6. 실 온에서 5 분에 대 한 225 x g에서 원심.
      7. 폐기는 상쾌한.
      8. 다시 10% 태아 둔감 한 혈 청, 1% 글루타민, 및 1% 페니실린/스 보충 DMEM 높은 문화 미디어의 1 mL을 추가 하 여 셀 펠 릿을 일시 중단 합니다.
      9. 새로운 문화 접시 또는 제조업체의 지침에 따라 최종 볼륨을 플라스 크에 세포 씨앗
        참고: 1:3 보다는 더 많은 세포를 분할 하지 않습니다.

3. 다운스트림 분석:

참고: 다른 실험의 다양 한 밖으로이 모델 (아래 참조)를 사용 하 여 수행할 수 있습니다. 그것은, 그러므로, 연구의 설계 단계는 분석 샘플 및 복제의 충분 한 숫자를 준비할 수 있도록 수행 됩니다 결정 하는 중요 한.

  1. MTT 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium 브 로마 이드 등 확산 분석 실험
  2. Apoptotic 분석 터미널 deoxynucleotidyl 전이 효소 (TdT) 같은 닉 끝 라벨 (TUNEL) 분석 결과
  3. Immunohistochemical 분석
  4. 유전자 표정 분석
  5. 서쪽 오 점 분석
  6. ELISA 분석 결과
  7. 형광 활성화 된 세포 분류 (FACS) 분석
  8. 이 종이 식 모델 vivo에서

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Representative Results

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우리 설계 환자 파생 된 연 조직 육 종의 기본 문화 설립 여기 한 특정 STS histotype13에서 얻은 결과의 예를 보고 하는 간단한 방법. 프로토콜, 잘 분화 liposarcoma를 포함 하 여 다른 STS histotypes의 기본 문화의 설립을 위해 사용 되었다 liposarcoma, myxoid liposarcoma, pleomorphic liposarcoma, myxofibrosarcoma, undifferentiated dedifferentiated pleomorphic 육 종, 요점, 및 desmoid fibromatosis입니다.

주 문화의 설립에 대 한 성공률 수술 표본 환자 화학 요법, 방사선 요법으로 치료 또는 치료 하지에서 파생 된에 대 한 54% (24 STS 외과 샘플에서 13 주 문화)를 했다. 반대로, 그것은 치료 되지 않는 환자 에서만에서 파생 된 외과 샘플 72% (18 STS 외과 샘플에서 13 주 문화) 이었다.

종양 세포는 54 세의 환자에서 수술로 제거는 잘 differentiated/dedifferentiated liposarcoma (ALT/DDLPS)에서 분리 했다. MDM2 증폭 분석, 현재 ALT/DDLPS의 표준 차동 진단을 수행 하 고 경험된 육 병리학 자에 의해 검토를 양성, ALT/DDLPS 병 변 (그림 1A)의 존재를 확인 했다. 격리 된 종양 세포에서 MDM2 증폭의 cytological 분석 확인 한 환자에서 파생 된 ALT/DDLPS 주 문화 (배양된 세포의 94.6 %MDM2 증폭에 대 한 긍정적인 했다)의 설립 (그림 1B). 주 문화 표준 단층 문화에서 후에 계속 하 고 세포 생존 능력은 MTT와 Tunel 모니터링 분석 결과.

이 모델 우리 문화의 ALT/DDLPS 기본 ifosfamide (IFO), 에피루비신 (EPI), IFO + 피, trabectedin (TRABE), 조합 ALT/DDLPS의 치료에 대 한 임상 평가 또는 현재 사용 하는 다른 약물에 감도 테스트를 활성화 그리고 eribulin (에 리), MTT 분석 결과 사용 하 여 수행. 결과 화학 요법 (그림 2A) 문화의 감도를 확인 했다. 가장 적극적인 치료 IFO + 피, 고급 또는 전이성 ALT/DDLPS에 사용 되는 첫 줄 치료 했다. 또한, 세포 형태학 약물 노출, ighlighting 형태학 변경 제어 및 세포 독성 분석 결과 (그림 2B)의 결과 관하여 주 문화에서 시험 되었다. 프로토콜에서 설명 했 듯이이 모델 여러 다운스트림 분석을 수행할 수 있습니다. 그림 3 방법의 도식 표현 및 시간 표시 막대는 변환 결과 얻기 위해 실험을 수행 합니다.

Figure 1
그림 1 . ALT/DDLPS의 기본 문화 환자 파생의 설립. A) 에서 제자리 교 잡 (물고기) 환자의 조직 표본 (100 X 이미지)에서 MDM2 증폭을 검색 하기 위해 수행. B) 에서 제자리 교 잡 (물고기) 수행 주 문화 (100 배 확대)에서 MDM2 증폭을 감지 하. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

Figure 2
그림 2 . ALT/DDLPS 주 문화에 화학요법입니다. A) 셀으로 치료 했다: ifosfamide (IFO), 에피루비신 (EPI), IFO + 피, trabectedin (TRABE), 및 eribulin (에 리). 3 개의 독립적인 복제는 각 실험에 대 한 수행 했다. 데이터 표시 됩니다 평균 ± 표준 오차 (SE)로 명시 된 바와 같이, 복제의 수를 나타내는 n. 그룹 간의 차이 양측 스튜던트 t에 의해 평가 됐다-테스트, * p < 0.05. B) 약물 노출 (2 배 확대) 후 이미지의 ALT/DDLPS 주 문화. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

Figure 3
그림 3 : STS 주 문화 모델. 타임 라인 및 가능한 다운스트림 분석을 포함 하 여 STS 주 문화의 전 임상 모델의 도식 적인 표현입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

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Discussion

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잘 정의 된 전 임상 모델 종양의 분자 배경 명료, 가난한 예 후를 예측 하 고 암 환자에 대 한 새로운 치료 전략을 개발 필요 합니다. 이것은 특히 STS 등 희귀 한 종양에 대 한 중요 한 형태에서 그 높은, 공격적인 잠재적인, 및 임상 행동 STS 생물학 및 환자 관리21의 우리의 이해에 도전. 또한, 사용할 수 있는 몇 가지 상업 육 종 셀 라인 엽 종양18의이 그룹에 대 한 전 임상 조사를 제한 합니다. Ex vivo 모델 따라서 STS에 대 한 귀중 한 연구 리소스를 나타냅니다. 우리는 모델을 완벽 하 게 인간의 체 외에 수술로 절제 종양 조직 (그림 3)에서 시작 하는 STS의 개발. 방법의 최적화 하는 동안 몇 가지 중요 한 문제는 해결 되었고 해결. 첫 번째 문제 우려 수술 치료 및 샘플 처리 사이 시간 간격. 처음에, 종양 표본을 특정 시간 후에 우리의 생물 과학 실험실에 도착, 그들은 4 ° C에서 밤새 껏 저장 되었고 날 처리. 이 샘플에서 고립 된 STS 셀 낮은 확산 활동 및 표준 단층 문화에서 가난한 생존 전시. 이 수 부분에 사실에 기 인할 수는 전체 종양 견본 처리 되기 전에 소변 컨테이너에 시간의 연장된 기간 동안 유지 됩니다. 우리는 따라서 기본 문화 계속 표준 단층 문화에서 증식 하 고 좋은 생존 능력을 전시 수 있도록 수술 후 최대 3 h 처리 하는 샘플의 시작 시간을 수정 합니다. 우리는 또한 셀 피의 프로세스 최적화: 작은 균질 조직 파편 효소 소화를 촉진 하는 데 필요한 그리고이 메스를 사용 하 여 달성 되었다. 또한, 프로토콜은 다양 한 크기의 표본을 협력, 비록의 표본에서 시작 주 문화의 설립 제한 크기 (< 2 cm)를 달성 하기 위해 더 어렵습니다. 콜라 농도 너무 높은 anenzyme 농도 STS 주 문화에서 phenotypic 변경 또는 종양 세포 생존에 있는 감소에 지도 하는 세포 스트레스를 일으킬 수 있기 때문에 또 다른 중요 한 문제 이었다. 좋은 효소 소화는 매트릭스 자료 및 파편에서 세포를 분리 해야 합니다. 우리는 마침내 소화 단계에 사용 하는 효소 농도 최적화. 또한, 세포 스트레스를 제한 하 고 격리 단계 STS 세포에 영양분을 제공 하 우리 다시 중단 효소 배양 PBS 등 다른 시 약 대신에. 마지막으로, liposarcoma 및 myxofibrosarcoma 같은 다른 STS 주 문화에서 수행 하는 여러 실험 시간과 증가 감도 화학 요법13,20를 통해 유전자 발현에 변화를 밝혔다. 이러한 발견은 환자 파생 STS 셀의 장기 문화에 기인 구절, 모두는 phenotypic 유도 및 유전적 부동의 증가 함께 단층 시스템에서 이다. 종양 조직, 이전 표시를 정리 하는 시간이 지남에 따라이 문화 시스템의 감소 신뢰성 모델22,23 ex vivo의 가장 중요 한 제한 중 하나를 나타냅니다. 우리는 따라서 (시드 종양 세포의 30 ~ 45 일) 내에서 실험을 수행 하는 시간을 줄여 고 낮은 통로 문화 재현 및 변환 결과를 얻을 사용 하 여 프로토콜 최적화. 또한, 주 문화를 얼 수 있다, 하지만 그들의 후속 생존 종양 위치, STS histotype, 외과 견본 및 수행 문화 구절의 번호를 포함 한 여러 요인에 따라.

우리의 시스템은 다양 한 장점, 다른 murine 기반 육 종 셀 선 모델24,25,,2627달리 완전히 인간의 전 임상 모델 이다. 또한, STS 주 문화의 설립의 확인은 cytomorphological, immunohistochemical 및 분자 cytogenetic 평가 함으로써, 하는 동안 경험된 육의 지원으로 병리학 자, 필수입니다 우리의 프로토콜에 이것은 항상 다른 STS 주 문화 모델에 대 한 사실이 아니다. 일부 서류에 수술 표본에서 발견 하는 셀의 다운스트림 분석 진단 STS 셀 비율 주 문화28에 확인 없이 수행 되었다. 우리의 시스템은 또한 다재 다능 한, 재현 하 고 다양 한 실험을 수행 하는 데 사용 될 수 있습니다. 또한, 시드, 셀 및 외부 자극 응답 특정 기능을 공부 하 고 수정할 수 있습니다. 이 모델의 개발 조사 환자 파생 STS 셀 현재 사용 하는 다른 약물에 또는 STS의 치료에 대 한 임상 평가의 감도 사용할 수 있습니다. 이 모델, 따라서, 치료 반응 예측을 위한 중요 한 전 임상 도구 나타내고, 추가 최적화, 잠재적으로 개인된 치료를 개선 하기 위해 사용 될 수 있습니다. 그것은 또한 진단 또는 전조 분자 마커, 몇 가지 특정 바이오 마커를 사용할 수 있는 STS에서 특히 중요 한 식별 하기 위해 사용 될 수 있습니다. 프로토콜의 한계 중 하나는 기본 문화권의 설립 후 다운스트림 분석을 수행할 수 상대적으로 짧은 시간 이다. 프로토콜은 유전자 식 프로 파일링 및 클러스터링 종양 및 종양 조직,이 모방 하는 기본 culture의 용량을 평가 하기 위해 시간이 지남에 같은 환자에서 파생 된 기본 문화권에 대 한 분석을 수행 하 여 향상 시킬 수 있습니다. 특히 위해 그 STS histotypes는 진단 마커는 사용할 수 없습니다. 이러한 분석 추가 획득된 문화에 있는 세포 종양 샘플에서 직접 파생에서 어떻게 다른 지 하 또한 도울 것입니다.

결론적으로, 강력한 전 임상 모델의 설립은 종양 병 리에 대 한 우리의 이해를 필수적입니다. 우리는 우리의 모델 STS의 빈약한 예 지 및 새로운 치료 전략의 식별에 기여할 것입니다 하는 분자 메커니즘을 밝히기 위해서 도움이 될 것입니다 믿습니다.

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Disclosures

저자는 공개 관심의 없습니다 충돌 있다.

Acknowledgments

저자 편집에 Gráinne Tierney를 감사 하 고 싶습니다.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
DMEM High Glucose EuroClone ECB7501L
Fetal bovine serum EuroClone ECS0180D
Glutamine Gibco 25030-024
Paraformaldehyde 4% aqueous solution, EM grade Electron Microscopy Sciences 157-4-100
Penicillin streptomycin Gibco 15140122
Triazol reagent Ambion Life-Technologies 15596018
Trypsin EuroClone ECB3052D

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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환자에서 파생 된 연 조직 육 종의 기본 문화 설립
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De Vita, A., Mercatali, L., Miserocchi, G., Liverani, C., Spadazzi, C., Recine, F., Bongiovanni, A., Pieri, F., Cavaliere, D., Fausti, V., Amadori, D., Ibrahim, T. Establishment of a Primary Culture of Patient-derived Soft Tissue Sarcoma. J. Vis. Exp. (134), e56767, doi:10.3791/56767 (2018).More

De Vita, A., Mercatali, L., Miserocchi, G., Liverani, C., Spadazzi, C., Recine, F., Bongiovanni, A., Pieri, F., Cavaliere, D., Fausti, V., Amadori, D., Ibrahim, T. Establishment of a Primary Culture of Patient-derived Soft Tissue Sarcoma. J. Vis. Exp. (134), e56767, doi:10.3791/56767 (2018).

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