Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Developmental Biology

Dissektion og farvning af Drosophila puppe æggestokke

Published: March 2, 2018 doi: 10.3791/56779

Summary

Drosophila æggestokken er en fremragende modelsystem til at undersøge stamceller niche udvikling. Om metoder til dissekere larve og voksen æggestokke er blevet offentliggjort, kræver puppe æggestokken dissektioner forskellige teknikker, der ikke er blevet offentliggjort i detaljer. Her skitsere vi en protokol til dissekere, farvning og montering puppe æggestokke.

Abstract

I modsætning til voksne Drosophila æggestokke, puppe æggestokkene er relativt vanskeligt at få adgang til og undersøge på grund af deres lille størrelse, translucence og omslutter inden en puppe sagen. Udfordringen at dissekere puppe æggestokkene ligger også i deres fysiske placering i puppe: æggestokkene er omgivet af fedt kroppens celler inde i puppe maven, og disse fedtceller skal fjernes for at give mulighed for korrekt antistoffarvning. For at overvinde disse udfordringer, udnytter denne protokol tilpassede Pasteur pipets hen til uddrag fedt kroppens celler fra puppe maven. Desuden, en chambered daekglas er brugt i stedet for et microcentrifuge rør under farvning processen for at forbedre synligheden af pupper. Men trods disse og andre fordele af de værktøjer, der anvendes i denne protokol, vellykket gennemførelse af disse teknikker kan stadig indebære flere dage i praksis på grund af den lille størrelse af puppe æggestokke. De teknikker, der er skitseret i denne protokol kunne anvendes til tid kursus eksperimenter, hvor æggestokkene er analyseret i forskellige faser af pupal udvikling.

Introduction

Forskning i stamceller ved hjælp af Drosophila æggestokke har meget udvidet siden den første dokumentation af en stamcelle niche1,2,3,4. Efter udviklingen af afstamning sporingen genetiske værktøjer, Drosophila æggestokken dissektioner har været almindeligt anvendt til at undersøge stamceller lineages og signalering veje, der regulerer stamcelle vedligeholdelse, spredning og skæbne i stamceller niche. Kendskab til disse signaling veje kan give indsigt i potentielle årsager til kræft, der stammer fra afvigende stamcelle aktivitet5,6,7. Det har også for nylig blevet vist, at somatiske stamceller i Drosophila æggestokken, kendt som follikel stamceller (FSCs), stærkt ligner mammale tarm stamceller i mange aspekter af deres organisation8. Af denne grund er Drosophila æggestokkene en meget nyttig modelsystem til at undersøge stamceller adfærd.

Mens larve og voksen æggestokkene tilbyder spor til tidlig udvikling af stamceller og sidste stamcelle organisation i niche, henholdsvis, er puppe æggestokken en mellemliggende struktur, hvor kønscelleoverførsel og somatiske celler omorganisere og etablere deres identiteter 9 , 10. selvom adskillige studier har undersøgt aspekter af væv udviklingen i puppe æggestokken10,11,12,13, stadig spørgsmål om differentiering og rumlige organisation af æggestokkene celletyper under puppe udvikling. Navnlig, opstår specifikation af FSCs i denne periode. Denne protokol beskriver en metode til at dissekere og farvning puppe æggestokkene på ønskede tidspunkter – en teknik, der kan bruges i gang kursus eksperimenter, at analysere puppe æggestokken udvikling i detaljer fra den larve til det voksne Stadium.

For at tage højde for den lille størrelse, translucence og utilgængelighed i puppe æggestokkene inden for puppe maven, denne protokol benytter værktøjer såsom en custom-made tynd spids Pasteur pipette til at fjerne abdominal fedt kropsvæv blokerer antistof adgang til den æggestokkene. En klar, chambered daekglas anvendes under antistof farvning tilbyder større synlighed af pupper og en blidere platform for vuggende æggestokkene på en "Nutator." Baseret på en protokol for larver æggestokken dissektioner af Maimon og Gilboas14, en relativt høj koncentration af Triton X-100 har været ansat i de indledende trin i proceduren farvning at maksimere cellemembranen permeabilization og antistof adgang til den æggestokkene celler.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. EggLaying

  1. Kombinere cirka ti mand og femten kvindelige voksne Drosophila fluer af den ønskede genotype i et hætteglas med normal rige flyve mad suppleret med gær. For at undgå overbefolkning hætteglasset, tillade skytterne hunner til at lægge æg længere end 2-4 h14.
  2. Overføre voksne fra hætteglasset ind i en ny hætteglas ved at trykke på hætteglasset åbning mod en forskellige hætteglas med flyve mad. Tillad æg til at udvikle sig til larver ved stuetemperatur i 3-4 dage.

2. valg af kvindelige larver

  1. Brug en fugtig fine pensel med bløde børster, lave en rullende bevægelse med pensel langs væggen af hætteglasset at overføre vandrer tredje-instar larver fra hætteglasset til et glas godt fyldt til randen med 1 x fosfatbufferet saltopløsning (PBS). Vask madrester ud larverne ved at overføre dem til en anden godt fyldt med 1 x PBS.
  2. Adskille de mandlige og kvindelige larver med pincet. Identificere de mandlige larver af et par store, runde, og gennemskinnelig testiklerne indlejret i fedt kroppen på den laterale side af kroppen cirka to-tredjedele ned fra dens forreste ende15. Kvindelige larver er gennemsnitligt større, mindre gennemsigtig end mænd, og har meget mindre gonaderne, der er vanskeligere at opdage.
  3. Vælg mod mandlige larver at indsamle kvindelige larver. Indsamle mindst ti kvinder fra brønden. Placer de kvindelige larver i et særskilt godt fyldt med 1 x PBS.
  4. Brug pincet til at overføre de kvindelige larver forsigtigt ind i en ny hætteglas med friske flyve mad suppleret med gær.
  5. Sted hætteglas med de kvindelige larver i et mørkt sted at lette pupariation16. Hele dagen, overvåge larver for pupariation. Som hver larve immobiliseres og udvikler sig til en prepupa, cirkel prepupa mod hætteglasset og optage den omtrentlige tid når det først danner i en prepupa. Identificere prepupae af fremspring i forreste Spirakler og timing af puparium dannelse17. Tillade prepupae at udvikle til det ønskede tidspunkt (målt i timer efter puparium dannelse, APF).
    Bemærk: Alle dyr, som underkastes puparium dannelse inden for et ca. 10 h interval kan betragtes som en prepupa. Den puppe stadie begynder ca 12 timer efter puparium dannelse efter en intern molt har fundet sted.

3. forberedelse pupper af antistoffarvning

  1. Danne et tyndt glas pipette anvendes i senere trin til at rydde ud i puppe fedt kroppen.
    1. Smelt glas spidsen af en Pasteur pipette over en bunsenbrænder. Da glasset smelter, bruge pincet til at trække tip vandret væk fra resten af pipette til at danne en tyndere tip.
    2. Efter afkøling, bryde ud en lille del af pipette tip til at danne en pæn rund åbning. Vedhæfte en pære til anden enden af en pipette.
    3. Indlæse pipette med 1 x PBS.
  2. For at høste de pupper, der klæbes fast til væggen af hætteglasset, anvende en lille dråbe vand langs zonen kontakt mellem puppe og hætteglas. Vente 1-2 min. at lade proteinet limen opløses før forsigtigt løftes puppe ud af væggen med en fugtig fine pensel. Overføre puppe til et godt glas fyldt med 1 x PBS. Afsætte en enkelt brønd pr. puppe at undgå overbefolkning i brønden.
  3. Mens fatte den bageste ende af puppe med et par pincet, forsigtigt rive den forreste del af puppe tilfældet med et andet par indtil hovedet af puppe er synlige.
  4. Greb den forreste-mest spids af puppe hovedet med pincet og træk forsigtigt puppe ud af sin puppe sag.
    NOTE: En del af selve fedt kan løber ud under denne proces.
  5. Adskille og kassér den forreste halvdel af puppe fra den bageste halvdel, indtil kun de abdominale sæk forbliver.
  6. Ekstrakt fedt kroppens celler fra den abdominale sæk.
    1. Forstå abdominal sækken mod bunden af brønden med tang i den ene hånd mens du holder den tynde glas afpipetteres fyldt med 1 x PBS i en anden hånd.
    2. Formålet med tynd pipette spidsen mod åbningen af den sæk og langsomt afpipetteres 1 x PBS i maven til at vaske væk fedt kroppens celler omkring puppe æggestokkene.
      Bemærk: Æggestokkene er et par små, gennemskinnelige, tværstribede og aflange strukturer, der skal forblive inde den abdominale sæk.
    3. Vaske væk fedt kroppen celler, indtil mindst to tredjedele af fedt kroppen er væk, eller æggestokkene er synlige nær åbningen af den abdominale sæk. Det er meget vigtigt at udføre dette trin langsomt for ikke at vaske æggestokkene ud af maven ved et uheld.
  7. Undersøge godt at tjekke hvis æggestokkene har spildt ud under fedt krop celle vask. Hvis æggestokkene ikke er synlige inde i brønden, bør de har opholdt sig i maven. Hvis æggestokkene er kommet, placere en ny puppe i brønden og Gentag dette trin.
  8. Overføre maven ind i en klar daekglas kammer fyldt med fiksering buffer (1 x PBS, 4% PARAFORMALDEHYD) og låget lægges på toppen. For at sikre et tilstrækkeligt antal æggestokkene modstå farvning og montering proces, dissekere mere æggestokkene end nødvendigt.
    Forsigtig: Fiksering bufferen indeholder PARAFORMALDEHYD, som er giftigt. Venligst bære passende beskyttelse som handsker, sikkerhedsbriller, osv.

4. Immunohistokemi

  1. Hele farvning processen, skal du bruge pincet til at forsigtigt skubbe ned enhver flydende æggestokkene til bunden af dækslet glas godt at sikre, at æggestokkene er helt nedsænket i antistof løsning.
  2. Strimler af dobbeltklæbende tape på den flade del af en Nutator og derefter placere den chambered daekglas på den selvklæbende overflade.
  3. Inkuber æggestokkene i fiksering buffer fra trin 3.7 i 15 min. ved stuetemperatur.
  4. Skyl æggestokkene tre gange i 1 x PBS med 1% Triton X-100 for 5, 10 og 45 min (1 h i alt), henholdsvis for at tillade grundig permeabilization.
  5. Blokere æggestokkene i 10% normal ged serum i 1 x PBS med 0,5% Triton X-100 i 30 min.
  6. Inkuber æggestokkene natten over i 600 µL af primære antistof valg fortyndet til den passende koncentration i 1 x PBS med 0,5% Triton X-100 ved 4 ° C.
  7. Skyl æggestokkene tre gange i 5 min i 1 x PBS med 0,5% Triton X-100.
  8. Inkuber æggestokkene for 2 h i 600 µL af sekundær antistof valg fortyndet til den passende koncentration i 1 x PBS med 0,5% Triton X-100 ved stuetemperatur.
  9. Skyl æggestokkene to gange for 5 min i 1 x PBS med 0,5% Triton X-100 og en gang for 5 min i 1 x PBS.

5. dissekere og montering puppe æggestokke

  1. Anbring en lille dråbe af 1 x PBS på et objektglas. Brug pincet til at overføre den abdominale sæk fra den chambered daekglas til et glas godt fyldt med 1 x PBS. Afsætte en enkelt brønd pr. puppe at undgå overbefolkning i brønden.
  2. Rive fra hinanden den abdominale sæk og eventuelle resterende fedt kroppen med pincet.
    Bemærk: Æggestokke, som er et par små, gennemskinnelige, tværstribede og aflange strukturer, skal være synlig inde i brønden. Æggestokkene er ofte tæt omgivet af fedt kroppen, så det er vigtigt at sikre alle fedt kroppen grundigt er revet fra hinanden.
  3. Overføre æggestokkene fra brønden til dråbe af 1 x PBS på mikroskopet glide af grådige midten af æggestokkene mellem spidsen af pincet. Det er meget vigtigt at bruge en fast greb uden at klemme æggestokkene for ikke at miste eller ødelægge dem under overførslen. Tilføj et par dråber 1 x PBS til diaset, når løsningen tørrer med tiden.
  4. Når alle æggestokke er blevet dissekeret og overført til objektglas, pipette 40 µL af montering medium på en 22 mm x 22 mm coverslip og sted coverslip forsigtigt på toppen af æggestokkene. Lad dias tørre natten før billeddannelse.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Vellykket gennemførelse af denne procedure bør resultere i klare antistoffarvning, der afslører den struktur og cellulære organisation af en Drosophila puppe æggestokken. Immunhistokemi skitseret i denne protokol kan bruges til at identificere celletyper almindeligt farves i larve og voksen æggestokke. Celler puppe stængelens afledt af swarm celler18 (beskrevet af Fasciclin III i hvid) er vist i figur 3. Ud over at fremhæve den cellulære organisation af puppe æggestokke, kan antistof farvning specifikke for celledelingen (såsom phospho-Histon H3 farvning i figur 3, vist i grøn) bruges til at studere celledeling mønstre af stamceller og andre mitotically aktive celletyper. Hvis fluorescerende antistof signaler er svag når undersøges under en Konfokal mikroskop, er det sandsynligt, at æggestokkene ikke var tilstrækkeligt udsat for antistoffer på grund af utilstrækkelig fedt kroppen udvinding i puppe maven. En anden mulighed kan være at den puppe sæk åbning kollapsede under farvning.

Figure 1
Figur 1: Side-by-side sammenligning af mand vs kvinde larver. (A) mandlige larve i PBS løsning identificeret ved et par af gennemskinnelig, aflange testiklerne placeret omtrent to tredjedele ned fra sin forreste ende. (B) kvindelige larve i PBS løsning identificeret ved fravær af store, gennemsigtige testiklerne. Skalere barer = 2 mm. venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 2
Figur 2: dissektion af puppe æggestokkene efter Immunhistokemi. (A) billede af et par af stribet, gennemskinnelige puppe æggestokke (røde cirkler) der er blevet fjernet fra den abdominale sæk ved Immunohistokemi farvning. Puppe æggestokke var dissekeret ca 48 h APF. De resterende fedt celler i kroppen (sort pil), ikke blev udtrukket i trin 3.6 er spredt i PBS løsning. (B) billede af en enkelt puppe æggestokken i PBS løsning dissekeret ca 48 h APF. Skalere barer = 100 µm. venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 3
Figur 3: farvede vildtype puppe æggestokken dissekeret 48 timer APF. Billedet blev erhvervet ved hjælp af en Konfokal mikroskop. Wnt pathway reporter, Fz3 RFP8 (rød), udtrykkes i forreste somatiske celler. Antistoffer rettet mod Fasciclin III (hvid) skitserer celler af den puppe stilk. Kerner blev counterstained med DAPI (blå). Phospho-Histon H3 farvning (grøn) fremhæver celler under mitosen. Diagonale hvide linjer angiver kanterne af det oprindelige billede. Skalalinjen = 20 µm. venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Det mest vigtige og vanskelige skridt af denne protokol omfatter forberedelse af puppe æggestokke før fiksering. For at sikre, at æggestokkene, små og begravet af fedt kroppens celler inde i puppe maven, farves tilstrækkeligt med antistoffer, er det vigtigt at ikke kun rive en stor åbning i den abdominal sæk med pincet, men også ekstrakt fedt kroppens celler, der hæmmer den æggestokkene fra antistoffer. Vellykket gennemførelse af dette trin kræver anvendelsen af subtil pres på Pasteur afpipetteres pære mens vaske fedt kroppens celler ud af den abdominale sæk (f.eks. 1 – 2 fedt kroppens celler skal lade maven pr. sekund under dette trin). Undladelse af at bruge blide kraft vil sandsynligvis forårsage æggestokkene til at spill ud af maven og ind i glasset godt. Fordi æggestokkene selv er små, gennemsigtig og svært at forstå med pincet, skal de forblive inden for abdominal sækken under hele farvnings-proceduren. Således, hvis æggestokkene kommer ud af maven under trinnet forberedelse før fiksering, det ville være yderst vanskeligt at hente, bejdse og montere dem i deres isolerede form under protokollen.

Fedt kroppens celler, som primært består af lipid dråber, er triglycerid opbevaring organeller almindeligt forekommende i insekter, herunder Drosophila melanogaster19,20. Da nogle fedt kroppens celler forbliver i puppe maven på fiksering, udnytter denne protokol relativt høje Triton X-100 koncentrationer i de tre første PBS skylninger til at udtrække så mange lipider som muligt fra begge cell membranes i æggestokkene og nogen fede levn vævet omkring æggestokkene. Som det fremgår af de lyse Fasciclin III cellemembranen protein antistof farvning i figur 3, bruger 1 x PBS med 1% Triton X-100 under de første tre skylninger fungerer godt for at inddæmme uddrag lipider samtidig stadig bevare integriteten af cellen membran.

Når fedt kroppen har været udvundet, er det andet mest vigtige skridt at sørge for æggestokkene forbliver i den abdominal sæk i hele fiksering og antistoffarvning. Det er nyttigt at placere dem inde i et klart, chambered daekglas snarere end et microcentrifuge rør til klarere synlighed af de puppe underliv under farvning. Bruge tang til at forsigtigt skubbe de abdominale sække til kammerets bund, så abdominal væv i sækken er helt omspændt af antistof løsning.

Endelig, stor omhu bør tages til at overføre æggestokkene fra den abdominale sæk til objektglas under montering proces. Selv æggestokkene er lille og svært at forstå med pincet uden at få dem i klemme, er den bedste måde at overføre dem til diaset af fast greb i midten af æggestokkene. De forbliver strukturelt intakt engang placeret på diaset. Det er muligt at dissekere æggestokke fra maven direkte på objektglas til at undgå at miste æggestokken, men dette kan føre til en stor mængde af montering medium på diaset og kunne komplicere montering proces.

Begrænsningerne i denne protokol omfatter mængden tid den hele dissektion proces kan tage, det potentielt lavt udbytte godt farvede æggestokke, og behændighed kræves for at fuldføre hvert trin. Fordi puppe æggestokkene kræver omfattende fedt kroppen udvinding, kan forberede fiksering en enkelt puppe tage alt fra 10 til 20 min. Desuden, for at sikre et tilstrækkeligt antal æggestokkene modstå hele farvning procedure, er det bedst at dissekere mere pupper end nødvendigt for eksperimentet. Det betyder, at en stor del af tiden kan bruges blot på forbereder pupper selv før trinnet fiksering.

Puppe æggestokken dissektioner adskiller sig i vid udstrækning fra protokoller for larver14 og voksen21 æggestokken dissektioner. Encasement af æggestokkene i en puppe case præsenterer unikke udfordringer, der er opfyldt af de værktøjer, der anvendes i denne protokol. Disse metoder kan være anvendt til afstamning sporingen eksperimenter til at bestemme, hvornår FSCs og Escort celler er angivet i puppe æggestokken over tid. En modificeret version af denne protokol, der involverer insekt celle Kulturmedier kunne også potentielt bruges til at dissekere puppe æggestokkene for ex vivo live imaging analyse.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ingen interessekonflikter at erklære.

Acknowledgments

Denne forskning blev støttet af National Institutes of Health (RO1 GM079351 til D.K.). Vi takker Dorothea Godt for hendes nyttige råd om puppe æggestokken dissektioner baseret på hendes oprindelige protokol. Vi takker også Amy Reilein for hendes hjælp og kommentarer til manuskriptet.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Dumont #5 Forceps, biology Fine Scientific Tools 11252-20
Nunc Lab-Tek Chambered Coverglass Thermo Fisher Scientific 155383
Dissection microscope Nikon SMZ-10A
Confocal Microscope Carl Zeiss LSM 700
Analysis software Carl Zeiss Zen
9 Depression Glass Spot Plates Pyrex 7220-85
Pasteur pipet Fisher Scientific 13-678-6B
Pasteur pipet bulb Various vendors
Bunsen burner Various vendors
Fisherfinest Premium Frosted Microscope Slides Thermo Fisher Scientific 12-544-2
22 x 22 mm glass coverslips No 1 VWR 48366-067
Dapi Fluoromount-G SouthernBiotech 0100-20
Double-sided tape Scotch
Nutator Clay Adams
Fine brush #0, #3-#5 Various vendors
Gilson Pipetman Starter Kit Thomas Scientific F167300 Contains p20, p200, p1000 pipettors
16% Paraformaldehyde Electron Microscopy Sciences 15710 Dilute to 4% paraformaldehyde in 1x PBS
Triton Sigma-Aldrich 9002-93-1
10x PBS Ambion AM9624 Dilute to 1x PBS
Normal Goat Serum Jackson ImmunoResearch 5000121 Dilute to 10% normal goat serum in PBST with 0.5% Triton concentration
Primary antibodies (in protocol: 7G10 anti-Fasciclin III diluted 1:250, rabbit anti-phosphohistone H3 diluted 1:1000) Various vendors (in protocol: Developmental Studies Hybridoma Bank, Millipore) Dilute in PBST with 0.5% Triton concentration
Secondary antibodies (in protocol: Alexa-546, FITC-conjugated anti-rabbit serum) Various vendors (in protocol: Molecular Probes, Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.) Dilute in PBST with 0.5% Triton concentration
Fly vials Denville Scientific V9406
Cotton Balls, For Wide Vials Genesee Scientific 51-102W
Yeast, Bakers Dried Active MP Biomedicals 101400
Fly food Produced in laboratory Mixture of water, brewer's yeast, cornmeal, molasses, agar, EtOH, penicillin, methyl 4-hydrobenzoate, and propionic acid
Male and female Drosophila flies (genotype used in protocol: yw; P[Fz3-RFP, w+]/TM2) Bloomington Drosophila Stock Center

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Losick, V., Morris, L., Fox, D., Spradling, A. Drosophila Stem Cell Niches: A Decade of Discovery Suggests a United View of Stem Cell Regulation. Dev Cell. 21 (1), 159-171 (2011).
  2. Kirilly, D., Xie, T. The Drosophila ovary: an active stem cell community. Cell Res. 17 (1), 15-25 (2007).
  3. Dansereau, D. A., Lasko, P. The Development of Germline Stem Cells in Drosophila. Method Mol Biol. 450, 3-26 (2008).
  4. Pearson, J., López-Onieva, L., Rojas-Ríos, P., Gonzáles-Reyes, A. Recent advances in Drosophila stem cell biology. Int J Dev Biol. 53, 1329-1339 (2009).
  5. Arwert, E. N., Hoste, E., Watt, F. M. Epithelial stem cells, wound healing and cancer. Nat Rev Cancer. 12 (3), 170-180 (2012).
  6. Barker, N., et al. Crypt stem cells as the cells-of-origin of intestinal cancer. Nature. 457 (7229), 608-611 (2009).
  7. Daley, G. Q. Chronic myeloid leukemia: proving ground for cancer stem cells. Cell. 119 (3), 314-316 (2004).
  8. Reilein, A., et al. Alternative direct stem cell derivatives defined by stem cell location and graded Wnt signaling. Nat Cell Biol. 19 (5), 433-444 (2017).
  9. Eliazer, S., Buszczack, M. Finding a niche: studies from the Drosophila ovary. Stem Cell Res Ther. 2 (6), 45 (2011).
  10. Godt, D., Laski, F. A. Mechanisms of cell rearrangement and cell recruitment in Drosophila ovary morphogenesis and the requirement of bric à brac. Development. 121 (1), 173-187 (1995).
  11. King, R. C., Aggarwal, S. K., Aggarwal, U. The development of the female Drosophila reproductive system. J Morphol. 124 (2), 143-166 (1968).
  12. Vlachos, S., Jangam, S., Conder, R., Chou, M., Nystul, T., Harden, N. A Pak-regulated cell intercalation event leading to a novel radial cell polarity is involved in positioning of the follicle stem cell niche in the Drosophila ovary. Development. 142 (1), 82-91 (2015).
  13. Irizarry, J., Stathopoulos, A. FGF signaling supports Drosophila fertility by regulating development of ovarian muscle tissues. Dev Biol. 404 (1), 1-13 (2015).
  14. Maimon, I., Gilboa, L. Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries. J Vis Exp. (51), e2537 (2011).
  15. Kerkis, J. The Growth of the Gonads in DROSOPHILA MELANOGASTER. Genetics. 16 (3), 212-224 (1931).
  16. Yamanaka, N., et al. Neuroendocrine Control of Drosophila Larval Light Preference. Science. 341 (6150), 1113-1116 (2013).
  17. Bainbridge, S., Bownes, M. Staging the metamorphosis of Drosophila melanogaster. Development. 66, 57-80 (1981).
  18. Courdec, J., et al. The bric à brac locus consists of two paralagous genes encoding BTB/POZ domain proteins and acts as a homeotic and morphogenetic regulator of imaginal development in Drosophila. Development. 129, 2419-2433 (2002).
  19. Arrese, E. L., Soulages, J. L. INSECT FAT BODY: ENERGY, METABOLISM, AND REGULATION. Annu Rev Entomol. 55, 207-225 (2011).
  20. Zhang, Y., Xi, Y. Fat Body Development and its Function in Energy Storage and Nutrient Sensing in Drosophila melanogaster. J Tissue Sci Eng. 6 (1), (2014).
  21. Wong, L. C., Schedl, P. Dissection of Drosophila Ovaries. J Vis Exp. (1), e52 (2006).

Tags

Udviklingsmæssige biologi sag 133 udviklingsmæssige biologi Drosophila puppe æggestok dissektion immunhistokemi antistof
Dissektion og farvning af <em>Drosophila </em>puppe æggestokke
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Park, K. S., Godt, D., Kalderon, D.More

Park, K. S., Godt, D., Kalderon, D. Dissection and Staining of Drosophila Pupal Ovaries. J. Vis. Exp. (133), e56779, doi:10.3791/56779 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter