Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Developmental Biology

Disseksjon og flekker av Drosophila Pupal eggstokkene

Published: March 2, 2018 doi: 10.3791/56779

Summary

Drosophila eggstokken er en utmerket modell for studerer stamcelleforskningen nisjeinteresser utvikling. Selv om metoder for dissekere larver og voksne eggstokkene har blitt publisert, krever pupal eggstokk disseksjoner forskjellige teknikker som ikke er publisert i detalj. Her skissere vi en protokoll for dissekere flekker og montering pupal eggstokkene.

Abstract

I motsetning til voksen Drosophila eggstokkene, pupal eggstokkene er relativt vanskelige tilgang og undersøke på grunn av sin lille størrelse, translucence og encasing innenfor en pupal sak. Utfordringen med å dissekere pupal eggstokkene ligger også i deres fysiske plassering i puppe: eggstokkene er omgitt av fett kroppens celler inne pupal magen, og disse fett celler må fjernes for å gi riktig antistoff flekker. For å overvinne disse utfordringene, benytter denne protokollen tilpasset Pasteur Pipetter for flergangsbruk for å trekke ut fett kroppens celler fra pupal magen. Videre brukes en kamret coverglass i stedet for et microcentrifuge rør under farging prosessen for å forbedre synligheten av pupae. Men til tross for disse og andre fordeler av verktøyene som brukes i denne protokollen, kan vellykket gjennomføring av disse teknikkene fortsatt innebære flere dager praksis på grunn av den lille størrelsen på pupal eggstokkene. Teknikkene i denne protokollen kan brukes til tid kurs eksperimenter som analyseres eggstokkene på ulike stadier av pupal utvikling.

Introduction

Stilk cellen forskning benytter Drosophila eggstokkene vokst mye siden den første dokumentasjonen av en stilk cellen nisje1,2,3,4. Følge utviklingen av avstamning genetisk sporingsverktøyene, Drosophila eggstokk disseksjoner har blitt brukt til å studere stamcelleforskningen overleveringslinjer og signalnettverk trasé som regulerer stamcelleforskningen vedlikehold, spredning og skjebne i stamcelleforskningen nisje. Kunnskap om disse signalveier kan gi innsikt i mulige årsaker til kreft fra avvikende stamcelleforskningen aktivitet5,6,7. Det har også nylig vist at somatiske stamceller i Drosophila eggstokken, kjent som hårsekken stamceller (FSCs), sterkt ligner pattedyr intestinal stamceller i mange aspekter av deres organisasjon8. Derfor er Drosophila eggstokkene et svært nyttig modellsystem for å studere stamcelleforskningen atferd.

Larver og voksne eggstokkene tilbyr ledetråder til tidlig stamcelleforskningen utvikling og siste stamceller organisasjon i nisje, henholdsvis, er pupal eggstokken en midlertidig struktur som germline og somatiske celler omorganisere og etablere sin identitet 9 , 10. flere studier har undersøkt aspekter av vev utvikling i pupal eggstokk10,11,12,13, forblir spørsmål om differensiering og romlig organisering ovarian celletyper under pupal utvikling. Spesielt oppstår spesifisering av FSCs i denne perioden. Denne protokollen definerer en metode for dissekere og flekker pupal eggstokkene på ønsket tidspunkt-en teknikk som kan brukes i gang kurs eksperimenter som analyserer pupal eggstokk utvikling i detalj fra den larver det voksne stadiet.

Kontoen for liten størrelse, translucence og veddemålsplasseringer av pupal eggstokken innen pupal magen, denne protokollen bruker verktøy som en skreddersydd tynn-tipped Pasteur Pipetter fjerne abdominal fett kroppens vev hindrer antistoff tilgang til den eggstokkene. En klar og kamret coverglass brukes under antistoffer flekker tilbyr synlighet av pupae og en mildere plattform for rocking eggstokkene på en "Nutator." Basert på en protokoll for disseksjoner larver eggstokken av Maimon og Gilboa14, en relativt høy konsentrasjon av Triton X-100 har vært ansatt i de første trinnene av flekker prosedyren å maksimere cellemembranen permeabilization og antistoff tilgang til den ovarian celler.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. EggLaying

  1. Kombiner ca ti mann og femten kvinnelige voksen Drosophila flyr av ønsket genotype i ampuller med vanlig rik fly mat supplert med gjær. For å unngå overbefolkning ampullen, tillate parret kvinner å legge egg i mer enn 2-4 h14.
  2. Overføre voksne fra ampullen til en ny medisinglass ved å tappe ampullen åpning mot ulike ampuller med fly mat. Tillate egg å utvikle i larvae ved romtemperatur for 3-4 dager.

2. velge kvinnelige larver

  1. Bruke en fuktig fin pensel med myk bust, lage en bølgende bevegelse med pensel langs veggen av ampullen overføre vandrende tredje-skikkelsen larver fra ampullen til et glass godt fylt til randen med 1 x fosfat-bufret saltvann (PBS). Vask maten rusk av Larvene ved å overføre dem til en annen fylt med 1 x PBS.
  2. Skille mannlige og kvinnelige Larvene ved hjelp av pinsett. Identifisere mannlige Larvene av et par store, runde og gjennomskinnelig testiklene innfelt i fett på den laterale siden av kroppen omtrent to tredjedeler ned den fremre delen15. Kvinnelige Larvene er i gjennomsnitt større, mindre gjennomsiktig enn menn, og har mye mindre gonader som er vanskeligere å oppdage.
  3. Velge mot mannlige Larvene å samle kvinnelige larver. Samle minst ti kvinner fra brønnen. Plass kvinnelige Larvene i en egen godt fylt med 1 x PBS.
  4. Bruk tang til å overføre kvinnelige Larvene forsiktig til en ny medisinglass av fersk fly mat supplert med gjær.
  5. Plass ampullen med kvinnelige Larvene i et mørkt sted å lette pupariation16. Hele dagen, overvåke Larvene for pupariation. Som hver Larven immobilizes og utvikler seg til en prepupa, sirkel prepupa mot ampullen og registrere den omtrentlige tiden når det første danner i en prepupa. Identifisere prepupae ved protrusion av fremre voksne og timing blodsugende formasjon17. Tillate prepupae å utvikle til ønsket tidspunktet (målt i timer etter blodsugende formasjon, APF).
    Merk: Noen dyr som gjennomgå blodsugende formasjonen i et ca. 10 h intervall kan betraktes som en prepupa. Pupal scenen begynner ca 12 timer etter blodsugende formasjon etter en intern molt har funnet sted.

3. forberedelser Pupae for antistoff flekker

  1. Danne en tynn glass Pipetter brukes i senere trinn for å fjerne ut pupal fett kroppen.
    1. Smelt glass spissen av en Pasteur Pipetter over en Bunsen-brenner. Som glass smelter, bruk tang til å trekke spissen vannrett fra resten av Pipetter å danne en tynnere tips.
    2. Etter avkjøling, bryte en liten del av Pipetter spissen danner en pen sirkulær åpning. Knytte en pære til den andre enden av pipetter.
    3. Last Pipetter med 1 x PBS.
  2. For å høste pupae, som er limt til veggen av ampullen, gjelde en liten dråpe vann langs sonen kontakt mellom puppe og hetteglass. Vent 1-2 min la protein lim løses før løfte forsiktig puppe av veggen med fuktig fin pensel. Overføre puppe til et glass godt fylt med 1 x PBS. Tilordne en enkelt brønn per puppe å unngå overbefolkning brønnen.
  3. Mens fatte den bakre enden av puppe med ett par pinsett, nøye rive den fremre delen av pupal saken med et annet par til leder av puppen er synlig.
  4. Grep fremre mest spissen av pupal hodet med tang og trekk forsiktig puppe ut av bærevesken pupal.
    Merk: En del av kroppen fett kan søles ut under denne prosessen.
  5. Skille og kast den fremre delen av puppen fra den bakre delen til bare abdominal sekken gjenstår.
  6. Ekstra fett kroppens celler fra abdominal sekken.
    1. Forstå abdominal sekken mot bunnen av brønnen med tang i den ene hånden mens du holder den tynne glass Pipetter fylt med 1 x PBS i en annen hånd.
    2. Mål tynn Pipetter spissen mot åpningen av sekk og sakte Pipetter 1 x PBS i magen til å vaske bort fett kroppens celler rundt pupal eggstokkene.
      Merk: Eggstokkene er et par små, gjennomskinnelige, striated og avlang strukturer som skal være i abdominal sekk.
    3. Vask bort kroppen fett celler til minst to tredjedeler av kroppen fett er borte eller eggstokkene vises nær åpningen av abdominal sekk. Det er veldig viktig å utføre dette trinnet sakte for ikke å vaske eggstokkene av magen ved et uhell.
  7. Undersøke brønnen å sjekk hvis eggstokkene har sølt ut under cellen fett kroppsvask. Hvis eggstokkene ikke vises i brønnen, bør de ha forblitt i magen. Hvis eggstokkene har kommet ut, plasserer nye august i brønnen, og gjenta dette trinnet.
  8. Overføre magen til et klart coverglass kammer fylt med fiksering buffer (1 x PBS, 4% paraformaldehyde) og sett lokket på toppen. For å sikre et tilstrekkelig antall eggstokkene tåle flekker og montering prosessen, analysere flere eggstokkene enn nødvendig.
    Forsiktig: Fiksering bufferen inneholder paraformaldehyde som er giftig. Vennligst bruk riktig beskyttelse som hansker, vernebriller, etc.

4. Immunohistochemistry

  1. Gjennom farging prosessen, bruk tang Skyv ned alle flytende eggstokkene til bunnen av forsiden glass brønnen slik at eggstokkene er helt oppslukt i antistoff løsning.
  2. Stedet strimler av dobbeltsidig tape på den flate overflaten på en Nutator og deretter plassere den kamret coverglass på selvklebende.
  3. Inkuber eggstokkene fiksering buffer fra trinn 3.7 i 15 min ved romtemperatur.
  4. Skyll eggstokkene tre ganger i 1 x PBS med 1% Triton X-100 for 5, 10 og 45 min (1 h totalt), henholdsvis, for å tillate grundig permeabilization.
  5. Blokkere eggstokkene i 10% normal geit serum i 1 x PBS med 0,5% Triton X-100 i 30 min.
  6. Inkuber eggstokkene overnatting i 600 µL primære antistoff valgfrihet utvannet til riktig konsentrasjonen i 1 x PBS med 0,5% Triton X-100 på 4 ° C.
  7. Skyll eggstokkene tre ganger i 5 min i 1 x PBS med 0,5% Triton X-100.
  8. Inkuber eggstokkene for 2t i 600 µL sekundære antistoff valgfrihet utvannet til riktig konsentrasjonen i 1 x PBS med 0,5% Triton X-100 ved romtemperatur.
  9. Skyll eggstokkene to ganger i 5 min i 1 x PBS med 0,5% Triton X-100 og én gang for 5 min med 1 x PBS.

5. dissekere og montering Pupal eggstokkene

  1. Legg en liten dråpe 1 x PBS på et mikroskop lysbilde. Bruk tang overføre abdominal sekken fra kamret coverglass til et glass godt fylt med 1 x PBS. Tilordne en enkelt brønn per puppe å unngå overbefolkning brønnen.
  2. Rive fra hverandre abdominal sekken og alle gjenværende fett kropp med tang.
    Merk: Eggstokkene, som er et par små, gjennomskinnelige, striated og avlang strukturer, skal vises i brønnen. Eggstokkene er ofte tett omgitt av fett kroppen, så det er viktig å sikre at alle fett kroppen er grundig revet fra hverandre.
  3. Overføre eggstokkene fra brønnen i dråpe 1 x PBS på mikroskopet lysbilde ved å ta tak i sentrum av eggstokkene mellom tips av tang. Det er svært viktig å bruke en fast grep uten klemme eggstokkene ikke å miste eller ødelegge dem under overføringen. Legg noen dråper 1 x PBS på lysbildet når løsningen tørker ut over tid.
  4. Når alle eggstokkene har blitt dissekert og overført til mikroskopet lysbildet Pipetter 40 µL av montering medium på en 22 x 22 mm dekkglassvæske og sted dekkglassvæske forsiktig på toppen av eggstokkene. La lysbildet tørr overnatting før bildebehandling.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Vellykket gjennomføring av denne prosedyren skal resultere i klart antistoff flekker som avslører struktur og mobilnettet organisering av en Drosophila pupal eggstokken. Immunohistochemistry i denne protokollen kan brukes til å identifisere celletyper ofte farget i larver og voksne eggstokkene. Celler med pupal stilken avledet fra sverme celler18 (uthevet av Fasciclin III i hvitt) er vist i Figur 3. I tillegg til utheving mobilnettet organiseringen av pupal eggstokkene, kan antistoff flekker gjelder for celle spredning (for eksempel phospho-histone H3 farging i Figur 3vises i grønt) brukes til å studere celledeling mønstre av stamceller og andre mitotically aktive celletyper. Hvis fluorescerende antistoff signaler er svak når undersøkt under AC confocal mikroskop, er det sannsynlig at eggstokkene ikke var tilstrekkelig eksponert for antistoffer på grunn av utilstrekkelig fett kroppen utvinning i pupal magen. En annen mulighet kan være at pupal sekk åpningen kollapset under den flekker.

Figure 1
Figur 1: Side ved side sammenligning av mannlige vs kvinnelig larver. (A) mannlige larve i PBS løsning identifisert av et par gjennomsiktig, avlang testiklene ligger cirka to tredjedeler ned fra fremre enden. (B) kvinnelige larve i PBS løsning identifisert av fraværet av store, gjennomskinnelig testiklene. Skalere barer = 2 mm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 2
Figur 2: Disseksjon av pupal eggstokkene etter immunohistochemistry. (A) bilde av et par striated, gjennomskinnelige pupal eggstokkene (røde sirkler) som er fjernet fra abdominal sekken på immunohistochemistry flekker. Pupal eggstokkene ble dissekert ca 48 timer APF. Gjenværende fett kroppens celler (svart pil) var ikke pakket ut i trinn 3.6 er spredt i PBS løsning. (B) bilde av en enkelt pupal eggstokk i PBS løsning dissekert ca 48 timer APF. Skalere barer = 100 µm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 3
Figur 3: flekkete vill-type pupal eggstokk dissekert 48 timer APF. Bildet ble kjøpt med AC confocal mikroskop. Wnt veien reporteren, Fz3 RFP8 (rød), uttrykkes i fremre. somatiske celler. Antistoffer mot Fasciclin III (hvit) skisserer celler av pupal stilken. Kjerner var counterstained med DAPI (blå). Phospho-histone H3 flekker (grønn) understreker cellene gjennomgår mitose. Diagonale hvite linjer angir kantene av originalbildet. Skala bar = 20 µm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Det mest viktige og vanskelige trinnet av denne protokollen innebærer utarbeidelsen av pupal eggstokkene før fiksering. For å sikre at eggstokkene, små og begravd fett kroppens celler inne pupal magen, er farget tilstrekkelig med antistoffer, er det viktig å ikke bare rive en stor åpning i abdominal sekk med tang, men også trekke ut fett kroppens celler som hindrer den eggstokkene fra antistoffer. Vellykket gjennomføring av dette trinnet krever anvendelse av subtile press på Pasteur Pipetter pære mens du vasker fett kroppens celler av abdominal sekken (f.eks 1 – 2 fett kroppens celler skal la magen per sekund under dette trinnet). Bruke skånsom makt vil trolig føre til eggstokkene å søle ut av magen og inn i glasset godt. Fordi eggstokkene selv er liten, gjennomsiktig og vanskelig å forstå med tang, må de være i abdominal sekken gjennom hele flekker prosedyren. Dermed, hvis eggstokkene kommer ut av magen under forberedelse trinnet før fiksering, det ville være svært vanskelig å hente flekken og monterer dem i isolerte skjemaet under protokollen.

Fett celler, som hovedsakelig består av lipid dråper, er triglyserider lagring organelles vanligvis finnes i insekter, inkludert Drosophila melanogaster19,20. Siden noen fett kroppens celler forblir i pupal magen på fiksering, bruker denne protokollen relativt høy Triton X-100 konsentrasjonene i de tre første PBS skyller å trekke så mange lipider som mulig fra begge cell membranes i eggstokken og noen leftover fet vevet rundt eggstokkene. Som demonstrert av lyse Fasciclin III cellemembranen protein antistoffer farging i Figur 3, 1 x PBS med 1% Triton X-100 under de tre første skyller fungerer bra for å trekke maksimalt lipider samtidig opprettholde integriteten til cellen membran.

Når kroppen fett er pakket ut, er det nest viktigste trinnet å sikre at eggstokkene forblir i abdominal sekken hele fiksering og antistoff flekker. Det er nyttig å plassere dem i en klar og kamret coverglass i stedet for et microcentrifuge rør for klarere synligheten av de pupal sklerotisert under den flekker. Bruk tang Skyv abdominal sekkene til bunnen av kammeret slik at mage vev i sekken er fullstendig oppslukt av antistoff løsning.

Til slutt, stor forsiktighet bør tas overføre eggstokkene fra abdominal sekken til microscope skyve under montering prosessen. Eggstokkene er små og vanskelig å forstå med tang uten klemming dem, er den beste måten å overføre dem til lysbildet ved å ta godt tak midt i eggstokkene. De vil være strukturelt intakt når plassert på lysbildet. Det er mulig å dissekere eggstokkene fra magen direkte over mikroskopet lysbildet å unngå å miste eggstokken, men dette kan føre til en overdreven mengde montering medium på lysbildet og kan komplisere montering prosessen.

Begrensningene for denne protokollen innebære tiden hele disseksjon prosessen kan ta, potensielt lav avkastningen av godt farget eggstokkene og fingerferdighet trengs for å fullføre hvert trinn. Fordi pupal eggstokkene krever omfattende fett kroppen utvinning, kan forbereder en enkelt puppe fiksering ta fra 10 til 20 min. Videre for å sikre et tilstrekkelig antall eggstokkene tåle hele flekker prosedyren, er det best å dissekere mer pupae enn nødvendig for eksperimentet. Dette betyr at mye tid kan brukes bare på å forberede pupae selv før fiksering trinn.

Pupal eggstokk disseksjoner varierer hovedsakelig fra protokoller for larver14 og voksen21 eggstokk disseksjoner. Encasement av eggstokken innenfor en pupal sak gir unike utfordringer som dekkes av verktøyene som brukes i denne protokollen. Disse metodene kan være brukt avstamning sporing eksperimenter bestemme når FSCs og eskorte celler er angitt i pupal eggstokken over tid. En modifisert versjon av denne protokollen som involverer insekt celle kultur medier kan også brukes til å analysere pupal eggstokkene for ex vivo live bildebehandling analyse.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ingen konflikter av interesse å erklære.

Acknowledgments

Denne forskningen ble støttet av National Institutes of Health (RO1 GM079351 til dk). Vi takker Dorothea Godt for hennes nyttige råd på pupal eggstokk disseksjoner basert på hennes opprinnelige protokollen. Vi takker også Amy Reilein for hennes assistanse og kommentarer på manuskriptet.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Dumont #5 Forceps, biology Fine Scientific Tools 11252-20
Nunc Lab-Tek Chambered Coverglass Thermo Fisher Scientific 155383
Dissection microscope Nikon SMZ-10A
Confocal Microscope Carl Zeiss LSM 700
Analysis software Carl Zeiss Zen
9 Depression Glass Spot Plates Pyrex 7220-85
Pasteur pipet Fisher Scientific 13-678-6B
Pasteur pipet bulb Various vendors
Bunsen burner Various vendors
Fisherfinest Premium Frosted Microscope Slides Thermo Fisher Scientific 12-544-2
22 x 22 mm glass coverslips No 1 VWR 48366-067
Dapi Fluoromount-G SouthernBiotech 0100-20
Double-sided tape Scotch
Nutator Clay Adams
Fine brush #0, #3-#5 Various vendors
Gilson Pipetman Starter Kit Thomas Scientific F167300 Contains p20, p200, p1000 pipettors
16% Paraformaldehyde Electron Microscopy Sciences 15710 Dilute to 4% paraformaldehyde in 1x PBS
Triton Sigma-Aldrich 9002-93-1
10x PBS Ambion AM9624 Dilute to 1x PBS
Normal Goat Serum Jackson ImmunoResearch 5000121 Dilute to 10% normal goat serum in PBST with 0.5% Triton concentration
Primary antibodies (in protocol: 7G10 anti-Fasciclin III diluted 1:250, rabbit anti-phosphohistone H3 diluted 1:1000) Various vendors (in protocol: Developmental Studies Hybridoma Bank, Millipore) Dilute in PBST with 0.5% Triton concentration
Secondary antibodies (in protocol: Alexa-546, FITC-conjugated anti-rabbit serum) Various vendors (in protocol: Molecular Probes, Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.) Dilute in PBST with 0.5% Triton concentration
Fly vials Denville Scientific V9406
Cotton Balls, For Wide Vials Genesee Scientific 51-102W
Yeast, Bakers Dried Active MP Biomedicals 101400
Fly food Produced in laboratory Mixture of water, brewer's yeast, cornmeal, molasses, agar, EtOH, penicillin, methyl 4-hydrobenzoate, and propionic acid
Male and female Drosophila flies (genotype used in protocol: yw; P[Fz3-RFP, w+]/TM2) Bloomington Drosophila Stock Center

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Losick, V., Morris, L., Fox, D., Spradling, A. Drosophila Stem Cell Niches: A Decade of Discovery Suggests a United View of Stem Cell Regulation. Dev Cell. 21 (1), 159-171 (2011).
  2. Kirilly, D., Xie, T. The Drosophila ovary: an active stem cell community. Cell Res. 17 (1), 15-25 (2007).
  3. Dansereau, D. A., Lasko, P. The Development of Germline Stem Cells in Drosophila. Method Mol Biol. 450, 3-26 (2008).
  4. Pearson, J., López-Onieva, L., Rojas-Ríos, P., Gonzáles-Reyes, A. Recent advances in Drosophila stem cell biology. Int J Dev Biol. 53, 1329-1339 (2009).
  5. Arwert, E. N., Hoste, E., Watt, F. M. Epithelial stem cells, wound healing and cancer. Nat Rev Cancer. 12 (3), 170-180 (2012).
  6. Barker, N., et al. Crypt stem cells as the cells-of-origin of intestinal cancer. Nature. 457 (7229), 608-611 (2009).
  7. Daley, G. Q. Chronic myeloid leukemia: proving ground for cancer stem cells. Cell. 119 (3), 314-316 (2004).
  8. Reilein, A., et al. Alternative direct stem cell derivatives defined by stem cell location and graded Wnt signaling. Nat Cell Biol. 19 (5), 433-444 (2017).
  9. Eliazer, S., Buszczack, M. Finding a niche: studies from the Drosophila ovary. Stem Cell Res Ther. 2 (6), 45 (2011).
  10. Godt, D., Laski, F. A. Mechanisms of cell rearrangement and cell recruitment in Drosophila ovary morphogenesis and the requirement of bric à brac. Development. 121 (1), 173-187 (1995).
  11. King, R. C., Aggarwal, S. K., Aggarwal, U. The development of the female Drosophila reproductive system. J Morphol. 124 (2), 143-166 (1968).
  12. Vlachos, S., Jangam, S., Conder, R., Chou, M., Nystul, T., Harden, N. A Pak-regulated cell intercalation event leading to a novel radial cell polarity is involved in positioning of the follicle stem cell niche in the Drosophila ovary. Development. 142 (1), 82-91 (2015).
  13. Irizarry, J., Stathopoulos, A. FGF signaling supports Drosophila fertility by regulating development of ovarian muscle tissues. Dev Biol. 404 (1), 1-13 (2015).
  14. Maimon, I., Gilboa, L. Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries. J Vis Exp. (51), e2537 (2011).
  15. Kerkis, J. The Growth of the Gonads in DROSOPHILA MELANOGASTER. Genetics. 16 (3), 212-224 (1931).
  16. Yamanaka, N., et al. Neuroendocrine Control of Drosophila Larval Light Preference. Science. 341 (6150), 1113-1116 (2013).
  17. Bainbridge, S., Bownes, M. Staging the metamorphosis of Drosophila melanogaster. Development. 66, 57-80 (1981).
  18. Courdec, J., et al. The bric à brac locus consists of two paralagous genes encoding BTB/POZ domain proteins and acts as a homeotic and morphogenetic regulator of imaginal development in Drosophila. Development. 129, 2419-2433 (2002).
  19. Arrese, E. L., Soulages, J. L. INSECT FAT BODY: ENERGY, METABOLISM, AND REGULATION. Annu Rev Entomol. 55, 207-225 (2011).
  20. Zhang, Y., Xi, Y. Fat Body Development and its Function in Energy Storage and Nutrient Sensing in Drosophila melanogaster. J Tissue Sci Eng. 6 (1), (2014).
  21. Wong, L. C., Schedl, P. Dissection of Drosophila Ovaries. J Vis Exp. (1), e52 (2006).

Tags

Utviklingspsykologi biologi problemet 133 utviklingspsykologi biologi Drosophila pupal eggstokk disseksjon immunohistochemistry antistoff
Disseksjon og flekker av <em>Drosophila </em>Pupal eggstokkene
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Park, K. S., Godt, D., Kalderon, D.More

Park, K. S., Godt, D., Kalderon, D. Dissection and Staining of Drosophila Pupal Ovaries. J. Vis. Exp. (133), e56779, doi:10.3791/56779 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter