Summary
肝細胞におけるミトコンドリア機能に対する環境有機塩素農薬(OP)の影響を理解することは、代謝障害を引き起こすOMPのメカニズムを探求する上で重要である。本論文では、肝ミトコンドリア機能の検出方法について詳しく説明する。
Abstract
本論文では、肝細胞における環境有機塩素農薬(OSP)による代謝障害の原因をより深く理解するための、肝ミトコンドリア機能の検出に関する詳細な方法を紹介する。ヘプG2細胞は、一般集団における内部曝露の等価用量で24時間のβ−ヘキサクロロシクロヘキサン(β-HCH)に曝露した。肝細胞における超構造を透過電子顕微鏡(TEM)で調べ、ミトコンドリアの損傷を示した。ミトコンドリア機能は、さらに、β-HCHでインキュベートされたHepG2細胞におけるミトコンドリア蛍光強度、アデノシン5'-三リン酸(ATP)レベル、酸素消費率(OCR)およびミトコンドリア膜電位(MMP)によって評価された。ミトコンドリア緑色蛍光プローブで染色後のミトコンドリア蛍光強度を蛍光顕微鏡で観察した。ルシフェリン-ルシメラーゼ反応を用い、ATPレベルを決定した。MMPを、カチオン色素JC-1によって検出し、フローサイトメトリー下で分析した。OCRは細胞外フラックス分析装置で測定した。要約すると、これらのプロトコルは、ミトコンドリアの損傷を調査するために肝細胞におけるミトコンドリア機能を検出するのに使用された。
Introduction
健康に対する有機塩素農薬(OMP)の影響、例えば生殖障害、免疫毒性、代謝変化は、以前に検討された1、2、3。2,3細胞代謝を検出し、ミトコンドリア機能障害を発見する方法は、科学者がミトコンドリア機能の役割を理解することを可能にしました (すなわち.、 ミトコンドリア STAT3レベル、 乳酸、 ピルビン酸、 乳酸とピルビン酸比、 コエンザイム Q10、 ミトコンドリア陽子漏れ、生体精エネルギー、生物発生、および動力学) 老化、肥満、糖尿病、心血管機能、癌、および安全毒性4,,55,6,,7.本論文では、オプスによるミトコンドリア機能障害の評価方法について述べている。
HepG2細胞をヒトの内部暴露に相当する用量で24時間の代表的なOCPであるβ-ヘキサクロロシクロヘキサン(β-HCH)に曝露した。まず、TEMを適用して、核、ミトコンドリア、小胞体8などの肝細胞の超構造を観察した。通常の顕微鏡と比較して、TEMは、細胞および細胞成分(細胞株または組織)の2Dおよび3D超構造、形態、化学組成、ならびに現代の科学技術において極めて重要な役割を果たす天然または人工材料の機能を探求することを可能にする。ミトコンドリア機能は、さらに、β-HCHでインキュベートされたHepG2細胞におけるミトコンドリア蛍光強度、アデノシン5'-三リン酸(ATP)レベル、酸素消費率(OCR)およびミトコンドリア膜電位(MMP)によって評価された。水戸トラッカーグリーンは、生細胞ミトコンドリア特異的蛍光染色に使用できるミトコンドリア緑色蛍光プローブです。肝細胞におけるミトコンドリアを、ミトトラッカーグリーン溶液とミトコンドリア蛍光強度で染色し、数とパターンを共焦点顕微鏡9で観察した。ミトコンドリア緑色蛍光プローブは、生細胞を染色するために使用することができる。ローダミン123またはJC-1と比較して、ミトコンドリア緑色蛍光プローブは、ミトコンドリア染色のミトコンドリア膜電位に依存しない。ATPレベルはルシファーゼ-ルシフェリンキットによって決定され、タンパク質濃度によって正規化された。ATPアッセイキットは、一般的な溶液、細胞または組織のATPレベルを検出するために使用することができます。このキットは、エネルギーを提供するためにATPが必要な場合、蛍光を生成するために蛍光を生成するために蛍光を触媒ホタルルシファーゼをベースにしています。ホタルルシメラーゼとフルオレセインが過剰である場合、ある濃度範囲では、蛍光の発生はATPの濃度に比例する。さらに、このキットはATPの化学発光を最大限に活用するために特別に設計されていた。ATPは、最も重要なエネルギー分子として、細胞の様々な生理学的または病理学的プロセスにおいて重要な役割を果たす。ATPレベルの変化は、細胞機能、特にミトコンドリアエネルギー産生の欠陥を反映することができる。通常、アポトーシス下で、 壊死またはいくつかの毒性状態で, 細胞の ATP レベルは 10.JC-1のMMPアッセイキットは、細胞、組織、精製されたMMPを迅速かつ敏感に検出するための蛍光プローブとしてJC-1を使用するキットです。アポトーシスの早期発見に使用できます。カチオン色素JC-1は、緑と赤色の蛍光比の変化によって示されるフローサイトメトリー下で分析することができるMMPを検出するために使用される蛍光プローブです。MMPが高いとき、JC-1はミトコンドリアのマトリックスに凝集してポリマー(J-凝集体)を形成し、赤色蛍光を生じる。MMPが低いと、JC-1は蓄積できず、緑色蛍光11を生成する単量体を形成する。したがって、赤と緑の蛍光の比率は、MMPのレベルを反映することができます。細胞のOCRは、正常な細胞機能12の重要な指標である。ミトコンドリア機能を研究するためのパラメータとみなされます。細胞糸球菌ストレステストキットは、ミトコンドリア機能の主要パラメータを分析するための安定した方法を提供します。このキットは、細胞ミトコンドリアストレステストを行うための標準的な方法と同様に、品質管理と予測試薬を提供します。これは、すべての細胞タイプを検出するために使用することができます, プライマリ細胞を含みます, 細胞株, 浮遊細胞, また、小島, 線虫, 酵母と単離ミトコンドリア.
OCR測定は、細胞の生理的状態または変化に関する貴重な洞察を提供することができる。これは、呼吸ベースライン、陽子漏れ、最大呼吸、ATPターンオーバーおよび予備容量を検出するために細胞外フラックス分析装置で決定された。簡単に言えば、OCRのベースライン測定の後、OCRはオリゴマイシン(ATPカプラ)、FCCP(ミトコンドリア酸化リン酸化アンカプラー)および抗マイシンA/ロテノーネ(酸素消費の阻害剤)に順次添加した後に検出された。
インビトロでの肝細胞におけるミトコンドリア機能を検出するためのより具体的なプロトコルの開発を促進するために、ここでは、ミトコンドリアの損傷関連有害な結果を研究する際に、TEM、共焦点顕微鏡、ルミノメーター、フローサイトメトリーおよび細胞外フラックス分析による実験を提示する。
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Protocol
すべての実験と実験プロトコルは、関連するガイドラインと規制に従って行われ、南京医科大学の地元の倫理委員会によって承認されました。
1. TEMによるミトコンドリア超構造
- HepG2細胞の収集
- 100 mm の皿の種 HepG2 細胞。37°C、5%CO2で2保管。
- 1.5 mLEPチューブに0.25%EDTAを有する消化細胞。
- 室温(RT)で3分間1000 x g で遠心分離機。上清を捨てます。
- 4-6 x 105 HepG2細胞を収集します。
- ピペットを用いて5%グルタルアルデヒド(溶媒:二重蒸留水)を1 mL加え、4°Cで2時間インキュベートします。
- リン酸緩衝液の4 mL(Na22HPO4、KH22PO4、NaClおよびKCl、pH 7.4を含む)の4つの変化に加えて洗浄し、それぞれ15分。4ピペットでリン酸バッファーを吸い出します。
- 200 μmの1%オスミウム(溶媒:二重蒸留水)を加え、4°Cで2時間黒色サンプルにインキュベートします。
注意: オスミウムは非常に有毒で揮発性の物質です。それは慎重に薬物キャビネットで操作する必要があります。 - リン酸緩衝液1 mLの2つの変更、それぞれ5分で加えて洗浄します。リン酸緩衝液を吸い出す。
- 2%ウラニル酢酸溶液中の染色(溶媒:二重蒸留水および酢酸)を1.5mLEPチューブで2時間用。
- 脱水して50%アセトン、70%アセトン、90%アセトン(溶媒:二重蒸留水)を通して、2つの絶対アセトンの変化、それぞれ15分を経て沈下する。
- 2滴でアセトン(100%)/埋め込み剤(1:1)でRTで1.5時間浸透。Epon812埋め込み剤は、レシピは次のとおりです: A: Epon812, 62 mLとDDSA, 100 mL;B:Epon812、100 mLおよびMNA 89 mL。A:B=2:8(v:v、冬)、A:B=1:9(夏期はv:v)。埋め込み金型に埋め込む(チェックグリッド付きのソフトプラスチックプレート)。
- 37°Cで12時間、45°Cで12時間、60°Cで48時間培養します。
- ウルトラ薄切片マシンとTEM(2μmおよび500 nm)で、超薄型セクション(最大面積は0.5mm×0.3mmを超えることはできません)を準備し、観察します。
2. ミトコンドリア蛍光強度検出
- シード 2x 104 6 ウェルプレートの HepG2 細胞。24時間にβ-HCHを加えます。
- 無水DMSOを加えるため、1 mMミトコンドリア緑色蛍光プローブの最終濃度を作り出します。
- 6ウェルプレートのウェルごとに1 mLミトコンドリア緑色蛍光プローブ溶液(最終濃度:200nM)を加え、37°Cで45分間インキュベートします。
- ミトコンドリアグリーン蛍光プローブ溶液を取り出し、イメージング前に37°Cで作りたての細胞培養培地(DMEM)を添加します。
- ミトコンドリアグリーン蛍光を蛍光顕微鏡(10x)で観察します。検出時の最大励起波長は490nm、最大発光波長は516nmです。
3. 細胞の ATP レベルのアッセイ
- 6ウェルプレートにHepG2細胞をシードします。24時間にβ-HCHを加えます。
- ルシファーゼ-ルシフェリンATPアッセイキットから6ウェルプレートの各ウェルに200 μLのライシスバッファーを追加します。4°Cで5分間12,000 x g で遠心分離機、新しいチューブにピペットで上清を収集します。
- ATP検出試薬を1:5の比で、ATP検出バッファーとして希釈します。
- 標準曲線決定を準備する:ATP標準溶液の0.5 mMを10、5、1、0.5、0.1、0.05、0.01 μMにATP溶解バッファーで希釈します。
- RTで5分間の96ウェルプレートに100μLのATP検出バッファを追加し、セルの上澄み液を100μL加え、ルミノメーター(化学発光検出器)で検出します。標準曲線を使用して ATP 濃度(nmol/L)を計算します。
- BCAタンパク質アッセイキットでタンパク質濃度をマルチモードリーダーで検出します。
- 標準曲線決定の準備:タンパク質標準溶液の5 mg/mLを0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mLに二重蒸留水で希釈します。
- 96ウェルプレートにセルの上清1μLを加え、19μLの二重蒸留水を加えます。
- 各ウェルに対して200 μLのBCA検出ソリューションを追加します。37°Cで30分間インキュベートします。562 nm のマルチモード リーダーで OD (光密度) 値を検出します。標準曲線を使用してタンパク質濃度(mg/mL)を計算します。
- mgタンパク質濃度あたりのATP含有量を補正します(単位:ATP濃度/タンパク質濃度、nmol/mg)。
4. JC-1によるミトコンドリア膜電位(MMP)評価
- 6ウェルプレートに播種HepG2細胞を収集します。1.5 mL EPチューブに0.25%EDTAを有する消化細胞、1000 x g で3分間遠心分離し、上清を捨てて細胞を収集する。
- 蒸留水を8mLに50μL(200X)に加え、混合します。JC-1検出液として2mLの染色性染色バッファーを追加します。
- 細胞培養培地の0.5mLとJC-1検出溶液の0.5 mLを37°Cで20分間混合して細胞をインキュベートする。
- 遠心分離機 600 x g で 3 分 4 °C. 上清を捨てます。
- JC-1(1X)染色バッファーの1mLの2変化でリンス、遠心分離機は600xgで3分間g4°Cで3分間。 そして上清を捨てる。
- JC-1(1X)染色バッファーの0.5 mLで細胞を懸濁し、フローサイトメトリーを介して分析し、緑色および赤色の蛍光を検出する。JC-1ポリマーが検出されたら、励起光を490nmに、発光光を530nmに設定します。JC-1ポリマーが検出されたら、励起光を525nmに、発光光を590nmに設定します。
5. 酸素消費率(OCR)測定
- ヘプG2細胞を細胞培養マイクロプレートに96ウェルの濃度で、4500個の細胞/100μLの密度で播種します。24時間後に各ウェルで覆われた細胞を確認してください。
- 前の文献13に従って、調製された試薬の適切な容積を適切な注入ポートに加える。ポートA:25 μL 1 μMのオリゴマイシン(ATPカプラ)ポートB:25 μL 0.75 μM FCCP(電子スロットル制御、ETCアクセラレータ)ポートC:μM抗ミシンA/ロテノーネ(ミトコンドリア阻害剤Aおよびミトコンドリア阻害剤B)の25 μL 0.5。
- 使用できる状態になるまで、CO2 のない37°Cインキュベーターにカートリッジを保管してください。
- 各ウェルから実行媒体を取り除き、新しいDMEMに追加することで、セルプレートの中程度の変更を行います。各ウェルの最終ボリュームは180 μLです。
- 細胞プレートを、アッセイ前に1時間CO2 を使用しない37°Cインキュベーターに保管してください。
- ソフトウェアによって自動的にOCRを記録します。
- OCRソフトウェアを開きます。
- [アプリ] ドロップダウン メニューで [セル ミトストレス テスト キット] を選択します。
- [アプリの開始] ボタンをクリックします。
- [ストレス テストの実行] ボタンをクリックします。セルストレス テストのセットアップ画面が表示されます。
- 次の手順を実行します。
- [セルシード番号] ボックスにウェル当たりのシードセル数を入力します。
- [平均基底 OCR] ボックスに平均 OCR を入力します。
- 各試薬の最終作業濃度を入力し、試薬を注入します。
注: 細胞のシード濃度を最適化する際に最適化アッセイを実行する前に、セルの平均基底OCR値を検出しておく必要があります。 - [次へ] ボタンをクリックします。グループ情報画面が表示されます。
- 色を選択し、名前を与え、適切な井戸をクリックして、未割り当ての井戸にグループを割り当てます。
注: 異なるグループは、細胞水戸ストレステストを実行する前に、異なる治療として定義されています。マイクロプレートのすべてのウェルは、ストレステストが実行されたときに同じ試薬注射を受けます。 - [次へ] ボタンをクリックします。[ストレス テストインジェクション レイアウト] 画面が表示されます。
- [開始] をクリックします。ストレス テストがアナライザーで実行されるようになりました。実行が終わったら、ソフトウェアのポイントに従って、カートリッジとセルプレートを取り外して廃棄します。
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Representative Results
β-HCHに曝露したHepG2細胞のミトコンドリアクリステは著しく損傷を受けた。散在したミトコンドリアは、比較的異常なミトコンドリア建築で、著しく膨張し、不規則な形状、およびミトコンドリア尾根が消失した軽度であった(図1)。
ミトコンドリアを表す平均ミトコンドリアグリーン蛍光強度は、β-HCH(図2)に曝露されたHepG2細胞およびATPレベルで減少した(図3)。蛍光強度とATPレベルは、暴露濃度の増加に伴って徐々に減少した。潜在的に、ミトコンドリア数の減少、またはミトコンドリアの損傷により、観察されたミトコンドリア蛍光強度を引き起こし、その結果ATPの産生が減少した。
フローサイトメトリーの結果は、β-HCH群における赤/緑色JC-1蛍光の比が対照よりも有意に低いことを示した(図4)。HepG2細胞のOCRはβ-HCH曝露後に用量依存的に減少した。対照群と比較して、基底呼吸率、プロトンリーク、最大呼吸容量、およびATP回転率は、β-HCHにさらされたHepG2細胞において有意に減少した(図5)。これらの結果は、β-HCH曝露後にミトコンドリア機能が損なわれたことを示した。
これらの実験で使用されたすべての器具は 、補足図1に示した。
図1:β-HCHに曝露したHepG2細胞の代表的なTEM顕微鏡写真(A:6000×、B:25000×)。 典型的な損傷は、軽度に拡大したミトコンドリア(M)、電子発光マトリックス、損傷したクリステおよび緩いオルガネラの隙間を示した。M:ミトコンドリア。 この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。
図2: β-HCH 13で処理したHepG2細胞におけるミトコンドリア蛍光の検出13ミトコンドリア(A)の量、位置および蛍光強度は、ミトコンドリア蛍光強度の蛍光顕微鏡画像および定量レベルのミトコンドリア蛍光強度(B)に基づいて示された。*: P < 0.05, ***: P < 0.001 コントロールと比較した。各データ点は、3つの別々の実験から平均±SEMであった。この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。
図3:HepG2細胞13のATPレベル13は、コントロールと比較してP<0.001、##:P<0.01と比較して10 ng /mL β-HCH.Dataは3つの別々の実験の平均±SEMとして提示された。 Pこの図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。
図4: JC-1染色とフローサイトメトリー13によるMMPへの影響. (A)フローサイトメトリープロット。Y軸は、赤と緑の蛍光の比率を示した。PE:赤蛍光、FITC:緑色蛍光。(B).**: コントロールと比較した P < 0.01。各データ点は、3つの別々の実験から平均±SEMであった。この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。
図5:細胞酸素消費率(OCR)の検出(a) 細胞内OCRに対するβ-HCHの効果を細胞外フラックス分析装置で測定した。4つの期間は、細胞基底呼吸率、ATP-シンターゼ阻害率、最大非結合率、およびロテロンまたはアンチマイシンA阻害率を表す。 (B) ベースライン、プロトンリーク、最大呼吸容量、ATP回転率および予約容量に対するOCR結果の定量ヒストグラム。*: P < 0.05, **: P < 0.01, ***: P < 0.001 コントロールと比較した。各データ点は、3つの別々の実験から平均±SEMであった。 この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。
補足図1: プロトコルで使用されるすべての計測器 (A)透過型電子顕微鏡。(B)レーザー走査型共焦点顕微鏡。(C)ルミノメーター。(D)マルチモード リーダー。(E)フローサイトメトリー。(F)細胞外フラックスアナライザ。この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。
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Discussion
検出プロトコルの成功に不可欠なのは、表現型からメカニズムまで研究をカバーしてきた様々な実験方法の使用である。本研究では、ヘプG2細胞をペニシリンおよびストレプトマイシンおよび10%胎児ウシ血清でDMEMで培養した。細胞が合流率40~50%に達すると、β-HCH(0,10,100 ng/mL)を加え、24時間インキュベートした。代表のPPSによる肝細胞の超構造変化を示すTEMをまず用いたβ-HCHは、ミトコンドリア構造の障害を示す(図1)。)さらに、蛍光染色アッセイ(図2)、ルシファーゼ-ルシフェリンATPアッセイ(図3)、JC-1アッセイ(図4)) および細胞ミトストレス試験アッセイ(図5)、ミトコンドリア機能障害を一般的に評価する試験を行った。これらの結果は、基礎となる分子メカニズムの調査の基礎となる。
上記の方法では、調査官はいくつかのステップで予防措置に注意を払う必要があります。例えば、電子顕微鏡細胞の調製においては、組織や細胞ブロックが大きすぎることで生じる不十分な固定化を避けるために、細胞数に注意を払うべきである。5%グルタルアルデヒドは固定剤として作用し、検出の失敗を避けるために半年以上保存しない方が良い。固定サンプルは、4 °Cで24時間、または次のステップの1ヶ月まで配置されます。ミトコンドリア緑色蛍光色素は急がい、蛍光の急発を遅くするように光を避けるべきである。細胞のATPレベルアッセイでは、化学発光を検出できる多機能なルミノメーターを使用する場合、不透明な黒板またはホワイトボード96ウェルプレートを使用して、隣接する穴間の相互干渉を避けるために使用する必要があります。ATPは、試料中のATPの切断が室温で安定しておらず、実験は4°Cまたは氷上で動作させる必要がある。ATPは氷上で6時間まで安定することができます。JC-1検出液の調製では、JC-1(200X)を完全に溶解し、超純水と混合した後にJC-1染色バッファー(5X)を添加することができ、JC-1検出溶液が完全に溶解しやすくなるようになっ。JC-1プローブは30分以内にロードして洗浄し、4°Cまたは氷で保存して、フォローアップテストを完了する必要があります。OCR測定では、細胞のシード濃度を最適化する際に、最適化アッセイの前に細胞の平均基底OCR値を検出する必要があります。
これらの方法には、いくつかの制限があります。細胞外フラックス分析装置によるOCR測定は細胞実験に限定される。ミトコンドリア機能の検出は、肝細胞におけるTCAサイクル中の脂肪酸および代謝産物の測定など、ミトコンドリアによる代謝産物が測定されないので、十分に深くはない。さらに、肝脂肪酸合成および分解に関する遺伝子およびタンパク質の発現は、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応およびウェスタンブロットによって検出することができ、これは脂肪酸代謝およびミトコンドリア機能不全13の分子障害をさらに確認することができる。ミトコンドリアのデジタル画像は、共焦点顕微鏡下の生細胞で撮影し、フォームファクター(FF)とアスペクト比(AR)値に基づいてミトコンドリア形態の変化を解析することができる。ミトコンドリアの代謝機能はまた、生体エネルギー分析装置14を用いて細胞外酸性化率(ECAR)を測定することによって評価した。いくつかのミトコンドリアマーカー抗体(シトクロムc、HSP60、PHB1、SOD1、VDCAおよびSTAT3)は、ウェスタンブロット44、15、16、1715,16,17によって測定することができる。ミトコンドリア機能とトリカルボン酸(TCA)サイクルを尊重する酵素の活性は、例えば、リンゴデヒドロゲナーゼ、コハク酸脱水素酵素、クエン酸シンセターゼ、ATPase、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ及びα-ケトグルタル酸脱水素酵素などが証明される。細胞内および単離された肝臓ミトコンドリアにおける電子輸送鎖の機能は、高分解能呼吸数19を用いて検出される。
私たちのプロトコルはミトコンドリアの形態、構造、位置、量、容量、膜電位および呼吸鎖機能の検出に焦点を当てる。これらは基本的に異なる側面からミトコンドリア関数を評価することができます。.さらに、これらの方法はシンプルで操作が簡単です。ミトコンドリア機能研究は、肝臓20、腸内微生物叢21、多能性幹細胞22、および2型糖尿病、パーキンソン病24および炎症性腸疾患25のようないくつかの一般的な疾患において、様々な分野で広く行われている24。ミトコンドリアに関連する病気が増える可能性があり、当社のプロトコルは関連するメカニズムの調査に役立ちます。さらに、より実験的な方法を用いたこれらの効果の包括的かつ詳細なスケールについても、さらなる実証作業が必要です。
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Disclosures
著者らは開示するものは何もない。
Acknowledgments
この研究は中国国立自然科学財団(グラント81573174、81570574)によって支援されました。江蘇省優秀青少年基金(SBK2014010296);中国教育省の研究プロジェクト(213015A);江蘇高等教育機関(PAPD)の優先的な学術プログラム開発、江蘇高等教育機関の主力主要な発展;環境化学・環境毒性学の国家キー研究所のオープンプロジェクトプログラム(KF2015-01)。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Transmission electron microscope | FEI | Tecnai G2 Spirit Bio TWIN | High-contrast, high-resolution imaging, Low-dose observation and imaging, Low-temperature observation, Outstanding analytical performance, Automation for convenience and performance |
| Mito-Tracker Green | Beyotime | C1048 | Mito-Tracker Green is a mitochondrial green fluorescent probe that can be used for live cell mitochondrial-specific fluorescent staining. |
| Laser scanning confocal microscope | Zeiss | 700B | The design is compact, stable, light path is the shortest, high light precision, creative technology and sophisticated scanning technology together to produce a perfect 3-dimensional specimen image. |
| Enhanced ATP Assay Kit | Beyotime | S0027 | Enhanced ATP Assay Kit can be used to detect ATP (adenosine 5'-triphosphate) levels in common solutions, cells or tissues. Cells and tissue samples can be split to complete the sample preparation, detection sensitivity up to 0.1nmol / L, chemiluminescence can be sustained for 30 minutes. |
| Luminometer | Berthold | Centro LB 960 | Luminometer is chemiluminescence detector, the test sample itself can be light, do not need to stimulate. Luminometer is the instrument that detects chemiluminescence. |
| BCA Protein Assay Kit | Beyotime | P0012 | BCA Protein Assay Kit is one of the most commonly used methods for detecting protein concentrations. |
| Multimode reader | TECAN | InfiniteM200 | Multimode reader be used to detect protein consentration. |
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