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ऊतक और रक्त नमूना प्रक्रियाओं के मानकीकरण द्वारा एक बंद छाती सुअर का रोधगलन मॉडल के सुधार

Published: March 12, 2018 doi: 10.3791/56856
Automatic Translation
1,2, 1, 3, 1, 1
1Department for Biomedical Research, University of Bern, 2Graduate School for Cellular and Biomedical Sciences, University of Bern, 3Institute of Chemical Sciences and Engineering, Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL)

Summary

यहां हम तीव्र रोधगलन के एक स्थापित सुअर का मॉडल के नमूना प्रक्रियाओं का मानकीकरण करने के लिए एक प्रोटोकॉल का प्रदर्शन करते हैं ताकि रोधगलन ischemia/reperfusion चोट के pathophysiology की समझ में अपने शोधों के मूल्य में वृद्धि करने के लिए और उपंयास दवा उंमीदवारों की परीक्षा के लिए ।

Abstract

रोधगलन reperfusion (I/R) चोट रोधगलन के बाद क्षेत्र के लगभग आधे के लिए योगदान देता है । तारीख करने के लिए कोई अनुमोदित दवा को रोकने या कम रोधगलन I/ अध्ययन और रोधगलन मैं/आर चोट के pathophysiological तंत्र की समझ के लिए सफल उपचार विकसित करने के लिए आवश्यक है । बड़े पशु प्रयोग शोधों की विधियों में एक महत्वपूर्ण कदम हैं । तीव्र रोधगलन के सुअर का मॉडल स्थापित किया गया है और खुद को और दूसरों के द्वारा वर्णित है । हम आगे भविष्य के प्रयोगों में उपयोग के लिए नमूना तकनीकों पर विस्तार से ध्यान केंद्रित करके मॉडल के मूल्य में सुधार करने के उद्देश्य से. इसके अलावा, हम छोटे लेकिन महत्वपूर्ण कदम है कि अंतिम परिणाम की गुणवत्ता को प्रभावित कर सकते है पर जोर । रोधगलन की नैदानिक स्थिति की नकल करने के लिए/आर चोट, एक percutaneous कोरोनरी हस्तक्षेप (PCI) कैथेटर एक anesthetized सुअर के बाईं पूर्वकाल उतरते कोरोनरी धमनी (बालक) में डाला गया था । ° ° ° इस मॉडल सही जोखिम पर क्षेत्र के रूप में के रूप में अच्छी तरह से गल और व्यवहार्य कोरोनरी ऊतक का निर्धारण की संभावना के साथ मनुष्यों में तीव्र रोधगलन और पीसीआई उपचार की नकल । यहां मॉडल FXIIa के एक bicyclic पेप्टाइड अवरोधक के प्रभाव की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया गया था । मॉडल भी लंबे समय तक reperfusion बार रोधगलन के बाद के प्रभाव का अध्ययन करने की अनुमति संशोधित किया जा सकता है ।

Introduction

कोरोनरी हृदय रोग, विशेष रूप से तीव्र रोधगलन (एमआई) में, विकसित देशों में मौत का मुख्य कारण है 1. आज, MI के मानक उपचार percutaneous कोरोनरी हस्तक्षेप (पीसीआई), गुब्बारा कैथेटर उपचार है । एक महत्वपूर्ण कारक है कि जीवन की गुणवत्ता को प्रभावित करता है और रोगियों के रोग का निदान के बाद PCI-इलाज तीव्र MI रोधगलन आकार है । आकार की कमी रोगी जीवन रक्षा और 2रोग का निदान पर एक महान प्रभाव हो सकता है । रोधगलन/reperfusion (i/r) चोट रोधगलन आकार पर एक महत्वपूर्ण प्रभाव है तो हृदय अनुसंधान में मुख्य उद्देश्य में से एक को रोकने या रोधगलन मैं कम/ I/R चोट के सटीक तंत्र अभी भी जांच के तहत 4हैं । प्लाज्मा झरने और endothelial कोशिकाओं के सक्रियकरण I/आर चोट की पहचान कर रहे है 5। जमावट प्रणाली के सक्रियकरण स्पष्ट रूप से 6,7शामिल है । हाल ही में, FXII की भूमिका, एक जल्दी नदी के थक्के झरना के संपर्क चरण सक्रियण में शामिल पेप्टाइड के रूप में, एक FXII में दिखाया गया है बाहर मस्तिष्क मैं के चूहे मॉडल/ एक सुअर का मॉडल में इन परिणामों की मांयता नैदानिक अनुवाद में एक महत्वपूर्ण कदम है । इसलिए, हम एक उपंयास bicyclic परीक्षण कर रहे है (80 केडीए को छेड़ो) एक पायलट अध्ययन में रोधगलन के संदर्भ में FXIIa अवरोधक/

पशु मॉडल, जो तीव्र एमआई और पीसीआई उपचार की नैदानिक स्थिति की नकल, रोधगलन मैं/आर चोट के pathophysiology की हमारी समझ में सुधार करने के लिए और उपंयास उपचार के विकल्प का परीक्षण करने के लिए आवश्यक हैं । सूअरों नैदानिक रोधगलन I/आर चोट के लिए एक अच्छा पशु मॉडल का प्रतिनिधित्व करते हैं । यह केवल इसलिए नहीं है क्योंकि उनके दिल बहुत शरीर रचना विज्ञान और कोरोनरी संचलन के संबंध में मानव दिलों के समान हैं, लेकिन वे भी रोधगलन और reperfusion 9,10के लिए इसी तरह pathophysiological प्रतिक्रियाओं दिखाओ । ऐसे चूहों और चूहों के रूप में अन्य मॉडल इन मानदंडों को पूरा नहीं है और मानव दिल 11,12की तुलना में जब काफी मतभेद दिखाने के लिए, उदाहरण के लिए कुत्तों जबकि, कई और अधिक जमानती कोरोनरी जहाजों के रूप में मनुष्य के साथ तुलना की है 13.

सुअर का तीव्र रोधगलन मॉडल व्यापक रूप से रोधगलन मैं/आर चोट 14, 15, 16, 17 सहित कोरोनरी हृदय रोग की जांच करने के लिए हृदय अनुसंधान में इस्तेमाल किया गया है । बाद एक भड़काऊ हालत है, जो की वजह से sternotomy या खुले सीने में सर्जरी में इस्तेमाल thoracotomy से संबंधित भड़काऊ प्रतिक्रिया को कम करने के लिए आवश्यक है । बंद छाती मॉडल एक नैदानिक सी हाथ एंजियोग्राफी सेटिंग का उपयोग कर इस समस्या पर काबू । इसके अलावा, सबसे महत्वपूर्ण बिंदुओं में से एक यह है कि हमारे प्रोटोकॉल कोरोनर के बीच एक सही अंतर (जोखिम में क्षेत्र, AAR) और वाम निलय के गैर-कोरोनरी क्षेत्रों (क्षेत्र खतरे में नहीं, ANR) प्रदान करता है ताकि infarct आकार (गल कोरोनरी ऊतक, NIT) कर सकते हैं सही निर्धारित किया जाए । इस कागज के लिए हमारा उद्देश्य स्पष्ट रूप से एक सुअर का रोधगलन मैं/आर चोट मॉडल के एक reproducible पद्धति को परिभाषित करने के लिए, विशेष रूप से रोधगलन ऊतक नमूने के संबंध में है, जो मैं के आणविक तंत्र के एक अधिक सटीक विश्लेषण के लिए अनुमति देगा/ उपंयास दवा उपचार के प्रभाव के स्पष्ट तस्वीर ।

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Protocol

1. पशु:

सभी पशुओं का स्विस राष्ट्रीय कानूनों के दिशा-निर्देशों के अनुसार इलाज किया गया । इस अध्ययन में बर्न् स के कैंटर की स्थानीय पशु प्रयोग समिति द्वारा मंजूरी दी गई थी (अनुमति सं. BE 25/16).

दोनों लिंगों (~ 30 ± 5 किग्रा) के बड़े सफेद सूअरों का प्रयोग करें । दो समूहों में अंधा कर रही है, एक समूह एक bicyclic प्राप्त (80 केडीए को चिढ़ाने) FXIIa या पसंद के उपचार और अंय एक निष्क्रिय नियंत्रण की बाधा जानवरों को विभाजित ।

2. शल्य प्रक्रिया (चित्रा 1)

  1. संज्ञाहरण और पशु की तैयारी:
    1. प्रयोग शुरू करने से पहले 12 ज के लिए जानवरों फास्ट ।
    2. एक 10 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग कर, गर्दन में एक इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शन के माध्यम से 20 मिलीग्राम/kg Ketamine और 2 मिलीग्राम/केजी Xylazine के साथ पूर्व-औषधीय पशु । पशु वजन और सेक्स रिकॉर्ड ।
    3. auricular नस में 0.5 मिलीग्राम/किलो मिदाजोलम और 0.05 मिलीग्राम/किलोग्राम Atropin इंजेक्शन द्वारा संज्ञाहरण प्रेरित । एक endotracheal ट्यूब के साथ पशु Intubate ।
    4. यांत्रिक वेंटिलेशन द्वारा संज्ञाहरण को बनाए रखने के एक श्वसन (ओ2/air 1:3, Sevorane 1.5%), एक 7-8 mm airway ट्यूब और एक फिल्टर का उपयोग कर । प्रेरित ऑक्सीजन के अंश को समायोजित (फियो2) से 35% और ज्वार की मात्रा को ६-१० मिलीलीटर/
    5. संज्ञाहरण की गहराई नाक चुटकी के लिए या तो मोटर या स्वायत्त प्रतिक्रियाओं के अभाव में पर्याप्त के रूप में मूल्यांकन किया है । Palpebral सजगता और जबड़े टोन लगातार निगरानी के रूप में अच्छी तरह से जबड़े टोन आराम और Palpebral सजगता के अभाव लक्ष्यीकरण थे । कोर तापमान लगातार नजर रखी थी और normothermia (38-38.5 डिग्री सेल्सियस) के रखरखाव निष्क्रिय वार्मिंग (कंबल और गर्म बोतलों को अलग) के साथ सुनिश्चित किया गया था ।
    6. काटना मुक्त, के रूप में पहले Koudstaal द्वारा वर्णित है और उनके सहयोगियों को 3-1 से 3-318, मन्या धमनियों दोनों पक्षों पर और उन्हें एक 7F म्यान के साथ cannulate. Cannulate एक 7F म्यान के साथ छोड़ दिया jugular नस शिरापरक रक्त नमूने के लिए ।
    7. 250 µ जी Fentanyl के एक बोल्स खुराक 250 µ जी के द्वारा पीछा किया केंद्रीय शिरापरक लाइन के माध्यम से एनाल्जेसिक एक अर्क पंप का उपयोग कर एक सतत नसों में सुई के रूप में/ पूरे प्रयोग के दौरान शरीर के तापमान, हृदय की दर और ताल के साथ 3-लीड इलेक्ट्रोकार्डियोग्राम (ईसीजी), धमनी और केंद्रीय शिरापरक दबाव पर नजर रखें ।
    8. मानक रक्त संग्रह ट्यूबों का उपयोग करना, शिरापरक लाइन से निंनलिखित आधारभूत रक्त के नमूनों को वापस लेने: 5 मिलीलीटर प्लाज्मा और 2.9 मिलीलीटर EDTA प्लाज्मा संबंधित ट्यूबों में । 15 मिनट के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर 2,000 x जी में तुरंत केंद्रापसारक । एक सीरम ट्यूब में 2.9 मिलीलीटर रक्त ले लो और ऊपर वर्णित के रूप में केंद्रापसारक से पहले कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए coagulate करने के लिए अनुमति देते हैं ।
    9. Aliquot 500 µ एल ट्यूबों में प्लाज्मा या सीरम के 200 µ एल और अधिक विश्लेषण के लिए-80 डिग्री सेल्सियस पर सभी नमूनों की दुकान.
    10. विशेष रक्त गैस विश्लेषण (BGA) सीरिंज का उपयोग कर BGA को मापने के लिए BGA मशीन के निर्माता के निर्देश के अनुसार धमनी लाइन से 0.5 मिलीलीटर रक्त निकाल लें ।
    11. शिरापरक एक मानक 2 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग कर लाइन से रक्त की 0.5 मिलीलीटर वापस लेने और तुरंत यह अधिनियम कारतूस में एक 30 जी सुई का उपयोग कर हस्तांतरण । निर्माता के निर्देशों के अनुसार थक्के समय को मापने के लिए अधिनियम मशीन में भरा कारतूस डालें । समय बिंदुओं के लिए चित्र 2 देखें ।
    12. प्रशासन एक 2 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग कर शिरापरक लाइन में 5000 IU unfractionated हेपरिन और एमआई प्रयोग शुरू करने से पहले पशु 20 मिनट के लिए स्थिर करने के लिए अनुमति देते हैं ।
    13. मॉनिटर अधिनियम हर 30-45 मिनट के रूप में 2.1.11 में उल्लेख किया । 2500 IU unfractionated हेपरिन नसों में सुई अगर अधिनियम है < 180 एस ।
  2. रोधगलन प्रयोग
    1. एक मानक सी बांह प्रतिदीप्तिदर्शन उपकरण (कोरोनरी एंजियोग्राफी कार्यक्रम, कोण 0 °, 12 फ्रेम प्रति सेकंड, ~ 70 केवी) का प्रयोग करें-या वैकल्पिक रूप से एक समर्पित एंजियोग्राफी प्रणाली-कोरोनरी हस्तक्षेप करने के लिए ।
    2. बाएं मन्या धमनी में पहले से रखा म्यान के माध्यम से एक दबाव कैथेटर (5F, 120 सेमी) डालने के लिए fluoroscopic मार्गदर्शन का उपयोग करें । यह वाम निलय में अग्रिम । वेंट्रिकुलर दबाव छोड़ दिया रिकॉर्ड करने के लिए एक अधिग्रहण प्रणाली के लिए दबाव कैथेटर कनेक्ट । अधिग्रहण प्रणाली की जरूरत है लगातार गणना और रिकॉर्ड दिल की दर, विकसित दबाव, डीपी/डीटी अधिकतम (वाम निलय के सिकुड़ना) और डीपी/डीटी ंयूनतम (बाएं निलय की छूट) पूरे प्रयोग के दौरान । 10 मिनट के लिए आधार रेखा मान रिकॉर्ड है ।
    3. डालें एक 6F (100 सेमी, eb 3.75) सही मन्या धमनी में पहले से रखा म्यान के माध्यम से कैथेटर मार्गदर्शक. बाएँ कोरोनरी धमनी के लिए अग्रिम यह एक्स-रे मार्गदर्शन के तहत बाएँ पूर्वकाल उतरते कोरोनरी धमनी (बालक) तक पहुँचने के लिए. एक आधारभूत कोरोनरी एंजियोग्राफी करने के लिए मार्गदर्शक कैथेटर के माध्यम से एक 20 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग कर इसके विपरीत माध्यम सुई.
      नोट: विपरीत माध्यम के इंजेक्शन मैनुअल दबाव द्वारा किया गया था, लेकिन एक समर्पित बिजली इंजेक्टर प्रणाली के रूप में अच्छी तरह से इस्तेमाल किया जा सकता है ।
    4. percutaneous कोरोनरी हस्तक्षेप (PCI) कैथेटर का उपयुक्त आकार का चयन करने के लिए एक्स-रे मॉनिटर पर बालक के आकार का आकलन करें । 15-25 मिमी और बालक आकार के आधार पर 2 और 3.5 मिमी के बीच व्यास की लंबाई के साथ PCI गुब्बारे का प्रयोग करें । PCI कैथेटर और कोरोनरी guidewire (F 014/J, 175 सेमी) को इकट्ठा करें । विपरीत माध्यम से पूर्व-भरा मुद्रास्फीति डिवाइस के साथ PCI कैथेटर कनेक्ट करें ।
      नोट: बालक व्यास एक शासक का उपयोग कर एक नपे मॉनिटर पर सीधे मापा जा सकता है और PCI गुब्बारा का आकार तो तदनुसार चयन किया जाता है ।
    5. 2.2.4 से इकट्ठे प्रणाली मार्गदर्शक कैथेटर के लुमेन में डालें । बालक में guidewire को जब तक यह बालक की दूसरी कर्ण शाखा से आगे नहीं पहुंचता तब तक पेशगी ।
    6. fluoroscopic मार्गदर्शन का उपयोग PCI कैथेटर अग्रिम जब तक यह बालक के बीच के बारे में पहुंचता है । coronaries के शरीर रचना विज्ञान के आधार पर बालक ब्लॉकिंग साइट चुनें, आम तौर पर दूसरे के बाद, कभी कभार पहले विकर्ण शाखा (चित्रा 3) के बाद छोड़ दिया निलय (एल. वी.) के AAR के समान प्रतिशत है ।
      नोट: ब्लॉकिंग साइट का चुनाव विकर्ण शाखाओं की लंबाई पर निर्भर करता है और इस प्रकार ऊतक जो संबंधित शाखा के माध्यम से रक्त की आपूर्ति की है के क्षेत्र । एक लंबी, बंटवारा पहली तिरछी शाखा के मामले में ब्लॉकिंग साइट बस इस के बाद किया जाएगा । एक छोटे से पहले विकर्ण शाखा के मामले में, अवरुद्ध दूसरा विकर्ण के बाद किया जाता है ।
    7. guidewire निकालें और फिर दबाव में वृद्धि मुद्रास्फीति डिवाइस 7-10 बार करने के लिए PCI कैथेटर का गुब्बारा फुलाना और 1 घंटे के लिए रोधगलन के ischemia को प्रेरित करने के लिए फियो2 के बीच 50-60% की वृद्धि हुई । ज्वार की मात्रा को ६-१० मिलीलीटर/
      नोट: इस प्रक्रिया extrasystoles की घटना को कम करने और वेंट्रिकुलर fibrillations की आवृत्ति में कमी होगी ।
    8. एक 5-10 एस वीडियो अनुक्रम रिकॉर्ड जबकि मार्गदर्शक कैथेटर के माध्यम से विपरीत माध्यम इंजेक्शन बस ischemia शुरू करने के बाद जगह में PCI कैथेटर के गुब्बारे का एक एंजियोग्राम है; ischemia के 10 मिनट के बाद दोहराएं PCI कैथेटर के गुब्बारे के लिए बाहर बालक की पूरी रोड़ा सत्यापित करने के लिए ।
    9. पशु की बारीकी से निगरानी करने के लिए तुरंत का पता लगाने और इलाज (2.2.10) हृदय संबंधी अतालता. Extrasystoles आमतौर पर होते है और आवृत्ति में वृद्धि (> 3 प्रति मिनट) के बीच 20 और 40 मिनट के बाद रोधगलन ischemia की प्रेरण । अगर ऐसा होता है तो धीरे से सिर्फ गाल के नीचे दोनों तरफ गर्दन की मसाज करें । ज्यादातर मामलों में यह एक नियमित दिल की धड़कन, शायद वागल तंत्रिका आम मन्या धमनी पर स्थित baroreceptors की उत्तेजना द्वारा फिर से स्थापित करने के लिए पर्याप्त होगा ।
    10. यदि वेंट्रिकुलर अलिंद में कार्डियक अतालता प्रगति, एक बाहरी, biphasic defibrillator फिर से एक साइनस लय स्थापित करने के लिए उपयोग करें । लागू 5-10 छाती संपीड़न defibrillator पैड तुरंत सदमे लागू करने से पहले के क्रम में oxygenated रक्त के साथ coronaries भरने के लिए और फिर सदमे से 150 जंमू (30 किलो पशुओं के लिए) ।
    11. यदि आवश्यक दोहराएं और 3rd सदमे के बाद 175 जंमू को ऊर्जा में वृद्धि हुई है । भारी जानवरों के लिए उच्च ऊर्जा सेटिंग्स का उपयोग करें ।
    12. के ischemia समय के अंत से पहले पांच मिनट रक्त 2.1.8-2.1.13 में वर्णित नमूना दोहराएं । परीक्षण पदार्थ इंजेक्षन (या तो bicyclic FXIIa अवरोध करनेवाला या नियंत्रण 4 मिलीग्राम/kg, यह इस अंधा कर) नसों के माध्यम से केंद्रीय शिरापरक लाइन के माध्यम से और 20 मिलीलीटर खारा के साथ लाइन फ्लश ।
    13. एक प्लाज्मा साइट्रेट नमूना वापस लेने (के रूप में 2.1.8 और 2.1.9 में उल्लेख किया है) 4 2.2.12 में पदार्थ इंजेक्शन के बाद मिनट ।
    14. एक एंजियोग्राम (2.2.3) बालक रोड़ा की पुष्टि करने के लिए प्रदर्शन करते हैं, तो PCI कैथेटर के गुब्बारे खंडन करना और मार्गदर्शक कैथेटर से इस कैथेटर को हटा दें । तुरंत संकुचन और PCI कैथेटर, 10 मिनट के गुब्बारे के हटाने के बाद एंजियोग्राम द्वारा रोड़ा साइट के लिए बाहर बालक के छिड़काव की पुष्टि करें, जब भी रोधगलन के संकेत के लिए अधिक से अधिक 5 मिनट के लिए ईसीजी द्वारा दिखाई दे रहे थे, और तुरंत पहले बालक के पुनः रोड़ा.
    15. 2 ज के लिए कोरोनरी मायोकार्डियम के reperfusion की अनुमति दें । reperfusion (2.1.8 और 2.1.9) के 10, 30, 60 और 115 मिनट पर प्लाज्मा और सीरम के नमूने लें । 60 और 115 मिनट (2.1.10) पर BGA मॉनिटर ।
    16. guidewire के साथ एक ही स्थिति के लिए के रूप में ischemia के लिए इस्तेमाल किया PCI कैथेटर फिर से डालें । पहले के रूप में PCI कैथेटर के गुब्बारे फुलाना और एंजियोग्राम (2.2.3) द्वारा बालक रोड़ा की पुष्टि करें । बाईं निलय से दबाव कैथेटर निकालें और रिकॉर्डिंग बंद करो ।
    17. केंद्रीय शिरापरक लाइन में 100 मिलीलीटर फॉस्फेट में 2% इवांस नीले (पंजाबियों, पीएच 7.4) खारा इंजेक्शन । लगभग 30 s बाद में, जब पूरा जानवर नीला हो जाता है, तो पशु को euthanize करने के लिए 40 मिलीलीटर 20% KCl इंजेक्ट करें । ईसीजी सिग्नल व पल्स तरंगों के अभाव में मौत की पुष्टि हुई ।

3. नमूना तकनीक

  1. निकालने, विदारक और नमूना दिल (चित्रा 4)
    1. दिल को बेनकाब करने के लिए एक sternotomy प्रदर्शन करें । Koudstaal और सहकर्मियों द्वारा पहले बताए गए प्रोटोकॉल का पालन करें, चरण 8-2 और 8-318। कटौती पेरीकार्डियम जबकि विषमताओं, जो पहले pericarditis से स्टेम हो सकता है के लिए निरीक्षण, और आगे मूल्यांकन से पशु को बाहर निकालें ।
    2. खंडन करना और PCI के रूप में के रूप में अच्छी तरह से मार्गदर्शक कैथेटर निकालें । आगे के विश्लेषण के लिए दिल को एक्साइज । वेना कावा काटें और एक सक्शन पंप का उपयोग कर रक्त को हटाने, तो सभी बड़े शरीर के साथ दिल को जोड़ने वाहिकाओं में कटौती ।
    3. अंदर और बाहर कमरे के तापमान खारा के साथ दिल कुल्ला । पूरे दिल को तौलना ।
    4. 30-40 मिनट के भीतर, एक तेज चाकू का उपयोग कर लंबी धुरी के लिए सीधा mitral वाल्व के Chordae tendinae के लिए एपेक्स से के बारे में 3-5 मिमी के स्लाइस में दिल काट ।
    5. हमेशा ventral पक्ष के साथ एक ही अभिविन्यास में दिल जगह करने के क्रम में कटौती के नमूने के अभिविन्यास रखने के लिए सावधान रहना (चित्रा 5).
    6. तस्वीर दिल के स्लाइस एक डिजिटल एकल लेंस पलटा कैमरा का उपयोग कर ।
    7. दूर सही निलय काट (के रूप में की जरूरत नहीं छोड़ो) । तस्वीर बाईं निलय स्लाइसें और बाईं निलय के कुल वजन के लिए सभी स्लाइसें तौलना.
    8. इवांस नीले सकारात्मक और इवांस सभी वर्गों में नीले नकारात्मक ऊतक के बीच अंतर । काटना को गैर-कोरोनरी ऊतकों (इवांस ब्लू पॉजिटिव) से कोरोनरी (इवांस ब्लू निगेटिव) अलग करने के लिए स्लाइसें एक स्केलपेल का उपयोग कर ।
    9. पहले इवांस ब्लू नकारात्मक वर्गों (जोखिम में कोरोनरी क्षेत्र, AAR) का विश्लेषण । उन सब को तौलना और एक प्लास्टिक कंटेनर में उन सब को डाल दिया ।
    10. स्लाइस को पूरी तरह से १००-१५० मिलीलीटर के साथ कवर करें (दिल के आकार के अनुसार) triphenyl tetrazolium क्लोराइड सॉल्यूशन (२ ग्राम टीटीसी, १६ ग्राम Dextran, आणविक भार 48000-90000 में, २०० एमएल पंजाबियों में, हौसले से तैयार) ताकि दिल के टुकड़े समाधान के अंदर स्वतंत्र रूप से घूम सकें. कंटेनर कवर और 37 डिग्री सेल्सियस पर 20 मिनट के लिए मशीन जबकि धीरे मिलाते हुए ।
    11. इस के दौरान 20 मिनट की मशीन समय इवांस नीले सकारात्मक टुकड़े वजन (क्षेत्र जोखिम पर नहीं, ANR), ऊतक के लिए नमूने-टेक एंबेडिंग (चोट से सबसे बाहर का हिस्सा चुनें) और स्टोर पर-80 ° c आगे विश्लेषण के लिए ले लो । 4% formaldehyde समाधान और प्रोटोकॉल वर्गों के लिए कमरे के तापमान पर स्टोर में आराम हस्तांतरण ।
    12. टीटीसी समाधान से AAR के टुकड़ों को हटा दें । लाल दाग ऊतक व्यवहार्य कोरोनरी ऊतक (विट) और गैर दाग ऊतक है गल कोरोनरी ऊतक (NIT) । दोनों NIT और विट से 2 छोटे टुकड़ों (2-3 मिमी के ब्लॉक) में कटौती, और अधिक विश्लेषण के लिए-80 डिग्री सेल्सियस पर ऊतक-टेक और स्टोर में उन्हें एंबेड । इन नमूनों में एक ही वजन होना चाहिए ।
    13. टुकड़े के बाकी फिक्स (सभी AAR से व्युत्पंन स्लाइसें) उंहें एक स्टायरोफोम कंटेनर में नीचे लगाए और पूरी तरह से कवर के साथ 4% formaldehyde समाधान के लिए 24 घंटे में एक धुएं डाकू में कमरे के तापमान पर । टुकड़े अगले कदम में फोटो प्रलेखन के लिए फ्लैट रहना चाहिए ।
    14. अगले दिन एक उच्च संकल्प कैमरे के साथ टुकड़े की तस्वीर दोनों पक्षों के साथ एक ही सेटिंग ज़ूम और ऊतक से दूरी (एक ही इज़ाफ़ा) । सभी चित्रों में स्वचालित स्केल पट्टियां जोड़ें । सभी सलाखों के एक ही लंबाई की जरूरत है ।
      नोट: उच्च संकल्प कैमरा स्वचालित रूप से प्रत्येक तस्वीर के लिए पैमाने बार कहते हैं कि सॉफ्टवेयर से जुड़ा होना चाहिए.
  2. AAR और infarct आकार की गणना
    1. वाम निलय के% AAR = (जी में AAR का भार/g में वाम निलय का वजन) * 100.
    2. तस्वीरों के आधार पर AAR और NIT (प्रत्येक टुकड़ा के दोनों ओर) की कुल सतह क्षेत्र की गणना करने के लिए ImageJ सॉफ्टवेयर का उपयोग करें ।
    3. कोण उपकरण से सीधी रेखा का उपयोग करके स्केल बार लंबाई का चयन करके स्केल बार समायोजित करें । मेनू का विश्लेषण > सेट पैमाने से चुनें और ज्ञात दूरी और स्केल बार की इकाई डालें । चुनें "वैश्विक" तो एक ही पैमाने पर सभी चित्रों को लागू किया जाएगा ।
    4. AAR की गणना करने के लिए मुक्त हाथ चयन उपकरण का उपयोग कर ऊतक के पूरे सतह क्षेत्र मार्क. ऊतक और/या फैटी ऊतक (चित्रा 6-सी) की ओर (ऊंचाई) को शामिल करने के लिए नहीं सावधान रहना ।
    5. का चयन करके माप सेट "क्षेत्र" और विश्लेषण से "प्रदर्शन लेबल" > सेट माप मेनू. विश्लेषण से सतह क्षेत्र को मापने > माप ।
    6. NIT को मापने के लिए चरण 3.2.5 दोहराएँ (केवल गैर-दाग ऊतक चिह्नित). नोट: NIT परिकलन में फैटी टिशू (चित्रा 6-डी) शामिल न करें । ऊतक के दूसरे पक्ष पर कदम दोहराएं ।
    7. ऊतक के प्रत्येक टुकड़े के लिए औसत AAR और NIT की गणना करें ।
    8. nit को AAR के प्रतिशत के रूप में परिकलित करने के लिए 3.2.7 से प्राप्त मानों का उपयोग करें:% nit की AAR = (Σ में nit का औसत सतह क्षेत्र cm 2/Σ की औसत सतह क्षेत्र में cm2) * 100.
    9. दो अलग जांचकर्ताओं के ऊपर विधि दोहराना चाहिए । अंतर का स्वीकार्य हाशिया < 10% है ।
  3. Ischemia मार्करों
    1. EDTA प्लाज्मा नमूनों का प्रयोग करें, जो पहले से कम-80 ° c (2.1.9) में संग्रहित किया गया है कार्डियक ट्रोपोनिन के स्तर को मापने के लिए-मैं एक एकल plex Luminex प्रकार परख का उपयोग कर के रूप में पहले वर्णित 19।

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Representative Results

एक पशु FXIIa अवरोध करनेवाला या नियंत्रण एक तकनीकी त्रुटि (ischemia समय के दौरान रक्तचाप की अचानक गिरावट के कारण, परीक्षण पदार्थ के अलावा पहले) के प्रशासन से पहले ही मर गया । एक जानवर FXIIa अवरोधक समूह से बाहर रखा गया था क्योंकि कोई ischemia/reperfusion चोट छोड़ पूर्वकाल उतरते धमनी (बालक) के असामांय एनाटॉमी के कारण मनाया गया । वाम निलय सहित शीर्ष का एक बड़ा हिस्सा इस पशु में circumflex धमनी से perfused था. अंतिम विश्लेषण में शामिल जानवरों bicyclic FXIIa पेप्टाइड अवरोध करनेवाला समूह में n = 2 थे (27.5 ± 2.5 किग्रा का वजन) और n = 3 एक निष्क्रिय bicyclic नियंत्रण पेप्टाइड प्राप्त (29 ± 0.8 किलो के वजन का मतलब) ।

एक्स-रे वीडियो इमेजिंग/सुअर दिल की कोरोनरी एंजियोग्राफी के लिए दबाव कैथेटर की स्थिति की कल्पना और जहां बालक (चित्रा 3) ब्लॉक करने के लिए तय करने के लिए प्रयोग किया जाता है । चित्र बी कैथेटर स्थिति से पता चलता है, रक्त प्रवाह दूसरी तिरछी शाखा के लिए बाहर अवरुद्ध । चित्रा 3 और बी सी की तुलना भी एक अनुमान है जो बालक के हिस्से की आपूर्ति की मायोकार्डियम कोरोनरी हो जाएगा अनुमति देता है । 2 एच reperfusion अवधि के अंत में PCI कैथेटर फिर से शुरू और एक ही स्थिति में फुलाया के रूप में यह ischemia के दौरान किया गया है । इवांस ब्लू तो नसों के लिए सही AAR (चित्रा 5) निर्धारित करने के लिए इंजेक्शन है । दिल के उत्पाद के बाद, वाम निलय शीर्ष से 3-5 मिमी मोटी वर्गों में कटा हुआ है mitral वाल्व, सीधा लंबी धुरी के लिए । AAR और ANR की स्लाइस पर इवांस नीले दाग से स्पष्ट रूप से demarcated हैं. AAR और ANR नमूना क्षेत्र चित्रा 5Bमें दिखाया गया है ।

AAR, LV के प्रतिशत के रूप में व्यक्त, FXIIa स्वास्थ्यकर्मी समूह और नियंत्रण समूह (चित्रा 6A) के बीच कोई सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण अंतर नहीं दिखाता है. infarct आकार (NIT/AAR) या तो समूहों के बीच कोई अंतर नहीं दिखाता है (नॉन-पैरामीट्रिक मान-Whitney परीक्षण, p > 0.05, चित्र घमण्ड) का उपयोग करके । इन आंकड़ों का सुझाव है कि अकेले FXIIa अवरोध करनेवाला, इस्तेमाल किया एकाग्रता और आवेदन की अवधि में, रोधगलन से दिल की रक्षा नहीं कर सका/ चित्रा 6C और 6D दिखाने के लिए कैसे AAR और NIT सीमाओं को चिह्नित करने के लिए सही और reproducibly संबंधित सतह क्षेत्रों को मापने के लिए ।

रक्त नमूना रणनीति हृदय की मांसपेशी क्षति मार्कर कार्डियक ट्रोपोनिन की रिहाई की अनुमति देता है-मैं समय के साथ नजर रखने के लिए । वहां लगभग आधारभूत के साथ ischemia के एक घंटे के बाद कोई फर्क नहीं है जबकि reperfusion के बाद वहां समय के साथ एक निरंतर वृद्धि के रूप में चित्रा 7में दिखाया गया है । ट्रोपोनिन-I के लिए, अंतर-समूह अंतर भी इन प्रयोगों में महत्वपूर्ण नहीं थे ।

Figure 1
चित्र 1 . प्रयोगात्मक समयरेखा का अवलोकन । रोधगलन में महत्वपूर्ण कदम के लिए योजनाबद्ध समयरेखा/reperfusion चोट मॉडल । आधारभूत कोरोनरी दृश्य, ischemia के समय शुरू, हृदय अतालता की निगरानी और परीक्षण पदार्थ इंजेक्शन प्रयोग में महत्वपूर्ण कदम हैं । सभी प्रयोगों में सटीक समय का उपयोग reproducibility सुनिश्चित करता है. Euthanizing के 2h reperfusion चरण के पूरा होने के बाद 15-20 मिनट के अंदर ही एनिमल और एक्साइज का काम किया जाना चाहिए । KCl: पोटेशियम क्लोराइड. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 2
चित्र 2 . रक्त नमूना और विश्लेषण की समयरेखा । रक्त के नमूने के लिए समय अंक के साथ प्रयोग किया जाता थक्कारोधी के प्रकार के साथ संकेत दिया जाता है । प्रयोग के अनुसार अतिरिक्त नमूने लिए जा सकते हैं और analytes को मापा जा सकता है. अधिनियम: सक्रिय थक्के समय, BGA: रक्त गैस विश्लेषण, आरटी: कमरे के तापमान । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 3
चित्र 3 . कोरोनरी एंजियोग्राफी. (क) के Fluoroscopic दृश्य बेसलाइन पर बाईं coronaries, पीले तीरों को इंगित करने के लिए पहली और दूसरी विकर्ण शाखाओं, सफेद तीर अंक के लिए दिल एपेक्स (ख) बाएँ निलय (एल. वी.) का कोई प्रवाह क्षेत्र दिखा occluded बालक, लाल तीर अंक पीसी के लिए मैं कैथेटर (सी) फिर से reperfusion के गुब्बारे के साथ के अंत में बालक के बंद करने PCI कैथेटर के दौरान ischemia के रूप में बालक में एक ही साइट को फिर से डाला । CX: circumflex कोरोनरी धमनी, बालक: बाईं पूर्वकाल उतरते कोरोनरी धमनी, MC: Millar कैथेटर, बाएं निलय में डाला । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 4
चित्र 4 . ऊतक नमूने के योजनाबद्ध चार्ट । दिल विच्छेदन और आगे विश्लेषण के लिए विभिंन क्षेत्रों के नमूने के सटीक समय । समयरेखा ischemia, पशु प्रयोग की समाप्ति के बाद 20 मिनट की शुरुआत के बाद 205 मिनट में शुरू होता है । यह पशु euthanizing के बाद 40 मिनट की एक अधिकतम के भीतर टीटीसी में ऊतक वर्गों की मशीन के लिए महत्वपूर्ण है । ANR, विट और NIT की सैंपलिंग को सफेद चौकोरों के रूप में दर्शाया गया है । 4% formaldehyde में AAR की मशीन infarct आकार के सटीक निर्धारण के लिए NIT और विट के बीच स्पष्ट अंतर की अनुमति देता है । AAR: जोखिम में क्षेत्र, ANR: क्षेत्र खतरे में नहीं, LV: वाम निलय, NIT: गल कोरोनरी ऊतक, ओटीसी: ऊतक-टेक, आर. वी.: सही निलय, टीटीसी: triphenyl tetrazolium क्लोराइड, विट: व्यवहार्य कोरोनरी ऊतक । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 5
चित्र 5 . में सीटू जोखिम पर क्षेत्र के बीच भेदभाव (AAR) और क्षेत्र में नहीं जोखिम ANR. (एक) पूरे दिल की प्रतिनिधि तस्वीर बस प्रयोग के अंत में sternotomy के बाद । (ख) प्रतिनिधि की तस्वीर विच्छेदन के बाद 3-5 मिमी मोटी बाईं निलय स्लाइसें दिखा । AAR और ANR स्पष्ट रूप से परिभाषित कर रहे हैं, पीले तीर से संकेत दिया, और सफेद तीर ANR नमूना क्षेत्र से पता चलता है. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 6
चित्र 6 . Ischemia और infarct आकार । (क) वाम निलय (LV) के AAR का प्रतिशत भार. (B) AAR के NIT का प्रतिशत सतह क्षेत्र । (ग) AAR गणना का एक प्रतिनिधि चित्र. (D) NIT परिकलन का एक प्रतिनिधि चित्र । सफेद तीर से पता चलता है कि विट सैंपलिंग एरिया है और ब्लैक एरो को NIT sample एरिया दिखाता है । डेटा ImageJ सॉफ्टवेयर का उपयोग कर की गणना की गई । मान मतलब ± ± एसडी के संकेत के साथ प्रत्येक व्यक्ति के प्रयोग के लिए डॉट्स के रूप में दिखाया जाता है । नियंत्रण समूह, n = 3 और FXIIa अवरोधक इलाज समूह, n = 2 । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 7
चित्र 7 . कार्डिएक मांसपेशी क्षति मार्कर । कार्डियक ट्रोपोनिन-मैं दोनों नियंत्रण और FXIIa अवरोधक इलाज समूह के स्नातकोत्तर में समय के साथ एकाग्रता । रक्त jugular नस से बेसलाइन पर EDTA प्लाज्मा ट्यूबों में एकत्र किया गया था, ischemia के अंत और कई reperfusion और कार्डियक ट्रोपोनिन के दौरान समय अंक-मैं एकल plex निलंबन सरणी (जैव plex) द्वारा मापा गया था । डेटा मतलब ± ± एसडी के संकेत के साथ प्रत्येक व्यक्ति के प्रयोग के लिए डॉट्स के रूप में दिखाया जाता है । नियंत्रण समूह, n = 3 और FXIIa स्वास्थ्यकर्मी समूह, n = 2. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

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Discussion

रोधगलन/आर चोट अंतिम infarct आकार जो सीधे तीव्र रोधगलन3के बाद रोगी के रोग का निदान में अनुवाद किया है पर एक महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ता है । रोधगलन I/R चोट के pathophysiology को समझना पहला कदम कम या इसे रोकने के लिए है । रोधगलन I/R चोट एक गंभीर स्थिति है कि सीधे occluded वाहिकाओं के reperfusion के बाद होता है । I/R चोट जंमजात प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के सक्रियकरण की ओर जाता है और सेलुलर नुकसान reperfusion और आसपास के ऊतकों20की साइट पर होता है । एक ताजा अध्ययन मस्तिष्क मैं/आर चोट जब FXIIa अवरोध करनेवाला8के साथ इलाज के एक चूहे के मॉडल में तंत्रिका विज्ञान के परिणाम में सुधार दिखाया । हालांकि, वर्तमान पायलट अध्ययन में हम रोधगलन पर bicyclic FXIIa अवरोधक का कोई प्रभाव नहीं पाया/ प्रयुक्त FXIIa अवरोधक उपंयास और सूअरों में अपनी फार्माकोकाइनेटिक्स अभी तक नहीं जाना जाता है । इसलिए, प्रभाव की कमी मनाया अनुचित खुराक या आवेदन के कारण हो सकता है । यह अनुवर्ती अध्ययन में संबोधित किया जाना चाहिए ।

एक पशु मॉडल का मानकीकरण गहराई में रोधगलन मैं/आर चोट के pathophysiology और क्लीनिक में उपयुक्त समाधान लाने के लिए जांच करने के लिए आवश्यक है । रोधगलन I/R चोट के pathophysiology की जांच के क्रम में यह अंतर्निहित सेलुलर तंत्र का अध्ययन करने के लिए अच्छे और प्रतिनिधि नमूना की आवश्यकता है । सुअर का बंद छाती रोधगलन I/R चोट मॉडल एक reproducible विधि प्रदान करता है, जो नैदानिक स्थिति के करीब है, और सेलुलर तंत्र और परीक्षण उपंयास नई चिकित्सकीय समझ में मदद करने के लिए उपयोगी है । वर्तमान मॉडल के वेरिएंट से पहले उपर्युक्त प्रयोजनों के लिए वर्णित किया गया है14,17,18।

सूअरों में तीव्र रोधगलन के हमारे प्रोटोकॉल ऐमियोडैरोन के साथ पूर्व उपचार की जरूरत नहीं है के रूप में पहले वर्णित18,21। हम हृदय संबंधी अतालता और वेंट्रिकुलर अलिंद के मामले में cardioconversion के लिए एक biphasic defibrillator को कम करने के लिए मन्या साइनस मालिश का इस्तेमाल किया. मन्या साइनस मालिश का उपयोग नैदानिक अलिंद अलिंद22को प्रभावित करने के लिए जाना जाता है, लेकिन अभी तक यह रोकने के लिए या MI में वेंट्रिकुलर अलिंद की शुरुआत में देरी नहीं दिखाया गया है, या तो मनुष्यों में या सुअर मॉडल में. इसके अलावा, sevoflurane के उपयोग तीव्र रोधगलन के सुअर का मॉडल में वेंट्रिकुलर अतालता के साथ ही मृत्यु दर को कम करने में मदद करता है 23.

reproducibility सुनिश्चित करने के लिए और प्रयोग के दौरान घनास्त्रता के जोखिम को कम करने के लिए, हेपरिन की कई खुराकों के बजाय Koudstaal एट अल18द्वारा उदाहरण के लिए वर्णित के रूप में तय हेपरिन खुराक का उपयोग करके, अधिनियम की दोहराया माप के आधार पर इंजेक्ट किया गया. हेपरिन प्रशासन के एक नियंत्रित राशि I/R चोट के संदर्भ में जमावट झरना की जांच करने में मदद करता है । इवांस ब्लू AAR के सटीक निर्धारण की अनुमति देता है/ पुनः के बाद इवांस ब्लू के नसों में इंजेक्शन रोड़ा के दौरान सही साइट पर बालक का fluoroscopic मार्गदर्शन के तहत प्रेरण शामिल करने के लिए गैर ANR पर ंयूनतम प्रभाव के साथ दिल के कोरोनरी भाग सहित पूरे सुअर का धुंधला हो जाता है मायोकार्डियम और vasculature । इवांस ब्लू एक ज्ञात साइटोटोक्सिक पदार्थ है24. वर्तमान प्रयोगों में यह दिल vasculature में ANR में endothelial कोशिका परत की व्यवहार्यता बनाए रखने के लिए महत्वपूर्ण था ताकि यह एक इंट्रा व्यक्तिगत नियंत्रण के रूप में उपयोग करने के लिए तो 100 एमएल इवांस ब्लू प्रणालीबद्ध इंजेक्शन और पूरे खून के साथ पतला था इसके विषाक्तता. पहले, एक ऐसी ही सेटिंग में, 50 मिलीलीटर 2% इवांस ब्लू सीधे coronaries में हृदय कोशिकाओं को अपनी cytotoxicity के जोखिम को बढ़ाने में इंजेक्ट किया गया था25. अगले महत्वपूर्ण कदम सीधे काटना के लिए शीर्ष से 3-5 मिमी स्लाइस में mitral वाल्व (हर जानवर में सही स्थिति) और इस विधि का उपयोग करने के लिए बाएं निलय के एक प्रतिशत के रूप में AAR का एक सटीक गणना करने के लिए किया गया था ।

विधि का वर्तमान विवरण पहले से वर्णन नहीं किया गया है जो बेहतर विवरण प्रदान करता है । 24 घंटे के लिए 4% formaldehyde में टीटीसी सना हुआ अनुभाग मशीन व्यवहार्य (लाल) और (सफेद) ऊतक, जो अंत में आगे आणविक धुंधला के लिए नमूने के reproducibility बढ़ जाती है के बीच एक स्पष्ट अंतर प्रदान करता है । reperfusion के 2 ज पर रक्त नमूना रणनीति बहुत जल्दी (10 और 30 मिनट) reperfusion के चरणों के रूप में के रूप में अच्छी तरह से बाद (60 और 120 मिनट) में नव व्यक्त अणुओं का पता लगाने में सक्षम बनाता है । सही रक्त और ऊतक नमूने और भंडारण भी प्लाज्मा झरना मार्करों के विश्लेषण के लिए इस तरह के पूरक और जमावट प्रोटीन की अभिव्यक्ति के रूप में महत्वपूर्ण हैं ।

वर्तमान प्रोटोकॉल एक लंबा reperfusion समय है, कुछ घंटों से दिनों के लिए संशोधित किया जा सकता है । यह शोधकर्ता दिल पर I/R चोट के बाद के परिणामों की जांच करने के लिए अनुमति देता है और भी उपंयास दवाओं और उनके प्रभाव के आकलन के परीक्षण में सक्षम बनाता है । वर्तमान प्रोटोकॉल की सीमा दिल समारोह की माप के लिए एक दबाव टिप कैथेटर का उपयोग है । हृदय समारोह पर अधिक विश्वसनीय डेटा एक दबाव मात्रा पाश माप प्रणाली के उपयोग के द्वारा प्राप्त किया जा सकता है । सारांश में वर्तमान विधि विस्तृत महत्वपूर्ण कदम सुअर का बंद छाती रोधगलन मैं/आर चोट मॉडल के reproducibility बढ़ाने के लिए आवश्यक प्रदान करता है जब मॉडल का इरादा उपयोग के संदर्भ में सेलुलर और आणविक परिवर्तन का अध्ययन करने के लिए है रोधगलन मैं/आर चोट pathophysiology अध्ययन या उपंयास चिकित्सीय विकल्प का अध्ययन ।

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Disclosures

लेखक हितों के टकराव की घोषणा नहीं की ।

Acknowledgments

लेखक FXIIa अवरोधक और संबंधित नियंत्रण प्रदान करने के लिए प्रोफेसर ईसाई Heinis स्वीकार करना चाहते हैं । हम भी कृतज्ञता Olgica Beslac, डॉ डैनियल Mettler और Kay Nettelbeck प्रयोगात्मक सर्जरी यूनिट, जैव चिकित्सा अनुसंधान के लिए विभाग, तकनीकी सहायता के लिए बर्न के विश्वविद्यालय से स्वीकार करते हैं । नैदानिक, हस्तक्षेप और बाल चिकित्सा रेडियोलॉजी, बर्न विश्वविद्यालय अस्पताल, Inselspital के लिए विभाग से Celine Guillod और मथायस Rausch एक्स-रे उपकरण और तकनीक के साथ समर्थन प्रदान की है । इस परियोजना स्विस राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन, परियोजना no 320030_156193 द्वारा वित्त पोषित किया गया । हम भी संचार और विपणन, बर्न विश्वविद्यालय अस्पताल, हमारे प्रयोग वीडियो रिकॉर्डिंग के लिए Inselspital से श्री ऺेतो Haenni शुक्रिया अदा करना चाहूंगा ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
ABL 90 Flex, blood gas analyser Radiometer - Blood gas analysis (BGA)
ACT Plus Medtronic - Activated clotting time
Atropin Sintetica - Atropinum Sulfas, 0,5mg/ml
Balance (20-500 Kg) NAGATA Scale, Tiwan HTB/HTR Alternative products can be used
Balance (21-4200 g) Mettler toledo, Switzerland MS4002SDR Alternative products can be used
Blood collection tubes: EDTA, citrate and serum S-Monovette, Nuembrecht, Germany 05.1167.001,
05.1071.001
and
05.1557.001 respectively		 Alternative products can be used
BV Pulsera mobile C-arm Philips - Alternative products can be used
Centrifuge Labcare, UK ALC PK120R Alternative products can be used
Defibrillator Lifepak 12 Medtronic - Alternative products can be used
Dextran from Leuconostoc mesenteroides Sigma-Aldrich, Germany D3759 Average M.wt 48000-90000
Digital single lens reflex camera Sony, Thailand DSLR-A500/A550 Alternative products can be used
Dissecting forceps Alternative products can be used
EMPIRA RX PCI dilatation catheter Cordis, Johnson&Johnson, USA 85R15300S Diameter 3 mm, length 15 mm, Alternative products can be used
EMPIRA RX PCI dilatation catheter Cordis, Johnson&Johnson, USA 85R15350S Diameter 3.5 mm, length 15 mm, Alternative products can be used
Evans Blue Sigma-Aldrich, Germany E2129 Toxic
Fabius GS premium respirator Dräger, Lübeck, Germany - Anesthesia work station, Alternative products can be used
Fentanyl Inselspital ISPI - Fentanyl 2500mcg/50ml
Formaldehyde Pathology Institute, Bern University SI148701 Alternative products can be used
FXIIa inhibitor Provided by Prof. Christian Heinis' laboratory in EPFL Novel bicyclic peptide
Galeo, coronary guidewire Biotronik, Germany 125497 Alternative products can be used
Guidance catheter Boston Scientific, Florida, USA 34356-06 6F (100 cm, EB3.75). Alternative products can be used
Heparin Sodium Drossapharm, Basel, Switzerland - Liquemin, 25000 U.I./5 ml
High end electrosurgery BOWA, Germany ARC 400 Electrical source for blood suction. Alternative products can be used
Hydro-Guardmini breathing filter Intersurgical, Lithuania 1745000 Filters
Image J National Institute of Health, USA 1.47v Alternative products can be used
Inflation device, Atrion QL2530 Atrion medical product, Alabama, USA 96402 Alternative products can be used
IntelliVue MP 70 Philips, Boeblingen, Germany - Monitor (ECG, heart rate, blood presure and body temperature). Alternative products can be used
KCl Sintetica SA - Potassium chloride 15%
Ketamine Vetoquinol - Narketan, 1ml/100mg
LR-ACT Medtronic 402-01 ACT special syringes
Midazolam Roche - Dormicum, 5mg/ml
Monopolar scalpel Alternative products can be used
Needle holder Alternative products can be used
High resolution camera, PathStand Macro Imaging Stand for Grossing Spotimaging, USA 1080 p HD resolution. Alternative products can be used
PBS In-house preparation - Alternative products can be used
Peripheral venous cannula, 18 G Alternative products can be used
PowerLab 4/35 data acquisition system Adinstruments, Spechbach, Germany -
Rotamax120T Heidolph, Germany 544-41200-00 Shaker. Alternative can be used
Rüschelit-Super Safety Clear Tube Teleflex, Dublin, Irland 112480 Air way tubing, Alternative products can be used
Safe Pico Aspirator Syringes Radiometer 956-622 BGA special syringes
Saline Sintetica Bioren - NaCl 0,9%. Alternative products can be used
Sevorane 1.5% AbbVie AG - Sevorane 250ml 100%
Sheath Cordis, Johnson&Johnson, USA 504-607 A AVANTI + / 7 F, Alternative products can be used
Space infusion pump B.Braun Medical AG, Germany - For infusion of fentanyl. Alternative products can be used
SPR-350 (Millar catheter) Adinstruments, Texas, USA 840-8166 MIKRO-TIP, 5F, 120 cm
Sternotomy saw Alternative products can be used
Sutures ETHICON, Johnson&Johnson, USA Y3110H Monocryl 3-0 SH-1 Plus. Alternative products can be used
Syringes (20, 10 and 5 mL) CODAN,Baar, Switzerland 62.7602,
62.6616,
62.5607
respectively		 Used to inject anesthetic materials intramuscularly or directly into the central venous line. Also to inject heparin or FXIIa or the respective control. Alternative products can be used
Thorax spreader Alternative products can be used
Tissue-tek SAKURA, Netherlands 4583 O.C.T. compound
Vascular forceps Alternative products can be used
Xenetix 300 contrast media Guerbet, Zürich, Switzerland - Lobitridol, 300 mg iodide/ml
Xylazine Vetoquinol - Xylapan, 20mg/1 mL
2,3,5-Triphenyltetrazolium choride Sigma-Aldrich, Austria T8877
500 μL tubes (eppendorf) Trefflab, Switzerland 96.08185.9.03 Alternative products can be used

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References

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चिकित्सा अंक 133 रोधगलन बंद छाती मॉडल ischemia/reperfusion चोट नमूना तकनीक सुअर का जोखिम में क्षेत्र गल कोरोनरी ऊतक व्यवहार्य कोरोनरी ऊतक
ऊतक और रक्त नमूना प्रक्रियाओं के मानकीकरण द्वारा एक बंद छाती सुअर का रोधगलन मॉडल के सुधार
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Abdelhafez, M. M., Shaw, J., Wilbs, J., Despont, A., Rieben, R. Improvement of a Closed Chest Porcine Myocardial Infarction Model by Standardization of Tissue and Blood Sampling Procedures. J. Vis. Exp. (133), e56856, doi:10.3791/56856 (2018).

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