Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Cancer Research

זיהוי של OTX1 ו- OTX2 כמו שני סמנים מולקולריים אפשריים עבור קרצינומה Sinonasal ואת חוש הריח נוירובלסטומה

doi: 10.3791/56880 Published: February 28, 2019
* These authors contributed equally

Summary

גנים Homeobox גנים הם גנים תקינה קשורה לעיתים קרובות עם גידולים האורגניזמים למבוגרים. . חקרנו שלהם ביטוי השוואתית מאת immunohistochemical וניתוח בזמן אמת PCR, mucosae האף נורמלי, דלקתיות, sinonasal neoplasms על מנת להשתמש בהם בתור מטרות אפשריות האבחון והטיפול.

Abstract

OTX גנים homeobox (HB) הגנים באים לידי ביטוי במהלך מורפוגנזה עובריים ובמהלך ההתפתחות של האפיתל חוש הריח אורגניזמים למבוגרים. מוטציות המתרחשים הגנים האלה קשורים לעיתים קרובות tumorigenesis-אנוש. אין נתונים זמינים היום לגבי הקשר האפשרי בין גנים OTX לבין גידולים של חלל האף. מטרת עבודה זו היא להבין אם OTX1 ו- OTX2 יכול להיחשב סמנים מולקולריים להתפתחות גידולים באף. בחרנו אדנוקרצינומות אפיים ואת sinonasal לחקור את הביטוי של הגנים OTX1 ו- OTX2 דרך immunohistochemical וניתוחים PCR בזמן אמת. הן OTX1 והן OTX2 נעדרו כל הדגימות של sinonasal במעיים מסוג אדנוקרצינומה (ITACs). OTX1 mRNA זוהה רק ב- Non-מעיים מסוג אדנוקרצינומה (NITACs) בעוד OTX2 mRNA בא לידי ביטוי רק ב חוש הריח נוירובלסטומה (תוספות). הראו כי בביטוי הגן דיפרנציאלי עבור גנים הן OTX1 והן OTX2 עשוי להיות סמן מולקולרי שימושי כדי להבחין בין סוגים שונים של גידולים sinonasal.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

OTX HB גנים הם homologue חוליות של גנים orthodenticle דרוזופילה (otd) הם קידוד עבור גורמי שעתוק, אשר באים לידי ביטוי בדרך כלל במהלך מורפוגנזה עובריים, אך הם יכולים להתבטא גם בתוך האורגניזם למבוגרים עם פונקציות שונות . במהלך התפתחות עובריים הם שולטים המפרט של זהות תא תאית התמיינות, המיקום של axis¹ הגוף. משפחת OTX כולל הגנים OTX1 ו- OTX2 המציגים פונקציות שונות. OTX1 מעורב במוח ופיתוח איבר חישה. האורגניזם למבוגרים, זה מתבטא אברי החישה, הוא עיבד ברמות נמוכות. באונה הקדמי של בלוטת יותרת המוח2; זה גם ממלא תפקיד hematopoiesis, באות לידי ביטוי ב hematopoietic pluripotent וקדמון תאים3. OTX2 עוסקת בפיתוח של הראש rostral ואת מעשיה מתורגמים חלבונים כמו מורפוגן כי זה יוצר מדרג דרך אילו גנים אחרים מופעל או מודחקים בצורה-עתיים, ובכך לתרום תא התפשטות ובידול. בתוך האורגניזם למבוגרים, OTX2 נמצא באופן בלעדי מקלעת דמית העין מקלעת ובלוטת האיצטרובל4.

מוטציות בגנים OTX קשורים לעיתים קרובות המראה של פגמים מולדים, סומאטית או מטבוליות אנושי. רווח או הפסד מוטציות בגנים OTX יכולים לקדם את tumorigenesis אם הם לא יכולים לשלוט כראוי צמיחה ו/או בידול הסלולר5. לוקמיה, לימפומה גם כן כמו רבים גידולים מוצקים (למשל, medulloblastomas6, שאינה הודג'קין לימפומה אגרסיבית2, השד קרצינומה7, סרטן המעי הגס8ו רטינובלסטומה9), ושוחררו ביטוי של גנים HB OTX הוא מתועד היטב10. בנוסף, מוטציות OTX2 הוכחו במקרים של anophthalmia ו- microphtalmia11 בשל תפקיד מכריע עבור גן זה בבקרה על התפתחות העין.

בהקשר של neoplasms מוצק, גילוי סמני פנוטיפי המולקולריים הוא אתגר חשוב עבור אבחון, מיון, טיפול של מספר סוגים של הגידול11, כולל כאלו שמוצאן חלל האף והסינוסים paranasal הסינוסים. למעשה, למרות זאת באזורים אלה לכבוש רק אנטומי רווח צנוע, אפיתל הרירית, בלוטות, רקמות רכות, עצם, סחוס או עצבית/neuroectodermal, תאים hematolymphoid וניתן לעיתים קרובות האתר עבור המקור של מורכב ושונה בהיסטולוגיה קבוצות של גידולים. סוגים שונים של neoplasms הכוללת מערכת sinonasal מציגים מגוון רחב של תכונות להתגבר על מה נראה בדרך כלל במערכת העיכול העליונה aerodigestive או אפילו במהלך רוב חלקי הגוף12. Sinonasal ממאירות נדירים ולהציג שכיחות השנתי של תושבים כוללות ברחבי העולם, אז זה מונע מחקרים לגבי המסלולים המעורבים את tumorigenesis ובדיקות של אסטרטגיות טיפול אלטרנטיבי. למרות זאת, ההתקדמות הדמיה טכניקות, גישות ניתוח, הקרנות השתפרו ניהול קליני מסרטן sinonasal. יתר על כן, הפיתוח של שורות תאים, כמו גם מודלים בעלי חיים ושל סרטן פרופילים גנטיים מהווים כיום את הבסיס העתידי טיפולים נגד סרטן ממוקדים13. נכון להיום, ישנם דיווחים לא לגבי ביטוי OTX1 ו/או OTX2 neoplasms של חלל האף, הסינוסים paranasal, לוע האף. מאז בעבר הבחנו כי OTX1 ו- OTX2 מעורבים בסרטן השד7, תהינו אם הגנים האלה יכולים להיות נוכחים לא רק נורמלי רירית האף, אבל גם גידולים בתוך של חלל האף. כדי להשיג מטרה זו שאנו המתקבל המחלקה של פתולוגיה של "Ospedale di וטנים" בדגימות וארזה (varese) של רירית רגיל ו אדנוקרצינומה אפיים ואת sinonasal שנגבו משנת 1985 עד 2012, המסווגים על פי ארגון הבריאות העולמי (WHO) סיווג של הראש, הצוואר גידולים. בחרנו לנתח אותם באמצעות ניתוחים בזמן אמת PCR ואימונוהיסטוכימיה, הערכנו ביטוי OTX1 ו- OTX2 כדי לקבוע אם הם יכולים להיחשב סמנים מולקולריים עבור סוגים אלה של גידולים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

כל המחקרים בוצעו לפי ההכרזה של הלסינקי (1975) עם כתב הסכמה מדעת, אושרה על ידי הוועדה האתית של האוניברסיטה של Insubria ב וארזה.

1. אוסף של הדגימות

  1. לאסוף ולחלק כל הדגימות האנושי Formalin-Fixed Paraffin-Embedded (FFPE) לקבוצות שונות על פי סיווג WHO של הראש, הצוואר גידולים14.
    הערה: כאן השתמשנו בדגימות הבאות: רירית sinonasal נורמלי כפקד (10 דוגמאות); פפילומה הפוכה (IP, קוד ICD-O 8121/1); Sinonasal ITAC (ICD-O קוד 8144/3, דגימות 32); NITAC (ICD-O קוד 8140/3, דגימות 12); בצורת בלוטה פיברוזיס קרצינומה (ACC, קוד ICD-O 8200/3); אדנומה pleomorphic (PA, קוד ICD-O 8941/3); על (ICD-O קוד 9522/3, דגימות 13); גרוע הבדיל קרצינומה נוירואנדוקרינים (PDNEC, קוד ICD-O 8041/3, דגימות 19); גידולים נוירואנדוקריניים (נטו, ICD-O קוד 8041/3).

2. נוגדנים

  1. Deparaffinization, התייבשות של מקטעים
    1. מחממים את השקופיות לדוגמה בתנור ב 60 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות, נתרענן-3 מיקרומטר עבה FFPE חלקים באמצעות סדרות אלכוהול למים.
    2. בקצרה לשטוף את השקופיות של קסילן למשך 10 דקות, חזור על שלב זה; לשטוף את השקופיות עבור 5 דקות ב- 100% אלכוהול, חזור על שלב זה באמצעות אלכוהול 95%, 85% ו 75% באופן סדרתי. יש לשטוף את השקופיות עבור 5 דקות במים מזוקקים.
  2. חסימת הפעילות אנדוגני
    1. לחסום את פעילות אנדוגני על-ידי הצבת את השקופיות ב- 3% מימית חמצן למשך 12 דקות.
  3. אחזור אנטיגן
    1. לבצע אחזור אנטיגן על ידי טיפול עם 10 מ מ מאגר ציטראט (pH 6) למשך 10 דקות בטיפול מיקרוגל.
  4. הדגירה עם נוגדן ראשוני
    1. לשטוף את הסעיפים במאגר TBS (pH 7.4), ולאחר מכן להוסיף פתרון חסימה למשך 10 דקות.
    2. לשטוף את הסעיפים במאגר TBS (pH 7.4), ולאחר מכן להוסיף 0.2% X טריטון.
    3. דגירה בין לילה ב 4 ° C עם עז נגד OTX2 נוגדנים מדולל מטריים.
  5. הדגירה עם נוגדנים משניים
    1. דגירה הסעיפים לשעה בטמפרטורת החדר עם biotinylated הארנב עז נגד נוגדנים משניים מדולל 1:200 ואחריו ABC-peroxidase קומפלקס (ראה טבלאות של חומרים).
  6. לפתח את immunoreaction
    1. לפתח את immunoreaction באמצעות 3, 3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride, counterstain הגרעינים עם Hematoxylin האריס.
  7. הרכבה והדמיה
    1. מייבשים את המקטעים באמצעות חרמש אלכוהול-סרגל ולהבהיר אותן באמצעות חומר ניקוי ממוצא terpene (ראה טבלה של חומרים). להטביע מקטעים במדיום הרכבה, במקום הסעיפים על שקופית מיקרוסקופ, ולבחון הסעיפים באמצעות מיקרוסקופ אופטי.

3. RNA החילוץ ולא הפוכה-תמלול

  1. החילוץ-RNA
    1. לחלץ RNA הסעיפים על-ידי ביצוע השלב הראשון של פרוטוקול immunoprecipitation (ראו סעיף 2.1) ולשמור את השקופיות במים מזוקקים. חפיפה הסעיפים מוכתם עם המקביל hematoxylin אאוזין צבעונית מקטעים כדי לזהות קטעים מעניינים.
    2. לבצע את החילוץ RNA באמצעות ערכת חילוץ RNA מסחרי עבור דגימות FFPE (ראה טבלה של חומרים) והוראות היצרן הבא.
  2. הפוך-שעתוק RNA
    1. להשתמש ערכת מסחרי לתעתק. רטרו-RNA לתוך cDNA (ראה טבלה של חומרים) בעקבות הפרוטוקול. רטרו-לתעתק לפחות 1000 ננוגרם של RNA הכולל כדי לבצע ניתוח מספר.

4. בזמן אמת PCR וניתוח נתונים

  1. PCR בזמן אמת
    1. לבצע ניתוחים PCR בזמן אמת כמותית (לרביעיית-PCR) עם טכנולוגיה מבוססת על בדיקה (ראה טבלה של חומרים) ו הצנטרפוגה תרמי של.
  2. הכנת המיקס תגובת ה-PCR
    1. להכין את תערובת התגובה PCR באמצעות µL 12.5 של מיקס מאסטר המבוסס על בדיקה, רגשים 1.25 µL כל OTX1, OTX2 ו ACTB (ראה טבלה של חומרים), 50 ng של cDNA, ונטולת נוקלאז מים עד 25 µL של הנפח הכולל.
    2. לבצע את כל התגובות שהפקידים באמצעות הגן ACTB של הפקד אנדוגני לנרמל את רמות ביטוי גנים.
    3. Centrifuge את הצלחת ב x 1,109 g למשך 3 דקות ולאחסן את הצלחת מוגן מפני אור ב 4 ° C עד הניסוי.
  3. הגדרת הצנטרפוגה תרמי
    1. סט הפרופיל הצנטרפוגה תרמי עם התחלה לוהטת הראשונית מחזור ב 50 מעלות צלזיוס למשך 2 דקות ו- 95 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות, ואחריו 40 מחזורי ב 95 ° C 15 s ומעגל סופי ב 60 מעלות צלזיוס במשך 1 דקה.
  4. ניתוחים ברמה של ביטוי גנים
    1. לנרמל את רמות ביטוי גנים באמצעות השיטה הסף (ΔCt) מחזור השוואתי באמצעות הגן ACTB של הפקד אנדוגני.
    2. הערכת רמות ביטוי גנים בשיטת 2-ΔCt , להתוות את התוצאות.
  5. ניתוחים סטטיסטיים
    1. לבצע ניתוח סטטיסטי באמצעות הסטודנט t-Test, בהתחשב תוצאות משמעותיות מבחינה סטטיסטית עם 0.05 < p .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

ברירית נורמלי הבחנו חזקה ואחידה תגובתיות גרעיני עבור גנים OTX האפיתל הנשימה-סוג pseudostratified ciliated והן submucosal הבלוטות התאים (איור 1 א'). מצאנו את הביטוי גרעיני עבור OTX1 כל NITACs דגימות (איור 1B), בעוד מעט או נעדר immunoreactivity הודגשה ב- ITACs (איור 1C). Immunoreactivity אינטנסיבי היה נוכח כל תוספות (איור 1D); בין PDNECs, OTX ביטוי מגוונות בין אחוז תאים חיוביים (איור 1E). Immunohistochemical ניתוח סטטיסטי הופיעה עם צ'י מרובע ו/או בדיקה מדוקדקת של פישר הדגימו כי העדר OTX גנים בדגימות ITAC היה משמעותי סטטיסטית (n = 23, p < 0.01).

ניתוחים בזמן אמת PCR אישר את הביטוי של גנים הן OTX1 והן OTX2 בדגימות שליטה (איור 2AB); OTX1 אבל לא OTX2 בא לידי ביטוי בדגימות NITAC והיו שני גנים לחלוטין downregulated ב ITACs (איור 2AB). על דגימות מצאנו רק הביטוי של גנים OTX2 בזמן OTX1 היה downregulated, בין הדגימות PDNEC הביטוי של גנים הן מגוונות (איור 2AB).

מבחן t של סטודנט שבוצעה ב- PCR בזמן אמת אישר נתונים משמעותיים מבחינה סטטיסטית עבור OTX1 בפקדים נ' ITACs (n = 9, p < 0.05), פקדים לעומת הרחבות של (n = 6, p < 0.05), פקדים לעומת PDNECs (n = 8, p < 0.05), ועבור OTX2 בשליטה לעומת NITACs (n = 5, 0.05 < p ), פקדים לעומת ITACs (n = 9, p < 0.05), פקדים לעומת הרחבות של (n = 6, p < 0.05), ופקדים לעומת PDNECs (n = 8, p < 0.05).

Figure 1
איור 1 : להחליפן בתמונות של ביטוי שליטה ורקמות אמצעים OTX immunohistochemical. התגובה שפותחה על ידי הנוגדן משני מצומדת peroxidase חשף שהאות (חום כהה) היה גלוי בסעיפים FFPE בקרה 5 של רירית sinonasal רגיל (א), 7 מקרים של אי-מעיים-type אדנוקרצינומה (NITACs) (B), 7 המקרים חוש הריח נוירובלסטומה (תוספות) (D), 11 מקרים הבדיל גרוע קרצינומה נוירואנדוקרינים (PDNECs) (E), בעוד immunoreactivity לא מזוהה במקרים 23 של במעיים מסוג אדנוקרצינומה (ITACs) ניתח (C). DAB-Hematoxylin; ההגדלה המקורי: 200 x, סולם בר = 100 מיקרומטר.

Figure 2
איור 2 : ניתוח בזמן אמת PCR של OTX1 (א) ו- OTX2 (ב) mRNA ביטוי רגיל, אמצעים רקמות האף. עבור ניתוחים בזמן אמת PCR, שימשו את הדוגמאות הבאות: סעיפים FFPE 5 6 מקרים של חוש הריח נוירובלסטומה (תוספות), 8 9 מקרים של במעיים מסוג אדנוקרצינומה (ITACs), 5 מקרים של אדנוקרצינומות Non-מעיים-type (NITACs), שליטה רירית נורמלי מקרים של גרוע הבדיל קרצינומות נוירואנדוקריניים (PDNEC). בציר ה-X סוג הדגימה הוא דיווח, בעוד ציר Y מייצג את הערכים- ΔCt 2. נתונים משמעותיים מבחינה סטטיסטית (p < 0.05) בין גידולים ובקרה התקבלו על ידי הסטודנט t-לבדוק, מודגשים עם כוכביות. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

מחקר זה מראה בפעם הראשונה זה, המבוסס על רמות ה-mRNA, הגנים HB OTX1 ו- OTX2 באים לידי ביטוי רירית sinonasal רגיל ו בלוטות submucosal, פוליפים דלקתיים, sinonasal Schneiderian papillomas ולאחר שונים של אפיתל, neuroectodermal neoplasms, לרבות קרצינומות קשקש, sinonasal-מעיים מסוג אדנוקרצינומה, גידולים מסוג בלוטת הרוק, neoplasms נוירואנדוקריניים הרחבות.

שינויים, פתרון בעיות:

כדי למנוע השפלה RNA, ביצענו את פרוטוקול deparaffinization מעבדות בפתולוגיה. לאחר שאנחנו שרוט השקופיות, כל הדגימות היו במהירות מקורר, מאוחסנים בתוך קרח יבש עד להמשך השימוש. אנו לבצע כל הבדיקות הבאות בשכונה-זרימה בטיחות שימוש במערך ייעודי של מדי סוכר עם טיפים סטרילי כדי לשמור על תנאים ניסיוני aseptic וכדי למנוע RNA מציג.

מגבלות של הטכניקה:

המגבלה העיקרית של השיטה מסתמכת על הזמינות של דגימות מאז גידולים של חלל sinonasal לעיתים נדירות. הסכום של RNA המחולצים הוא עוד נושא חשוב כי החילוץ-RNA מדגימות FFPE תוצאות ב- RNA מפוצלים אשר קשה לנתח.

משמעות לגבי שיטות קיימות:

האבחנה של גידולים של חלל האף מכיל בדרך כלל צילומי רנטגן ניתוחים, בדיקה אנדוסקופית של חלל האף, סריקת סי. טי, תהודה מגנטית (RMN), ו ביופסיה. במהלך השנים האחרונות, ההתקדמות של מכשור כירורגי, ההתקדמות של טכניקות הדמיה הוביל לכירורגיה אנדוסקופית כמו האסטרטגיה המועדפת עבור גידולים sinonasal. ראוי לציין, טכניקה זו דווחה ככל ריאלי עבור סוגים שונים שפיר או ממאיר של גידולים sinonasal15. הטכניקה שלנו מבוסס על לרביעיית-PCR מאפשר זיהוי סמנים מולקולריים, אשר יכול להפלות באופן שונה דגימות של גידולים שונים: למעשה, אנו מספקים ראיות כי העדר של שני הגנים על בסיס חצי פנסיון ב- ITACs יכול לשמש סמנים מולקולריים בשביל זה סוג הגידול, כמו גם העדר OTX2 ב NITACs. יתר על כן, טכניקה זו ניתן להחיל מיד לאחר הביופסיה, יכול לתת תוצאות סופית תוך פחות מ 6 שעות ביחס ימים או שבועות הכרחי עבור הדוח מבית החולים.

יישומים עתידיים:

מחקרים עתידיים שלנו כרוכים ניתוח גנים, חלבונים רמות הביטוי של הגנים OTX1 ו- OTX2 על בסיס חצי פנסיון באמצעות ניתוחים PCR בזמן אמת, תספיג חלבון ו- immunofluorescence עם נוגדנים ספציפיים כדי לזהות לא רק OTX1, OTX2, אך גם רמות הביטוי משפחה p53. מאז אנחנו הפגינו בעבר כי הביטוי OTX1 מוסדר על ידי p53 ב סרטן השד7, זה יהיה מעניין להבין אם תקנה כזו קיימת גם בגידולים חלל האף. וזמינותו של immunofluorescence ואת וזמינותו של כרומטין Immunoprecipitation (ChiP) יכול לחשוף, בהתאמה, חלבון-חלבון ואינטראקציה DNA-חלבון p53 בין OTXs. אם נמצא חיבור כזה, יישוב להחרשת p53 (בני משפחה, p63 ואת p73), תחשוף אם הביטוי יתר או למטה-רגולציה של גנים OTX היא תלויה p53.

p53 אובדן לתפקד, דרך מוטציה ב- p53 עצמו או לפליטת במשעולים למנהיגנו p53, היא תכונה נפוצה ברוב המכריע של סרטן אנושיים16. רוב האשכול מוטציות p53 בתוך תחום ה-DNA מחייב; לכן, פעילות איגוד ה-DNA היא פונקציית קריטי זה משתנה, טוען כי שינויים בגנים תעתיק יכול להיות המפתח מוטציות p53 פעילות16. מוטציות p53 דווחו כמו תכונה נפוצה של סרטן sinonasal, בתדירות הכללית של 77%, ולהראות שהם האגודה אדנוקרצינומה, אבק עץ חשיפה17. לפיכך, הדגימות שלנו, זה יהיה מעניין כדי להעריך את רמות ה-mRNA, חלבון (על-ידי qR-PCR וניתוח המערבי כתם), כדי לבצע הרצף של גן זה, על מנת לזהות או לשלול הנוכחות של מוטציות מפעיל/inactivating. לבסוף, אם מוטציה חוזרים ונשנים ספציפיים מסוג הגידול נמצא, זה להיות ראויים לציון לייצר תאים מהונדסים, עכברים (עם אחד אלל mutant) הנמל מוטציה זו, לבחון אם המוטציה יכולה לסכם את המחלה.

שלבים קריטיים:

השלבים הקריטיים של מחקר זה כוללים את הקניית דגימות מאוחסנות היטב, גם בתור ביופסיות המאוחסנים ב- RNA מאגר מגן או FFPE דוגמאות בעובי לפחות 8 מיקרומטר, החילוץ לפחות 200 ng של RNA כדי לבצע ניתוח לרביעיית-PCR.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

עבודה זו נתמכה על ידי Centro גרנדי כלים באיטלקית dell'Insubria, דל'אנג'לו Comunitaria דל Varesotto, דל'אנג'לו דל מונטה די לומברדיה, ו- e וילה אנה דל'אנג'לו פליס Rusconi.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
RecoverAll Total Nucleic Acid Isolation Applied Biosystem AM1975
High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit Applied Biosystem 4368814
TaqMan Universal PCR Master Mix, no AmpErase UNG Applied Biosystem 4326614
ABI Prism 7000  Applied Biosystem 270001857
ACTB probe Applied Biosystem Out of production. Sequence protected by copyright
OTX1 probe Applied Biosystem Out of production. Sequence protected by copyright
OTX2 probe Applied Biosystem Out of production. Sequence protected by copyright
Acqueous Hydrogen Peroxide Merk 1072090250
Citrate Buffer Sigma-Aldrich 20276292
Triton Sigma-Aldrich 101473728
Tris Merk 108382
NaCl Merk 106404
Goat Anti-OTX2 Antibody Vector Laboratories Out of production. Catalog number not available
Rabbit Anti-Goat Antibody Vector Laboratories BA5000
ABC-Peroxidase Complex Vector Laboratories PK6100
3,3'-diaminobenzidine tetrahydrocloride (DAB) Sigma-Aldrich D5905
Harris Hematoxylin Bioptica 0506004/L
Pertek Kaltek SRL 1560
BioClear Bioptica W01030799

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Boncinelli, E., Simeone, A., Acampora, D., Gulisano, M. Homeobox genes in the developing central nervous system. Ann genet. 36, (1), 30-37 (1993).
  2. Omodei, D., et al. Expression of the Brain Transcription Factor OTX1 Occurs in a Subset of Normal Germinal-Center B Cells and in Aggressive Non-Hodgkin Lymphoma. American J. Pathol. 175, 2609-2617 (2009).
  3. Levantini, E., et al. Unsuspected role of the brain morphogenetic gene Otx1 in hematopoiesis. Proc. Natl. Acad. Sci USA. 100, (18), 10299-10303 (2003).
  4. Larsen, K. B., Lutterodt, M. C., Mollgard, K., Moller, M. Expression of the homeobox OTX2 and OTX1 in the early developing human brain. J. Histochem. Cytochem. 58, 669-678 (2010).
  5. Abate-Shen, C. Deregulated homeobox gene expression in cancer: cause or consequence? Nat. Rev. Cancer. 2, 777-785 (2002).
  6. de Haas, T., et al. OTX1 and OTX2 expression correlates with the clinicopathologic classification of medulloblastomas. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 65, 176-186 (2006).
  7. Terrinoni, A., et al. OTX1 expression in breast cancer is regulated by p53. Oncogene. 30, (27), 3096-3103 (2001).
  8. Yu, K., et al. OTX1 promotes colorectal cancer progression through epithelial-mesenchymal transition. Biochem. Biophys Res Commun. 44, (1), 1-5 (2014).
  9. Glubrecht, D. D., Kim, J. H., Russel, L., Bamforth, J. S., Godbout, R. Differential CRX and OTX2 expression in human retina and retinoblastoma. J. Neurochem. 111, (1), 250-263 (2009).
  10. Coletta, R. D., Jedlicka, P., Gutierrez-Hartamn, A., Ford, H. L. Transcriptional control of the cell cycle in mammary gland development and tumorigenesis. J. mammary gland Biol. Neoplasia. 9, 39-53 (2004).
  11. Cordes, B., et al. Molecular and phenotypic analysis of poorly differentiated sinonasal neoplasms: an integrated approach for early diagnosis and classification. Hum Pathol. 40, 283-292 (2009).
  12. Stelow, E. B., Bishop, J. A. Update from the 4th Edition of the World Health Organization Classification of Head and Neck Tumours: Tumors of the Nasal Cavity, Paranasal Sinuses and Skull Base. Head Neck Pathol. 11, (1), 3-15 (2017).
  13. Llorente, J. L., et al. Sinonasal carcinoma: clinical, pathological, genetic and therapeutic advances. Nat. Rev. Clin. Oncol. 11, (8), 460-472 (2014).
  14. Sidransky, D. World health organization classification of tumors. Pathology and genetics of head and neck tumors. 9, WHO Press. (2005).
  15. Radulesku, T., et al. Endoscopic surgery for sinonasal tumors: The transcribriform approach. J Stomatol Oral Maxillofac Surg. 118, (4), 248-250 (2017).
  16. Muller, P. A. J., Vousden, K. H. p53 mutations in cancer. Nature cell biology. 15, (1), 2-8 (2013).
  17. Holmila, R., et al. Profile of TP53 gene mutations in sinonasal cancer. Mutat Res. 686, (1-2), 9-14 (2010).
זיהוי של OTX1 ו- OTX2 כמו שני סמנים מולקולריים אפשריים עבור קרצינומה Sinonasal ואת חוש הריח נוירובלסטומה
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Micheloni, G., Millefanti, G., Conti, A., Pirrone, C., Marando, A., Rainero, A., Tararà, L., Pistochini, A., Lo Curto, F., Pasquali, F., Castelnuovo, P., Acquati, F., Grimaldi, A., Valli, R., Porta, G. Identification of OTX1 and OTX2 As Two Possible Molecular Markers for Sinonasal Carcinomas and Olfactory Neuroblastomas. J. Vis. Exp. (144), e56880, doi:10.3791/56880 (2019).More

Micheloni, G., Millefanti, G., Conti, A., Pirrone, C., Marando, A., Rainero, A., Tararà, L., Pistochini, A., Lo Curto, F., Pasquali, F., Castelnuovo, P., Acquati, F., Grimaldi, A., Valli, R., Porta, G. Identification of OTX1 and OTX2 As Two Possible Molecular Markers for Sinonasal Carcinomas and Olfactory Neuroblastomas. J. Vis. Exp. (144), e56880, doi:10.3791/56880 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter