Summary
Homeobox 유전자는 종종 종양 성인 유기 체와 관련 된 규제 유전자. 우리 immunohistochemical와 실시간 PCR 분석, 정상 및 염증 코 거칠어 고 가능한 진단 및 치료 대상으로 그들을 사용 하려면 sinonasal 신생 그들의 비교 식을 조사.
Abstract
OTX homeobox (HB) 유전자는 배아 morphogenesis 그리고 성인 유기 체에 있는 후 각 상피의 개발에 표현 됩니다. 이 유전자에서 발생 하는 돌연변이 종종 인간의 tumorigenesis 관련이 있습니다. 데이터가는 OTX 유전자와 비 강 종양 간의 가능한 상관 관계에 관한 오늘 사용할 수 있습니다. 이 작품의 목적은 경우 OTX1 및 OTX2 분자 마커 비 강 종양의 개발에서로 간주 될 수 있습니다 이해 하는 것입니다. 우리가 선택한 immunohistochemical 및 실시간 PCR 분석 통해 OTX1 및 OTX2 유전자의 표정을 조사 하 강과 sinonasal adenocarcinomas. 모두 OTX1 OTX2 했다 결 석 sinonasal Intestinal 형 Adenocarcinomas (ITACs)의 모든 샘플에서. OTX1 mRNA OTX2 mRNA 후 각 Neuroblastomas (기능)에 표현 하는 동안 비 장 유형 Adenocarcinomas (NITACs)에 확인 되었다. 우리 OTX1 와 OTX2 유전자에 대 한 차동 유전자 발현 sinonasal 종양의 종류를 구별 하는 유용한 분자 마커 수 있습니다 설명 했다.
Introduction
OTX HB 유전자 초파리 orthodenticle 유전자 (otd)의 척추 homologue 그리고 그들은 일반적으로 배아 morphogenesis 동안 표현 녹음 방송 요인에 대 한 인코딩 하지만 그들은 또한 다른 기능을 가진 성인 유기 체에 표현 될 수 있습니다. . 배아 개발 하는 동안 그들은 셀 정체성, 세포 분화, 및 몸 axis¹의 위치 지정을 제어 합니다. OTX 가족 포함 OTX1 와 OTX2 유전자는 서로 다른 기능을 표시 합니다. OTX1 두뇌와 감각 기관이 개발에 참여 하고있다. 성인 유기 체에서 그것은 감각 기관에서 표현 되며 뇌2;의 앞쪽 엽의 낮은 수준에서 복사했습니다 그것은 또한 조, 만능 조 혈 및 조상 세포3에 표현 되 고 있는 역할을 하고있다. OTX2 rostral 머리의 개발에 참여 하 고는 morphogen로 그것의 번역된 단백질 행위는 다른 유전자를 통해 그라데이션 생성 하기 때문에 활성화 또는 따라서 셀에 기여 spatio 시간적 방식 억압 확산 그리고 감 별 법입니다. 성인 유기 체에서 OTX2 맥락 막 신경 총 및 송과선4에서 독점적으로 발견 된다.
종종 OTX 유전자에 있는 돌연변이 인간의 선 천 적, 체세포, 또는 신진 대사 결함의 모양을 관련이 있습니다. 이득 또는 손실 OTX 유전자에 있는 돌연변이 세포 성장 및 분화5를 제대로 제어할 수 없는 경우 tumorigenesis 홍보 수 있습니다. Leukemias과 lymphomas 또한 많은 고체 종양 (예를 들어, medulloblastomas6, 적극적인 비 Hodgkin 림프 종2, 유 방 carcinomas7, 대 장 암8및 retinoblastoma9)로 규제 완화 표현의 OTX HB 유전자는 잘 문서화 되어10입니다. 또한, OTX2 돌연변이 눈 개발의 컨트롤에이 유전자에 대 한 중요 한 역할 때문에 anophthalmia와 microphtalmia11 의 경우에 증명 했습니다.
단단한 신생에서 분자 및 phenotypic 마커의 발견은 진단, 분류, 그리고 종양11, 비 강 및 코에를 포함 하 여 여러 종류의 치료에 대 한 중요 한 도전 sinuses입니다. 사실, 그럼에도 불구 하 고이 지역을 차지할만 겸손 해 부 공간, 점 막 상피, 샘, 부드러운 조직, 뼈, 연골 또는 신경/neuroectodermal, 및 hematolymphoid 세포는 종종 복잡 하 고 다른 조직학의 기원에 대 한 사이트가 될 수 있습니다. 종양의 그룹입니다. 신생 sinonasal로 관련 된 다른 유형의 다양 한 기능 위 aerodigestive로 또는 본문12의 대부분의 부품에 걸쳐도 본 것 일반적으로 극복을 제시. Sinonasal 악성 드물다 전세계 1:100,000 주민의 연간 발생률을 제시 하 고 그래서이 방지는 tumorigenesis와 대체 치료 전략의 테스트에 관련 된 경로 관한 연구. 그럼에도 불구 하 고, 영상 기법, 진보 수술 방법과 방사선 치료 sinonasal 암의 임상 관리를 개선 했습니다. 또한, 셀 라인으로 동물 모델 및 암 유전자 프로 파일링의 개발 현재13미래 표적으로 한 항 암 치료 대 한 기초를 구성 한다. 날짜 하려면, 비 강, paranasal sinuses과 nasopharynx의 신생에 OTX1 또는 OTX2 식에 관한 보고 있다. 이후 우리가 이전 OTX1 와 OTX2 유 방 암7에 참여 관찰, 우리가이 유전자는 정상적인 비 강 점 막 뿐만 아니라 비 강에 종양에 존재 수 궁금해. 우리는 "스타지오네 디 Circolo" 바레 세 샘플에 정상적인 점 막, 그리고 2012 년 1985에서 수집 하 고 분류 하는 세계 보건 기구 (WHO)에 따르면 코와 sinonasal adenocarcinomas의의 병 리 학과에서 얻은이 목표에 도달 하 머리와 목 종양의 분류입니다. 우리 실시간 PCR 및 immunohistochemistry 분석을 통해 분석을 선택 하 고 우리가 만약 그들이 이러한 유형의 종양에 대 한 분자 마커 간주 될 수 있습니다 확인 하려면 OTX1 및 OTX2 식 평가.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
모든 연구 동의 서 면 및 바레 세에서 Insubria의 대학 윤리 위원회에 의해 승인와 (1975) 헬싱키의 선언에 따르면 수행 했다.
1입니다. 샘플의 수집
- 수집 하 고 모든 인간 Formalin-Fixed Paraffin-Embedded (FFPE) 샘플14머리와 목 종양의 WHO 분류에 따라 서로 다른 하위 그룹으로 나눕니다.
참고: 여기 우리는 다음 예제 사용: 일반 sinonasal 점 제어 (10 샘플); 거꾸로 유 두 종 (IP, ICD O 코드 8121/1); Sinonasal 그것 (ICD O 코드 8144/3, 32 샘플); NITAC (ICD O 코드 8140/3, 12 샘플); Adenoid 낭 성 암 (ACC, ICD O 코드 8200/3); Pleomorphic Adenoma (PA, ICD O 코드 8941/3); (ICD O 코드 9522/3, 13 샘플); 가난 하 게 분화 신경 내 분 비 암 종 (PDNEC, ICD O 코드 8041/3, 19 샘플); 신경 내 분 비 종양 (NET, ICD O 코드 8041/3).
2입니다. immunochemistry
-
Deparaffinization 및 리하이드레이션 섹션의
- 30 분 동안 60 ° C에 오븐에 있는 샘플 슬라이드를 열 고 3 µ m 두께 FFPE 사용 하 여 섹션 물 알코올 시리즈를 rehydrate.
- 간단히 10 분 동안 크 실 렌에 슬라이드를 세척 하 고 반복이 단계; 100% 술에 5 분에 대 한 슬라이드를 세척 하 고 직렬로 95%, 85%, 및 75% 알코올을 사용 하 여이 단계를 반복. 증류수에 5 분에 대 한 슬라이드를 씻어.
-
생 활동 차단
- 12 분 동안 3% 수성 수소 과산화물에 슬라이드를 삽입 하 여 내 인 성 활동을 차단 합니다.
-
항 원 복구
- 10 m m 구 연산 염 버퍼 (pH 6) 치료를 전자 레인지에 10 분 동안 치료 하 여 항 원 복구를 수행 합니다.
-
1 차적인 항 체를 가진 외피
- TBS 버퍼 (pH 7.4)에 섹션을 씻어 다음 10 분 동안 차단 솔루션을 추가 합니다.
- TBS 버퍼 (pH 7.4)에 섹션을 씻어 다음 0.2% 트리톤 X를 추가 합니다.
- 염소 안티 인간 OTX2 항 체 희석 1: 100으로 4 ° C에서 밤새 품 어.
-
이차 항 체를 가진 외피
- ABC-과산화 효소 복잡 한 뒤에 biotinylated 토끼 반대로 염소 이차 항 체 희석 1: 200으로 실 온에서 1 h에 대 한 섹션을 품 어 ( 테이블의 자료를 참조).
-
immunoreaction 개발
- 3, 3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride를 사용 하 여 immunoreaction를 개발 하 고 해리스 Hematoxylin와 핵을 counterstain.
-
장착 및 이미징
- 초승달 알코올 규모를 사용 하 여 섹션을 탈수 하 고 명확히 terpene 근원의 개간 물질을 사용 하 여 ( 재료의 표참조). 설치 중간에 섹션을 포함, 섹션 현미경 슬라이드에 놓고 광학 현미경을 통해 섹션을 관찰 합니다.
3. RNA 추출 및 역-전사
-
RNA 추출
- Immunoprecipitation 프로토콜 (참조 섹션 2.1)의 첫 번째 단계를 수행 하 여 섹션에서 RNA를 추출 하 고 증류수에 슬라이드를 유지 합니다. 해당 되며 오신 관심의 조각 식별 섹션 스테인드과 흠 없는 섹션을 겹칩니다.
- RNA 추출 FFPE 샘플 ( 재료의 표참조) 및 다음 제조업체의 지침에 대 한 상업적인 RNA 추출 키트를 사용 하 여 수행 합니다.
-
RNA 리버스-전사
- 상업 키트를 사용 하 여 cDNA로 RNA 복고풍 녹음 ( 재료의 표참조) 다음 프로토콜. 여러 가지 분석을 수행 하기 위해 총 RNA의 레트로 녹음 적어도 1000 ng
4. 실시간 PCR 및 데이터 분석
-
실시간 PCR
- 프로브 기반 기술로 양적 실시간 PCR 분석 (qRT-PCR) 수행 ( 재료의 표참조) 및 열 cycler.
-
PCR 반응 혼합의 준비
- 프로브 기반 마스터 믹스의 12.5 µ L를 사용 하 여 PCR 반응 혼합 준비, 1.25 µ L 각 OTX1, OTX2, 및 ACTB의 프로브 ( 재료의 표참조), 50 ng cDNA, 그리고 nuclease 무료 물 총 볼륨의 최대 25 µ L.
- 3 중 유전자 표현 레벨을 정상화 하 생 컨트롤로 ACTB 유전자를 사용 하 여 모든 반응을 수행 합니다.
- 1109 x g 3 분에 격판덮개 원심 고 실험까지 4 ° C에서 빛에서 보호 하는 접시를 저장.
-
열 cycler 설정
- 설정 열 cycler 프로필 초기 뜨거운 시작 2 분 및 10 분 동안 95 ° C 50 ° C에서 사이클 15 95 ° C에서 40 주기 다음 s와 1 분 동안 60 ° C에서 최종 주기.
-
진 식 수준 분석
- 생 제어 ACTB 유전자를 사용 하 여 비교 주기 임계값 (ΔCt) 메서드를 통해 유전자 표현 레벨을 정상화.
- 2-ΔCt 메서드를 사용 하 여 유전자 식 레벨을 평가 하 고 결과 플롯.
-
통계 분석
- 학생의 t를 사용 하 여 통계 분석을 수행- p < 0.05를 통계적으로 유의 한 결과 고려 하 고 테스트.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
정상 점 막에서 OTX 유전자 ciliated pseudostratified 형 호흡 상피와 submucosal 선 세포 (그림 1A)에 대 한 강력 하 고 동종 핵 반응을 관찰합니다. 우리는 모든 NITACs 샘플에 (그림 1B), 작은 동안 또는 immunoreactivity 결 석 OTX1 핵 식을 ITACs (그림 1C)에서 강조 했다 발견. 강렬한 immunoreactivity는 모든 기능 (그림 1D);에 PDNECs, 중 OTX 식 강도에 긍정적인 세포 (그림 1E)의 백분율 변화. 통계 분석 치 평방 또는 피셔의 정확한 시험 수행 Immunohistochemical 시연 OTX 그것 견본에서 유전자의 부재 했다 통계적 (n = 23, p < 0.01).
실시간 PCR 분석 확인 컨트롤 샘플 (그림 2A-B); OTX2와 OTX1 유전자의 표현 OTX1 하지만 하지 OTX2 NITAC 샘플에 표현 했다 고 두 유전자 ITACs (그림 2A-B)에서 downregulated 완전히 했다. 샘플에 우리가 발견 OTX2 유전자의 표현에만 동안 OTX1 downregulated, PDNEC 샘플 중 두 유전자의 표정 변화 (그림 2A-B).
학생의 t 시험 실시간 PCR 수행 ITACs 대 컨트롤에서 OTX1 통계적 데이터 확인 (n = 9, p < 0.05), 컨트롤 기능 대 (n = 6, p < 0.05), PDNECs 대 컨트롤 (n = 8, p < 0.05), OTX2 NITACs 대 컨트롤에 대 한 (n = 5, p < 0.05), ITACs 대 컨트롤 (n = 9, p < 0.05), 컨트롤 기능 대 (n = 6, p < 0.05), 및 PDNECs 대 (n = 8, p < 0.05).
그림 1 : 제어 및 종양 약 조직 OTX immunohistochemical 식의 대표 이미지. 과산화 효소 활용 된 이차 항 체에 의해 개발 된 반응 공개 신호 (짙은 갈색)은 정상적인 sinonasal 점 막 (A), 비-장 형 adenocarcinomas (NITACs) (B), 7의 7 경우의 5 제어 FFPE 섹션에 표시 후 각 neuroblastomas (기능) (D)의 경우, 11의 경우는 23의 경우에 Intestinal 형 adenocarcinomas (ITACs) 분석 (C) neuroendocrine carcinomas (PDNECs) (E), 아무 immunoreactivity 감지 하는 동안 제대로 분화. DAB 되며; 원래 확대: 눈금 막대 x 200 = 100 µ m.
그림 2 : OTX1 (A) 및 정상 및 종양 약 코 조직에서 OTX2 mRNA (B) 식의 실시간 PCR 분석. 실시간 PCR 분석에 대 한 다음 샘플을 사용 되었다: 제어 정상 점 막, 비-장 형 adenocarcinomas (NITACs)의 5 경우, Intestinal 형 adenocarcinomas (ITACs)의 9의 경우, 후 각 neuroblastomas (ONs), 8의 6 경우 5 FFPE 섹션 저조한의 경우 분화 신경 내 분 비 carcinomas (PDNEC). X 축에서 Y 축 2-ΔCt 값을 나타내는 샘플 형식을 보고 됩니다. 제어 및 종양 사이 통계적으로 중요 한 데이터 (p < 0.05) 학생의 t에 의해 가져온-테스트 및 별표와 함께 강조 표시 됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
이 연구는, mRNA 수준에 따라 처음으로 보여줍니다 OTX1 및 OTX2 HB 유전자가 정상적인 sinonasal 점 막과 submucosal 선, 염증 성 폴립, sinonasal Schneiderian 갑, 그리고 다른 표현 상피와 neuroectodermal 신생, 편평 carcinomas, 비-장의 유형 sinonasal adenocarcinomas, 침 샘 타입 종양, 신경 내 분 비 신생 및 기능을 포함 하 여
수정 및 문제 해결:
RNA 저하를 방지 하려면 우리 병 리의 실험실에서 deparaffinization 프로토콜을 수행 합니다. 후에 우리가 긁힌 슬라이드, 모든 샘플 급속 하 게 냉각 되었고 추가 사용까지 드라이 아이스에 저장. 우리는 층 류 흐름 안전 후드 무 균 실험 조건 유지 하 고 RNA 오염 방지 살 균 팁 펫 전용된 세트를 사용 하 여 모든 후속 분석을 수행 합니다.
기술의 한계:
기술의 주요 제한 때문에 sinonasal 구멍의 종양은 드문 종종 샘플의 가용성에 의존 합니다. 추출 된 RNA의 양을 FFPE 샘플에서 RNA 추출 분석 하기 어려운 조각난된 RNA에 발생 하기 때문에 또 다른 중요 한 문제입니다.
기존의 방법에 관하여 의미:
X-레이 분석, 비 강, CT 검사, 자기 공명 (RMN) 및 생 검 내 시경 시험이 비 강 종양의 진단에 의하여 일반적으로 이루어져 있다. 최근 몇 년 동안 수술 장비의 발전과 기술 이미징의 진행 sinonasal 종양에 대 한 기본 전략으로 내 시경 수술을 주도 했다. 특히,이 기술은 양성 또는 악성의 종류 sinonasal 종양15에 대 한 실현 가능한 것으로 보고 되었습니다. QRT-PCR에 기초를 둔 우리의 기술은 수 다른 종양의 샘플을 차별 차동 수 분자 마커의 식별: 우리 ITACs에서 모두 HB 유전자의 부재 분자 마커로 사용 될 수 있다는 증거를 제공 하는 사실, NITACs에서 OTX2의 부재로 서 종양의 유형입니다. 또한,이 기술은 생 검 후 즉시 적용 될 수 있다 고 일 또는 병원에서 보고서에 필요한 주 6 시간 이내에 최종 결과 줄 수 있다.
미래의 응용 프로그램:
우리의 미래 연구 분석 하는 유전자 및 단백질 식 수준의 OTX1와 OTX2 HB 유전자를 사용 하 여 실시간 PCR 분석, 서쪽 오 점, 그리고 면역 형광 특정 항 체를 검출 뿐만 아니라 OTX1 OTX2, 뿐만 아니라 p53 가족 식 수준을 포함 한다. 때문에 우리는 이전 OTX1 식 유 방 암7에서 p53에 의해 규제 됩니다 시연, 그것은 이러한 규제 비 강 종양에도 있는지 이해 흥미로울 것입니다. 면역 형광 시험 고 Chromatin Immunoprecipitation (칩) 분석 결과 밝힐 수 있다, 각각, 단백질-단백질 및 p53와 OTXs 간의 DNA 단백질 상호 작용. 이러한 연결을 발견 하는 경우 오버 식 또는 다운 레 귤 레이 션 OTX 유전자의 p53 의존 인지 밝힐 것 이다 p53 (가족 구성원, p63 및 p73), 대상에 게 침묵.
p53 손실의 기능, p53 돌연변이 통해 자체 또는 p53 신호 경로에 섭, 대부분 인간의 암16의 일반적인 기능입니다. P53 돌연변이의 대부분 클러스터 도메인 내에서 DNA 바인딩; 따라서, DNA 바인딩 활동 변경, 변경 transcriptional 유전자에 돌연변이 p53 활동16키 수 제안 하는 중요 한 기능입니다. p53 돌연변이 77%의 전반적인 주파수 sinonasal 암의 일반적인 기능으로 보고 되었습니다 그리고 그들은 보여 선 암 및 나무 먼지 노출17협회. 따라서, 우리의 샘플 mRNA와 단백질 레벨 (qR-PCR 및 서쪽 오 점 분석)를 평가 하 고 식별 하거나 활성화/비활성화 변이의 존재를 제외,이 유전자의 시퀀싱을 수행 하기 위해 재미 있을 것. 마지막으로, 경우 종양 형 특정 재발 돌연변이 발견, 그것은 주목할 만한 조작된 세포와이 돌연변이 항구 (와 1 개의 돌연변이 체 대립 유전자) 마우스를 생산 하 고 돌연변이 질병 정리 수 면 검사 됩니다.
중요 한 단계:
이 연구의 중요 한 단계는 biopsies RNA 보호 버퍼 또는 적어도 8 µ m 두께의 FFPE 샘플 및 적어도 200의 추출에 저장으로 잘 저장 된 샘플의 획득을 포함 qRT-PCR 분석을 수행 하는 RNA의 ng.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
이 작품은 센트 가족 Strumenti 사크 dell'Insubria, 피코 Comunitaria del Varesotto, 피코 델에 의해 지원 되었다 몬테 디 롬바르디아와 피코 안 나 빌라 e 펠리 Rusconi.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| RecoverAll Total Nucleic Acid Isolation | Applied Biosystem | AM1975 | |
| High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit | Applied Biosystem | 4368814 | |
| TaqMan Universal PCR Master Mix, no AmpErase UNG | Applied Biosystem | 4326614 | |
| ABI Prism 7000 | Applied Biosystem | 270001857 | |
| ACTB probe | Applied Biosystem | Out of production. Sequence protected by copyright | |
| OTX1 probe | Applied Biosystem | Out of production. Sequence protected by copyright | |
| OTX2 probe | Applied Biosystem | Out of production. Sequence protected by copyright | |
| Acqueous Hydrogen Peroxide | Merk | 1072090250 | |
| Citrate Buffer | Sigma-Aldrich | 20276292 | |
| Triton | Sigma-Aldrich | 101473728 | |
| Tris | Merk | 108382 | |
| NaCl | Merk | 106404 | |
| Goat Anti-OTX2 Antibody | Vector Laboratories | Out of production. Catalog number not available | |
| Rabbit Anti-Goat Antibody | Vector Laboratories | BA5000 | |
| ABC-Peroxidase Complex | Vector Laboratories | PK6100 | |
| 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrocloride (DAB) | Sigma-Aldrich | D5905 | |
| Harris Hematoxylin | Bioptica | 0506004/L | |
| Pertek | Kaltek SRL | 1560 | |
| BioClear | Bioptica | W01030799 |
References
- Boncinelli, E., Simeone, A., Acampora, D., Gulisano, M. Homeobox genes in the developing central nervous system. Ann genet. 36 (1), 30-37 (1993).
- Omodei, D., et al. Expression of the Brain Transcription Factor OTX1 Occurs in a Subset of Normal Germinal-Center B Cells and in Aggressive Non-Hodgkin Lymphoma. American J. Pathol. 175, 2609-2617 (2009).
- Levantini, E., et al. Unsuspected role of the brain morphogenetic gene Otx1 in hematopoiesis. Proc. Natl. Acad. Sci USA. 100 (18), 10299-10303 (2003).
- Larsen, K. B., Lutterodt, M. C., Mollgard, K., Moller, M. Expression of the homeobox OTX2 and OTX1 in the early developing human brain. J. Histochem. Cytochem. 58, 669-678 (2010).
- Abate-Shen, C. Deregulated homeobox gene expression in cancer: cause or consequence? Nat. Rev. Cancer. 2, 777-785 (2002).
- de Haas, T., et al. OTX1 and OTX2 expression correlates with the clinicopathologic classification of medulloblastomas. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 65, 176-186 (2006).
- Terrinoni, A., et al. OTX1 expression in breast cancer is regulated by p53. Oncogene. 30 (27), 3096-3103 (2001).
- Yu, K., et al. OTX1 promotes colorectal cancer progression through epithelial-mesenchymal transition. Biochem. Biophys Res Commun. 44 (1), 1-5 (2014).
- Glubrecht, D. D., Kim, J. H., Russel, L., Bamforth, J. S., Godbout, R. Differential CRX and OTX2 expression in human retina and retinoblastoma. J. Neurochem. 111 (1), 250-263 (2009).
- Coletta, R. D., Jedlicka, P., Gutierrez-Hartamn, A., Ford, H. L. Transcriptional control of the cell cycle in mammary gland development and tumorigenesis. J. mammary gland Biol. Neoplasia. 9, 39-53 (2004).
- Cordes, B., et al. Molecular and phenotypic analysis of poorly differentiated sinonasal neoplasms: an integrated approach for early diagnosis and classification. Hum Pathol. 40, 283-292 (2009).
- Stelow, E. B., Bishop, J. A. Update from the 4th Edition of the World Health Organization Classification of Head and Neck Tumours: Tumors of the Nasal Cavity, Paranasal Sinuses and Skull Base. Head Neck Pathol. 11 (1), 3-15 (2017).
- Llorente, J. L., et al. Sinonasal carcinoma: clinical, pathological, genetic and therapeutic advances. Nat. Rev. Clin. Oncol. 11 (8), 460-472 (2014).
- Sidransky, D. World health organization classification of tumors. Pathology and genetics of head and neck tumors. 9, WHO Press. (2005).
- Radulesku, T., et al. Endoscopic surgery for sinonasal tumors: The transcribriform approach. J Stomatol Oral Maxillofac Surg. 118 (4), 248-250 (2017).
- Muller, P. A. J., Vousden, K. H. p53 mutations in cancer. Nature cell biology. 15 (1), 2-8 (2013).
- Holmila, R., et al. Profile of TP53 gene mutations in sinonasal cancer. Mutat Res. 686 (1-2), 9-14 (2010).
