Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Cancer Research

Identifiering av OTX1 och OTX2 som två möjliga molekylära markörer för Sinonasal carcinom och lukt Neuroblastomas

doi: 10.3791/56880 Published: February 28, 2019
* These authors contributed equally

Summary

Homeobox gener är regleringsgener som ofta förknippas med tumörer i den vuxna organismen. Vi undersökte deras jämförande uttryck av immunhistokemiska och realtids PCR-analys, i normal och inflammatoriska näsans slemhinnor och sinonasal tumörer för att använda dem som möjliga diagnostiska och terapeutiska mål.

Abstract

OTX homeobox (HB) gener uttrycks under embryonala morfogenes och under utvecklingen av luktepitel i vuxna organismer. Mutationer i dessa gener är ofta relaterade till tumourigenesis i mänskliga. Inga data finns tillgängliga idag angående möjliga sambandet mellan OTX gener och tumörer i näshålan. Syftet med detta arbete är att förstå om OTX1 och OTX2 kan betraktas som molekylära markörer i utvecklingen av nasala tumörer. Vi valde nasal och sinonasal adenokarcinom att undersöka uttrycket av OTX1 och OTX2 gener genom immunhistokemisk och realtids PCR-analyser. Både OTX1 och OTX2 var frånvarande i alla prover av sinonasal intestinala-typen adenokarcinom (ITACs). OTX1 mRNA identifierades endast i icke-Intestinal typ adenokarcinom (NITACs) medan OTX2 mRNA uttrycktes endast i lukt Neuroblastomas (ONs). Vi har visat att differential genuttrycket för både OTX1 och OTX2 gener kan vara en användbar molekylär markör för att skilja olika typer av sinonasal tumörer.

Introduction

OTX HB gener är det vertebrate homologt Drosophila orthodenticle gener (otd) och de kodar för transkriptionsfaktorer som uttrycks normalt under embryonala morfogenes, men de kan också uttryckas i den vuxna organismen med olika funktioner . Under Embryonalutvecklingen styr de specifikationen av cellidentiteten, celldifferentiering och placeringen av den kropp axis¹. OTX familjen innehåller OTX1 och OTX2 gener som visar olika funktioner. OTX1 är involverad i hjärnan och sensoriska organ utveckling. I den vuxna organismen, det uttrycks i sinnesorgan och transkriberas på låga nivåer i den främre loben av hypofysen2; den spelar också en roll i blodbildning, uttrycks i hematopoetiska pluripotenta och stamceller celler3. OTX2 är involverad i utvecklingen av rostralt huvudet och dess översatta protein agerar som en morphogen eftersom det genererar en övertoning genom vilka andra gener är aktiverat eller förträngt i en plats och tid tidsramar och därigenom bidra till cell proliferation och differentiering. I den vuxna organismen finns OTX2 uteslutande i den koroidea plexus och tallkottkörteln4.

Mutationer i gener som OTX är ofta relaterade till uppkomsten av människans medfödda, somatiska eller metaboliska defekter. Vinst eller förlust-mutationer i gener som OTX kunde främja uppkomst om de inte kunna korrekt styra cellulära tillväxt och/eller differentiering5. Leukemier och lymfom samt liksom många solida tumörer (t.ex. medulloblastomas6, aggressiva non-Hodgkin lymfom2, bröstcancer carcinom7, kolorektal cancer8och retinoblastom9), den avreglerad uttryck av OTX HB gener är väldokumenterade10. Dessutom har OTX2 mutationer påvisats i fall av anoftalmi och mikroftalmi11 på grund av den avgörande rollen för denna gen i kontrollen av ögats utveckling.

I samband med solida tumörer är upptäckten av molekylära och fenotypiska markörer en viktig utmaning för diagnos, klassificering och behandling av flera typer av tumör11, inklusive de som har sitt ursprung i näshålan och paranasal bihålorna. I själva verket, trots att dessa områden upptar endast en blygsam anatomiska utrymme, slemhinnorna epitel, körtlar, mjuka vävnader, ben, brosk eller neurala/neuroektodermala, och hematolymphoid celler kan vara ofta webbplatsen för komplexa och histologiskt olika ursprung grupper av tumörer. Olika typer av tumörer som omfattar den sinonasal tarmkanalen presenterar en mängd funktioner som övervinna vad som vanligtvis ses i övre aerodigestive tarmkanalen eller även under de flesta delar av kroppen12. Sinonasal maligniteter är sällsynta och lägga fram en årlig incidens av 1:100,000 invånare världen över, och så detta förhindrar studier om vägarna som är inblandade i tumourigenesis och testning av alternativa behandlingsstrategier. Trots detta framsteg inom imaging tekniker, har kirurgiska metoder, och strålbehandling förbättrat klinisk hantering av sinonasal cancer. Dessutom utveckling av cellinjer och djurmodeller samt cancer genetisk profilering för närvarande utgör grunden för den framtida målinriktad cancerbehandling13. Hittills finns det inga rapporter om OTX1 eller OTX2 uttryck i tumörer av näshålan, bihålorna och nasofarynx. Eftersom vi har tidigare konstaterat att OTX1 och OTX2 är inblandade i bröst cancer7, undrade vi om dessa gener kunde närvara inte bara i den normala nässlemhinnan men också i tumörer i näshålan. Att nå detta mål som vi fått från Institutionen för patologi av den ”Ospedale di Circolo” i Varese prover av normal slemhinna, och nasal och sinonasal adenokarcinom samlas in från 1985 till 2012 och klassificeras enligt den Världshälsoorganisationen (WHO) klassificering av huvud och hals tumörer. Vi väljer att analysera dem genom realtids PCR och immunohistokemi analyser och vi utvärderat OTX1 och OTX2 uttryck för att avgöra om de kan anses molekylära markörer för dessa typer av tumörer.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alla studier utfördes enligt deklarationen av Helsingfors (1975) med skriftligt informerat samtycke och godkänts av den etiska kommittén av det Universitetar av Insubria i Varese.

1. insamling av proverna

  1. Samla och dela alla mänskliga Formalin-Fixed Paraffin-Embedded (FFPE) prover i olika undergrupper enligt WHO klassifikationen av huvud och hals tumörer14.
    Obs: Här använde vi de följande proverna: Normal sinonasal slemhinna som kontroll (10 prover); Inverterade papillom (IP, ICD-O kod 8121/1); Sinonasal ITAC (ICD-O kod 8144/3, 32 prover). NITAC (ICD-O kod 8140/3, 12 prover). Adenoid cystisk carcinom (ACC, ICD-O kod 8200/3); Pleomorfa adenom (PA, ICD-O kod 8941/3); PÅ (ICD-O kod 9522/3, 13 prover). Dåligt differentierade Neuroendokrina carcinom (PDNEC, ICD-O kod 8041/3, 19 prover); Neuroendokrin tumör (netto, ICD-O kod 8041/3).

2. immunkemi

  1. Avparaffinering och rehydrering av sektioner
    1. Värm exempelbilder i en ugn vid 60 ° C i 30 min och rehydrera 3 µm tjock FFPE sektioner med en alkohol-serien till vatten.
    2. Kort tvätta bilderna i xylen i 10 minuter och upprepa detta steg; Tvätta bilderna för 5 min i 100% alkohol och upprepa det här steget använder 95%, 85% och 75% alkohol seriellt. Skölj glasen för 5 min i destillerat vatten.
  2. Blockering endogenous aktiviteten
    1. Blockera aktiviteten endogena genom att placera bilderna i 3% vattenlösning väteperoxid för 12 min.
  3. Antigen retrieval
    1. Utföra antigen hämtning genom att behandla med 10 mM citratbuffert (pH 6) i 10 min i en mikrovågsbehandling.
  4. Inkubation med primär antikropp
    1. Tvätta avsnitten i TBS buffert (pH 7,4), Lägg blockerande lösning för 10 min sedan.
    2. Tvätta avsnitten i TBS buffert (pH 7,4), sedan lägga till 0,2% Triton X.
    3. Inkubera över natten vid 4 ° C med geten Anti-humant OTX2 antikropp spädd 1: 100.
  5. Inkubation med sekundär antikropp
    1. Inkubera i avsnitt 1 h i rumstemperatur med biotinylerade kanin anti get sekundär antikropp utspädd 1: 200 följt av ABC-peroxidas komplex (se Tabeller för material).
  6. Utveckla immunreaktion
    1. Utveckla den immunreaktion med 3, 3'-diaminobenzidin tetrahydrochloride och counterstain atomkärnor med Harris Hematoxylin.
  7. Montering och imaging
    1. Torkar ut avsnitten med en crescent alkohol-skala och klargöra dem använder ett clearing ämne av terpen ursprung (se Tabell för material). Bädda in avsnitten i monteringsmedium, placera avsnitten på ett objektglas och observera avsnitten genom ett optiskt Mikroskop.

3. RNA-extraktion och omvänd-transkription

  1. RNA-extraktion
    1. Extrahera RNA från avsnitten genom att utföra det första steget av immunoprecipitation protokoll (se avsnitt 2.1) och hålla bilderna i destillerat vatten. Överlappa de ofärgade avsnitten med de motsvarande hematoxylin-eosin färgade sektioner för att identifiera fragment av intresse.
    2. Utföra den RNA-extraktion med en kommersiell RNA extraktion kit för FFPE-prov (se Tabell av material) och följande tillverkarens anvisningar.
  2. RNA omvänd-transkription
    1. Använd en kommersiella kit för att retro-transkribera RNA till cDNA (se Tabell för material) efter protokollet. Retro-transkribera minst 1000 ng av total-RNA att utföra flera analyser.

4. realtids-PCR och dataanalys

  1. Realtids-PCR
    1. Utföra kvantitativ realtids PCR-analyser (qRT-PCR) med sond-baserad teknik (se Tabell av material) och en termocykel.
  2. Beredning av den PCR-reaktionsblandning
    1. Förbereda den PCR-reaktionsblandning använder 12,5 µL av sonden-baserade master mix, 1,25 µL varje OTX1, OTX2 och ACTB sonder (se Tabell för material), 50 ng av cDNA, och nuclease-gratis vatten upp till 25 µL av totala volymen.
    2. Utföra alla reaktioner i tre exemplar med den ACTB genen som endogen kontroll för att normalisera gen uttryck nivåer.
    3. Centrifugera plattan vid 1 109 x g i 3 min och förvara plattan skyddas från ljus vid 4 ° C fram till experimentet.
  3. Inställning av termocykel
    1. Uppsättning termocykel profilen med en inledande varmstart cykel vid 50 ° C i 2 min och 95 ° C i 10 min, följt av 40 cykler vid 95 ° C under 15 s och en sista cykel vid 60 ° C i 1 min.
  4. Gen uttryck nivå analyser
    1. Normalisera gen uttryck nivåer genom jämförande cykel tröskel (ΔCt)-metoden använder den ACTB genen som endogen kontroll.
    2. Utvärdera gen uttryck nivåer med metoden 2-ΔCt och plotta resultaten.
  5. Statistiska analyser
    1. Utföra statistiska analyser med Student's t-Test, med tanke på statistiskt signifikanta resultat med p < 0,05.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

I normal slemhinna observerade vi starka och homogen nukleära reaktivitet för OTX gener både i cilierade pseudostratified respiratorisk-typen epitelet och submukosala glandulära cellerna (figur 1A). Vi hittade nukleära uttryck för OTX1 i alla NITACs prov (figur 1B), samtidigt lite eller frånvarande immunoreaktivitet lyftes fram i ITACs (figur 1 c). Intensiv immunoreaktivitet var närvarande i alla ONs (figur 1 d); bland PDNECs varierade OTX uttryck i intensitet och andelen positiva celler (figur 1E). Immunhistokemisk statistisk analys utförs med Chi square eller Fishers exakta test visade att avsaknaden av OTX gener i ITAC prover var statistiskt signifikant (n = 23, p < 0,01).

Realtids PCR-analyser bekräftade uttrycket av både OTX1 och OTX2 gener i kontrollprover (figur 2AB). OTX1 men inte OTX2 uttrycktes i NITAC prover och båda gener var helt nedreglerade i ITACs (figur 2AB). I prover hittade vi bara ett uttryck för OTX2 gen medan OTX1 var nedreglerade, och bland proverna som PDNEC uttrycket av både gener varierade (figur 2AB).

Student's t -test utförs på realtids-PCR bekräftat statistiskt signifikanta data för OTX1 i kontroller vs. ITACs (n = 9, p < 0,05), kontroller vs. ONs (n = 6, p < 0,05), kontroller vs. PDNECs (n = 8, p < 0,05), och för OTX2 kontroll vs. NITACs (n = 5, p < 0,05), kontroller vs. ITACs (n = 9, p < 0,05), kontroller vs. ONs (n = 6, p < 0,05), och kontroller vs. PDNECs (n = 8, p < 0,05).

Figure 1
Figur 1 : Representativa bilder av OTX immunhistokemiska uttryck i kontroll och neoplastiska vävnader. Den reaktion som utvecklats av peroxidaskonjugerat sekundära antikroppen avslöjade signalen (Mörkbrun) var synlig i 5 FFPE avsnittskontroller av normala sinonasal slemhinna (A), 7 fall av icke-inälvs-typen adenokarcinom (NITACs) (B), 7 fall lukt neuroblastomas (ONs) (D), 11 fall dåligt differentierade Neuroendokrina carcinom (PDNECs) (E), medan inga immunoreaktivitet upptäcks i 23 fall av intestinala-typen adenokarcinom (ITACs) analyserade (C). DAB-Hematoxylin; ursprungliga förstoring: 200 x, skalstapeln = 100 µm.

Figure 2
Figur 2 : Real-time PCR-analys av OTX1 (A) och OTX2 (B) mRNA uttryck i normal och neoplastiska näsans vävnader. De följande proverna användes för realtids PCR-analyser,: 5 FFPE sektioner av kontroll normal slemhinna, 5 fall av icke-inälvs-typen adenokarcinom (NITACs), 9 fall av intestinala-typen adenokarcinom (ITACs), 6 fall av lukt neuroblastomas (ONs), 8 fall av dåligt differentierade Neuroendokrina carcinom (PDNEC). På X-axeln redovisas typ av prov, medan Y-axeln representerar 2- ΔCt värden. Statistiskt signifikanta data (p < 0,05) mellan kontroll och tumörer erhölls genom Student's t-test och markeras med asterisker. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Denna studie visar för första gången att, baserat på mRNA nivåer, HB generna OTX1 och OTX2 uttrycks i normala sinonasal slemhinna och submukösa körtlar, inflammatoriska polyper, sinonasal Schneiderian papillom och i de olika epitelial och neuroektodermala tumörer, inklusive skivepitelcancer karcinom, icke-intestinal typ sinonasal adenokarcinom, spottkörtel-typ tumörer, Neuroendokrina tumörer och ONs.

Modifieringar och felsökning:

För att undvika RNA nedbrytning, utfört vi avparaffinering protokollet i laboratoriet för patologi. När vi repade bilder, var alla prover snabbt kyls och lagras i torris tills vidare användning. Vi utförde alla efterföljande analyser i en laminar-flow säkerhet huva med en särskild uppsättning pipetter med steril tips att upprätthålla experimentella betingelser och undvika RNA föroreningar.

Begränsningar av tekniken:

Den huvudsakliga begränsningen av tekniken är beroende av tillgängligheten av prover eftersom tumörer av sinonasal hålrum ofta sällsynta. Mängden extraherade RNA är en annan viktig fråga eftersom RNA-extraktion från FFPE prover resulterar i fragmenterade RNA som är svåra att analysera.

Betydelse med avseende på befintliga metoder:

Diagnos av tumörer i näshålan består vanligen av röntgen analyser, endoskopisk undersökning av näshålan, datortomografi, magnetisk resonanstomografi (RMN) och biopsi. Under de senaste åren, hade förskott av kirurgisk instrumentering och framstegen i imaging tekniker lett endoskopisk kirurgi som Rekommenderad strategi för sinonasal tumörer. Särskilt har denna teknik rapporterats som möjliga typer av sinonasal tumörer15godartade eller elakartade. Vår teknik som bygger på qRT-PCR möjliggör identifiering av molekylära markörer, vilka kan differentially diskriminera prover av olika tumörer: i själva verket vi bevisa att avsaknad av båda HB generna i ITACs kan användas som molekylära markörer för detta typ av tumör samt avsaknaden av OTX2 i NITACs. Dessutom denna teknik kan tillämpas omedelbart efter biopsi och kan ge slutgiltiga resultat i mindre än 6 timmar med avseende på dagar eller veckor behövs för rapporten från sjukhuset.

Framtida tillämpningar:

Våra framtida studier involvera analysera genen och protein uttryck nivåer av OTX1 och OTX2 HB gener med realtid PCR-analyser, Western blot och immunofluorescens med specifika antikroppar för att upptäcka inte bara OTX1 och OTX2, men också p53 familjeuttryck nivåer. Eftersom vi visat tidigare att OTX1 uttryck är reglerat av p53 i bröst cancer7, skulle det vara intressant att förstå om en sådan reglering finns också i näshålan tumörer. Ett immunofluorescens-test och en kromatin Immunoprecipitation (ChiP) test kan avslöja, respektive ett protein-protein och en DNA-protein interaktion mellan p53 och OTXs. Om sådan anslutning är grunda, kommer att den riktade ljuddämpning p53 (familjemedlemmar, p63 och p73), avslöja om över uttryck eller down-förordning OTX gener är beroende av p53.

p53 förlust av funktion, genom mutation i p53 själv eller störningar i vägar signalering till p53, är ett vanligt inslag i flesta mänskliga cancerformer16. De flesta av p53 mutationer klustret inom DNA-bindande domänen. DNA-bindande aktivitet är därför den kritiska funktionen som ändras, tyder på att förändringar i transkriptionell gener kan vara nyckeln till muterat p53 verksamhet16. p53 mutationer har rapporterats som ett gemensamt drag för sinonasal cancer, med en total frekvens av 77%, och de visar association till adenocarcinom och trä-damm exponering17. Således, i våra prover, det skulle vara intressant att utvärdera mRNA och protein nivåer (genom qR-PCR och Western Blot analys) och att utföra sekvensering av denna gen, för att identifiera eller utesluta förekomsten av aktivera/inaktivera mutationer. Slutligen, om en tumör-typ specifika återkommande mutation är hittade, det skulle vara anmärkningsvärt att producera bearbetade celler och möss (med en mutant allel) som hyser denna mutation och undersöka om mutationen kan sammanfatta sjukdomen.

Kritiska steg:

Kritiska steg av denna studie omfattar obtainmenten av väl lagrade prover, antingen som biopsier lagras i RNA skyddande buffert eller FFPE prover av minst 8 µm tjock och utvinning av minst 200 ng av RNA att utföra qRT-PCR-analyser.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Författarna har något att avslöja.

Acknowledgments

Detta arbete stöds av Centro Grandi att Università bara, Fondazione Comunitaria del Varesotto, Fondazione del Monte di Lombardia och Fondazione Anna Villa e Felice Rusconi.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
RecoverAll Total Nucleic Acid Isolation Applied Biosystem AM1975
High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit Applied Biosystem 4368814
TaqMan Universal PCR Master Mix, no AmpErase UNG Applied Biosystem 4326614
ABI Prism 7000  Applied Biosystem 270001857
ACTB probe Applied Biosystem Out of production. Sequence protected by copyright
OTX1 probe Applied Biosystem Out of production. Sequence protected by copyright
OTX2 probe Applied Biosystem Out of production. Sequence protected by copyright
Acqueous Hydrogen Peroxide Merk 1072090250
Citrate Buffer Sigma-Aldrich 20276292
Triton Sigma-Aldrich 101473728
Tris Merk 108382
NaCl Merk 106404
Goat Anti-OTX2 Antibody Vector Laboratories Out of production. Catalog number not available
Rabbit Anti-Goat Antibody Vector Laboratories BA5000
ABC-Peroxidase Complex Vector Laboratories PK6100
3,3'-diaminobenzidine tetrahydrocloride (DAB) Sigma-Aldrich D5905
Harris Hematoxylin Bioptica 0506004/L
Pertek Kaltek SRL 1560
BioClear Bioptica W01030799

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Boncinelli, E., Simeone, A., Acampora, D., Gulisano, M. Homeobox genes in the developing central nervous system. Ann genet. 36, (1), 30-37 (1993).
  2. Omodei, D., et al. Expression of the Brain Transcription Factor OTX1 Occurs in a Subset of Normal Germinal-Center B Cells and in Aggressive Non-Hodgkin Lymphoma. American J. Pathol. 175, 2609-2617 (2009).
  3. Levantini, E., et al. Unsuspected role of the brain morphogenetic gene Otx1 in hematopoiesis. Proc. Natl. Acad. Sci USA. 100, (18), 10299-10303 (2003).
  4. Larsen, K. B., Lutterodt, M. C., Mollgard, K., Moller, M. Expression of the homeobox OTX2 and OTX1 in the early developing human brain. J. Histochem. Cytochem. 58, 669-678 (2010).
  5. Abate-Shen, C. Deregulated homeobox gene expression in cancer: cause or consequence? Nat. Rev. Cancer. 2, 777-785 (2002).
  6. de Haas, T., et al. OTX1 and OTX2 expression correlates with the clinicopathologic classification of medulloblastomas. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 65, 176-186 (2006).
  7. Terrinoni, A., et al. OTX1 expression in breast cancer is regulated by p53. Oncogene. 30, (27), 3096-3103 (2001).
  8. Yu, K., et al. OTX1 promotes colorectal cancer progression through epithelial-mesenchymal transition. Biochem. Biophys Res Commun. 44, (1), 1-5 (2014).
  9. Glubrecht, D. D., Kim, J. H., Russel, L., Bamforth, J. S., Godbout, R. Differential CRX and OTX2 expression in human retina and retinoblastoma. J. Neurochem. 111, (1), 250-263 (2009).
  10. Coletta, R. D., Jedlicka, P., Gutierrez-Hartamn, A., Ford, H. L. Transcriptional control of the cell cycle in mammary gland development and tumorigenesis. J. mammary gland Biol. Neoplasia. 9, 39-53 (2004).
  11. Cordes, B., et al. Molecular and phenotypic analysis of poorly differentiated sinonasal neoplasms: an integrated approach for early diagnosis and classification. Hum Pathol. 40, 283-292 (2009).
  12. Stelow, E. B., Bishop, J. A. Update from the 4th Edition of the World Health Organization Classification of Head and Neck Tumours: Tumors of the Nasal Cavity, Paranasal Sinuses and Skull Base. Head Neck Pathol. 11, (1), 3-15 (2017).
  13. Llorente, J. L., et al. Sinonasal carcinoma: clinical, pathological, genetic and therapeutic advances. Nat. Rev. Clin. Oncol. 11, (8), 460-472 (2014).
  14. Sidransky, D. World health organization classification of tumors. Pathology and genetics of head and neck tumors. 9, WHO Press. (2005).
  15. Radulesku, T., et al. Endoscopic surgery for sinonasal tumors: The transcribriform approach. J Stomatol Oral Maxillofac Surg. 118, (4), 248-250 (2017).
  16. Muller, P. A. J., Vousden, K. H. p53 mutations in cancer. Nature cell biology. 15, (1), 2-8 (2013).
  17. Holmila, R., et al. Profile of TP53 gene mutations in sinonasal cancer. Mutat Res. 686, (1-2), 9-14 (2010).
Identifiering av OTX1 och OTX2 som två möjliga molekylära markörer för Sinonasal carcinom och lukt Neuroblastomas
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Micheloni, G., Millefanti, G., Conti, A., Pirrone, C., Marando, A., Rainero, A., Tararà, L., Pistochini, A., Lo Curto, F., Pasquali, F., Castelnuovo, P., Acquati, F., Grimaldi, A., Valli, R., Porta, G. Identification of OTX1 and OTX2 As Two Possible Molecular Markers for Sinonasal Carcinomas and Olfactory Neuroblastomas. J. Vis. Exp. (144), e56880, doi:10.3791/56880 (2019).More

Micheloni, G., Millefanti, G., Conti, A., Pirrone, C., Marando, A., Rainero, A., Tararà, L., Pistochini, A., Lo Curto, F., Pasquali, F., Castelnuovo, P., Acquati, F., Grimaldi, A., Valli, R., Porta, G. Identification of OTX1 and OTX2 As Two Possible Molecular Markers for Sinonasal Carcinomas and Olfactory Neuroblastomas. J. Vis. Exp. (144), e56880, doi:10.3791/56880 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter