Summary
Bu çalışmanın temel amacı standartlaştırmak ve pnömatik yöntemi gökkuşağı alabalığı ve kahverengi alabalık yumurta toplama (sıyırma hava) test etmektir. Bu yöntem, yumurta balık karın Masaj gerekliliği olmadan etkili ve basit topluluğu sağlar.
Abstract
Yumurta toplama salmonid kuluçkahane balık üreme sırasında en önemli yordamları biridir. Klasik yöntemler balık abdomens yumurta sınırdışı el masaj kullanımını içerir. Alternatif bir yöntem yumurta sonraki sürümü neden vücut boşluğuna enjekte gaz basıncı kullanır. Bu yöntem broodstocks refah ve yumurta kalitesi üzerinde daha az olumsuz etkileri inanılıyor. Burada, hava ve yöntemleri bir yıl hayatta kalma ve yumurta miktar ve kalite açısından iki salmonid balık, gökkuşağı alabalığı (Oncorhynchus mykiss) ve kahverengi alabalık (Salmo trutta morfin fario) sıyırma el sonuçlar karşılaştırın. Bizim sonuçları hava sıyırma daha kaliteli bir yumurta ve daha yüksek bir yıllık sağkalım oranı gökkuşağı alabalığı verdiğini gösterir. Buna ek olarak, hava sıyırma el sıyırma için tabi grup daha düşük mortalite oranına sonuçlandı (% 25 vs. % 35). Elimden el grup pH ve tarama hızını bu elimden hava grubu daha düşüktü. Brown trout söz konusu olduğunda, hem el hem de hava sıyırma yöntemleri tarafından elde edilen yumurta kalitesini benzer; Ancak, bir yıl kayıp balık elimden hava grubunda (%0 olarak elimden el balık kıyasla % 15) yüksekti. Her ne kadar yumurta kalitesi açısından sıyırma el üzerinde yöntem sıyırma hava avantajları tüm salmonid türler gözlenen değil, hava şeridi oluşturma yordamı tekrarlanabilirlik yüksek düzeyde sağlar kuluçkahane kabul edilmesi için umut verici bir seçenek olabilir ve etkinlik.
Introduction
Gökkuşağı alabalıklarında (Oncorhynchus mykiss) ve kahverengi alabalık (Salmo trutta morfin fario) Salmoniformes1 Salmoniformes ailesine aittir. Bu iki tür küresel su ürünleri üretim hızlı büyüme, ticari ve eğlence önemleri nedeniyle kazanmıştır. Polonya'da, salmonid balık üretimi yaklaşık 20 000 ton, alabalık ile baskın tür olmak anlamına gelir. Öte yandan, kahverengi alabalık tatlı su balığı kaynakları Avrupa'nın önemli bir kaynağı nedeniyle su ürünleri yetiştiriciliği ve olta balıkçılığı için önemli ticari değerini temsil eder. Birçok su ekosistemleri, kahverengi alabalık nüfus varlığını tehdit etti. Sonuç olarak, yapay üreme bu tür2yerel nüfus eksikleri tamamlamak için uygulanmıştır.
Gökkuşağı alabalığı ve kahverengi alabalık genellikle üç erkek bir kadın1' den önceki yıla olgunlaşması yaşta cinsel olgunluğa ulaşmak. Yapay koşullarda, yumurta ve sperm gökkuşağı alabalığı ve kahverengi alabalık genellikle hafif karın Masaj tarafından toplanır. Uygulamada, küçük ölçekli, yumurta toplama el sıyırma uygun maliyetli yöntemidir. Ancak, büyük ölçüde, el şeridi oluşturma yöntemi emek yoğun ve yorucu olabilir. Sonuç olarak, bu teknik kırık yumurta kuluçka işçilerin yorgunluk nedeniyle neden olabilir. Yumurta kırılma kez yumurtalık sıvı pH ve yumurta sarısı, ikisi de olumsuz etkiler fertilizasyon yumurta3sürümü azalmasına yol açar. Ayrıca, bu geleneksel Yöntem (Art arda tuşuna basarak karın) yumurta toplama Ayrıca cilt enfeksiyonu mukus Koruyucu bariyer bozulma ile ilgili neden broodstock ölüm neden olabilir.
Yumurta toplama Pnömatik yöntemi ilk Avustralya'da 19574' te kullanılmıştır. Bu yöntem gazlar (Hava, azot veya oksijen) enjeksiyon gaz basınç uygulayarak yumurta kovmak için vücut boşluğuna dayanır. Bu hızlı ve kolay teknik salmonid balık balık4üzerinde herhangi bir yan etkisi olmadan başarıyla uygulandı. Son zamanlarda, bu yöntem yabani türlerin (Kuzey pike, Esox lucius) yapay koşulları5Olgun yumurta toplamak için kullanılmıştır. Bu hava daha yüksek gübreleme ve oranları ile karşılaştırıldığında el kuluçkalık yumurta döllenme (Woynarovich çözüm, Billard arabellek veya kuluçka su)5için kullanılan çözüm ne olursa olsun elimden yumurta elimden gösterilmiştir.
Pnömatik yöntemi gökkuşağı alabalığı ve kahverengi alabalık ile karşılaştırıldığında geleneksel el yöntemi sıyırma yumurta toplama (sıyırma hava) test etmek için bu çalışmanın asıl amacı oldu. Her iki Yöntem (cilt elde edilen yumurta) ve toplama, kalite gametler (yumurtalık sıvı pH) yanı sıra tarama hızı ve yumurtlama sonrası ölüm saatini verimliliği karşılaştırıldı.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Yordamlar yerel komite, Olsztyn, Polonya, hayvan deneyleri etiği doğrultusunda gerçekleştirilmiştir.
1. donanımları hazırlık
- Bir şırınga ve iğne balık vücut boşluğu içine gaz enjeksiyon için kullanın.
- Gaz basıncı 0,5 barda atayıp saklamanız 1 çubuk altında olması için baskı.
- Hava akışını denetlemek. Salmonid balık için 1, 5 L/dk gaz tükenme en verimli hızıdır. Optimum hız korumak Sürdüremiyorlarsa hızlarını gereksiz yere yordamı uzatmak iken daha yüksek hız tüm yumurta elde etmek değil çünkü.
- Şırınga vidalı bir iğne ile bağlayın (0,8-1.2 mm çap) gaz basıncı ile neden iğne dekolmanı önlemek için.
2. hava yumurtlama
- Balık % 0,2 ile anestezi Propiscin. 0,2 ile bir su banyosu içine balık yer % Propiscin ve balık tepkisiz hale gelinceye kadar bekleyin.
- Dikkatli bir kuru pamuklu bezle silerek yumurtlama öncesi kurumasına.
- Eğim yatakta balık hakkında yer 35-40°, onun yan kuyruk tarafında. Balık karın yumuşak push ile genital sistem yumurta akışından denetleyin. Yumurta yoksa, balık kökenli değil.
- Kafes yumurta toplamak için balık papilla aşağıda kaplı bir kap yerleştirin.
- Hızlı bir şekilde iğneyi karın yüzgeçleri aşağıda eklemek.
- Serbestçe yalnızca tekil yumurta balık vücuttan kaldırılana kadar yumurta gazdan kaldırın.
- Balık vücuttan aşırı gaz kaldırmak için karın hafifçe masaj.
- Yumurtlama sonra yavaşça balık tank su akışı ile aktarın. Balık tank için hava yumurtlama başlangıçta su yüzeyinde yüzmek sonra serbest. Birkaç dakika sonra balık yüzme sırasında kalan gaz bültenleri ve normalde yüzmeye başlar.
Not: Çok temiz ve ücretsiz kan veya dışkı kirlenme--dan elde edilen yumurta vardır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Olgun erkek ve dişi gökkuşağı alabalığı (Yaş 2 +, 1700 ± 328 g) ve kahverengi alabalık (Yaş 3 +, 1900 ± 435 g) Salmonid balık kuluçka (Rutki-Żukowo, iç balıkçılık Enstitüsü, Olsztyn, Polonya) elde. Erkek ve kadın bir hacmi yaklaşık 5 m3ayrı tanklar yerleştirildi. Su sıcaklığı 12±1 ° C. yapıldı. Manipülasyon önce balık % 0,2 ile anestezi Propiscin. Balık iki gruba ayrıldı. Onların bir parçası yapıldı yumurta, Yani, abdominal basınç elde etmek için geleneksel bir Yöntem (n = 20). Kalan gruplar hava kullanımı ile Pnömatik prosedür uygulandı (n = 20). Her dişi yumurta ayrı ayrı toplanmıştır ve kuru plastik kase yerleştirilir.
Yumurta sıyırma el sırasında balık ilk onun tarafında, kuyruk balık tutarken kuru bir bezle silinmiş. Yumurtlama süresi nereye operatör balık ve ya, karın basıldığında başlayın veya iğneyi enjekte tutan noktadan başlayarak ölçüldü. Bitiş noktası ne zaman yumurta kase akan son zamanda kuruldu. El, sıyırma için bir vasıflı işçi bütün deneyin yapmak için seçildi ve yordam sıyırma hava başka bir vasıflı işçi tarafından gerçekleştirilmiştir.
Yordamı sırasında elde edilen yumurta hacmi bir ölçüm silindir kullanılarak ölçüldü ve yumurtalık sıvı ayrı ayrı her kadın örnek toplanmıştır. Bundan sonra onun pH seviyesi bir pH elektrodu kullanarak analiz edildi. Broodstock balık bizim deneylerde kullanılan pasif entegre Transponder (çukur) etiketleri ile işaretlenmiştir. Etiketleme balık her grup içinde ölüm oranı gözlemlemek için bize izin.
Hemen toplandıktan sonra her örnek için döllenme maruz bırakıldı. Fertilizasyon yumurtlama için 10 dakika önceden hakkında toplanan ve saklanan için sperm Morisawa çözüm6 (0.1 M NaCl, 0,04 M KCl, 0,003 M CaCl2, 0.0015 M MgCl2 x 6 H2O, 0,05 M Tris, pH 8,5), 1:9 4 ° C'de oranında sulandırılmış Dört alabalık veya kahverengi alabalık erkek aldığınız sperm karışımı sırasıyla kullanıldı.
Tarama hızı yumurta kalitesini en uygun ölçüsü olduğu için gökkuşağı alabalığı ve kahverengi alabalık yumurtaları el ile elde edilen ve pnömatik sıyırma yöntemleri gübreleme için tabi tutuldu. Yumurta yumurta, gelen olurken her kadın yaklaşık 100 yumurta kullanılarak başına yaklaşık 100.000 sperm ile döllenmiş. Sonra sperm çözümleri seyreltilmiş 1:2000 % 0.7 ile sperm konsantrasyonu Bürker odasında ölçüldü NaCl. Yumurta her varyant7Billard çözüm (0,125 M NaCl, 0.002 M Tris arabellek, 0,003 M glisin ve 0,001 mM CaCl2, pH 9.0) 5 ml sperm ile döllenmiş. İki çoğaltmalar yumurta her örneği için yapıldı. Üç dakika sonra gübreleme, yumurta örnekleri dikkatli bir şekilde iki kez kuluçka suda yıkanmış. Sonra yumurta deneysel her değişken ayrı ayrı yerleştirerek özel bir kılavuzda yerleştirildi. Döllenmiş yumurta kuluçka 8 ° C'de yerleştirildi ve gözlü-yumurta sayısı yaklaşık dört hafta sonra tespit edildi. Taranmış yumurta yüzdesi aynı zamanda formüle göre belirlendi: (olan yumurta döllenmiş x 100%) / (tüm Beton VARIANT olarak yumurta).
Deneysel tedaviler arasındaki farkları bir düzey of önemi P < 0,05 eşleştirilmiş t-testleri ile belirlenmiştir. Yüzde ifade edilen verileri istatistiksel çözümleme önce arc-sin dönüştürme kullanarak dönüştü. İstatistiksel analizler GraphPad prizma yazılımı ile yapılmıştır.
Yumurta toplama yöntemi sıyırma el tarafından süresi daha kısa (yaklaşık 10 s.) yöntem her iki tür (Şekil 1; sıyırma hava ile karşılaştırıldığında P < 0,05). Sıyırma Yöntemleri (geleneksel veya pnömatik) gökkuşağı alabalığı ve kahverengi alabalık kadın (Şekil 2) elde edilen yumurta hacmi üzerinde bir etkisi yoktu. Alabalık yöntemi sıyırma havada pH 8.0 (Şekil 3; yükseltilmiştir ise el sıyırma 7,6, sonra Yumurtalık sıvı pH P < 0,05). Ancak, yumurta toplama yöntemleri ne olursa olsun, kahverengi alabalık yumurtalık sıvı pH etkilenmedi (Şekil 2). Gökkuşağı alabalık kuluçka oranı önemli ölçüde daha yüksek (Şekil 4; oldu. P < 0,05) hava elimden el elimden yumurta yumurta içinde. Gökkuşağı alabalık sıyırma hava ile karşılaştırıldığında sıyırma el sonra yüzde mortalite daha yüksek. Ancak, brown trout, yüzde mortalite daha yüksek (% 15) hava elimden yumurta (Tablo 1) el-elimden yumurta oldu.
Resim 1 . Sonra sıyırma zaman geleneksel (sıyırma el) ve pnömatik (sıyırma hava) yöntemi yumurta toplama içinde gökkuşağı alabalığı ve kahverengi alabalık. İstatistiksel anlamlılık P-değerini temsil eden yıldız tarafından belirtilir (*** P < 0.001), hata Çubuklarõn SD (n = 20). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Resim 2 . Sonra yumurta hacmi elde geleneksel (sıyırma el) ve pnömatik gökkuşağı alabalığı ve kahverengi alabalık yumurta toplama yöntemleri (Hava sıyırma). Hata Çubuklarõn SD (n = 20). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3 . Sonra Yumurtalık sıvı pH geleneksel (sıyırma el) ve pnömatik gökkuşağı alabalığı ve kahverengi alabalık yumurta toplama yöntemleri (Hava sıyırma). İstatistiksel anlamlılık P-değerini temsil eden yıldız tarafından belirtilir (*** P < 0.001), hata Çubuklarõn SD (n = 20). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 4 . Sonra tarama oranı yüzdesi geleneksel (sıyırma el) ve pnömatik gökkuşağı alabalığı ve kahverengi alabalık yumurta toplama yöntemleri (Hava sıyırma). İstatistiksel anlamlılık P-değerini temsil eden yıldız tarafından belirtilir (** P < 0,01)., hata Çubuklarõn SD (n = 20). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
| Türler | Yumurta toplama yöntemi | |
| El sıyırma | Sıyırma hava | |
| Gökkuşağı alabalığı | 35 | 25 |
| Kahverengi alabalık | 0 | 15 |
Tablo 1. Sonra sonrası yumurtlama mortalite yüzdesi geleneksel (sıyırma el) ve pnömatik gökkuşağı alabalığı ve bir yıl içinde ölçülen alabalığı yumurta toplama yöntemleri (sıyırma hava).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Balık, yumurta koleksiyonundan Pnömatik yöntemi her ne kadar daha zaman alıcı (sıyırma el), geleneksel yöntem güvenli daha kaliteli olgunlaşmış yumurta (Bu eser). Bu yumurta mekanik bozulma bu yordamı uygularken düşük riski ile ilgilidir. Yumurtalık sıvı yanı sıra fertilizasyon oranı artış yüksek pH Pnömatik yöntemi kullanışlılığı kanıtı. Genel olarak, onların başarılı uygulama için operatörlerin mükemmellik el ile ilgili olmayan gibi balık üreme yöntemi yumurta toplama sıyırma hava kuluçka protokolleri standardizasyon açısından umut verici bir seçenek olabilir.
Hava yumurtlama otomatik bir seçenek gibi görünüyor olsa da, el ile yumurtlama daha daha fazla zaman alabilir bulundu. Özellikle iyi deneyimli kuluçka işçi el şeridi oluşturma yordamları uyguladığınızda bu farklılığı süresi belirgin olabilir. Ancak, sivri olmalıdır yumurtlama süresi kullanımı ile hava basıncı out hala tatmin edici; Balık başına yaklaşık 20 saniye. Ayrıca, yöntem sıyırma el ile olduğu gibi bu tekniğin etkinliğini işçi deneyim, bağımlı değildir.
Her ne kadar biz elde edilen yumurta hacimleri arasındaki farklılıkları gözlemlemek değil, yumurtalık sıvı pH farklılıkları gökkuşağı alabalığı durumunda belirgin idi. Bu etkiyi pH bu fenomen3iyi bir göstergesi olarak, kırık yumurta, en büyük olasılıkla ilgili. Döllenmemiş yumurta mekanik yaralanma ve onların direnci artırmak için daha fazla duyarlı yumurta etkinleştirme sırasında sertleşme sonra zaman8. Döllenmemiş kırık yumurta olarak başka bir yerde rapor salmonids daha düşük fertilizasyon oranları için sorumludur. Bu nedenle, en fazla yumurta toplama sırasında özen göstermelidir. Bizim veri gökkuşağı alabalığı döllenmemiş yumurta kahverengi alabalık yumurta zayıf olduğunu göstermektedir. Gökkuşağı alabalığı yumurta el sıyırma tarafından toplanan daha düşük pH ve hava sıyırma tarafından elde edilen kişilere göre oranı çıkım vardı. Bu kahverengi alabalık durumunda görülen değildi. Deneylerimiz yumuşak yumurta ile salmonid türler için hava şeridi oluşturma yordamı sonrası kalite yumurtlama açısından yararlı olabilir öneririz.
Sonra yumurtlama broodstock bireysel ölüm her zaman salmonid balık kuluçkahane görülür. Ancak, olay hem bireysel durum ve balık sağlık durumunu ilgilidir. Hava sıyırma cilt mukus, su patojenlere karşı önemli bir bariyer büyük kaybı olduğu yumurta toplama hafif bir yöntem gibi görünüyor. Biz sonrası yumurtlama herhangi bir ölüm (yumurtlama üzerinden bir ay içinde) gözlemleme ki aslında rağmen bazı balık kaybeder yıl boyunca gözlem gösterdi. Kahverengi alabalık, hava sıyırma mortalite % 15 yıldan fazla sonuçlandı, ancak, gökkuşağı alabalığı söz konusu olduğunda, biz grup, yaklaşık %10 daha yüksek kayıp elinde elimden gözlenen. Hava sıyırma alabalık için kahverengi alabalık yumurta kalitesi ve broodstock Genel mortalite açısından daha yararlı olabileceğini varsayabiliriz.
Hava sıyırma yararlı olmasına rağmen gökkuşağı alabalığı yumurta ancak kahverengi alabalık, biz bu yordamı daha sıyırma yordam el ile karşılaştırıldığında standart olacak ki öneririz. Sıyırma havada balık karında uygulanan basınç elde olgunlaşmış yumurta miktarını ve kalitesini etkiler tek faktördür. Bu yöntemde kuluçkahane kullanımı esas olarak kırık yumurta11sonucu olarak ortaya çıkan somon yumurta kayıp azaltır. Özel bir beceri hava şeridi oluşturma yordamı gerçekleştirmek için gerekli olan, biz benzer miktar ve yumurta kalitesini her iki yetenekli ve yetenekli kuluçka işçiler tarafından elde edilebilir bekliyoruz. Biz yeni kuluçkahane yumurta toplama yordamı tarafından etkinlik ve tekrarlanabilirlik yüksek düzeyde karakterize için aradığınız için umut verici bir seçenek olarak hava şeridi oluşturma yordamı tavsiye yanı sıra işleçleri tarafından az veya hiç deneyimi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa gerek yok.
Acknowledgments
Sunulan çalışmada Project tarafından desteklenen "balık sıyırma - Pnömatik yöntemi olası uygulama, gamet kalite ve miktar ve balık refahı üzerinde etkisi" (kısaltma: PNEUFISH) "Operasyonel Program geliştirme balıkçılık altında finanse Sektör ve kıyı alanları 2007-2013"(OR-61724-OR1400001/10), hayvan üreme Enstitüsü ve gıda araştırma için tahsis fonların Bilimler Akademisi, Olsztyn, Polonya, Lehçe ve destek maliyeti Office tarafından (Gıda ve tarım maliyet eylem FA1205: AQUAGAMETE ). Stanley Ifeanyi Ugwu İngilizce düzenleme büyük destek için teşekkür etmek istiyoruz. Ayrıca Animasyon üreticileri "Studio Filmowe Ruchome Obrazki" kabul etmek istiyoruz.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Glycine pure P.A. | AVANTOR | 527560117 | sperm activating buffer |
| Trizma base | Sigma Aldrich | T1503 | sperm activating buffer |
| Sodium chloride Bioreagent | Sigma Aldrich | S5886 | sperm activating buffer |
| Calcium chloride anhydrous | Sigma Aldrich | C4901 | sperm activating buffer |
| Propiscin (0.2% etomidate solution) | IRS Olsztyn, Poland | not indicated | |
| compressor | Thomas Sheboigan WI USA | DT/SR 070800001882 | |
| reduction valve | Camozzi | cRJUS U7J | |
| air hose | ZEC T.P.U. | SH.98 | |
| syrgine | EFD | 7012118 | |
| Air spawning stage | Biopasz, Poland | PNEU001 | |
| Orion Ross Ultra electrode | Thermo Scientific, Waltham, MA, USA | 8102BNUWP |
References
- Nelson, J. S. Fishes of the World. , 4th, JohnWiley and Sons, Inc. Hoboken, NJ, USA. (2006).
- García-Marín, J. L., Sanz, N., Pla, C. Proportions of native and introduced brown trout in adjacent fished and unfished Spanish rivers. Conservation Biology. 12, 313-319 (1998).
- Dietrich, G. J., Wojtczak, M., Slowinska, M., Dobosz, S., Kuzminski, H., Ciereszko, A. Broken eggs decrease pH of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) ovarian fluid. Aquaculture. 273, 748-751 (2007).
- Zurbuch, P. E. A structure for easy fish recovery during drainage of an impoundment. Progressive FishCulturist. 27, 237-238 (1965).
- Cejko, B. I., et al. Effects of different stripping methods of female and activation medium on fertilization success in northern pike (Esox lucius). Czech Journal of Animal Sciences. 10, 481-486 (2016).
- Morisawa, S., Morisawa, M. Induction of potential for sperm motility by bicarbonate and pH in rainbow trout and chum salmon. Journal of Experimental Biology. 136, 13-22 (1988).
- Billard, R., Cosson, J., Perchec, G., Linhart, O. Biology of sperm and artificial reproduction in carp. Aquaculture. 129, 95-112 (1995).
- Iuchi, I., Ha, C. R., Sugiyama, H., Nomura, K. Analysis of chorion hardening of eggs of rainbow trout, Oncorhynchus mykiss. Development Growth and Differentiation. 38, 299-306 (1996).
- Wojtczak, M. A., Kowalski, R. K., Dobosz, S., Goryczko, K., Kuźminski, H., Glogowski, J., Ciereszko, A. Assessment of water turbidity for evaluation of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) egg quality. Aquaculture. 242, 617-624 (2004).
- Tabrizi, E. N., Khara, H., Nezami, S. A., Lorestani, R., Shamspour, S. Broken Eggs Influence on Fertilization Capacity and Viability of Eggs, Turbidity and pH of Ovarian Fluid and Fertilization Water in the Endangered Caspian Brown Trout, Salmo Trutta Caspius. International Journal of Biology. 3 (1), 161-166 (2011).
- Carl, G. C. Beware of the broken egg! A possible cause of heavy losses of salmon eggs. Progresive Fish-Culturist. 53, 30-31 (1941).
