Summary
Det nuvarande protokollet presenterar experimentella rutiner för att stimulera odlade makrofager utrustas med kapacitet att släppa molekylära faktorer som främjar neurite utväxt. Behandling av lägret till neuron-makrofag samtidig kulturer inducerar makrofager att producera luftkonditionerade medium som besitter starka neurite utväxt aktivitet.
Abstract
Det finns starka bevis att makrofager kan delta i regenerering eller reparation av skadade nervsystemet. Här beskriver vi ett protokoll där makrofager förmås att producera luftkonditionerade medium (CM) som främjar neurite utväxt. Adult dorsalrotsganglier ganglion (DRG) nervceller är akut skiljas och förkromad. När nervceller bifogas stabilt, är peritoneal makrofager samtidig odlade på en cell kultur infoga överlagras på samma väl. Dibutyryl cykliskt AMP (db-cAMP) tillämpas samtidig kulturer för 24 h, varefter cellkulturen infoga innehållande makrofager flyttas till en annan brunn att samla CM för 72 h. CM från samtidig kulturer behandlas med db-lägret, när de appliceras på en separat vuxen DRG neuron kultur, utställningar robust neurite utväxt aktivitet. Den CM erhålls från db-cAMP-behandlade kulturerna bestående av encellig typ ensam, antingen DRG neuron eller peritoneal makrofag, inte uppvisar neurite utväxt aktivitet. Detta indikerar att samspelet mellan nervceller och makrofager är oumbärlig för aktivering av makrofager utsöndrar molekylära faktorer med neurite utväxt aktivitet i CM. Vårt samarbete kultur paradigm kommer således också vara användbart att studera intercellulära signalering i neuron-makrofag samspelet att stimulera makrofager utrustas med en pro-regenerativ fenotyp.
Introduction
En mängd studier har försökt att förbättra CNS axon regeneration efter skador i ryggmärgen eller hjärnan. Inflammatoriska reaktioner, oundvikligen åtföljer skadorna i nervsystemet, anses traditionellt delta i sekundära sjukdomsprocesser som leder till skadliga resultat1,2. Metylprednisolon som kan dämpa inflammatoriska reaktioner är faktiskt den enda godkända terapin för akut ryggmärgen skadan3. Nyare studier har emellertid lämnat bevis att makrofager, en typ av representativa inflammatoriska celler, kan delta i regenerering eller reparation av skadade nervsystemet4,5,6. Till exempel infiltrera makrofager efter en objektiv skada producera pro-regenerativ molekyler att främja regenerering av retinal ganglion nervceller7,8. Dessutom ökade transplanterade DRG nervceller axon tillväxten upp regionen där makrofager aktiverades av zymosan9. Makrofager på webbplatsen lesion kan dessutom skapa en tillväxt-tillåtande miljö för skadade perifera nerver10.
Vårt arbete har också starka bevis som makrofager kan bidra till kapaciteten hos axon förnyelse i intilliggande nervceller. Vi har visat att aktivering av makrofager i de dorsala rotganglier (DRG) var väsentliga i den ökade regenerativa kapaciteten av DRG sensoriska nervceller efter en prekonditionering perifer nerv skada11. Liknande forskning rapporterades självständigt från ett annat laboratorium12. Vi visade också att intraganglionic injektion av dibutyryl cykliskt AMP (db-cAMP), som är en välkänd molekyl att förbättra kapaciteten hos axon regenerering13, inducerad aktivering av makrofager. Avaktivering av makrofager avskaffat effekterna av db-lägret på neurite utväxt aktivitet. Efterföljande verk identifierade nervskade-inducerad uttryck för CCL2 i nervceller som en signal att stimulera makrofager med en pro-regenerativ fenotyp14,15.
Baserat på ovanstående experimentella resultat, har vi etablerat en in vitro- modell som liknar molekylära händelser som inträffar i de DRGs efter en prekonditionerande skada modell11,14. I denna modell används db-cAMP till neuron-makrofag samtidig kulturer framkalla intercellulära signalering som leder till aktivering av makrofager med en pro-regenerativ fenotyp. Här beskriver vi detaljerade protokoll genom vilket vi kan generera makrofager som utsöndrar molekylära faktorer som främjar neurite utväxt (figur 1). Detta experimentella modellen illustrerar ett koncept att makrofager kan stimuleras eller förmås att stödja axon regeneration efter skador på nervsystemet. Vår modell kommer också vara användbart för att studera mekanismer i intercellulära signalering som leder till aktivering av pro-regenerativ makrofager.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla experiment med djur godkändes av institutionella djur vård och användning kommittén av Ajou University School of Medicine.
1. kultur beredning av dissocierade vuxen DRG Neuron
- Innan du konfigurerar kulturen, pre coat en 6-väl tallrik med poly-D-lysin och laminin. Inkubera en 6-well platta med 0,01% poly-D-lysin vid 37° C i 2 h eller vid 4° C över natten. Sedan tvätta plattan två gånger med destillerat vatten.
- Inkubera plattan med laminin lösning med en koncentration på 3 µg/mL för 2 h i rumstemperatur och sedan tvätta plattan två gånger med destillerat vatten. Torka plattan i rumstemperatur minst 1 h.
- Avliva en mus i en transparent CO2 kammare ansluten till en komprimerad CO2 gascylinder. Incisionsfilm huden överliggande kotpelaren med kirurgisk blad och dissekera paravertebral musklerna bilateralt för att utsätta vertebrala ben. Ta bort vertebrala ben minutiöst med en smal spets kirurgiska rongeur tills DRGs är helt exponerad.
Obs: Vuxen DRGs nervceller erhålls från vuxna C57BL6 manliga möss åldern 8 veckor till 12 veckor gamla. - Ta bort DRGs bilateralt från S1 ända upp till C1 nivå med iridektomi sax och spetsig pincett i dissekera Mikroskop. Försök att klippa ut rötterna helt från DRGs för att minimera kontaminering av Schwann celler eller fibroblaster.
- Lagra de dissekerade DRGs i en 60 mm petriskål innehållande 5 mL av kall Dulbeccos modifierade Eagle Medium (DMEM) på is tills alla DRGs samlas.
Obs: Det är viktigt att dissekera DRGs så snabbt som möjligt. Insamling av alla DRGs från en mus bör inte ta längre tid än 30 min. 30 min efter dödshjälpen, stoppa insamlingen av DRGs och fortsätt till nästa steg även om det återstår DRGs. - Överföra DRGs till en 1,5 mL Eppendorf-rör med en blå pipettspetsen (1000 µL) med ett cut-off slut. Ta bort DMEM efter en snabb spinn i flera sekunder med en mini centrifug. Tillsätt 1 mL DMEM som innehåller 125 U/mL typ XI kollagenas och Inkubera röret i 90 min med en varsam rotering (35-40 rpm) skakapparat twister i en 37 ° C inkubator. Immobilisera röret på golvet shaker med tejpen.
- Kassera kollagenas-innehållande DMEM och tillsätt 1 mL färsk DMEM. Vänta tills de flytande DRGs helt sjunka ner till botten, och ta sedan bort DMEM med vävnad skräp. Upprepa detta tvätt minst sex gånger.
Obs: Försök inte att Kassera supernatanten helt. Var noga med att inte ta bort någon DRGs med den supernatant DMEM. - Överföra DRGs till en 15 mL konisk slang med en blå pipettspetsen (1000 µL) med ett cut-off slut. Sedan Pipettera försiktigt upp och ner minst 15 gånger med en blå spets (1000 µL) för att göra en homogen cellsuspension. Undvika att göra bubblor och inte försöka röra botten av koniska rör med en pipettspetsen.
- Centrifugera röret vid 239 x g i 3 min och noggrant avlägsna supernatanten med flytande skräp. Tillsätt 1 mL av Neurobasal medium kompletteras med B27 (2,0% v/v) och resuspendera cellpelleten genom pipettering försiktigt upp och ner 5 till 10 gånger.
- Passera en 70 µm cell SIL överlagras ovanpå en 50 mL konisk tub cellsuspension. Vänta i 2 min och häll sedan Neurobasal/B-27 medium på silen med en pipett controller.
- Tallrik alla insamlade DRG neuroner (sammanlagt ungefär 2 x 106 DRG nervceller från en mus) på två brunnar i 6-väl-plattan. DRG nervceller från en vuxen mus omfatta två brunnar i en 6-bra platta. Sedan placera plattan i en CO2 inkubator vid 37 ° C tills makrofag Co kulturer.
2. samtidig kultur av P målgruppen Peritoneal makrofager på A Cell kultur infoga
Obs: Upprätta samarbete kulturerna 4 h efter den inledande pläteringen av dissocierade DRG nervceller
- Primär peritoneal makrofager är beredda från vuxna C57BL6 manliga möss åldern 8 veckor till 12 veckor gamla. Avliva ett djur i en CO2 kammare. Incisionsfilm bukhuden delikat, utsätta bukhinnan och undvika skärning bukhinnan för att förhindra läckage av lavage vätska.
- Punktering bukhinnan med en spruta med en 22G nål och injicera 10 ìl av iskall fosfatbuffrad salin (PBS) in i bukhålan. Massera lätt bukhinnan för 1-2 min. Sedan, dra ut nålen och pressa ut PBS via webbplatsen nålen punktering och samla lavage vätskan i en 50 mL konisk tub.
Obs: Före användning, sätta sprutan på isen att bibehålla kylan av PBS. - Centrifugera lavage vätskan vid 239 x g i 10 minuter vid 4 ° C till pellet cellulära komponenter. Återsuspendera pelleten med 3 mL i röda blodkroppar (RBC) lyseringsbuffert för 3 min i rumstemperatur. Sedan Centrifugera cellsuspensionen igen vid 239 x g under 10 minuter vid 4 ° C. Återsuspendera pelleten med 3 mL PBS och centrifugera cellsuspensionen igen för att ta bort alla återstående RBC lyseringsbuffert.
Obs: Kontrollera den RBC lyseringsbuffert bort helt. Annars kan återstående RBC lysisbuffert vara giftigt för odlade makrofager. - Att resuspendera pelleterat cellerna i 1 mL av Neurobasal/B-27 medium. Plattan som hälften av alla insamlade makrofager (totalt 3 × 10-6 till 6 x 106 celler) på en cellkultur infoga med den effektiva arean av 4,2 cm2, som är placerad ovanpå brunnen av dissocierade DRG.
Obs: Under perioden samtidig kultur odlas makrofager i Neurobasal/B-27 neuron odlingsmedium. Adekvat överlevnad av makrofager under detta villkor bekräftades.
3. behandling av Db-Camp och samling av makrofag CM
Obs: Starta db-cAMP behandling 4 h efter de neuron-makrofag samtidig kulturerna.
- Tillsätt 2 µL av 100 µM db-cAMP lösning till neuron-makrofag samtidig kulturer. Tillsätt samma volym av PBS för en kontroll-experiment.
- Efter 24 h, fylla en tom brunn med 1 mL av makrofag odlingsmedium i samma 6-bra platta. Överföra cell kultur skäret i neuron-makrofag samtidig kulturer till tomma brunnen med makrofag odlingsmedium. Hålla cellerna på samma villkor för 72 h utan att ändra mediet.
Obs: Vi lägger bara 1 mL odlingsmedium makrofag under CM samling att göra koncentrerad CM. Under samlingen CM, om det behövs, vi lagt till mer för att helt täcka makrofager inom insatsen. - Efter 72 h, Centrifugera makrofag CM 239 x g för 5 min att ta bort de cellulära komponenterna. Passera supernatanten genom ett 0,2 µm filter för att ta bort alla återstående cellulära skräp. Lagra den insamlade CM vid-70 ° C fram till användning.
4. Neurite utväxt Assay med insamlade CM
- Innan du konfigurerar en separat vuxen DRG neuron kultur, pre coat en 8-väl kammaren bild efter samma procedur som beskrivs i 1.1 och 1.2.
- Erhålla dissocierade vuxen DRG nervceller i Neurobasal medium kompletteras med B27 med samma metoder beskrivs från 1,3 till 1,10. Tallrik 5 x 104 celler per brunn in i pre belagda 8-väl kammaren bilden.
- Plats i kammaren bilden i en 37 ° C inkubator för 2 h, vilket gör att cellerna att bifoga till botten. Sedan, ersätta odlingssubstratet med tinade CM som är förvärmd vid 37 ° C.
Obs: Var noga med att inte röra botten av 8-väl kammaren bilden när du tar bort odlingssubstratet och lägga till den insamlade CM. - 15 h efter inledande plätering, ta bort mediet och tvätta cellerna med PBS en gång. Sedan tillsätt 200 µL iskall 4% PARAFORMALDEHYD lösning i brunnarna och inkubera cellerna med PARAFORMALDEHYD lösningen för 20 minuter vid 4 ° C
Obs: DRG neuron kulturen för neurite utväxt assay bör just begränsas till 15 h. Under detta tillstånd finns det ingen märkbar neurite utväxt. - Tvätta tre gånger med iskall PBS och sedan utföra blockering med 10% normalt get serum (NGS) med 0,1% Triton-X för 30 min. Inkubera fast cellerna med primär antikropp (anti-Tuj-1) lösning utspädd med 10% NGS (vid en koncentration på 1 µg/mL) för 4 h på rummet temperatur eller övernattning vid 4 ° C.
- Tvätta tre gånger med PBS och sedan Inkubera cellerna med sekundär antikropp (get-anti-mus) lösning för 2 h i rumstemperatur. Sedan tvätta två gånger med PBS och montera kultur bilden med ett täckglas (24 × 50 mm) med montering lösning.
- Ta bilder med fluorescens Mikroskop för att visualisera neurite utväxt.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Vi beskriver ett protokoll som kan generera makrofager kan utsöndra molekylära faktorer med neurite utväxt aktivitet. Makrofag CM erhålls från samtidig kulturer behandlas med db-lägret resulterade i robust neurite utväxt när det appliceras på en separat DRG neuron kultur (figur 2A). I jämförelse inducerade CM erhålls från PBS-behandlade samtidig kulturerna inte neurite utväxt i våra 15-h kultur varaktighet (figur 2B). När db-cAMP behandlas till kulturen med makrofag ensam, var CM som erhållits från detta villkor inte effektivt stödja neurite utväxt (figur 2 c). Detta tyder på att neuron-makrofag interaktion är oumbärlig för stimulerar makrofager utrustas med en proregenerative kapacitet. Vi testade också om CM erhålls från db-cAMP-behandlade endast neuron-kultur och hittade ingen neurite utväxt (figur 2D).
Figur 1: en schematisk bild som illustrerar förfaranden för att erhålla luftkonditionerade innehållande neurite utväxt medelaktivitet. Adult DRG nervceller (2 x 106 celler per varje brunn) odlas i 4 h. Sedan, peritoneal makrofager odlas i Infoga väl, ovanför Brunnen i som DRG nervceller odlades. 4 h efter plätering, antingen PBS eller dibutyryl cAMP behandlas. Efter 24 h inkubation överförs infoga väl till en annan brunn fylld med ca 1 ml medium. Då inkuberas de överförda väl i 72 h. Sedan samlas ruvade luftkonditionerade medium (CM). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: representativa resultat av neurite utväxt assay använder luftkonditionerade medium erhålls från olika villkor. (A, B) Adult DRG nervceller var akut skiljas och odlade för exakt 15 h. 2 h efter plätering, odlingsmedium ersattes med luftkonditionerade medium (CM) erhålls från neuron-makrofag samtidig kulturer behandlas med antingen PBS (A) eller dibutyryl cAMP (db-cAMP) (B). Endast den CM behandlas med db-cAMP utställda robust neurite utväxt aktivitet. (C, D) CM från kulturer som består av antingen makrofag (C) eller neuron (D) ensam som behandlades med db-lägret stödde inte neurite utväxt. Skala staplarna visar 200 µm. vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Det finns flera kritiska steg för generering av detta samarbete kultur system. Det är viktigt att se till att den musen DRG nervceller och peritoneal makrofager är beredda färska och hälsosamma. Vi har upplevt minskad neurite utväxt aktivitet cm när dissektion av alla DRGs tog mer än 30 min. Dessutom kontaminering av blodkomponenter i peritoneal makrofager också lett till en minskning av neurite utväxt aktivitet i CM. För att framkalla robust neuron-makrofag interaktion av db-cAMP, grundlig tvätt skulle också vara ett viktigt steg att säkerställa fullständigt avlägsnande av vävnad skräp och eliminering av potentiellt återstående cytotoxiska komponenter, såsom kollagenas och RBC lyseringsbuffert. En annan punkt upprepas är att rötterna bifogas DRGs bör tas bort så mycket som möjligt. Resterande stubbar av rötter skulle öka kontaminering av Schwann celler i DRG neuron kultur. Schwann celler kan producera hög mängd neurotrofa faktorer i kultur som kan förvirra resultaten.
I detta protokoll, var dissocierade makrofager klädd på en cell kultur infoga separerade från DRG nervceller pläterade på undersidan av väl plattan. Vår tidigare studie visade ingen signifikant skillnad i omfattningen av neurite utväxt aktivitet mellan CMs som samlats in från direkt samtidig kulturer (tillåta fysiska kontakter mellan de två celltyper) och samtidig kulturerna med de två celltyper åtskilda av en cellodling in11. Detta resultat anges att nervceller och makrofager kommunicerar med varandra via lösliga molekyler frigörs från antingen celltyp, inte genom direkta fysiska kontakter. Det visades att CCL2, utsöndras från DRG nervceller, ansvarar för att aktivera makrofager i en pro-regenerativ fenotyp i samtidig kultur modell14. Således kommer vår samtidig kultur att klarlägga mer detaljerad intercellulära signalering som medierar aktivering av pro-regenerativ makrofager.
Kulturen var just begränsad till 15 h under neurite utväxt analysen i detta protokoll. I pilotförsök, vi prövade flera olika kulturtid och hittade att med en minimal grad av neurite utväxt i kontroll skick (15 h), uppnåddes mycket robust neurite utväxt med CM behandlas med db-cAMP. Mus DRG nervceller, växer om inte konditioneras, inte någon betydande neuriter inom denna tidsram. Om DRG nervceller odlas längre än 15 h, men börjar de Visa en viss neurite utväxt även i kontroll, inte betingade tillstånd, som skulle dölja någon effekt i db-cAMP-behandlade GH på neurite utväxt. Liknande resultat har redovisats i neurite utväxt analysen med råtta DRG nervceller i en tidigare studie16.
Vissa tidigare studier används zymosan, en jäst cellväggen förberedelse, för att aktivera makrofager med en pro-regenerativ fenotyp7,9. Men släpptes makrofager stimuleras av zymosan inte bara pro-regenerativ molekyler men även cytotoxiska faktorer. När protein komponenterna i makrofag CM behandlade med zymosan skildes genom gelfiltrering kromatografi, makrofag-derived faktorer ≥ 30 kDa var cytotoxisk medan faktorer ≤ 30 kDa främjas axon regenerering7. Zymosan injektion till ryggmärgen kan dessutom leda till overt död av nervceller och axoner9. I jämförelse, våra protokoll att generera pro-regenerativ makrofager har visat sig vara mer fysiologiska än den tidigare använda zymosan. I själva verket förbättras db-cAMP injektion till DRG nervceller deras förmåga till tillväxt axoner efter en skada till den centrala grenen utan någon rapport om cellulära skador17,18. Under en serie av våra experiment, har vi aldrig sett någon betydande minskning av DRG neuron tätheten i kulturen efter applicering av den db-cAMP-behandlade CM. Vi spekulerar att våra protokoll tillåter oss att producera endast pro-regenerativ makrofager utan samtidiga neurotoxicitet. Därför rapporteras protokollet och experimentell modell här skulle vara användbart att identifiera molekylära signaturer av pro-regenerativ makrofager och förstå vilka mekanismer pro-regenerativ fenotypen är utvecklats.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har något att avslöja.
Acknowledgments
Detta protokoll stöds av bidrag NRF-2015R1A2A1A01003410 från ministeriet för vetenskap, IKT och framtida planering, Sydkorea.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cell culture insert transparent PET membrane 0.4μm pore size | Corning,Falcon | 353090 | Transparent PET membrane with 0.4-μm pore size, for 6-well plate |
| 70-μm nylon cell strainer | Corning, Falcon | 352350 | |
| 8-well culture slide | Biocoat | 354632 | with a uniform application of Poly-D-Lysine |
| Red blood cell lysis buffer | Qiagen | 158904 | |
| Collagenase from Clostridium histolyticum | Sigma-Aldrich | C9407-100MG | |
| Neurobasal medium | Thermo Fisher Scientific, Gibco | 21103-049 | Containing 1% glutamax and 1% penicilin-streptomycin |
| B-27 supplement, serum free | Thermo Fisher Scientific, Gibco | 17504-044 | extracellular solution |
| Glutamax | Thermo Fisher Scientific, Gibco | 35050-061 | |
| Penicillin-streptomycin | Thermo Fisher Scientific, Gibco | 15140-122 | |
| Poly-D-lysine Hydrobromide | Sigma-Aldrich | P6407-5MG | |
| Laminin | Thermo Fisher Scientific, Invitrogen | 23017-015 | |
| Adenosine 3', 5'-cyclic monophosphate, N6,O2'-dibutyryl-, sodium salt | Merck Millipore Corporation, Calbiochem | 28745 | |
| 10% Normal Goat Serum | Thermo Fisher Scientific | 16210072 | |
| Triton-X-100 | Daejung Chemical and Metal Co | 8566-4405 | |
| Anti β III tubulin (Tuj-1) | Promega Corporation | G7121 | Mouse monoclonal antibody |
| Goat anti-Mouse IgG (H+L) secondary antibody | Thermo Fisher Scientific, Invitrogen | A11005 | |
| Hemacytometer | Marienfeld-Superior | N/A | |
| Cell culture CO2 incubator | Panasonic | N/A | |
| Dissecting stereomicroscope | Carl Zeiss | Stemi DV4 | |
| Twist shaker | FINEPCR | Tw3t | |
| Tabletop centrifuge | Sorvall | N/A | |
| Confocal microscope | Olympus America Inc | IX71 | |
| FBS (Fetal Bovine Serum) | VWR International, Hyclone | SH30919.03 | |
| Friedman Pearson Rongeurs | FST (Fine Science Tools) | 16021-14 | Stainless steel, 14cm, curved, single joint action |
| Fine Scissors - Tungsten Carbide & ToughCut | FST (Fine Science Tools) | 14558-11 | sharp, serrated |
| Dumont #7 Forceps | FST (Fine Science Tools) | 11272-30 | Dumoxel, 0.07 x 0.04mm, curved |
| Vannas Spring Scissors | FST (Fine Science Tools) | 15000-00 | straight, 3mm cutting-edge, sharp |
| Qualitron DW-41 Micro-Centrifuge | Artisan Technology Group | DW-41 | Input Voltage: 115VAC |
References
- Donnelly, D. J., Popovich, P. G. Inflammation and its role in neuroprotection, axonal regeneration and functional recovery after spinal cord injury. Exp Neurol. 209 (2), 378-388 (2008).
- Festoff, B. W., et al. Minocycline neuroprotects, reduces microgliosis, and inhibits caspase protease expression early after spinal cord injury. J Neurochem. 97 (5), 1314-1326 (2006).
- Bowers, C. A., Kundu, B., Hawryluk, G. W. Methylprednisolone for acute spinal cord injury: an increasingly philosophical debate. Neural Regen Res. 11 (6), 882-885 (2016).
- Gensel, J. C., Kigerl, K. A., Mandrekar-Colucci, S. S., Gaudet, A. D., Popovich, P. G. Achieving CNS axon regeneration by manipulating convergent neuro-immune signaling. Cell Tissue Res. 349 (1), 201-213 (2012).
- DiSabato, D. J., Quan, N., Godbout, J. P. Neuroinflammation: the devil is in the details. J Neurochem. 139 Suppl 2, 136-153 (2016).
- Jin, X., Yamashita, T. Microglia in central nervous system repair after injury. J Biochem. 159 (5), 491-496 (2016).
- Yin, Y., et al. Macrophage-derived factors stimulate optic nerve regeneration. J Neurosci. 23 (6), 2284-2293 (2003).
- Yin, Y., et al. Oncomodulin is a macrophage-derived signal for axon regeneration in retinal ganglion cells. Nat Neurosci. 9 (6), 843-852 (2006).
- Gensel, J. C., et al. Macrophages promote axon regeneration with concurrent neurotoxicity. J Neurosci. 29 (12), 3956-3968 (2009).
- Barrette, B., et al. Requirement of myeloid cells for axon regeneration. J Neurosci. 28 (38), 9363-9376 (2008).
- Kwon, M. J., et al. Contribution of macrophages to enhanced regenerative capacity of dorsal root ganglia sensory neurons by conditioning injury. J Neurosci. 33 (38), 15095-15108 (2013).
- Niemi, J. P., et al. A critical role for macrophages near axotomized neuronal cell bodies in stimulating nerve regeneration. J Neurosci. 33 (41), 16236-16248 (2013).
- Hannila, S. S., Filbin, M. T. The role of cyclic AMP signaling in promoting axonal regeneration after spinal cord injury. Exp Neurol. 209 (2), 321-332 (2008).
- Kwon, M. J., et al. CCL2 Mediates Neuron-Macrophage Interactions to Drive Proregenerative Macrophage Activation Following Preconditioning Injury. J Neurosci. 35 (48), 15934-15947 (2015).
- Niemi, J. P., DeFrancesco-Lisowitz, A., Cregg, J. M., Howarth, M., Zigmond, R. E. Overexpression of the monocyte chemokine CCL2 in dorsal root ganglion neurons causes a conditioning-like increase in neurite outgrowth and does so via a STAT3 dependent mechanism. Exp Neurol. 275 Pt 1, 25-37 (2016).
- Cafferty, W. B., et al. Conditioning injury-induced spinal axon regeneration fails in interleukin-6 knock-out mice. J Neurosci. 24 (18), 4432-4443 (2004).
- Cai, D., et al. Neuronal cyclic AMP controls the developmental loss in ability of axons to regenerate. J Neurosci. 21 (13), 4731-4739 (2001).
- Neumann, S., Woolf, C. J. Regeneration of dorsal column fibers into and beyond the lesion site following adult spinal cord injury. Neuron. 23 (1), 83-91 (1999).
