Summary
نقدم هنا، ربط القناة الصفراوية الجزئي كنموذج جراحية لإصابة الكبد والتجدد في القوارض.
Abstract
في القوارض، ربط القناة الصفراوية كاملة (كبدل) من القناة الصفراوية المشتركة أسلوب جراحية المتبعة لدراسة انتشار ركود صفراوي والقناة الصفراوية معرقلة. بيد أن التجارب الطويلة الأجل يمكن أن يؤدي إلى زيادة معدلات الاعتلال والوفيات. في الماوس تحديد سلالات مع مرض الكبد الكامنة، يمكن إجراء مقارنات مفيدة حتى مع ربط فلقة واحدة من الكبد، والتي يمكن أن تقلل من الخسائر الحيوانية والنفقات. هنا، نحن تصف ربط القناة الصفراوية الجزئي (ببدل) في الماوس، والتي هي متصلة فقط القناة الصفراوية الكبدية اليسرى، مما تسبب في عرقلة الصفراوية في الفص الأيسر ولكن ليس الفصوص المتبقية. مع تقنية microsurgical حذراً، يمكن أن ببدل تجارب فعالة من حيث التكلفة، منذ الفص أونليجاتيد بمثابة رقابة داخلية على الفصوص الواصلة، عندما تعرض لنفس الظروف في نفس الحيوان. وخلافا كبدل، مجموعة مراقبة مستقلة تعمل بالشام غير ضروري. ببدل مفيد للغاية لمقارنة مباشرة مترجمة مقابل التأثيرات المنتظمة لركود صفراوي وغيرها من مكونات الصفراء المحتفظ بها. يمكن أيضا أن تكون أغراض أخرى ببدل كطريقة جديدة للتحقيق في الآليات المتعلقة بالأدوية والهجرة الخلية.
Introduction
قد استخدمت نماذج الجراحية لإصابة الكبد الحاد وإصلاحها، مثل ظهرت جزئية أو ربط القناة الصفراوية المشتركة (كبدل)، على مدى عقود في القوارض لدراسة تجديد الكبد وبل1،2. في كبدل، هو متصلة القناة الصفراوية المشتركة (التي تستنزف جميع الصفراوية تنتج في الكبد)، أسفر عن ركود صفراوي انسداد الشعب الهوائية والتهاب وتليف في أول 2-3 أسابيع بعد الجراحة، ومع التقدم في نهاية المطاف لتليف الكبد3. انتشار القناة الصفراوية، ترانسديفيرينتييشن، وتحريض الخلايا السلف الكبد المقيم أيضا ملامح كبدل4،5. على الرغم من أن التعريف كبدل آليات محددة للانسداد تشولانجيوباثي، وتتسم جيدا مع النتائج استنساخه في الفئران البرية من نوع وهذه السلالات مع كبد عادي6،،من78، الإجراء يمكن أن يطالب من الناحية الفنية في بعض نماذج الماوس المحورة وراثيا من أمراض الكبد، تتطلب الحيوانات أكثر مما كان متوقعا بسبب ارتفاع المراضة والوفيات من انسداد مراري مع مرور الوقت. هذا الأسلوب أيضا مفيدة لدراسة المرض الفئران المحورة وراثيا مع الكامنة في الكبد، الذي قد لا تتسامح مع خلاف ذلك الإجهاد من فترات طويلة من الوقت بالطبع تجارب عقب كبدل.
ببدل يمكن أن توفر بديلاً معقولاً للمساعدة في التغلب على بعض هذه التحديات. الدراسات الأولية ببدل في الفئران البرية من نوع تهدف إلى التمييز بين الوسطاء بالنيابة محلياً والجهازية لالتهاب9. في ببدل، هو تصور التقاء الصفراوية الرئيسية من اليمين واليسار الكبدية الصفراوية أعلاه القناة الصفراوية المشتركة بعناية على هيلم، وهي متصلة فقط القناة الصفراوية الكبدية اليسرى لتوليد ركود صفراوي معرقلة مترجمة. ببدل يوفر العديد من المزايا كبدل. في ببدل، أونليجاتيد الفص الأيمن بمثابة رقابة داخلية مطابقة مطابق تماما للفص الأيسر الواصلة، تعرض لنفس التأثيرات الجهازية، مثل الحالة التغذوية أو تعميم العوامل. على الرغم من أن الوسطاء المحترفين التهاب النظامية كانوا حاضرين، أوساوا et al. لاحظ التليف ونخر في الفصوص أونليجاتيد أقل، ولكن زيادة الخلايا التحريضية، وتحويل التعبير β عامل النمو في الفص الواصلة9.
في الآونة الأخيرة، تم إعادة تعريف ببدل لدراسة آثار متني الكبد من الصفراء المحتفظ بها10. باستخدام نفس الحيوان للمراقبة الداخلية (أونليجاتيد "صورية") والمجموعات التجريبية، نصفين ببدل فعالية عدد الحيوانات اللازمة للتجربة، والتي بدورها أكثر فعالية من حيث التكلفة. الفئران تحمل آثار ببدل أفضل بكثير، حيث الوقت المثالي بالطبع تجربة (إيه تو أسابيع) يمكن أن يتحقق في الفص الواصلة. الأهم من ذلك، يمكن التمييز بين الآثار المباشرة أحياناً من ركود صفراوي انسداد الشعب الهوائية ببدل والاحتفاظ بمكونات الصفراء في الفص الواصلة، مقارنة بالفص التحكم أونليجاتيد. عموما، ببدل وسيلة جذابة لدراسة الآثار الخاصة بفلقة من ركود صفراوي المترجمة في الكبد.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
وقد أجريت جميع الإجراءات وفقا للمبادئ التوجيهية الأخلاقية لرعاية الحيوان المؤسسية واستخدام اللجنة لجامعة بيتسبرغ.
1. الأساسية تقنيات وإجراءات مشتركة
- اﻷوتوكﻻف جميع المعدات ميكروسورجيكال قبل الاستخدام.
- لتجنب قتل الفأرة بالتخدير، تحقق لها نمط التنفس بعناية.
- أجهزة تعمل باللمس والأمعاء أقل قدر ممكن لتجنب إتلاف الأجهزة وتسبب النزيف. الصحافة نزيف النقاط مع مسحات القطن الرطب أو الأسفنج الشاش.
- استخدام مسحات القطن الرطب للطيف التلاعب بالأجهزة. تستخدم الأسفنج الشاش الرطب، غير منسوجة بحجمين، 3.5 × 3.5 سم و 6.0 × 6.0 سم. استخدم أصغر واحد على التراجع عن الكبد كله. استخدام واحد أكبر التفاف الأمعاء الصغيرة والكبيرة.
2-إعداد بريسورجيكال
- استخدام الفئران الذكور c57/b6، 8-12 أسبوعا عمر (عندما يكون وزن الجسم حوالي 20-35 غ) لربط جزئي القناة الصفراوية.
- السماح بحرية الوصول إلى الماء والغذاء الفئران حتى تحريض التخدير.
3-الجزئية القناة الصفراوية ربط العملية
- تخدير الماوس عن طريق وضع الحيوان في دائرة للاستقراء مع مزيج أكسجين 1.5-2.0% إيسوفلوراني و 1 لتر في الدقيقة. مراقبة الحيوان بعناية عن طريق مراقبة معدل التنفس. عندما يكون معدل التنفس للحيوان نفسا واحدة في الثانية الواحدة، يكون الماوس أنيسثيتيزيد جيدا. حيث يختفي منعكس انسحاب الجبهة من أطرافهم أكثر سرعة، قرصه أطرافهم هند سيرا على الأقدام، وكذلك لتأكيد غياب منعكس الانسحاب الكامل. وينبغي أن مشحم العيون مع وكيل التشحيم العيون لمنع قرحة القرنية. علما أن الجرعة الأولى من مسكن يمكن أن تعطي بريوبيراتيفيلي لمنع تنشيط مستقبلات الألم.
- يحلق جدار البطن مع مقص الشعر، ووضع الماوس على طاولة العمليات الجراحية تحت المجهر الجراحي. إصلاح جميع الأطراف إلى طاولة المفاوضات مع الشريط. استخدم الاستنشاق isoflurane للاحتفاظ بالماوس تحت التخدير العام.
- ضبط المبخر isoflurane واستخدام isoflurane 2.0-3.0% للاستقراء.
- استخدام مسحات معقمة، تطهير جدار البطن أولاً مع 0.3-0.5 مل بوفيدون يطبق موضعياً، تليها إيثانول 70%. ينبغي أن تغطي الحيوان مع ثني عقيمة.
- جعل شق البطن خط الوسط طويلة من الرهابه إلى العانة باستخدام مقص وملقط أدزون. وبعد إجراء شق البطن، تقليل isoflurane إلى 0.8-1.0% للصيانة.
- كشف تجويف البطن باستخدام الصغرى-ضام. اضغط الرهابه مع الملقط البعوض والتراجع عن اتجاه رأس الماوس. إصلاح الملقط البعوض في مكان استخدام الطين الناعمة.
- 1-2 مل من حرارة (37 درجة مئوية) غرس المالحة مخزنة الفوسفات معقمة (PBS) في تجويف البطن لتجنب إصابة أجهزة البطن. عقد الأمعاء الصغيرة مع مسحات القطن الرطب وسحب منهم بلطف نحو رأس الماوس. قص الأربطة بين الأمعاء الصغيرة وريتروبيريتونيوم لتجنب إصابة الأمعاء الصغيرة (الشكل 1A).
- التفاف الأمعاء الصغيرة والكبيرة مع الأسفنج شاش الرطب، غير المنسوجة. وضعها الجانب والذيلية تجويف البطن. يمكن أن توضع الأمعاء ملفوفة في شاش معقم في ميدان رايات العقيمة لتجنب التلوث.
- بلطف سحب الكبد كله تجاه الرهابه باستخدام اسفنجة صغيرة رطبة من شاش منسوج لكشف هيلم الكبدي والرباط الكبدية الإثناعشرية (الشكل 1B).
- تحقق للتأكد من تشريح هيلم كبدي. القناة الصفراوية المشتركة يقع على الجانب البطني من الوريد البابي. تأكيد مواقع الحق والقناة الصفراوية الكبدية اليسرى، التي تصب في التقاء الصفراوية الرئيسية في هيلم الكبد.
- تحديد القناة الصفراوية الكبدية اليسرى التي تستنزف الفص الأيسر، وتطويق أنه مع خياطة نايلون 10-0 استخدام الجانب كليلة إبرة خياطة (الشكل 2A). تجنب إصابة الوريد البابي والشريان الكبدي، وسطح الكبد.
- سد القناة الصفراوية الأيسر مع النايلون 10-0. (الشكل 2).
- ضع الأمعاء الصغيرة والكبيرة في نفس الموقف قبل العملية باستخدام مسحات القطن الرطب.
- تأكيد لا يوجد التواء الأمعاء ونزيف داخل البطن، ثم أغلق في العضلات والجلد في طبقتين مع فيكريل 4-0. خياطة مجدول (فيكريل) كان يستخدم لإغلاق الجلد، ولكن شعيرات هو المفضل لتقليل احتمالات الإصابة.
ملاحظة: اللفافة بخياطة المستمر من الرهابه إلى العانة أغلق، والجلد بخياطة المستمر من العانة إلى الرهابه. - إيقاف التخدير بعد إغلاق الشق.
4-بعد العملية الجراحية العلاج والمتابعة
- بعد الجراحة، قرصه الجلد الظهرية الماوس فقط وحقن بوبرينيكس (0.1 مغ/كغ) وسيفازولين (100 مغ/كغ) تحت الجلد، يليه حقن بوبرينيكس كل ح 12 لمدة 3 أيام، وسيفازولين كل 24 ساعة لمدة 3 أيام على التوالي11،12 ،13. علما أن الجرعة الأولى من مسكن يمكن أن تعطي بريوبيراتيفيلي لمنع تنشيط مستقبلات الألم. سيفازولين والمضادات الحيوية المحيطة التعاونية الأخرى ضرورية فقط للحيوانات التي قمعت المناعي، مثل تلك التي استخدمت في دراسات الزرع.
ملاحظة: إذا كان يتم إجراء الجراحة بنجاح، الماوس عادة يتعافى داخل 30 دقيقة سوف يكون نشاط الفئران تقريبا نفس الشرط قبل الجراحة. - تحقق من الفئران يوميا بحثاً عن أي علامات الشدة.
- التضحية الفئران بخلع عنق الرحم تحت التخدير العام لشراء كبد وعينات الأنسجة الأخرى عند نقطة زمنية محددة (أي، 7، 14، 21 يوما) بعد ببدل.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
وأجرى ببدل لهذه التجربة النموذجية، في PiZ ثلاث الفئران المعدلة وراثيا، التي الخص أمراض الكبد البشري وجدت في عوز ألفا-1 antitrypsin (A1AT). أوفيريكسبريسيس الماوس PiZ التحوير يتألف من عدة أجزاء الجينوم الحمض النووي التي تحتوي على مناطق الترميز متحولة الجينات البشرية A1AT والمروج، جنبا إلى جنب مع إينترونس وكيلوبس ~ 2 من المنبع والمصب المرافقة المناطق14، 15. A1AT عادي بروتين مصل يفرز المنتجة في الكبد. شكل المسخ A1AT يولد المجاميع بروتين غير قابل للذوبان بشكل عفوي تتراكم في الكبد تسبب الإجهاد السامة. الاستفادة من التجارب الفئران PiZ الذكور 3-شهر القديمة، التي تعبر عن النمط الظاهري أشد من هذا المرض، عند تجميع البروتين قمم16.
وقورنت بيوتشيميستريس المصل الكبد في ببدل وكبدل PiZ الفئران (الجدول 1)10. إنزيمات الكبد ألانين aminotransferase (ALT) وأمينوترانسفيراسي اسبارتاتي (أست) من المؤشرات الحيوية لإصابة كبدية، بينما بيليروبين المصل الإجمالي (TSB) يقيس درجة ركود صفراوي. عموما، لم تظهر الفئران التي تعرضت إلى ببدل علامات إصابة الكبد الحاد أو ركود صفراوي، كما قيمها المصل كانت مماثلة للأساس10. من المهم ملاحظة أن الفئران مع ببدل الفاشلة (بسبب مشاكل تقنية، مثل القناة الصفراوية أو إصابات الأوعية الدموية) سوف تظهر القيم المصل مشابهة للفئران كبدل، مع إنزيمات الكبد مرتفعة إلى حد كبير ولجان. سريرياً، الفئران مع ببدل الفاشلة سوف تظهر أكثر الكليلة والأسى، مع النتائج التي توصل إليها من تسرب الصفراء والاستسقاء والتهاب الصفاق، أو ورم دموي، وسوف تحتاج في نهاية المطاف لا بد من التضحية.
منذ وضع الفئران التي تعرضت إلى ببدل الخاصة بالفص معرقلة ركود صفراوي، أنهم لا يكتسبون المرارة منتفخة، والظلام، ومليئة بالصفراء في كبدل. يظهر فقط الفص الواصلة اشحب في اللون، بينما الفصوص أونليجاتيد ستحافظ على التلون العادي، والظلام، والبنى المحمر (الشكل 3). وهناك اختلافات رئيسية في الكبد الأنسجة، وكذلك، مع القناة الصفراوية زيادة انتشار والتليف في الفص الواصلة (الشكل 4). 10
الجدول 1: بيوتشيميستريس المصل الممثل الكبد من ربط القناة الصفراوية الجزئي (ببدل) بالمقارنة مع إكمال ربط القناة الصفراوية (كبدل) 10 . وتمثل كل نقطة الوقت الفئران 3-4. ملاحظة PiZ الفئران المحورة وراثيا على خلفية c57/bl6. مختبر مرجعي يتراوح أيضا بين قوسين. (WT، البرية من نوع؛ TSB، بيليروبين المصل الإجمالي؛ ALT، ألانين أمينوترانسفيراسي؛ الب، الفوسفاتيز القلوية).
الشكل 1:التعرض لنظام الكبد وتجويف البطن. الأمعاء الصغيرة (A) يتم سحبه برفق لتجنب إصابة الأمعاء، وهي قطع الأربطة تربط خالية من ريتروبيريتونيوم. الكبد (ب) هو تراجع بلطف السماح التصور القصوى من الشجرة الصفراوية في هيلم الكبدي (السهم). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 2 : ربط القناة الصفراوية الجزئي. (أ) النهاية غير حادة من الإبرة الجراحية يستخدم لتطويق خياطة نايلون حول القناة الصفراوية الكبدية اليسرى، أعلاه الالتقاء للقناة الصفراوية المشتركة (التكبير الأصلي x 40) بعناية. (ب) حرف مزدوج ناجحة للقناة الصفراوية الكبدية اليسرى، التي تستنزف عادة فص الكبد الأيسر. الصفراوية المتبقية هي أونليجاتيد (الأصلي التكبير 40 س). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3: إجمالي مظهر الكبد الماوس WT (c57/b6) 14 يوما بعد ببدل- لاحظ ظهور الفص الأيسر الواصلة اشحب في اللون (الأسهم)، بينما تحتفظ الفصوص أونليجاتيد بهم التلون العادي، والظلام، والبنى المحمر. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4 : التغييرات الخاصة بالفص في أنسجة الكبد تمثيلية الفروع من ببدل يوم 14 مقارنة الفص حق أونليجاتيد (R) إلى الواصلة الفص الأيسر (L) في الفئران WT (c57/b6). توضع (A) وثم (H & E) المصبوغة تبين زيادة الصفراوية انتشار (الأسهم) في الفص الواصلة. (ب) سيريوس الأحمر وصمة عار يظهر التليف سد المصاحبة لانتشار القناة الصفراوية في الفص الواصلة. علم الأنسجة ل PiZ الماوس وقد سبق ذكر10. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
على الرغم من أن كبدل هو الأسلوب التجريبية الأكثر شيوعاً لانسداد ركود صفراوي، فإنه يمكن أن يقدم تحديات متعددة في القوارض. اعتماداً على عدد الأيام بعد العمليات الجراحية المطلوبة لتحقيق نقطة نهاية، يمكن تجربة الحيوانات الكبيرة في معدلات الاعتلال والوفيات مع مرور الوقت. ويتفاقم درجة إصابة الأنسجة ونخر الصفراوية عند العمل مع بعض نماذج الماوس المحورة وراثيا لمرض الكبد، التي تبين لحمه الكبد غير طبيعي والدالة عند خط الأساس. بالمقارنة مع كبدل، تقارير ببدل محدودة، ولكن يمكن تطبيق هذا الأسلوب كبديل في تجارب مختارة للحد من النتائج السلبية والخسائر الحيوانية.
وأفيد أيضا الاختلافات في أسلوب ببدل. في أسلوب هاينريش et al.، يوضع إبرة منحنية خارجية المتاخمة للقناة الصفراوية المشتركة، متبوعاً بحرف مزدوج حول القناة الصفراوية المشتركة و إبرة17. ثم تتم إزالة الإبرة قبل إغلاق جدار البطن، مما أدى إلى تدفق الصفراء المحدودة عن طريق تجويف ضيق (أي، عرقلة المجموع الفرعي) من القناة الصفراوية17. وخلال هذا الإجراء، يتم أيضا إزالة المرارة لمنع التهاب المرارة17. استنتج المؤلفون أن هذا الأسلوب أكثر فائدة لدراسة ركود صفراوي الحاد بدلاً من التغييرات المزمنة17. وفي المقابل، الأسلوب ببدل نحن الموصوفة هنا مراقبة شديدة، مع الفصوص الواصلة وأونليجاتيد على حد سواء ("شام") في الحيوان نفسه، وحتى الحيوانات أقل مطلوبة من كل تجربة. يمكن أن يستمر الفئران المعدلة وراثيا حتى مع أمراض الكبد الأساسية شديدة لنقاط النهاية أطول (2-3 أسابيع). ويجب الحرص على فضح تماما وتحديد الشجرة الصفراوية باستخدام تقنيات ميكروديسيكتيون، مع معالجة محدودة لهياكل الأوعية الدموية والصفراوية لمنع الإصابة.
في تجربة مثالية، سوف تحصد الأنسجة من الفصوص الواصلة (يسار) وأونليجاتيد (يمين) في نفس الوقت، حتى يمكن إجراء مقارنات مباشرة وظيفة افرازية الصفراء والناقلين باستخدام التقنيات الجزيئية ونسيجية. على الرغم من أن بيوتشيميستريس المصل الكبد لن تعكس ركود صفراوي حاد، ستبين فلقة الواصلة التغيرات النسجية المرتبطة بركود صفراوي معرقلة10. هذا النموذج مفيد لدراسة الآثار المباشرة ميكرونفيرونمينتال لمكونات الصفراء المحتفظ بها (مثلاً، الأحماض الصفراوية، الدهون، الكوليسترول) داخل الكبد. كدراسة في مستقبل، يمكن اعتبار ببدل للتحقيق في تشوليهيباتيك السحب، حيث بعض الأحماض الصفراوية والمخدرات هي إعادة استيعاب مباشرة من تشولانجيوسيتيس إلى خلايا الكبد18،19. يتم امتصاص الأحماض الصفراوية الذاتية دون كفاءة مترافق بخلايا الكبد سلبية قبل ظهارة الصفراوية للخضوع تشوليهيباتيك السحب كذلك، مما يؤدي إلى هايبرتشوليريسيس والكانلينيزيشن من الصفراء ببيكربونات زيادة إفراز20. يمكن تطبيق تقنية ببدل تيسير اكتشاف المخدرات بتحديد آليات دوائية للمداواة حامض الصفراء رواية قيد التحقيق لأمراض الكبد.
تطبيقات إضافية ببدل يمكن أن تمتد إلى ما وراء الشجرة الصفراوية. قد وصفت بعكس كبدل والآثار المرتبطة به، وهذا أيضا يمكن تطبيقها على ببدل مع المقارنة المباشرة ل الرقابة الداخلية21. وبالمثل، درست طولية في فيفو بيويماجينج التعبير مراسل الفلورسنت في الكبد الماوس بعد كبدل22، مع تأثيرات قوية على تجارب ببدل. وعلاوة على ذلك، تجارب القوارض باستخدام ببدل لديها القدرة على إدماج تتبع النسب أو "صاروخ موجه" تعميم الخلايا، مثل الخلايا الوسيطة المشتقة من نخاع العظم، إلى الموقع لإصابة الكبد، يسمح لهم بأن يتم تعقبها في فيفو مع أكثر الدقيقة23،،من2425.
ومن الواضح أن هناك تطبيقات على نطاق واسع ببدل وحدها كأسلوب التحكم داخليا واستنساخه لدراسة إصابة الكبد وإصلاح، جنبا إلى جنب مع الأيض الصفراوية فيزيولوجيا والمخدرات. لإجراء التجارب التي تهدف إلى تقييم التقدم والتأثيرات المنتظمة لركود صفراوي مزمن، كبدل لا يزال الأسلوب الأكثر تفضيلاً؛ ومع ذلك، سيضيف ببدل لا تزال بيانات تكميلية لدعم مثل هذه النتائج.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب قد لا الكشف.
Acknowledgments
وتسلم الدكتور خان منحة الدعم من المعاهد الوطنية للصحة/NICHD K12HD052892 ومؤسسة ألفا-1، مؤسسة هيلمان، ومركز أبحاث الكبد بيتسبرغ. الدكتور ميكالوبولوس تسلم منحة الدعم من المعاهد الوطنية للصحة/نيدك P01DK096990. ونحن نقدر المساعدة التقنية الممتازة وكرم أور Anne. ونحن ممتنون أيضا للدكتور ديفيد ألف غيلر لتوفير الوصول إلى مختبر زراعة/القوارض "الجراحة الدقيقة".
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Microscope-Leica Wild M650, 6–40× magnification | Leica Microsystems | n/a | |
| Tec 3 isoflurane funnel fill vaporizer | General Anesthetic Services | n/a | |
| Stevens Tenotomy Scissors | Accurate Surgical & Scientific Instruments Corporation | ASSI.9193 | |
| Adson Forceps | Fine science tools | 11006-12 | |
| Mosquito classic delicate hemostatic forceps | Codman | 30-4472 | |
| Micro-retractor | Murdock; Roboz Surgical Instrument | RS-6550 | |
| Nonwoven gauze sponges | Fisherband | 870-PC-DBL | |
| Puritan 6” Small Cotton Swab w/Wooden Handle | Puritan Medical Products Company | 868-WCS | |
| Dumont SS Forceps - Standard Tips/Straight/Inox/13.5cm | Fine science tools | 11203-23 | |
| Dumont SS Forceps - Standard Tips/Angled 45°/Inox/13.5cm | Fine science tools | 11203-25 | |
| Vannas Spring Scissors - 3mm Cutting Edge | Fine science tools | 15000-00 | |
| Microneedle holder | Aesculap Surgical Instruments | FD231R | |
| Micro AROSuture, sterile 10-0 nylon suture, 70 µm, TAP points | AROSurgical Instruments Corporation | T4A10N07 | |
| 4-0 Vicryl | Ethicon | J662H | |
| 5-ml Syringe | BD | 309646 | |
| Falcon tissue culture dish, 60 × 15 mm | Corning | 353002 | |
| Isoflurane, United States Pharmacopeia (USP) liquid for inhalation, 250 ml | Piramal Healthcare | NDC 66794-017-25 | |
| Buprenex injectable (buprenorphine hydrochloride) | Reckitt Benckiser Pharmaceuticals | NDC 12496-0757-1 | |
| Cefazolin for injection , USP | APP Pharmaceuticals | NDC 63323-238-61 | |
| PVP scrub solution (povidone–iodine 7.5%) | Medline | NDC 12496-0757-1 | |
| 70% Ethanol | Decon Labs | 2716 | |
| Phosphate Buffered Saline Without Calcium or Magnesium | LONZA | 17-516F | |
| Sirius Red | Sigma | 365548 | |
| Hematolxylin | Fisher (Richard-Allan Scientific) | 22-050-111 (7211) | |
| Eosin | Anatech (Fisher) | 832 (NC9686037) | |
| Formalin | Fisher | SF100-20 |
References
- Higgins, G. M., Anderson, R. Experimental pathology of the liver - Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal. Arch Pathol. 12, 186-202 (1931).
- Cameron, G. R., Oakley, C. L. Ligation of the common bile duct. The Journal of Pathology and Bacteriology. 35 (5), 769-798 (1932).
- Kountouras, J., Billing, B. H., Scheuer, P. J. Prolonged bile duct obstruction: a new experimental model for cirrhosis in the rat. Br J Exp Pathol. 65 (3), 305-311 (1984).
- Michalopoulos, G. K., Barua, L., Bowen, W. C. Transdifferentiation of rat hepatocytes into biliary cells after bile duct ligation and toxic biliary injury. Hepatology. 41 (3), 535-544 (2005).
- Dipaola, F., et al. Identification of intramural epithelial networks linked to peribiliary glands that express progenitor cell markers and proliferate after injury in mice. Hepatology. 58 (4), 1486-1496 (2013).
- Guyot, C., Combe, C., Desmouliere, A. The common bile duct ligation in rat: A relevant in vivo model to study the role of mechanical stress on cell and matrix behaviour. Histochem Cell Biol. 126 (4), 517-523 (2006).
- Zhang, Y., et al. Effect of bile duct ligation on bile acid composition in mouse serum and liver. Liver Int. 32 (1), 58-69 (2012).
- Tag, C. G., et al. Bile duct ligation in mice: induction of inflammatory liver injury and fibrosis by obstructive cholestasis. J Vis Exp. (96), e52438 (2015).
- Osawa, Y., et al. Systemic mediators induce fibrogenic effects in normal liver after partial bile duct ligation. Liver Int. 26 (9), 1138-1147 (2006).
- Khan, Z., et al. Bile Duct Ligation Induces ATZ Globule Clearance in a Mouse Model of alpha-1 Antitrypsin Deficiency. Gene Expr. 17 (2), 115-127 (2017).
- Birkhead, H. A., Briggs, G. B., Saunders, L. Z. Toxicology of cefazolin in animals. J Infect Dis. 128, 378 (1973).
- Kunst, M. W., Mattie, H., van Furth, R. Antibacterial efficacy of cefazolin and cephradine in neutropenic mice. Infection. 7 (1), 30-34 (1979).
- Traul, K. A., et al. Safety studies of post-surgical buprenorphine therapy for mice. Lab Anim. 49 (2), 100-110 (2015).
- Carlson, J. A., et al. Accumulation of PiZ alpha 1-antitrypsin causes liver damage in transgenic mice. J Clin Invest. 83 (4), 1183-1190 (1989).
- Sifers, R. N., Finegold, M. J., Woo, S. L. Alpha-1-antitrypsin deficiency: accumulation or degradation of mutant variants within the hepatic endoplasmic reticulum. Am J Respir Cell Mol Biol. 1 (5), 341-345 (1989).
- Rudnick, D. A., Shikapwashya, O., Blomenkamp, K., Teckman, J. H. Indomethacin increases liver damage in a murine model of liver injury from alpha-1-antitrypsin deficiency. Hepatology. 44 (4), 976-982 (2006).
- Heinrich, S., et al. Partial bile duct ligation in mice: a novel model of acute cholestasis. Surgery. 149 (3), 445-451 (2011).
- Glaser, S. S., Alpini, G. Activation of the cholehepatic shunt as a potential therapy for primary sclerosing cholangitis. Hepatology. 49 (6), 1795-1797 (2009).
- Gurpinar, E., et al. A novel sulindac derivative inhibits lung adenocarcinoma cell growth through suppression of Akt/mTOR signaling and induction of autophagy. Mol Cancer Ther. 12 (5), 663-674 (2013).
- Alpini, G. G., Francis, H., Marzioni, M., Venter, J., Phinizy, J., LeSage, G. Madame Curie Bioscience Database. , Landes Bioscience. Austin, TX. (2013).
- Kirkland, J. G., et al. Reversible surgical model of biliary inflammation and obstructive jaundice in mice. J Surg Res. 164 (2), 221-227 (2010).
- Delhove, J. M., et al. Longitudinal in vivo bioimaging of hepatocyte transcription factor activity following cholestatic liver injury in mice. Sci Rep. 7, 41874 (2017).
- Li, C., et al. Homing of bone marrow mesenchymal stem cells mediated by sphingosine 1-phosphate contributes to liver fibrosis. J Hepatol. 50 (6), 1174-1183 (2009).
- Xu, J., et al. Factors released from cholestatic rat livers possibly involved in inducing bone marrow hepatic stem cell priming. Stem Cells Dev. 17 (1), 143-155 (2008).
- Sharma, S., et al. Propitious role of bone marrow-derived mononuclear cells in an experimental bile duct ligation model: potential clinical implications in obstructive cholangiopathy. Pediatr Surg Int. 29 (6), 623-632 (2013).
