Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Behavior
Click here for the English version

Behavior

दवा की बहाली की मांग चूहों में वातानुकूलित जगह वरीयता प्रतिमान का उपयोग

Published: June 7, 2018 doi: 10.3791/56983
Automatic Translation
1, 1, 1, 1
1Unidad de Investigación Psicobiología de las Drogodependencias, Departamento de Psicobiología, Facultad de Psicología, Universitat de València

Summary

यह प्रोटोकॉल वातानुकूलित जगह वरीयता (CPP) पतन के एक मॉडल के रूप में वर्णन करता है । इस प्रक्रिया को प्रयोगशाला पशुओं में पतन की माप परमिट, दवा के प्रभाव से जुड़े पर्यावरण cues के रूप में लालसा और बचना नशेड़ी में पतन पर विचार वर्तमान में नशीली दवाओं के दुरुपयोग के उपचार के कार्यक्रमों का ध्यान है ।

Abstract

वर्तमान प्रोटोकॉल दवा की लत में पतन के एक मॉडल के रूप में वातानुकूलित जगह वरीयता (CPP) का वर्णन करता है । इस मॉडल में, जानवरों पहले एक दवा बनती डिब्बे में एक वातानुकूलित जगह वरीयता प्राप्त करने के लिए प्रशिक्षित किया जाता है, और बाद कंडीशनिंग परीक्षण के बाद, वे स्थापित वरीयता बुझाने के लिए कई सत्रों प्रदर्शन । CPP पर्यावरण cues से संबंधित दवाओं के वातानुकूलित पुरस्कृत प्रभावों के मूल्यांकन परमिट । फिर, बुझा CPP मजबूती से दवा की एक भड़काने खुराक की गैर-आकस्मिक प्रशासन द्वारा बहाल जा सकता है, और तनावपूर्ण उत्तेजनाओं के लिए जोखिम से । दोनों तरीकों को यहां समझाया जाएगा । जब पशु व्यवहार प्रतिक्रिया पुनः आरंभ, वातानुकूलित इनाम की बहाली के लिए जगह ले लिया है माना जाता है ।

इस प्रोटोकॉल का मुख्य लाभ कर रहे है कि यह गैर इनवेसिव, सस्ती है, और अच्छी वैधता मानदंडों के साथ सरल है । इसके अलावा, यह इस तरह के तनाव या आहार के रूप में विभिंन पर्यावरणीय जोड़तोड़, के अध्ययन की अनुमति देता है, जो व्यवहार की मांग दवा में चूक मिलाना कर सकते हैं । हालांकि, एक सीमा है कि अगर शोधकर्ता को प्रेरणा और दवा के प्राथमिक प्रभाव को मजबूत का पता लगाने का लक्ष्य है, यह आत्म प्रशासन प्रक्रियाओं के साथ पूरित किया जाना चाहिए, के रूप में वे पशुओं के operant प्रतिक्रियाओं शामिल ।

Introduction

वातानुकूलित जगह वरीयता (CPP) प्रतिमान1,2विविध उत्तेजनाओं से प्रेरित वातानुकूलित इनाम का आकलन करने का एक सरल तरीका प्रदान करता है, और नशे की लत दवाओं के वातानुकूलित पुरस्कृत प्रभाव का अध्ययन करने के लिए मोटे तौर पर इस्तेमाल किया गया है3 . यह Pavlovian कंडीशनिंग पर आधारित है, व्यसनी व्यवहार को बनाए रखने के लिए दवा से जुड़े पर्यावरण cues के प्रेरक मूल्य का मूल्यांकन4। इस मॉडल में, पर्यावरण cues माध्यमिक appetitive गुण प्राप्त (वातानुकूलित पुरस्कृत प्रभाव) जब एक प्राथमिक मजबूत3के साथ जोड़ा । उदाहरण के लिए, एक आरंभिक रूप से तटस्थ स्थान (जैसे CPP पिंजरे में एक डिब्बे का रंग) कुछ कंडीशनिंग सत्रों के दौरान दुर्व्यवहार की दवा के विशिष्ट प्रभावों के साथ जोड़ा जाता है,जबकि एक अन्य डिब्बे एक वाहन के इंजेक्शन के साथ जुड़ा हुआ है । कंडीशनिंग के बाद, अगर पशु पहले दवा के साथ जुड़े डिब्बे में अधिक समय खर्च करता है, यह माना जाता है कि CPP3विकसित की है । वरीयता की स्थापना जब पशु दवा है, जो प्राथमिक मजबूत है से जुड़े पर्यावरण cues को एक सकारात्मक मूल्य देता है हासिल की है । नतीजतन, जानवरों व्यवहार दवा प्रदर्शन करेंगे उन प्रासंगिक cues6के जवाब में प्रतिक्रियाओं की मांग । CPP मॉडल दवा की उपसीमा खुराक के पुरस्कृत गुणों के मूल्यांकन परमिट, एक विशिष्ट स्थिति में जानवरों दिखा रहा है कि क्या (जैसे, पहले सामाजिक हार से सामना करना पड़ा होने) और अधिक संवेदनशील है और खुराक है कि कर रहे है भोले पशुओं में कारगर नहीं7.

CPP मॉडल भी3, जो वर्तमान प्रोटोकॉल का उद्देश्य है पतन का अध्ययन करने के लिए एक पशु मॉडल के रूप में विलुप्त होने/बहाली का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है । वहां तीन विभिंन चरणों: अधिग्रहण, विलुप्त होने, और बहाली (1 चित्रा) हैं । CPP बहाली मॉडल में, जानवरों पहले एक दवा बनती डिब्बे के लिए CPP अधिग्रहण, और फिर वे कई विलुप्त सत्र प्रदर्शन करते हैं । हम पल में जानवर एक वातानुकूलित पुरस्कृत उत्तेजना है कि हटा दिया गया है के लिए संनिकटन के अपने व्यवहार प्रतिक्रियाओं को कम कर देता है के रूप में विलुप्त होने को परिभाषित (जैसे, दवा)8। विलुप्त होने वाले सत्रों के दौरान, पशु दवा के अभाव में डिब्बों का पता लगाने, ताकि अर्जित वरीयता धीरे-2तनु है । एक महत्वपूर्ण मुद्दे पर विचार करने के लिए है कि व्यवहार परिवर्तन है कि विलुप्त होने के दौरान पशु प्रदर्शन (दवा बनती डिब्बे में बिताए समय में प्रगतिशील कमी) नई सीखने की प्रक्रिया के कारण हो सकता है कि पिछले सीखा प्रतिक्रिया के साथ प्रतिस्पर्धा, या विषय3के आंतरिक प्रेरक राज्य में कमी के कारण । अंत में, संदर्भ या दवा cues के माध्यम से जगह वरीयता के पुनर्स्थापन1बहाली के हमारे मॉडल होगा ।

संबंधित दवा का भड़काना इंजेक्शन प्रशासन वरीयता है, जो प्रासंगिक cues को संनिकटन का एक पुनर्स्थापन माना जाता है बहाल कर सकते हैं । दवा भड़काने लालसा प्रेरित और इनाम से संबंधित पर्यावरण cues की तलाश करने के लिए जानवरों को प्रेरित जो दवा के आनंददायक प्रभाव की लगातार स्मृति के कारण होता है ।

CPP बहाली मॉडल के कुछ लाभ है कि प्रक्रिया गैर इनवेसिव है (स्वयं के साथ इसके विपरीत प्रशासन, जो शल्य चिकित्सा की आवश्यकता है), सस्ती, और सरल । इसके अलावा, यह मॉडल एक अच्छा कसौटी वैधता है, क्योंकि यह अच्छी तरह से नकल करता है क्या मनुष्यों में10,11, उत्तेजनाओं कि पतन प्रेरित के साथ बहाली उत्प्रेरण, जैसे पुनः के रूप में दवा के लिए जोखिम12,13 या तनाव14.

वहां इस तरह के विलुप्त होने के रूप में अंय तकनीकों है-नसों में स्वयं प्रशासन की बहाली मॉडल । यहां, पशु स्वयं के लिए एक लीवर प्रेस, दवा है, जो पशु, compulsivity, और प्रेरणा14,15,16के operant प्रतिक्रिया के मूल्यांकन परमिट प्रशासन । स्व-प्रशासन प्रक्रियाओं पर CPP का मुख्य लाभ यह है कि CPP बहाली के लिए प्रोत्साहन के पुनर्क्रियाशीलता को प्रतिबिंबित माना जाता है-संदर्भ उत्तेजनाओं के प्रेरक मूल्य, दवा के साथ युग्मित दृष्टिकोण के reappearing से मिलकर प्रसंग17के लिए व्यवहार । इसके अलावा, इस तरह के तनाव के रूप में गैर दवा उत्तेजनाओं, भी बहाली प्रेरित कर सकते हैं18,19. उदाहरण के लिए, एक आत्म प्रशासन अध्ययन एक पैर सदमे या संयम तनाव20के बाद चूहों में हेरोइन का सेवन की बहाली पर कोई प्रभाव नहीं बताया । लेखकों चर्चा की है कि यह असफल रहा था क्योंकि उन तनाव एक अलग संदर्भ में स्वयं प्रशासन के चैंबर के बाहर परीक्षण किया गया । इसके विपरीत, जब बहाली के CPP मॉडल का उपयोग कर, वहां एक स्पष्ट फिर से स्थापना की थी अफ़ीम-प्रेरित CPP एक ही तनाव का उपयोग करने के बाद, और CPP के लिए है कि एक अलग संदर्भ में लागू किया और अलग समय पर (0 और 15 मिनट तनाव के बाद जोखिम एक्सपोजर)18 .

साहित्य में कई अध्ययनों से दवा और तनाव प्रेरित बहाली के विभिंन तरीकों से पता चला है । एक तरफ, दवा प्रेरित बहाली चूहों और चूहों में सूचित किया गया है अफ़ीम का उपयोग5,21,22,23, कोकीन24,25, एंफ़ैटेमिन26, 27, इथेनॉल28,29, और 3, 4-Methylenedioxymethamphetamine (एमडीएमए)30. दूसरी ओर, तनाव के संपर्क में दवा के दुरुपयोग के लिए जोखिम का निर्धारण कारक हो सकता है । तनाव दवाओं के पुरस्कृत प्रभाव को बढ़ाने के लिए जाना जाता है7,31,३२ और पतन में उनकी भूमिका अच्छी तरह से३३,३४की स्थापना की है । उदाहरण के लिए, एक विशिष्ट reinstates अफ़ीम और कोकीन CPP18,19के साथ सामाजिक बातचीत में हार । इसके अलावा, दोहराया सामाजिक हार को उजागर पशुओं और अधिक कोकीन की सीमा खुराक की वातानुकूलित पुरस्कृत प्रभाव को कमजोर कर रहे हैं, और कोकीन7की बहुत कम खुराक के साथ वरीयता बहाल ।

CPP बहाली मॉडल के आवेदन जानवरों में पतन के लिए भेद्यता का मूल्यांकन करने के लिए एक उपयोगी और संवेदनशील तरीका है, और विभिन्न सूक्ष्म पर्यावरण जोड़तोड़, जो मुख्य ट्रिगर है कि मानव पतन, धमकी के रूप में कर रहे हैं के आकलन परमिट दवा या तनाव प्रेरित बहाली ।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

सभी चूहों को शामिल करने की प्रक्रिया और उनकी देखभाल राष्ट्रीय, क्षेत्रीय और स्थानीय कानूनों और विनियमों, जो के अनुसार कर रहे है के साथ अनुपालन 2010 के निर्देशन में/63/यूरोपीय संसद के यूरोपीय संघ और 22 सितंबर की परिषद के लिए इस्तेमाल किया पशुओं के संरक्षण पर २०१० वैज्ञानिक प्रयोजनों । पशु उपयोग और वालेंसिया विश्वविद्यालय की देखभाल समिति वर्तमान प्रोटोकॉल को मंजूरी दे दी ।

1. सामग्री और वातानुकूलित जगह वरीयता के लिए सेट अप:

  1. 1-2 मिनट प्रत्येक के लिए परीक्षण करने से पहले चूहों 3 दिन संभाल । पूंछ के आधार को लोभी होना चाहिए । यदि संभव हो तो शरीर का समर्थन किया जाना चाहिए । यह दर्द और संकट को कम करने के लिए जब एक जानवर से निपटने और तनाव के रूप में चर, हस्तक्षेप को रोकने के लिए किया जाता है ।
    नोट: 1 पुरुष चूहों की ६० दिन पुराने (युवा वयस्कों) ३५ वजनी-४० जी वर्तमान प्रयोगों में कार्यरत थे. दवा प्रेरित बहाली दोनों लिंगों के चूहों में किया जा सकता है । हालांकि, तनाव प्रेरित बहाली के बारे में, सामाजिक हार प्रतिमान केवल पुरुष कुतर के लिए बनाया गया है, के रूप में महिलाओं कोई निवासी चूहों में एक आक्रामक प्रतिक्रिया पैदा करते हैं ।
  2. जगह कंडीशनिंग के लिए, समान दो समान डिब्बों (३०.७ सेमी लंबी × ३१.५ सेमी चौड़ा × ३४.५ सेमी उच्च) एक छोटे केंद्रीय ग्रे क्षेत्र (१३.८ लांग × ३१.५ सेमी चौड़ा × ३४.५ उच्च) द्वारा अलग से बना बक्से का उपयोग करें ।
    नोट: डिब्बों अलग फर्श textures और दीवार के रंग (काले डिब्बे में एक चिकनी मंजिल और सफेद एक में किसी न किसी मंजिल) है । CPP बॉक्स के प्रत्येक डिब्बे में चार अवरक्त प्रकाश बीम और छह केंद्रीय डिब्बे में हैं । इससे डिब्बों के बीच क्रॉसिंगों की रिकार्डिंग और जानवर की पोजिशन की रिकॉर्डिंग हो जाती है ।
  3. प्रत्येक दिन कमरे की रोशनी (बंद या कम) सेट करें । लाल बत्ती का प्रयोग करें (अनुशंसित), के रूप में जानवरों यह अनुभव नहीं है और यह प्रयोगकर्ता के लिए तनु है (लगभग ४० लक्स 1 मीटर फर्श स्तर से ऊपर मापा) ।
  4. पूर्व के लिए 15 मिनट और बाद कंडीशनिंग परीक्षण (सॉफ्टवेयर के लिए सामग्री की तालिका देखें) रजिस्टर करने के लिए कार्यक्रम सेट (चित्रा 2)
  5. कोकीन के पूरे प्रयोग के लिए आवश्यक समाधान तैयार करें । ०.९% NaCl (खारा) में कोकीन हाइडरोक्लॉराइड को भंग ०.१ मिलीलीटर की मात्रा में/10 ग्राम शरीर के वजन । भंवर मिश्रण और दिन के अंत में 4 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर ।
    नोट: कोकीन सांद्रता अध्ययन के उद्देश्य के आधार पर भिन्न हो सकते हैं । अगर उद्देश्य के लिए कोकीन की खुराक का मूल्यांकन करने के लिए है, एक 1 मिलीग्राम/किलोग्राम एकाग्रता इस्तेमाल किया जा सकता है, जो नियंत्रण पशुओं में अप्रभावी है, के रूप में पिछले अध्ययन में देखा24,३५। यदि एक प्रभावी खुराक उद्देश्य है, एक 6 मिलीग्राम/किलोग्राम एकाग्रता, जो प्रभावी है, लेकिन बहाली24, या एक 25mg/किलोग्राम एकाग्रता है, जो प्रभावी है और वरीयताएं19की बहाली लाती है प्रेरित नहीं चुना जा सकता है ।
  6. अपने अंधेरे चरण के दौरान जानवरों का परीक्षण और दिन भर में प्रत्येक जानवर के लिए एक ही बॉक्स का उपयोग करें ।
  7. जानवरों हर दिन अपने घर पिंजरों में परीक्षण के कमरे में लाने के लिए और सभी परीक्षण से संबंधित शोर करने के लिए एक आदी होना अवधि के रूप में 15 मिनट के लिए उन्हें परेशान छोड़ दें.

2. टेस्ट

  1. अधिग्रहण
    नोट: जगह कंडीशनिंग की प्रक्रिया, प्रारंभिक सहज वरीयता के मामले में निष्पक्ष, तीन चरणों के होते हैं: पूर्व कंडीशनिंग, कंडीशनिंग, और बाद कंडीशनिंग (चित्रा 1) ।
    1. प्री-कंडीशनिंग (प्री-सी) (3 दिन)(चित्रा 2, चित्रा 3, चित्रा 4)
      नोट: यहां, CPP बॉक्स में डिब्बों के तटस्थ मूल्य का मूल्यांकन किया है । प्रत्येक डिब्बे में बिताए समय को मापने और बाद में यह है कि बाद में कंडीशनिंग परीक्षण में एक ही डिब्बे में बिताए के साथ तुलना करें ।
      1. परीक्षण के कमरे में जानवरों को लाने और उंहें 15 मिनट के लिए आदत छोड़ दें ।
      2. जांच करें कि guillotines पिंजरे से निकाले गए हैं ।
      3. कंप्यूटर और प्रोग्राम सेट करें । पशु आईडी दर्ज करें और "परीक्षण" और "प्रारंभ" आदेश (चित्रा 2) दबाएँ.
      4. माउस को मध्य कक्ष (धूसर कम्पार्टमेंट) में रखें और ंयूनतम शोर के साथ परीक्षण कक्ष को छोड़ दें ।
      5. सभी जानवरों को वापस अपने घर पिंजरों में लाने के लिए और जब परीक्षण समाप्त हो गया है डेटा को बचाने के ।
      6. चूहों को 15 मिनट (९०० s) के लिए उपकरण के दोनों डिब्बों का उपयोग करने के लिए 3 लगातार दिनों पर प्रति दिन की अनुमति दें ।
      7. 3 दिन पर, नीचे एक ९०० s अवधि में प्रत्येक डिब्बे में बिताए समय लिखें, और अगले चरण (चित्रा 3) में डिब्बों के काम के लिए इसे बचाने के लिए ।
      8. एक डिब्बे (जैसे, काले) में दवा या वाहन प्राप्त करने के लिए प्रत्येक समूह में आधे जानवरों निरुपित (जैसे, सफेद) (चित्रा 4) अन्य डिब्बेमें अन्य आधा.
        नोट: पशुओं के अंतिम वितरण सुनिश्चित करना चाहिए कि पशुओं के आधे प्रारंभिक पसंदीदा डिब्बे को सौंपा और अंय आधा गैर पसंदीदा डिब्बे के लिए कर रहे हैं । इसके अलावा, पशुओं के आधे एक डिब्बे में दवा प्राप्त (उदाहरण के लिए, काले एक) और दूसरे में आधे (इस मामले में, सफेद एक) ।
      9. दोनों डिब्बों के भीतर समूह में शेष स्कोर के रूप में अच्छी तरह से समूहों के पार (परीक्षण समूह मतभेदों के एक विश्लेषण के साथ विचरण (ANOVA)) । अनुमानित मार्गदर्शन के रूप में, मान के आसपास होना चाहिए ३६०-३७० s Pre-C परीक्षण (चित्रा 4) में । नोट: प्री-सी टेस्ट के दौरान दवा बनती और वाहन में बाँधे गए डिब्बों में बिताए समय के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं पाया जाना चाहिए.
      10. जानवरों है कि किसी भी डिब्बे के लिए एक मजबूत बचने या पसंद प्रदर्शन बाहर निकालें । डिब्बे में ३३% से भी कम समय खर्च के रूप में बचने पर विचार करें, और वरीयता पर विचार जब जानवर है कि डिब्बे में कुल समय के ६७% से अधिक खर्च किए ।
    2. कंडीशनिंग (4 दिन) (चित्रा 5)
      1. जानवरों के वजन और कंडीशनिंग के दौरान कोकीन खुराक के लिए इन वजन का उपयोग करें ।
      2. कोकीन या खारा शरीर के वजन के आधार पर के साथ सीरिंज तैयार करते हैं ।
      3. एक समय intraperitoneally (आईपी) में एक चूहा इंजेक्षन और तुरंत इसे अपने बक्से के सौंपा काले या सफेद डिब्बे में धीरे से जगह है ।
      4. 4 एच के एक अंतराल के बाद, दवा खुराक सुई तुरंत पहले माउस 30 मिनट (चित्रा 5) के लिए दवा बनती डिब्बे तक ही सीमित है.
      5. इस प्रक्रिया को प्रत्येक दिन वैकल्पिक, 1 और 3 दिनों पर कोकीन के साथ शुरुआत है, और 2 दिन और 4 पर खारा ।
      6. यह जांचें कि दोनों ही मामलों में गिलोटिन दरवाजा बंद करके दोनों डिब्बों को अलग किया जाता है, जिससे मध्य क्षेत्र दुर्गम हो जाता है ।
        नोट: इस चरण में, पीसी प्रोग्राम को सेट करने के लिए कोई आवश्यकता नहीं है ।
    3. पद-कंडीशनिंग (post-C) (1 दिन)
      1. परीक्षण के कमरे में जानवरों को लाने और उंहें 15 मिनट के लिए आदत छोड़ दें ।
      2. दो डिब्बों को अलग गिलोटिन दरवाजा निकालें ।
      3. कंप्यूटर और प्रोग्राम सेट करें । पशु आईडी दर्ज करें और "प्रारंभ" आदेश दबाएँ.
      4. ९०० s अवलोकन अवधि के दौरान प्रत्येक डिब्बे में अनुपचारित चूहों द्वारा बिताए गए समय को रिकॉर्ड करें ।
      5. जब परीक्षण समाप्त हो गया है, सभी जानवरों को वापस अपने घर पिंजरों में लाने के लिए और डेटा को बचाने के ।
      6. विचार है कि दवा जगह वरीयता प्रेरित किया है अगर पोस्ट-सी के दौरान दवा युग्मित डिब्बे में बिताया समय पूर्व सी परीक्षण की तुलना में काफी अधिक है । यदि विपरीत होता है, दवा युग्मित डिब्बे के लिए एक घृणा पर विचार करें ।
  2. विलुप्त होने
    1. दवा युग्मित डिब्बे के लिए एक प्राथमिकता विकसित की है कि सभी समूहों/जानवरों में एक साप्ताहिक विलुप्त सत्र आचरण ।
    2. उपकरण (guillotines) के बिना 15 मिनट के लिए (पूर्व और बाद के रूप में एक ही परीक्षण) (चित्रा 1) में पशु प्लेस ।
      नोट: यदि CPP में कार्यरत खुराक उच्च है (25 मिलीग्राम/किग्रा), प्रति सप्ताह 1 विलुप्त सत्र प्रदर्शन । यदि कोई उपसीमा खुराक (1 मिलीग्राम/किग्रा) का उपयोग किया जाता है, तो प्रति सप्ताह 2 विलुप्त सत्र (उदा. सोमवार और गुरुवार) प्रदर्शन करें ।
    3. वरीयता बुझाने पर गौर करें तो जब लुप्त हो चुके टेस्ट से डाटा प्री-सी टेस्ट के संबंध में मतभेद नहीं दिखा, लेकिन वे पोस्ट-सी टेस्ट के संबंध में मतभेद दिखाते हैं.
    4. विलुप्त होने की पुष्टि करने के लिए बाद में परीक्षण 24 घंटे बाद में दोहराएँ ।
  3. CPP की बहाली
    1. भड़काना-प्रेरित बहाली
      1. विलुप्त होने की पुष्टि की गई है के बाद कोकीन 24 एच की एक भड़काने खुराक के प्रभाव का मूल्यांकन करें ।
        नोट: भड़काना खुराक आधा पिछले खुराक है कि पशु कंडीशनिंग के दौरान प्राप्त हुआ है । बहाली परीक्षण पूर्व में एक ही प्रोटोकॉल के रूप में सी और पोस्ट-सी परीक्षणों से गुजरती है, सिवाय इसके कि पशुओं के परीक्षण से पहले एक गैर आकस्मिक जगह 15 मिनट में कोकीन की खुराक प्राप्त करते हैं । बहाली उत्प्रेरण में दवा भड़काना की प्रभावकारिता दोहराया विलुप्त होने के बाद बढ़ाया जा सकता है/बहाली के अनुभवों23, हालांकि खुराक के आदेश३६प्राप्त परिणामों में एक भूमिका निभाने के लिए नहीं लगता है.
      2. जानवरों को परीक्षण कक्ष (गैर-आकस्मिक जगह) (चित्रा 6) से अलग कमरे में लाएं ।
      3. उंहें आधा कोकीन की पिछले खुराक के साथ सुई (जैसे, अगर जानवरों के साथ वातानुकूलित थे 25 मिलीग्राम/किलो कोकीन, एक भड़काने खुराक १२.५ मिलीग्राम/
      4. उंहें वापस लाने के लिए उनके vivarium के लिए 15 मिनट ।
      5. उंहें परीक्षण के कमरे में ले लो और तुरंत उपकरण में पशुओं जगह (गिलोटिन दरवाजे के बिना डिब्बों को अलग) 15 मिनट के लिए (पूर्व के रूप में एक ही है और बाद सी परीक्षण) ।
      6. पिछले विलुप्त होने के सत्र के दौरान दवा युग्मित डिब्बे में बिताए गए समय के बीच सेकंड में अंतर पर विचार करें और दवा द्वारा प्रेरित वरीयता की बहाली की डिग्री के एक उपाय के रूप में बहाली परीक्षण ।
      7. विलुप्त होने-बहाली प्रक्रिया को कम खुराक के साथ हर बार दोहराने जब तक यह अप्रभावी होने की पुष्टि की है ।
        नोट: एक खारा इंजेक्शन नियंत्रण कोकीन भड़काने की क्षमता को नियंत्रित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता (और इंजेक्शन के ही नहीं) बहाली प्रेरित करने के लिए.
    2. तनाव प्रेरित बहाली
      1. एक तनाव प्रेरित बहाली के प्रभाव का मूल्यांकन 24 ज विलुप्त होने के बाद पुष्टि की गई है
        नोट: बहाली परीक्षण के बाद उन के रूप में एक ही कर रहे है (15 मिनट के लिए नि: शुल्क ambulation), सिवाय इसके कि पशुओं का परीक्षण कर रहे है 15 मिन एक agonistic मुठभेड़ में सामाजिक हार के बाद (6 चित्रा)
      2. जानवरों को CPP रूम से अलग कमरे में ले जाएं ।
      3. एक आक्रामक प्रतिद्वंद्वी सेक्स प्लास्टिक पिंजरे में बराबर उम्र और शरीर के वजन के मिलान के साथ प्रयोगात्मक माउस रखें (चित्रा 6).
        नोट: agonistic मुठभेड़ प्रयोगात्मक माउस के लिए एक हार परिणाम के साथ एक तटस्थ पारदर्शी प्लास्टिक पिंजरे में एक 10 मिनट का परीक्षण (23x 13.5 x13cm) के होते हैं । आक्रामक प्रतिद्वंद्वी तैयार करने के लिए, पहले 3 सप्ताह के लिए प्रयोगात्मक चूहों के रूप में उम्र और शरीर के वजन में मैच कि विभिन्न जानवरों को अलग । उंहें प्रशिक्षित करने के लिए लड़ अनुभव प्राप्त करने और उंहें परीक्षण के लिए आक्रामक क्षेत्रीय व्यवहार के उच्च स्तर है । आक्रामक विशिष्टताओं को प्राप्त करने के लिए, चूहों के लिए अलग-थलग होना चाहिए कम से 3 सप्ताह, और फिर आक्रामक और हमले व्यवहार में प्रशिक्षित किया । जानवरों को तटस्थ वातावरण में प्रशिक्षित किया जाता है, उन्हें जोड़े में सामना करना पड़ता है । हम उंहें प्रतिद्वंद्वी 2 या 3 बार काटने और उंहें पिंजरे से बाहर निकलना, हमेशा दो चूहों में से एक से पहले प्रशिक्षण समाप्त प्रस्तुत करने से पता चलता है, ताकि मुठभेड़ का अनुभव आक्रामक व्यवहार पुष्ट । आक्रामकता (खतरा है और आक्रामक विशिष्ट से हमले) पीड़ित के बाद, प्रयोगात्मक चूहों से बचने के मौजूद होना चाहिए/ कसौटी को हराने के एक विशिष्ट मुद्रा को अपनाने है, एक ईमानदार विनंर स्थिति की विशेषता, लंगड़ा forepaws, ऊपर की ओर सिर angled, और कान मुकर (6 चित्रा) । बर्क एट अल., २०१६ के अनुसार, हम मानते है कि सामाजिक मुठभेड़ पहले समाप्त अगर घुसपैठिए एक विनंर लापरवाह आसन प्रदर्शित करता है के लिए > 8 एस या यदि 13 हमले के काटने हुआ । महत्वपूर्ण चोट के जोखिम के बिना जानवरों स्क्रीन करने के लिए एक और विकल्प के लिए एक छेद के साथ एक जाल संलग्नक में जानवर की गति हो सकता है, या तो पशु पारित करने के लिए पर्याप्त नहीं है ।  आक्रामकता प्रत्यक्ष आक्रामक व्यवहार करने के लिए पशुओं के बिना पता लगाया जा सकता है ।  यदि एक जानवर के व्यास और/या मांसपेशियों के प्रत्यक्ष जोखिम में घाव 1cm के साथ एक चोट को बनाए, यह अध्ययन से बाहर रखा गया है और euthanized किया जाना चाहिए ।
      4. agonistic मुठभेड़ के 10 मिनट के बाद, परीक्षण के कमरे में चूहों ले और CPP तंत्र में जानवरों को तुरंत (गिलोटिन डिब्बों को अलग दरवाजे के बिना) 15 मिनट (पूर्व और बाद के रूप में एक ही परीक्षण के रूप में) के लिए जगह है ।

3. सांख्यिकीय विश्लेषण

नोट: आदर्श नमूना आकार समूह प्रति 15 पशुओं की एक ंयूनतम होना चाहिए ।

  1. मतलब एक चर के बीच एक मिश्रित ANOVA के माध्यम से समूह के दवा युग्मित डिब्बे में बिताए समय का विश्लेषण, उपचार, दो स्तरों के साथ (नियंत्रण समूह, प्रयोगात्मक समूह, दो समूहों के उदाहरण चित्रा 7cमें है), और चर के भीतर एक-दिन, 2 स्तरों के साथ (पूर्व सी और पोस्ट-सी) ।
    नोट: नियंत्रण समूह में, पशु दवा प्राप्त करते हैं, लेकिन कोई पर्यावरणीय जोड़तोड़ है । दूसरी ओर, प्रयोगात्मक समूह जानवरों में विभिंन पर्यावरणीय परिस्थितियों के संपर्क में हैं । इसके पश्चात् सी डे पर दवा बाँधने वाले डिब्बे में बिताए समय की तुलना प्री-सी टेस्ट से करें, ताकि दवा के प्रति संवेदनशीलता में कोई महत्वपूर्ण अंतर न दिखे.
  2. इसके अलावा, Bonferroni पोस्ट-हॉक विश्लेषण के लिए महत्वपूर्ण स्कोर की जांच करने के लिए या तो प्रदर्शन ।
  3. समूह में विलुप्त होने और बहाली मूल्यों से संबंधित डेटा का विश्लेषण करें कि छात्र ´ एस टी के माध्यम से वरीयता विकसित-परीक्षण प्रयोग के दौरान विलुप्त होने बहाली प्रक्रिया के साथ जारी रखने के लिए, लेकिन अंतिम क्षण में, उंहें विश्लेषण प्रत्येक समूह के आधार पर स्तरों की संख्या के साथ एक चर के भीतर (दिनों) के साथ एक ANOVA के साथ ।
    नोट: जब तुलना की संख्या में वृद्धि हुई है, उन है कि मौका द्वारा महत्वपूर्ण होगा की संख्या भी बढ़ गई । जैसे, झूठी सकारात्मक हो रही से बचने के लिए (प्रकार 1 त्रुटियां) हम ' सही ' पी-मूल्य जिससे कई टी के लिए परीक्षण Bonferroni सुधार के साथ और अधिक रूढ़िवादी बना । हालांकि, बहाली परीक्षण के लिए, तुलना बहाली परीक्षण और पिछले विलुप्त परीक्षण के बीच किया जाना चाहिए । इसलिए सुधार की कोई जरूरत नहीं है ।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

सबसे पहले, भड़काना और तनाव से प्रेरित बहाली से प्रतिनिधि परिणाम चित्रा 7 में दिखाया वयस्क OF1 पुरुष चूहों का उपयोग कर रहे हैं ।

चित्रा 7ए-बी में डेटा प्री और पोस्ट-सी परीक्षण में दवा युग्मित डिब्बे (ओं) में बिताए समय का प्रतिनिधित्व एक के भीतर विषयों चर दिनों के साथ ANOVA एक दोहराया उपायों के साथ विश्लेषण किया गया (पूर्व की तुलना सी और पोस्ट-सी). परिणाम चर दिनों का एक महत्वपूर्ण प्रभाव दिखाया [एफ (1, 34) = ५१.१७९; पी < 0.001], जैसा कि सभी जानवरों ने प्री-सी की तुलना में पोस्ट-सी दिन में वरीयता विकसित की । सभी जानवरों के साथ वातानुकूलित थे 25 मिलीग्राम/किलो कोकीन और जब विलुप्त होने प्राप्त किया गया था, एक समूह १२.५ मिलीग्राम/किलो कोकीन की एक भड़काने खुराक प्राप्त करने के लिए बहाली (चित्रा 7a) परीक्षण और अंय एक सामाजिक संपर्क के अधीन किया गया था जिसमें प्रयोगात्मक पशु एक आक्रामक प्रतिद्वंद्वी (चित्रा 7b) ने हराया था । दो घटनाओं के बाद 15 मिनट, जानवरों उनके इसी CPP बॉक्स में परीक्षण किया गया ।

कण्ठ प्रेरित बहाली (चित्रा 7a) बाद में कम भड़काना खुराक (आधा पिछले एक) जब तक एक भड़काने खुराक अप्रभावी होने की पुष्टि की है के अधीन किया गया था । खुराक थे: १२.५, ६.२५, ३.१२५, और १.५६ मिलीग्राम/ छात्र ´ एस टी टेस्ट विलुप्त होने सत्र (t सांख्यिकीय (t) = २०.५८९, स्वतंत्रता की डिग्री (d.f.) = 17 के संबंध में १२.५ मिलीग्राम/kg कोकीन बहाली पर एक महत्वपूर्ण प्रभाव का पता चला; p < 0.001) और अनुवर्ती खुराक (६.२५ mg/किग्रा: t = १८.३५६; ३.१२५ मिलीग्राम/kg: t = १४.२६०; १.५६ मिलीग्राम/kg: t = १६.९३४ d.f. = 17; p < 0.001) । ०.७८ मिलीग्राम/kg के साथ भड़काना बहाली प्रेरित नहीं किया ।

तनाव से प्रेरित बहाली के बारे में ( चित्रा 7bदेखें), एक आक्रामक जानवर को उजागर किया जा रहा है और परीक्षण से पहले 15 मिनट हार को पहले बुझ वरीयता reinstating (t = २६.८१०; d.f. = 15; p < 0.001)19 .

इस तरह के CPP प्रक्रिया से पहले सामाजिक हार पीड़ित के रूप में अंय पर्यावरणीय जोड़तोड़, कोकीन की उपसीमा खुराक के पुरस्कृत प्रभाव को संशोधित (चित्रा 7c) । चर "तनाव" और चर "दिनों" के बीच के साथ एक मिश्रित ANOVA प्रदर्शन किया गया था, और वहां बातचीत तनाव x दिनों का एक महत्वपूर्ण प्रभाव था [F (1, 29) = ४.१४४; p < 0.05] । केवल सामाजिक रूप से पराजित पशुओं को दवा के लिए वरीयता का प्रदर्शन किया, कोकीन की एक सीमा है, जो मानक जानवरों में अप्रभावी हो दिखाया गया है के साथ डिब्बा जोड़ा7। इसके अलावा, वरीयता के विलुप्त होने के बाद, सामाजिक रूप से हार जानवरों केवल ०.५ मिलीग्राम/किलो कोकीन भड़काना (टी = २५.४८४ d.f. = 17; पी < 0.001) के साथ उनकी प्राथमिकता बहाल ।

दूसरे, एक नकारात्मक परिणाम के रूप में, हम देख सकते है कि कैसे बहाली एक गैर आक्रामक विशिष्ट (चित्रा 8a) के साथ एक सकारात्मक सामाजिक संपर्क द्वारा रोका जा सकता है । इसलिए, यह मूल्यांकन करने के लिए महत्वपूर्ण है कि जानवरों को हराने या नहीं एक सामाजिक मुठभेड़३७के बाद कर रहे हैं ।

नकारात्मक परिणाम है कि बहाली को रोकने का एक और उदाहरण के एक उच्च वसा स्वादिष्ट आहार का सेवन के रूप में, पोषण जोड़तोड़ हो सकता है । सबसे पहले, ANOVA विश्लेषण में चर दिनों का प्रभाव पता चला [F (1, 26) = २१.५२७; p <. 0.001], क्योंकि दोनों समूहों ने दवा युग्मित डिब्बे (p < 0.01) (figure 8b) के लिए प्राथमिकता विकसित की । विलुप्त होने के बाद, हमारे परिणामों से पता चलता है कि जानवरों के बाद उच्च वसा वाले आहार के लिए स्विच के बाद सी परीक्षण दवा कण्ठ प्रेरित बहाली के लिए उनकी संवेदनशीलता में कमी आई, के रूप में वे वरीयता बहाल नहीं किया 6.25 मिलीग्राम/kg कोकीन खुराक३८।

Figure 1
चित्रा 1: वातानुकूलित जगह वरीयता की प्रयोगात्मक प्रक्रिया । यह तीन चरणों के होते हैं: पूर्व कंडीशनिंग, कंडीशनिंग, और बाद कंडीशनिंग । 4 कंडीशनिंग दिन है जिसमें प्रक्रिया प्रत्येक दिन, 1 और 3 दिनों पर कोकीन के साथ और 2 और 4 दिनों पर वाहन के साथ शुरुआत में वैकल्पिक है । फिर, विलुप्त होने और बहाली सत्र किया जाता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 2
चित्र 2: प्री-सी और पोस्ट-सी परीक्षणों के लिए सॉफ़्टवेयर उपयोग सत्र जहां प्रत्येक डिब्बे में समय बिताया और प्रविष्टियों की संख्या दर्ज की गई है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 3
चित्रा 3: प्री-सी और पोस्ट-सी टेस्ट के बाद डाटा । यहां, परीक्षण के दौरान प्राप्त डेटा रिकॉर्ड । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 4
चित्रा 4: पशुओं का निष्पक्ष असाइनमेंट कंडीशनिंग के अगले चरण के लिए डिब्बों के लिए । सफेद और काले डिब्बों में अंतिम प्री-सी टेस्ट के दिन का डाटा लें । आधे जानवरों को एक डिब्बे में दवा या वाहन (काला या सफेद), और दूसरे डिब्बे में दूसरे आधे प्राप्त करने के लिए सौंपा जाता है । मजबूत बचने या पसंद दिखाने वाले जानवरों को बाहर निकालें । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 5
चित्रा 5: वाहन और कोकीन युग्मित सत्र के अंतिम असाइनमेंट । यह आंकड़ा pairings के आदेश पर अदल दिखाता है । दिन 1 और 3 पर, एक जानवर (जैसे, १.१) पहले कोकीन-युग्मित डिब्बे (सफेद एक) के संपर्क में है और चार घंटे के बाद, वाहन के डिब्बे (काले एक) के संपर्क में है । 2 और 4 दिनों पर, pairings के आदेश औंधा है, और पशु पहले वाहन के सामने आ रहा है (काला) डिब्बे और, चार घंटे के बाद, कोकीन-युग्मित (सफेद) डिब्बे के लिए । इस प्रक्रिया के रूप में निष्पक्ष और counterbalanced है, एक साथ कंडीशनिंग सत्र दो एक ही बॉक्स के दोनों डिब्बों (जैसे, जानवरों १.१ और २.४, ३.१ और १.३) का उपयोग कर जानवरों के साथ आयोजित किया जा सकता है, जो हमें समय को कम करने के लिए समर्पित करने की अनुमति देता है प्रयोगात्मक प्रक्रिया । ध्यान दें कि जानवरों की इन जोड़ियों कंडीशनिंग चरण के माध्यम से युग्मन के उलट आदेश का पालन करें । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 6
चित्रा 6: बहाली के दो मॉडल । (a) भड़काने वाली बहाली और (ख) तनाव प्रेरित बहाली । (क) पशु एक गैर आकस्मिक कमरे में एक दवा इंजेक्शन प्राप्त है और vivarium के लिए लाया जाता है; 15 मिनट बाद वे CPP बॉक्स में परीक्षण कर रहे हैं । (ख) पशु एक गैर में एक agonistic मुठभेड़ में हार रहे है 10 मिनट के लिए आकस्मिक कमरे और, बाद में, वे CPP बॉक्स में परीक्षण कर रहे हैं । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 7
चित्रा 7: प्रतिनिधि सकारात्मक परिणाम । भड़काना (ए) और तनाव प्रेरित (ख) बहाली के बाद 25 मिलीग्राम/किलो कोकीन CPP । (ग) कोकीन की उपसीमा खुराक के पुरस्कृत प्रभाव पर सामाजिक हार के प्रभाव (1 मिलीग्राम/ सलाखों के पूर्व के दौरान दवा युग्मित डिब्बे में बिताए सेकंड में मतलब (± SEM) समय का प्रतिनिधित्व कंडीशनिंग (सफेद), बाद कंडीशनिंग (काला), पिछले विलुप्त सत्र (प्रकाश ग्रे), और बहाली (डार्क ग्रे) । बहाली परीक्षण आधा पिछले खुराक प्राप्त की एक भड़काने के बाद 15 मिनट का मूल्यांकन किया गया था । * p < 0.05; * * p < 0.01; p < 0.001 महत्वपूर्ण अंतर बनाम पूर्व-c (ANOVA with a-विषय चर दिन (पूर्व-c और पोस्ट-c की तुलना) या पिछले विलुप्त सत्र (Student ' s t test) । इन आंकड़ों को 7,19से संशोधित किया गया है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 8
चित्र 8: प्रतिनिधि नकारात्मक परिणाम । कोकीन के पुरस्कृत प्रभाव पर सुरक्षात्मक पर्यावरण जोड़तोड़ के प्रभाव । (क) बहाली परीक्षण से पहले एक सकारात्मक सामाजिक संपर्क के प्रभाव । (ख) पूरे विलुप्त होने की अवधि और बहाली के दौरान एक उच्च वसा वाले आहार का प्रभाव । नियंत्रण समूह एक मानक आहार (वसा से किलो कैलोरी की 13% से तंग आ गया था, ६७% कैलोरी कार्बोहाइड्रेट से, और 20% किलो कैलोरी प्रोटीन से; २.९ कुल किलो कैलोरी/जी) और उच्च वसा वाले आहार समूह (४५% कैलोरी वसा से, ३६% कैलोरी कार्बोहाइड्रेट से, और 19% किलो कैलोरी प्रोटीन से; ४.६ कुल किलो कैलोरी/ सलाखों के पूर्व के दौरान दवा युग्मित डिब्बे में बिताए सेकंड में मतलब (± SEM) समय का प्रतिनिधित्व कंडीशनिंग (सफेद), बाद कंडीशनिंग (काला), पिछले विलुप्त सत्र (प्रकाश ग्रे), और बहाली (डार्क ग्रे) । बहाली परीक्षण आधा पूर्व प्राप्त की खुराक की एक भड़काने के बाद 15 मिनट का मूल्यांकन किया गया था । * p < 0.05; * * p < 0.01; महत्वपूर्ण अंतर बनाम पूर्व सी (ANOVA के भीतर एक विषय चर दिनों के साथ (पूर्व की तुलना सी और पोस्ट सी) या पिछले विलुप्त सत्र (छात्र टी परीक्षण) । इन आंकड़ों को ३७,३८से संशोधित किया गया है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

मादक पदार्थों की लत अनुसंधान के प्रमुख बिंदु उपचार है कि तरस कम है और, नतीजतन, पतन को कम करने के लिए जोखिम के विकास है । CPP प्रतिमान की बहाली मॉडल के लिए धंयवाद, यह विभिंन प्रक्रियात्मक और पर्यावरणीय कारकों है कि पतन, जो भविष्य के अनुसंधान की एक प्राथमिकता है मिलाना के प्रभाव का अध्ययन संभव है । वहां कुछ महत्वपूर्ण बिंदुओं पर विचार कर रहे हैं, के रूप में CPP प्रतिमान एक परीक्षण है कि अत्यधिक पर्यावरणीय कारकों के प्रति संवेदनशील है ।

संशोधन और समस्या निवारण: बहाली मॉडल के CPP संस्करण को ब्याज की दवा के आधार पर संशोधित किया जाना चाहिए । ऐसी अवधि और कंडीशनिंग सत्रों की संख्या के रूप में वातानुकूलित वरीयता की भयावहता को प्रभावित कर सकते है कि विभिंन कारकों हैं । संघों की संख्या आमतौर पर एक से छह पर्वतमाला, चार के साथ सबसे आम जा रहा है । कंडीशनिंग परीक्षणों की अवधि औषध और उसके फार्माकोकाइनेटिक्स की विशेषताओं के अनुसार स्थापित की जाती है.

CPP अध्ययन आमतौर पर कई परीक्षणों शामिल है, इसलिए यह आवश्यक समय को कम करने के लिए प्रोटोकॉल का उपयोग करने के लिए उपयोगी है. एक तरीका यह हासिल करने के लिए परीक्षणों की संख्या को कम करने और एक अंय तरीका है प्रति दिन कंडीशनिंग के दो सत्रों के प्रदर्शन है, के रूप में वर्तमान प्रोटोकॉल में दिखाया गया है । इस मामले में, यह सुनिश्चित करना आवश्यक है कि पिछले सत्र से दवा का प्रभाव इस दूसरे सत्र३९पर न खींचें, यही कारण है कि कोकीन-वाहन सत्र के बीच चार घंटे का अंतराल चुना गया. उदाहरण के लिए, कंडीशनिंग चरण के दौरान कोकीन के मामले में बाँधना के समय 30 मिनट की एक बाँधना अवधि के साथ 4 दिनों के लिए हर 24 एच होना चाहिए. इसके विपरीत, इथेनॉल की कंडीशनिंग प्रक्रिया का समय पाठ्यक्रम हर ४८ ज, 8 दिनों की कुल, प्रति दिन 1 कंडीशनिंग सत्र, और बारी वाहन और ेतोः, अंत में 4 ेतोः pairings के कुल होने चाहिए । इथेनॉल बाँधना एक छोटी अवधि के रूप में होना चाहिए, 5 मिनट, के रूप में अधिक समय aversive राज्यों का उत्पादन कर सकता. 1-2 g/किग्रा और उपसीमा खुराक से प्रभावी खुराक रेंज ०.७५ g/ भड़काना बहाल आधा पिछले खुराक प्राप्त किया जाना चाहिए, और उपकरण एक ही होना चाहिए ।

हालांकि, 1 या 2 सत्रों के एक दिन के दुरुपयोग के कुछ विशेष दवाओं में परिणाम को प्रभावित कर सकते है का चयन । उदाहरण के लिए, दो सत्र प्रोटोकॉल के साथ एमडीएमए-प्रेरित CPL के मामले में, के बाद कंडीशनिंग में वातानुकूलित वरीयता नहीं मनाया जाता है, जबकि यह एक एकल संघ प्रत्येक दिन30प्रदर्शन करके प्राप्त किया जा सकता है, इसलिए एमडीएमए भी प्रशासित किया जाना चाहिए हर ४८ एच, लेकिन कंडीशनिंग सत्र की अवधि 30 मिनट होनी चाहिए ।

वहां दो विलुप्त होने के मुख्य तरीके है कि CPP की स्थापना के बाद चलाया जा सकता है, या तो वाहन के दैनिक इंजेक्शन दोनों पहले दवा और वाहन वातानुकूलित डिब्बों४१,४२में पशु को परिष्कृत, ४३, या CPP परीक्षण दोहरा कर, पशुओं को वरीयता गिलोटिन बिना तीन डिब्बों का पता लगाने जब तक पसंद नहीं रह गयाहै 7,18,30,३८मनाया । वर्तमान प्रोटोकॉल में, हम बाद कार्यरत है, क्योंकि यह किसी भी औषधीय या व्यवहार को कंडीशनिंग से संबंधित हेरफेर के बिना सहज विलुप्त होने का एक प्रकार है (और अधिक है कि मानव नशेड़ी में होने वाली), लेकिन दोनों तरीकों और स्वीकार्य है वैध, साहित्य के रूप में वर्षों के लिए दिखाया गया है ।

तकनीक की सीमाएं: CPP प्रतिमान और बहाली मॉडल की सबसे महत्वपूर्ण सीमा है कि वे किसी भी पर्यावरण परिवर्तन के लिए बहुत संवेदनशील हैं । इसलिए, कमरे और vivarium स्थितियों स्थिर और निरंतर पूरी प्रक्रिया के दौरान रहना चाहिए । विशेष देखभाल इस तरह के विपरीत लिंग के साथियों के साथ एक ही कमरे में रहने वाले पहियों की तरह कलाकृतियों के साथ पिंजरों है कि एक विशिष्ट और निरंतर शोर, या प्रकाश की स्थिति बनाने के रूप में पहलुओं को लिया जाना चाहिए । इन चर को नियंत्रित करने के अलावा, शोधकर्ता की भूमिका भी महत्वपूर्ण है, के रूप में वे पशुओं के तनाव के स्तर में वृद्धि पैदा कर सकते है और परिणामों के साथ हस्तक्षेप ।

मौजूदा तरीकों के संबंध में महत्व: अंय तरीकों के बारे में, बहाली मॉडल के CPP संस्करण में, शोधकर्ता एक है जो पशु के लिए दवा प्रशासन, स्वयं के साथ इसके विपरीत में-एडमिनिस्ट्रेशन मानदंड है कि पशु ´ एस प्रेरणा का मूल्यांकन करने के लिए दवा ले । यह महत्वपूर्ण है कि हम इस खाते में ले । इसका मतलब यह है कि हम एक operant प्रतिक्रिया के माध्यम से प्रेरणा का मूल्यांकन नहीं कर रहे है और न ही प्राथमिक दवा के प्रभाव को मजबूत । जैसा कि हम उल्लेख किया है, CPP महत्वपूर्ण भूमिका का आकलन करने के लिए एक उपयोगी मॉडल है कि पर्यावरण cues पदार्थ दुरुपयोग विकारों, जो वास्तव में मुख्य कारक है कि मानव में पतन मिलाना में चूक पर खेलते हैं ।

भविष्य अनुप्रयोगों: CPP बहाली मॉडल के भविष्य अनुप्रयोगों के तथाकथित गर्मी लालसा है, जो दवाओं के संयम के बाद क्यू जेट में एक प्रगतिशील वृद्धि के होते हैं, मनुष्यों में तरस नकल उतार के लिए उंमुख होना चाहिए । आजकल, थोड़ा CPP प्रतिमान में इस बारे में जाना जाता है । कुछ साल पहले, केवल एक अध्ययन का सुझाव दिया है कि CPP भी इस मशीन अवधि४४उपाय सकता है । हाल ही में, यह आकलन किया गया था या नहीं, पर्यावरण cues CPP में अफ़ीम के लिए युग्मित वापसी अवधि४५पर व्यवहार प्रतिक्रिया बढ़ सकता है । इस अध्ययन में पाया गया कि CPP डिब्बों के लिए प्रविष्टियों की संख्या समय के साथ बढ़ रहे थे, लालसा की गर्मी को परिलक्षित करती है और सुझाव है कि इनाम यादें और नशीली दवाओं लालसा CPP प्रतिमान में प्रतिष्ठित किया जा सकता है ।

महत्वपूर्ण चरण: प्रोटोकॉल में कई महत्वपूर्ण चरण हैं । आदेश में पुष्टि करने के लिए कि जानवरों उनकी पसंद बहाल, विलुप्त होने डेटा वरीयता के एक असली विलुप्त होने को प्रतिबिंबित करना चाहिए, बहाली परीक्षण से पहले की पुष्टि की जा रही है । लुप्त हो रही परीक्षा से डाटा प्री-सी टेस्ट के संबंध में मतभेद नहीं दिखाना चाहिए लेकिन पद-सी परीक्षा के संबंध में.

सामाजिक तनाव प्रेरित बहाली संस्करण के बारे में, हम पशु वास्तव में हराया गया है कि, हार में खत्म नहीं करता है कि एक सकारात्मक सामाजिक मुठभेड़ के बाद से इस जगह की बहाली अवरुद्ध सुरक्षात्मक प्रभाव से पता चलता है कि पुष्टि की जानी चाहिए कोकीन की वरीयता । यदि प्रायोगिक पशुओं को परास्त नहीं किया गया तो उन्हें अध्ययन से बाहर कर दिया जाएगा । हम रिकॉर्डिंग और agonistic मुठभेड़ का मूल्यांकन, आक्रामक व्यवहार या प्रस्तुत व्यवहार की विलंबता मापने, हमलों की संख्या, और समय उन व्यवहार में से प्रत्येक में खर्च की सिफारिश । हम मानते हैं कि प्रयोगात्मक पशु जब यह 2 हमलों की एक न्यूनतम प्राप्त करता है हार (काटने) और प्रस्तुत करने के लक्षण से पता चलता है (के रूप में चित्रा 6में सचित्र). सभी मामलों में, मुठभेड़ 10 मिनट तक रहता है ।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

Generalitat Valenciana, PROMETEOII/2014/063; स्वास्थ्य मंत्रालय, सामाजिक सेवा और समानता । औषधों पर राष्ट्रीय योजना के लिए सरकार का शिष्टमंडल, औषध निर्भरता पर अनुसंधान परियोजनाएं, 2014I007; अर्थव्यवस्था और प्रतिस्पर्धात्मकता मंत्रालय (MINECO), स्वास्थ्य संस्थान कार्लोस III, नशे की लत विकारों के नेटवर्क (आरटीए) RD12/0028/0005 और RD16/0017/0007 और यूरोपीय संघ, FEDER फंड "ऊना मनेरा de hacer यूरोपा", और PSI2014-५१८४७-आर ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
MONPRE 2Z software CIBERTEC S.A., Spain N/A
Identical Plexiglas boxes with two equal sized compartments separated by a grey central area. CIBERTEC S.A., Spain N/A The compartments have different colored walls (black vs white) and distinct floor textures (fine grid in the black compartment and wide grid in the white one). All boxes are equipped with four infrared light beams in each compartment of the box and six in the central area which allow the recording of the position of the animal and its crossings from one compartment to the other.
Cocaine hydrochloride Laboratorios Alcaliber S.A., Madrid, Spain N/A
Animals: mice of the OF1 outbred strain Charles River, Barcelona Spain N/A Male mice who arrive to the laboratory on PND 42 and on PND 60 perform the CPP test. These animals are specially indicated for social defeat and aggression models.
Standard Diet- Teklad Global Diet 2014 Supplied by Harlan Laboratories Models, S. L. (Barcelona, Spain) 13 kcal % fat, 67 kcal % carbohydrates and 20% kcal protein; 2.9 kcal/g
High fat diet TD.06415 45 kcal % fat, 36 kcal % carbohydrates and 19% kcal protein; 4.6 kcal/g

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bardo, M., Bevins, R. Conditioned place preference: what does it add to our preclinical understanding of drug reward? Psychopharmacology. 153, 31 (2000).
  2. Tzschentke, T. M. Review on CPP: Measuring reward with the conditioned place preference (CPP) paradigm: update of the last decade. Addiction biology. 12 (3-4), 227-462 (2007).
  3. Aguilar, M. A., Rodríguez-Arias, M., Miñarro, J. Neurobiological mechanisms of the reinstatement of drug-conditioned place preference. Brain research reviews. 59 (2), 253-277 (2009).
  4. García-Pardo, M. P., Roger-Sánchez, C., De la Rubia Ortí, J. E., Aguilar, M. A. Animal models of drug addiction. Adicciones. 12 (0), 823 (2017).
  5. Manzanedo, C., Aguilar, M. A., Rodrı́guez-Arias, M., Miñarro, J. Effects of dopamine antagonists with different receptor blockade profiles on morphine-induced place preference in male mice. Behavioural brain research. 121 (1), 189-197 (2001).
  6. Robbins, T. W. The acquisition of responding with conditioned reinforcement: effects of pipradrol, methylphenidate, d-amphetamine, and nomifensine. Psychopharmacology. 58 (1), 79-87 (1978).
  7. Montagud-Romero, S., Nuñez, C., Blanco-Gandia, M. C., Martínez-Laorden, E., Aguilar, M. A., Navarro-Zaragoza, J., et al. Repeated social defeat and the rewarding effects of cocaine in adult and adolescent mice: dopamine transcription factors, proBDNF signaling pathways, and the TrkB receptor in the mesolimbic system. Psychopharmacology. , (2017).
  8. Pavlov, I. P. Conditioned Reflexes. , Oxford University Press. Oxford. (1927).
  9. Yahyavi-Firouz-Abadi, N., See, R. E. Anti-relapse medications: preclinical models for drug addiction treatment. Pharmacology & therapeutics. 124 (2), 235-247 (2009).
  10. Epstein, D. H., Preston, K. L., Stewart, J., Shaham, Y. Toward a model of drug relapse: an assessment of the validity of the reinstatement procedure. Psychopharmacology. 189 (1), 1-16 (2006).
  11. Geyer, M. A., Markou, A. Animal models of psychiatric disorders. Psychopharmacology: the Fourth Generation of Progress. Bloom, F. E., Kupfer, D. J. , Raven. New York. 787-798 (1995).
  12. De Wit, H. Priming effects with drugs and other reinforcers. Experimental and Clinical Psychopharmacology. 4 (1), 5 (1996).
  13. Wang, B., Luo, F., Zhang, W. T., Han, J. S. Stress or drug priming induces reinstatement of extinguished conditioned place preference. Neuroreport. 11 (12), 2781-2784 (2000).
  14. Shalev, U., Erb, S., Shaham, Y. Role of CRF and other neuropeptides in stress-induced reinstatement of drug seeking. Brain research. 1314, 15-28 (2010).
  15. Bossert, J. M., Marchant, N. J., Calu, D. J., Shaham, Y. The reinstatement model of drug relapse: recent neurobiological findings, emerging research topics, and translational research. Psychopharmacology. 229 (3), 453 (2013).
  16. Weiss, F. Neurobiology of craving, conditioned reward and relapse. Current opinion in pharmacology. 5 (1), 9-19 (2005).
  17. Mueller, D., Stewart, J. Cocaine-induced conditioned place preference: reinstatement by priming injections of cocaine after extinction. Behavioural brain research. 115 (1), 39-47 (2000).
  18. Ribeiro Do Couto, B., Aguilar, M. A., Manzanedo, C., Rodriguez-Arias, M., Armario, A., Miñarro, J. Social stress is as effective as physical stress in reinstating morphine-induced place preference in mice. Psychopharmacology. 185 (4), 459-470 (2006).
  19. Titomanlio, F., Manzanedo, C., Rodríguez-Arias, M., Mattioli, L., Perfumi, M., Miñarro, J., Aguilar, M. A. Rhodiola rosea impairs acquisition and expression of conditioned place preference induced by cocaine. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. , (2013).
  20. Shalev, U., Highfield, D., Yap, J., Shaham, Y. Stress and relapse to drug seeking in rats: studies on the generality of the effect. Psychopharmacology. 150 (3), 337-346 (2000).
  21. Lu, L., Ceng, X., Huang, M. Corticotropin-releasing factor receptor type 1 mediates stress-induced relapse to opiate dependence in rats. Neuroreport. 11 (11), 2373-2378 (2000).
  22. Ribeiro Do Couto, B., Aguilar, M. A., Manzanedo, C., Rodriguez-Arias, M., Miñarro, J. Reinstatement of morphine-induced conditioned place preference in mice by priming injections. Neural Plast. 10, 279-290 (2003).
  23. Do Couto, B. R., Aguilar, M. A., Rodriguez-Arias, M., Miñarro, J. Long-lasting rewarding effects of morphine induced by drug primings. Brain research. 1050 (1), 53-63 (2005).
  24. Maldonado, C., Rodriguez-Arias, M., Castillo, A., Aguilar, M. A., Miñarro, J. Gamma-hydroxybutyric acid affects the acquisition and reinstatement of cocaine-induced conditioned place preference in mice. Behav. Pharmacol. 17, 119-131 (2006).
  25. Maldonado, C., Rodriguez-Arias, M., Castillo, A., Aguilar, M. A., Miñarro, J. Effect of memantine and CNQX in the acquisition, expression and reinstatement of cocaine-induced conditioned place preference. Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 31, 932-939 (2007).
  26. Cruz, F. C., Marin, M. T., Planeta, C. S. The reinstatement of amphetamine-induced place preference is long-lasting and related to decreased expression of AMPA receptors in the nucleus accumbens. Neuroscience. 151, 313-319 (2008).
  27. Li, S. M., Ren, Y. H., Zheng, J. W. Effect of 7-nitroindazole on drug-priming reinstatement of D-methamphetamine-induced conditioned place preference. Eur. J. Pharmacol. 443, 205-206 (2002).
  28. Font, L., Miquel, M., Aragon, C. M. Involvement of brain catalase activity in the acquisition of ethanol-induced conditioned place preference. Physiol. Behav. 93, 733-741 (2008).
  29. Roger-Sánchez, C., Aguilar, M. A., Rodríguez-Arias, M., Aragon, C. M., Miñarro, J. Age-and sex-related differences in the acquisition and reinstatement of ethanol CPP in mice. Neurotoxicology and teratology. 34 (1), 108-115 (2012).
  30. Daza-Losada, M., Do Couto, B. R., Manzanedo, C., Aguilar, M. A., Rodríguez-Arias, M., Miñarro, J. Rewarding effects and reinstatement of MDMA-induced CPP in adolescent mice. Neuropsychopharmacology. 32 (8), 1750-1759 (2007).
  31. Will, M. J., Watkins, L. R., Maier, S. F. Uncontrollable stress potentiates morphine's rewarding properties. Pharmacol. Biochem. Behav. 60, 655-664 (1998).
  32. Der-Avakian, A., Will, M. J., Bland, S. T., Deak, T., Nguyen, D. T., Schmid, M. J., Spencer, R. L., Watkins, L. R., Maier, S. F. Surgical and pharmacological suppression of glucocorticoids prevents the enhancement of morphine conditioned place preference by uncontrollable stress in rats. Psychopharmacology. 179, 409-417 (2005).
  33. Sinha, R. How does stress increase risk of drug abuse and relapse? Psychopharmacology. 158, 343-359 (2001).
  34. Lu, L., Shepard, J. D., Hall, F. S., Shaham, Y. Effect of environmental stressors on opiate and psychostimulant reinforcement, reinstatement and discrimination in rats: a review. Neurosci. Biobehav. Rev. 27, 457-491 (2003).
  35. Vidal-Infer, A., Arenas, M. C., Daza-Losada, M., Aguilar, M. A., Miñarro, J., Rodríguez-Arias, M. High novelty-seeking predicts greater sensitivity to the conditioned rewarding effects of cocaine. Pharmacol Biochem Behav. 102, 124-132 (2012).
  36. Reguilón, M. D., Montagud-Romero, S., Ferrer-Perez, C., Roger-Sánchez, C., Aguilar, M. A., Miñarro, J., Rodríguez-Arias, M. Dopamine D2 receptors mediate the increase in reinstatement of the conditioned rewarding effects of cocaine induced by acute social defeat. European Journal of Pharmacology. 799, 48-57 (2017).
  37. Ribeiro Do Couto, B., Aguilar, M. A., Lluch, J., Rodríguez-Arias, M., Miñarro, J. Social experiences affect reinstatement of cocaine-induced place preference in mice. Psychopharmacology. 207 (3), 485-498 (2009).
  38. Blanco-Gandía, M. C., Aracil-Fernández, A., Montagud-Romero, S., Aguilar, M. A., Manzanares, J., Miñarro, J., Rodríguez-Arias, M. Changes in gene expression and sensitivity of cocaine reward produced by a continuous fat diet. Psychopharmacology. 234 (15), 2337-2352 (2017).
  39. Tzschentke, T. M. Measuring reward with the conditioned place preference paradigm: a comprehensive review of drug effects, recent progress and new issues. Progress in neurobiology. 56 (6), 613-672 (1998).
  40. Blanco-Gandía, M. C., Ledesma, J. C., Aracil-Fernández, A., Navarrete, F., Montagud-Romero, S., Aguilar, M. A., Manzanares, J., Miñarro, J., Rodríguez-Arias, M. The rewarding effects of ethanol are modulated by binge eating of a high-fat diet during adolescence. Neuropharmacology. 121, 219-230 (2017).
  41. Itzhak, Y., Martin, J. L. Cocaine-induced conditioned place preference in mice: induction, extinction and reinstatement by related psychostimulants. Neuropsychopharmacology. 26 (1), 130-134 (2002).
  42. Kreibich, A. S., Blendy, J. A. cAMP response element-binding protein is required for stress but not cocaine-induced reinstatement. Journal of Neuroscience. 24 (30), 6686-6692 (2004).
  43. Zavala, A. R., Weber, S. M., Rice, H. J., Alleweireldt, A. T., Neisewander, J. L. Role of the prelimbic subregion of the medial prefrontal cortex in acquisition, extinction, and reinstatement of cocaine-conditioned place preference. Brain research. 990 (1), 157-164 (2003).
  44. Orsini, C., Bonito-Oliva, A., Conversi, D., Cabib, S. Genetic liability increases propensity to prime-induced reinstatement of conditioned place preference in mice exposed to low cocaine. Psychopharmacology. 198 (2), 287-296 (2008).
  45. Sun, Y., Pan, Z., Ma, Y. Increased entrances to side compartments indicate incubation of craving in morphine-induced rat and tree shrew CPP models. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 159, 62-68 (2017).

Tags

व्यवहार अंक १३६ वातानुकूलित जगह वरीयता कोकीन बहाली तनाव चूहे नशीली दवाओं की मांग
दवा की बहाली की मांग चूहों में वातानुकूलित जगह वरीयता प्रतिमान का उपयोग
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Blanco-Gandía, M. C., Aguilar,… More

Blanco-Gandía, M. C., Aguilar, M. A., Miñarro, J., Rodríguez-Arias, M. Reinstatement of Drug-seeking in Mice Using the Conditioned Place Preference Paradigm. J. Vis. Exp. (136), e56983, doi:10.3791/56983 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter