Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Behavior
Click here for the English version

Behavior

Systematisk vurdering velvære i mus for prosedyrer som bruker General Anesthesia

Published: March 20, 2018 doi: 10.3791/57046
Automatic Translation
1,2, 2,3, 2, 4, 2, 1
1Institute of Animal Welfare, Animal Behavior and Laboratory Animal Science, Department of Veterinary Medicine, Freie Universität Berlin, 2Institute of Pharmacology and Toxicology, Department of Veterinary Medicine, Freie Universität Berlin, 3German Federal Institute for Risk Assessment (BfR), 4Unit of Physiology, Pathophysiology and Experimental Endocrinology, Department of Biomedical Sciences, University of Veterinary Medicine

Summary

Vi utviklet en protokoll for å vurdere velvære i mus under prosedyrer med narkose. En rekke atferdsmessige parametere som angir nivåer av velvære samt glukokortikoid metabolitter ble analysert. Protokollen kan tjene som en generell hjelp å estimere graden av alvorlighetsgrad i en vitenskapelig, dyr-sentrert måte.

Abstract

I tråd med 3R prinsippet (erstatning, reduksjon, raffinement) utviklet av Russel og Burch, bør vitenskapelig forskning bruke alternativer til dyr eksperimentering mulig. Når det er ikke noe alternativ til dyr eksperimentering, skal antall forsøksdyr brukes minstekravene for å få verdifulle data. Dessuten bør riktig raffinement tiltak brukes for å redusere smerte, lidelse og nød følger den eksperimentelle prosedyren. Kategoriene som brukes til å klassifisere graden av smerte, lidelse og nød er ikke-utvinning, mild, moderat eller alvorlig (EU-direktivet 2010/63). For å avgjøre hvilke kategorier gjelder i enkeltsaker, er det avgjørende å bruke vitenskapelig Lydverktøy.

Godt-being-vurdering protokollen presenteres her er utformet for prosedyrer som generell anestesi brukes. Protokollen fokuserer på hjem bur aktivitet, Mouse grimase skala og luksus atferd som gravende og hekker bygge atferd som indikatorer på velvære. Den bruker også gratis utforskende paradigmet for egenskap angst-relaterte atferd. Fecal corticosterone metabolitter som indikatorer på akutt stress måles i 24-h etter bedøvende perioden.

Protokollen inneholder vitenskapelig solid informasjon om for mus etter generell anestesi. På grunn av sin enkelhet, kan protokollen lett tilpasses og integrert i en planlagt studie. Selv om det ikke gir en skala for å klassifisere nød i kategorier i henhold til EUs direktiv 2010/63, kan det hjelpe forskerne å estimere graden av alvorlighetsgraden av en prosedyre bruker vitenskapelig lyddata. Det gir en måte å forbedre vurdering av velvære på en vitenskapelig, dyr-sentrert måte.

Introduction

EU-direktivet 2010/631 fastsetter at 3R prinsippet (erstatning, reduksjon, raffinement) utviklet av Russel og Burch2 er brukes når dyr eksperimentering er nødvendig. Det endelige målet med EU-direktivet er å fase ut alle dyr testing, men direktivet erkjenner at for tiden noen dyreforsøk er fremdeles nødvendig å forske som vil beskytte mennesker og dyr sunnhet. Dermed, hvis et dyr eksperiment ikke kan erstattes av noen annen metode, bare minimum antall forsøksdyr er å få pålitelige resultater. Dessuten, bør hvor mye smerte, lidelse og nød følger eksperimentelle prosedyrer minimaliseres ved hjelp av riktig raffinement tiltak. EU-direktivet 2010/63 fastsetter at alvorlighetsgraden av en prosedyre må være prospektivt klassifisert som ikke-utvinning, mild, moderat eller alvorlig1. Som alvorlighetsgraden klassifisering avgjøres på et sak-til-sak grunnlag, er det viktig å ha vitenskapelig lyd verktøy til å anslå alvorlighetsgraden av en bestemt prosedyre.

Poengsummen ark som foreslått av Morton og Griffith3 er et viktig verktøy i å oppdage alle avvik fra normal status, inkludert negative effekter på velvære4. Poengsummen ark brukes til å ettertid avgjøre smerte, lidelse, og lidelse forårsaket av et eksperiment og fokus på synlige endringer i den fysiske tilstanden på individuelle dyr (f.eks, kroppsvekt, pels, gangart). Selv om vedlegg VIII av EU-direktivet 2010/63 gir eksempler på hver alvorlighetsgrad kategori, forskere fortsatt mangel verktøy for å estimere graden av alvorlighetsgraden av en bestemt prosedyre bruker vitenskapelig basert data.

Fravær av indikatorer viser negative trivsel er ikke den eneste måten å avgjøre statusen til dyret; tilstedeværelsen av indikatorer peker til positiv velvære er også viktig5,6,7,8. For eksempel dyr viser luksus atferd som gravende og neste bygningen atferd når alle sine grunnleggende behov er oppfylt. Hvis velvære er redusert, er luksus atferd først til å avslå5,7. Protokollen som brukes i vurderingen velvære bør inkludere indikatorer peker til fysisk, fysiologisk/biokjemiske og psykologiske stater av dyr for å vurdere deres velvære i en detaljert og omfattende måte9.

Innen rammen av raffinement, ble en protokoll som utviklet å møte disse kravene og vurdere virkningene av en prosedyre som involverer narkose på velvære mus10. Samtidig var målet å minimere noen ekstra stress for å aktivere enkel integrasjon av protokollen til en bestemt eksperiment. Protokollen vurderer gravende atferd, hjem bur atferd som aktivitet og matinntak nesting og trekk angst-relaterte atferd. I tillegg inneholder det musen grimase skala (MGS), og ikke-invasiv analyse av corticosterone metabolitter i avføring. Protokollen er utformet for å lette vurdering av velvære på en vitenskapelig og dyr-sentrert måte og å gi informasjon om velvære som støtter klassifiseringen av graden av alvorlighetsgrad. I tillegg til poengsummen ark, kan det gi nyttig informasjon for alvorlighetsgraden klassifiseringen av en prosedyre. Protokollen er enkelt å utføre og ikke krever omfattende utstyr, kan det integreres i et pågående eksperiment uten å påvirke resultatene av en studie. Det bør bemerkes at dyr forskning: rapportering av i Vivo eksperimenter (ANKOMME) retningslinje11 er å bli observert i alle studier som involverer dyreforsøk, med mål om å forbedre design, analyse og rapportering.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Studien ble utført i henhold til retningslinjer fastsatt av det tyske dyr velferd gjerning og ble godkjent av Berlin staten Authority ("Landesamt für Gesundheit und Soziales", tillatelse tall: G0053/15).

Merk: Det viktigste formålet med denne protokollen var å undersøke effekten av gjentatt anestesi på glukokortikoid metabolitter. En sample størrelse beregningen ble utført for å bestemme antall dyr brukes: n ≥ 2 × (s/μ1- µ2)2 × (zα + zβ)2. μ1- µ2 er forskjellen mellom populasjonsgjennomsnittene på hvilken makt og prøven størrelsen beregninger er gjort (α = 5%, β = 80%), zα = 1.96 og zβ = 0.84 er quantiles for standard normalfordeling. Figur 1 illustrerer tidsplan for denne protokollen. Hvis en parameter av protokollen viser en forskjell med av kontrollnivået, dyr bør nøye overvåket, og parameteren skal måles igjen etter en passende periode. For eksempel hvis egenskap angst-relaterte atferd er økt, bør dette testes igjen en uke senere, for å fastslå perioden før full gjenoppretting. Tidspunkt og periodene som er definert i denne protokollen kan tilpasses for bruk med andre prosedyrer. Når du endrer tidspunkt, bør habituering perioder holdes som beskrevet i protokollen. For å redusere faktorer som kan påvirke det mus atferd, bør tester krever mer manipulasjon utføres etter tester som ikke forstyrre den normale atferden mus. Figur 2 oppsummerer alle tester av protokollen bruker en scoring sammendragsark. Figur 3 har forenklet skalaer av karakteren av velvære, som gir en oversikt over hvordan du tolker testresultatene.

1. habituating mus håndtering av eksperimentator

  1. Kan mus å venne til dyr anlegget i minst 2 uker etter at de har anskaffet fra en annen anlegget eller leverandøren.
  2. Mus i grupper og opprettholde dem under standard betingelser (romtemperatur 22 ± 2 ° C, relativ fuktighet 55 ± 10%) på en lys: mørke syklus av 12:12 h.
  3. Gi alle grupper med en tunnel og bomull nestlets som standard berikelse, og gi mat og vann ad libitum.
  4. Venne alle mus til tunnelen og/eller kopp håndtering minst en uke før testing12.
    Merk: Plukke opp mus etter halen kan indusere stress eller angst, som i sin tur påvirker velvære og har også en innvirkning på resultatene av denne protokollen12.

2. forberede atferdsmessige testing rom og apparatene

Merk: Gi et eget rom for testing, ideelt i nærheten rommet der dyr holdes. Transport musene i burene sine hjem til testing rom minst 60 min før prosedyren utføres. Hvis mulig, gjennomføre alle tester av denne protokollen i samme testing rom hvor prosedyren utføres.

  1. Forberede en observasjon buret til å teste gravende atferd8 og ta bilder for bruk i MGS13 (Figur 4).
    1. Bruk en glassboks med et gulvareal ca 220 mm × 290 mm og en høyde på 390 mm.
    2. Dekket gulvet av denne bokse med ca 0,5 cm av sengetøy materiale.
    3. Punktdiagram en håndfull brukte bedding materiale fra hjem buret på det nye sengetøy materialet å redusere lidelse forårsaket av det nye miljøet.
    4. Skaffe mat, samme type som normalt leveres som kosthold og vann.
      Merk: Hvis mulig, bruk vann flasker, fordi mus kan fylle vann boller med sengetøy materiale.
  2. Forberede en bur (type III: 420 mm × 260 mm × 150 mm) for 24-h observasjon periode, som mus ligger individuelt (figur 5).
    Merk: For å redusere varigheten av hensyn til bolig, samle data for reir bygge atferd, hjem bur aktivitet, matinntaket og fecal corticosterone metabolitter (FCM) i denne perioden.
    1. Sted nytt sengetøy materiale i buret (ca 0,5 cm dyp) og scatter en håndfull brukte bedding materiale uten avføring fra hjem buret på toppen av det nye materialet, for å redusere smerte.
    2. Gir et standardisert kvadrat bomull nestlet av en definert vekt, som miljømessig berikelse kun (se tabell over materialer)14.
      Merk: Kommersielle nestlets avvike i vekt. Derfor vi endret vekten av nestlet beskrevet av Deacon og brukt 2.0 g i stedet for 2,7 g14.
    3. Montere sensoren på buret, når du bruker en infrarød sensor for å måle hjem bur aktivitet (se tabell av materialer).
    4. Skaffe mat, samme type som normalt leveres som kosthold, og vann ad libitum.

3. musen grimase skala

Merk: Fotografier for mg-bilene er tatt i observasjon buret på tre tidspunkt: (i) 2 dager før prosedyren til posten opprinnelige MGS nivåer, (ii) 30 min etter prosedyren og (iii) 150 min etter inngrepet. Når velvære er svekket, øke score på MGS. Hvis økt MGS score fortsatt er observert etter 150 min, ta flere bilder senere.

  1. Bruke et HD-kamera for fotografering.
  2. Forsiktig overføre musen til observasjon buret og la musen for å venne til det nye miljøet i minst 30 min.
  3. Kontinuerlig ta ca 30-40 bilder hver gang poeng innen 1-2 min.
  4. Sortere alle bildene ved å merke de skarpe frontal eller sideveis bildene og forkaster uskarpe bilder eller fotografier som viser musen ansikter fra andre perspektiver enn frontal eller sideveis.
  5. Tilfeldig velge ett bilde fra hvert punkt, (dvs 2 dager før den prosedyren, 30 min etter prosedyren og 150 min etter prosedyren) hver musen.
  6. Beskjære bildene for å vise bare hodet på musen slik at kroppens posisjon ikke er synlig13.
  7. Opprett en regnearkfil med ett ark for hvert bilde og legge til en tabell inkludert fem ansikts handling enhetene MGS hvert ark.
    Merk: Filen inneholder planlagte bilder samt fotografier innlegget prosedyren.
  8. Tilfeldig rekkefølge arkene.
  9. Presentere filen på en dataskjerm tre uavhengige personer, som var tidligere opplært bruke MGS utviklet av Langford et al. og har dem score ansikts handling enhetene med en 3-punkt-skala (0 = ikke finnes, 1 = moderat presentere, 2 = åpenbart finnes).
    Merk: Scoring er basert på følgende parametere13: Orbital stramme ("innsnevring av orbital området, med en tett lukket øyelokket eller et øye klem"); nesen bulge ("avrundet forlengelse av huden synlig på broen på nesen"); kinnet bule ("konveks utseende av kinnet muskel"); øre holdning ("ører trukket fra hverandre og tilbake fra sin opprinnelige plassering eller har vertikale riller skjemaet på grunn av tips ører blir trukket tilbake"); whisker endring ("bevegelse av bakkenbarter fra sin opprinnelige plassering enten bakover, mot ansiktet eller fremover, som om stående på slutten; værhår kan også clump sammen").
  10. Analysere score, slik (tilpasset fra Langford et al. 13).
    1. Gjennomsnittlig alle ansikts handling enheter for hvert bilde for å generere MGS score.
      Merk: Hvis en av enhetene som ansikts handling ikke kan være scoret, gjennomsnittlig de gjenværende ansikts handling-enhetene.
    2. Trekk fra gjennomsnittet for opprinnelige fotografiene fra middelverdien fotografier innlegget fremgangsmåten å få en MGS forskjellen score for hver musen.
    3. Test for forskjeller i MGS forskjellen scorene mellom personer (parametriske test for relaterte prøver).
      Merk: Hvis det er en betydelig forskjell (p < 0,05), bestemme om scorene til alle bildene eller bare score noen fotografier varierer mellom personer. Hvis sistnevnte er sant, gjenta scoring av disse bildene. Ellers skal personer gjenta MGS trening og deretter score bildene igjen.
    4. Gjennomsnittlig MGS forskjellen resultater Hentet fra de ulike scoret for hver musen, hvis resultatene av alle personer ikke avviker betydelig.
    5. Bruk en parametriske statistisk test for å sammenligne de MGS forskjell scorene gjennomsnitt mellom studie.

4. gravende atferd8,15,16

  1. Forberede burrows ved å plassere 140 ± 2 g mat pellets normalt leveres som diett i standard ugjennomsiktig plast vann flaske (250 mL, 150 mm lengde, 55 mm diameter, 45 mm diameter på flaske halsen)8.
    Merk: Som mus foretrekker bredt rør, Hi med en diameter på 68 mm kan bli brukt som beskrevet av Deacon16.
  2. Stedet hule fylt med mat pellets i hjem buret 5 dager før prosedyren for Akklimatisering.
    Merk: Vanlig mat-dispensing enheten i buret bør ikke tømmes, men bør også være fylt med mat pellets, mus brukes til dette.
  3. Utføre testen to ganger, 2 dager før prosedyren (grunnlinje); utføre siste 30 min post prosedyren også.
    1. La musen venne i minst 30 minutter til observasjon buret hvor fotografier for mg-bilene ble tatt.
    2. Plass vann plastflaske fylt med mat pellets parallelt bakveggen av observasjon buret.
    3. Veie mat pellets (g) igjen i hule etter 2 timer.
  4. Beregne vekten av mat pellets fjernet fra hule av mus i forhold til opprinnelig vekt (%).

5. 24t observasjon periode

Merk: Mus ligger individuelt, som beskrevet i 2.2. (Figur 5), for en periode på 24 timer, for å måle mat inntak, hjem bur aktivitet, neste bygningen atferd og FCM nivåer. 24-h observasjon foregår to ganger: (i) 2 dager før prosedyren for baseline nivåer, (ii) på dagen av prosedyren.

  1. Matinntak
    1. Veie musene regelmessig (f.eks 2 dager før anestesi, umiddelbart før anestesi, 2 dager etter anestesi og ukentlig etter anestesi) for å vurdere endringer i kroppsvekt (del av poengsummen ark).
      Merk: Kroppsvekt er nødvendig for å beregne matinntak pr. gram av kroppsvekt. Vanninntak kan også måles i 24-h observasjon perioden. Hvis matinntaket reduseres, kan det hende at velvære svekket.
    2. Bestem første vekten av standard matdiett (gram) i mat enheten buret (ca 100 g).
    3. Fastslå vekten standard matdiett på slutten av 24-h observasjon perioden.
    4. Skanne siden bur under mat enheten nøye for mat søl og legge til noen ekstra mat pellets funnet til vekten av mat pellets igjen i mat enheten.
    5. Beregne matinntak per enhet kroppsvekt.
  2. Hjem bur aktivitet
    Merk: Instruksjonene nedenfor refererer til bruk av en infrarød sensor (se tabell av materialer), men hjem bur aktivitet kan også vurderes med alternative programmer. Avvik hjem bur aktivitet fra kontroll nivåer (f.eks hypoactivity, hyperaktivitet) kan være et tegn på svekket velvære.
    1. Start programmet.
    2. Velg en prøveintervallet 1 min og en anskaffet på 24 t, betyr at impulser registreres hvert minutt i 24 timer.
      Merk: Hvis eksperimentator kommer inn i rommet flere ganger når innspillingen startet, bare bruke data fra perioder, når mus ikke var forstyrret (dvs. i mørke perioden).
    3. Oppsummere 10 minutters intervaller av impulser.
    4. Beregn arealet under tid kurven (impulser × min).
  3. Reir bygningen atferd
    Merk: Komplekse og høy reir kan tjene som en indikator på velvære.
    1. Plasser en firkantet bomull nestlet (se Tabell for materiale) med en definert vekt (f.eks 2.0 g) i buret.
    2. Score reiret i 5-punkts skala (se nedenfor) ifølge Deacon14 morgenen ca 2 timer etter at lyset slås på. Veie alle untorn nestlet stykker som er minst 5% av første nestlet vekten. Score reir som følger14
      1. Tilordne score på "1" Hvis 90% av nestlet intakt.
      2. Tilordne score på "2" Hvis det er 50-90% intakt.
      3. Tilordne score "3" Hvis 50-90% av nestlet er ødelagt.
      4. Tilordne score "4" Hvis mer enn 90% er makuleres men reir er flat, og mindre enn 50% av omkretsen er høyere enn musen kropp høyde når krøllet opp.
      5. Tilordne score "5" Hvis mer enn 90% nestlet er makuleres reir er høy og mer enn 50% av omkretsen er høyere enn kroppen høyden på krøllet opp musen.
  4. Fecal Corticosterone metabolitter
    Merk: Økning av FCM over kontrollnivået gjenspeiler akutt stress nivåer i 24-h postanesthetic perioden.
    1. Samle alle tørr fecal pellets fra buret ved hjelp av Tang på slutten av 24-h observasjon perioden og eliminere våt pellets forurenset med urin.
    2. Ekstra FCM etter Palme et al. 17slik.
      1. Tørke fekal samples ved en temperatur på 60-70 ° C.
      2. Homogenize fecal prøver ved å bruke en morter.
      3. Riste en aliquot på 0,05 g med 1 mL av 80% metanol i en sentrifuge rør i 30 min på en multi vortex.
      4. Sentrifuge eksempler på 2500 x g i 15 min.
      5. Pipetter 0,5 mL av nedbryting i en sentrifuge rør.
      6. Lagre fecal eksempler (og ekstrakter) minst-18 ° c.
      7. Analysere FCM bruker en 5α-pregnane-3b,11b,21-triol-20-one enzym immunanalyse (EIA)18,19 eller en fullt godkjent EIA.
    3. Beregn Prosentvis endring av FCM konsentrasjoner i forhold til de opprinnelige FCM konsentrasjonene.

6. gratis utforskende paradigme

  1. Ta hjem buret av stativet og plasser den på et bord overflate på slutten av 24-h observasjon perioden.
  2. Plass en gridded bur topp (uten mat eller vann flasker) i buret i en vinkel på 45° til den lange siden av byrået.
    Merk: Ikke ødelegger reiret, som fungerer som et gjemmested for musen, men plasser de bur diagonalt over reiret.
  3. Skjerm eller video-posten musene i 10 min fra en avstand på ca 1,5 m.
    1. Starte tidtakeren.
    2. Merk alle tider når musen klatrer på buret toppen (med alle fire paws øverst bur) eller forlater de bur (med en eller flere labber på bur gulvet).
      Merk: Noen mus kan klatre opp de bur og la den for å gå langs kanten av byrået. Noen mus også bak øverst buret. Behandle disse sakene som om mus var fremdeles på de buret.
  4. Evaluere parametere følge Bert et al. 20.
    1. Analysere ventetid til første leting (i sekunder).
    2. Analyser antall undersøkelser.
    3. Analysere total varighet (sekunder) for leting.
      Merk: En høy latency første letebrønn, et lavt antall undersøkelser og en lav total varighet for utforsking kan angi egenskap angst nivået.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Denne protokollen ble opprinnelig utviklet for å vurdere for C57BL/6JRj mus etter en enkelt opplevelse av isoflurane anestesi (en 45 minutters anestesi sesjon, n = 13 kvinner) eller gjentatte isoflurane anestesi (seks 45 minutters anestesi økter med 3-4 dager mellom anestesi økter, n = 13 kvinner) sammenlignet med for kontroll mus (n = 6 kvinner)10, som fikk ingen anestesi men ble testet i henhold til de samme tiltakene. Vi vurdert konsekvensene av en enkelt opplevelse av isoflurane anestesi og gjentatte isoflurane bedøvelsen på for C57BL/6JRj mus sammenlignet med ubehandlet kontroll mus. Her, representant resultatene av kvinnelige C57BL/6JRj mus, inkludert noen data tidligere publisert i Hohlbaum et al. 10, samt tidligere upubliserte resultater, vises.

Statistisk analyse

Utforskende dataanalyse og tester normalitet ble utført for hver parameter. Forskjeller mellom kollokvier (dvs. kontroll, enkelt isoflurane anestesi, gjentatt isoflurane anestesi ble analysert ved hjelp av respektive testen, som nevnt i figur legender. Når data møtte normalfordeling forutsetninger, ble 1-veis VARIANSANALYSE utført. Non-normalt distribuerte data ble analysert bruker Kruskal-Wallis-test forskjellene ble ansett betydelig på p < 0,05.

Opprinnelige verdier

Planlagte verdier, samlet før prosedyren utføres, er avgjørende for å avgjøre om behandlingsgrupper varierer i parameteren respektive. Som vist i figur 6, figur 7, Figur 8, figur 9 og Figur 10, opprinnelige nivåer av MGS score (p = 0.762, Kruskal-Wallis-Test), luksus atferd som gravende (p = 0.896, Kruskal-Wallis-Test) og neste (p = 0.723, Kruskal-Wallis-Test), matinntaket (p = 0.398, 1-veis VARIANSANALYSE), og hjem bur (p = 0.208, Kruskal-Wallis-Test) betydelig ikke skiller mellom grupper. Videre ingen betydelige forskjeller i planlagte FCM konsentrasjoner ble funnet (median, interquartile område i parentes [ng/50 mg]: kontroll: 123.01 (82.70-193.46), enkelt anestesi: 118.31 (101.73-153.54), gjentatte anestesi: 129.55 (92.58-139.48)) (p = 0.904, Kruskal-Wallis-Test). Hvis forskjeller i den opprinnelige nivået oppstår, kan delta verdiene beregnes.

Mouse grimase skala

Når mener MGS resultatet sammenlignes, betydelig høyere score versus kontrollen ble funnet etter enkelt erfaring bedøvelse (p = 0,001) og etter siste gjentatt anestesi økten (p = 0.021) forårsaket 30 minutter etter siste anestesi (figur 6A) . 150 minutter etter siste anestesi, det var ikke lenger forskjellene mellom gruppene (p = 0.910).

Ta hensyn til det faktum at planlagte MGS score ikke er lik 0 i alle tilfeller, var MGS forskjellen score beregnet, som beskrevet i protokollen. Både en enkelt oppleve bedøvelse (p = 0,002) og gjentatte anestesi (p = 0.008) økt MGS forskjellen score versus kontrollen 30 minutter etter anestesi. 150 minutter etter den siste anestesi, alle mus hadde returnert til kontroll nivåer (p = 0.617) (figur 6B)10.

Gravende atferd

Gjentatt anestesi betydelig redusert prosentandelen av vekten av mat pellets mus fjernet fra hule versus kontrollen (p = 0.036, Kruksal-Wallis-Test) (figur 7)10.

Reir bygningen atferd

Det var ingen betydelige forskjeller i reir scorene mellom en enkelt opplevelse av anestesi, gjentatte anestesi og kontrollen (p = 0.240, Kruksal-Wallis-Test) (Figur 8)10.

Matinntak

1 dag etter den siste anestesi, musene som hadde gjennomgått gjentatte anestesi viste betydelig redusert matinntak sammenlignet med musene som hadde opplevd enkelt anestesi (p = 0.047, 1-veis VARIANSANALYSE). I kontrast, en uke senere, musene som hadde fått gjentatt anestesi fortært betydelig mer mat enn kontroller (p = 0.012, 1-veis VARIANSANALYSE) eller musene som hadde mottatt en enkelt anestesi (p = 0,001, 1-veis VARIANSANALYSE) (figur 9)10.

Hjem bur aktivitet

På 1 dag etter den siste anestesi, hjem bur aktivitet under mørke perioden angitt av området under aktivitet kurven, ikke betydelig skiller blant musene som hadde mottatt en enkelt anestesi, gjentatte anestesi eller kontroll behandling (p = 0.498, Kruskal-Wallis-Test) (Figur 10)10.

Gratis utforskende paradigme

Alle mus utforsket de bur når testen ble gjennomført. Men en dag etter den siste anestesi, musene som hadde fått gjentatte anestesi (median, interquartile område i parentes [s]: 78.00 (55.00-89,00)) utforsket de bur betydelig senere i tid enn kontroller (31.00 (18.25-42,75), p = 0,009, Kruskal-Wallis-Test) og mus som hadde fått en enkelt anestesi (27,00 (21.00-45.50), p = 0,001, Kruskal-Wallis-Test), som tidligere publisert10. Parametere samlet varighet for utforsking (figur 11A) og antall undersøkelser (figur 11B) kan sammenlignes med ventetiden til første leting. Gjentatt anestesi betydelig redusert antall undersøkelser versus kontroll (p = 0.023, Kruskal-Wallis-Test) og den totale varigheten av leting (p = 0.032, Kruskal-Wallis-Test) kontra en enkelt anestesi på 1 dag etter den siste anestesi. 8 dager etter den siste anestesi, alle parametere, dvs ventetid til første leting (kontroll: 27.50 (13.50-47.25), enkelt anestesi: 18.00 (9.50-38.50), gjentatte anestesi: 20.00 (12,50-42.00), p = 0.722, Kruskal-Wallis-Test), antall undersøkelser (p = 0.057), og total varighet for utforsking (p = 0.579), ikke lenger ulik mellom studie (Figur 11).

Fecal corticosterone metabolitter

For å ta hensyn til de opprinnelige verdiene innhentet, prosenten endre forhold til opprinnelig ble beregnet og ble ikke funnet noen betydelige forskjeller mellom (p = 0.119, Kruskal-Wallis-Test) (Figur 12)10.

Figure 1
Figur 1 : Tid linje av protokollen. Grå og hvit fargede felt symboliserer mørket og lyset perioder med en dag, henholdsvis. Avhengig av prosedyren, kan denne protokollen tilpasses. "Habituering til hule" betyr at mus har å bli akklimatisert bruke plastflaske vann som en hule i deres hjem bur, før gravende testen kan utføres. B, grunnverdi; FCM, fecal corticosterone metabolitter. Dette tallet har blitt endret fra Hohlbaum et al. 10. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 2
Figur 2 : Scoring sammendragsark. Dette inkluderer alle tester og kan fylles ut for hver individuelle musen. Datoen og klokkeslettet skal legges når testen blir utført. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 3
Figur 3 : Skalaer av karakteren av velvære. Skalaer området fra "velvære usvekket" (grønn) til "velvære svekket" (rød) og express betydningen av testresultatene i en forenklet måte. På dette stadiet av kunnskap på indikatorer for velvære, kan vi gjøre en klar uttalelse på karakteren av velvære for hver test, bare generell uttalelse. MGS, Mouse grimase skala. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 4
Figur 4 : Observasjon buret. Denne bur brukes for testen gravende atferd og ta bilder som skal analyseres etter musen grimase skala (MGS). Foran buret er klart og, avhengig av pels fargene av mus, andre tre vegger bør være farget svart eller hvit til kontrast med musene. Gulvet i glass boksen er dekket med ca 0,5 cm bedding materiale inkludert brukte bedding materiale fra hjem buret. Standard mat og vann er gitt. Hvis mulig, bør vannflasker i stedet for boller brukes fordi mus kan fylle skåler med sengetøy materiale. Etter en habituering periode av minst 30 min legges hule. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 5
Figur 5 : 24-h observasjon perioden. Vurdere reir bygge atferd, hjem bur aktivitet og matinntaket og fecal prøver å måle fecal corticosterone metabolitter (FCM), mus er plassert for 24 h (bur type III: 420 mm × 260 mm × 150 mm, bedding materiale ca 0,5 cm dyp med brukte bedding materiale fra hjem buret spredt på toppen, en bomull nestlet, vann og standard mat diett ad libitum). En infrarød sensor er montert på toppen av holderen. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 6
Figur 6 : Mus grimase skala (MGS). Boksen representerer den interquartile rekkevidden (IQR), boksen kantene er det 25th og 75te kvartil. Kinnskjegg representerer verdier som er ikke større enn 1,5 × IQR. Prikkene er outliers med verdier mellom 1,5 til 3,0 × IQR. Farget stjerner er uteliggere med verdier større enn 3.0 × IQR. (A) mener MGS score. (B) mener MGS forskjellen score. p-verdier ble beregnet ved hjelp av Kruskal-Wallis-Test: * p < 0,05; ** p < 0,01. På grunn av en teknisk feil (kamera, skala) måtte fire mus i gruppen enkelt anestesi utelates fra statistikken. Dette tallet har blitt endret fra Hohlbaum et al. 10. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 7
Figur 7 : Hi atferd. Boksen representerer den interquartile rekkevidden (IQR), boksen kantene er det 25th og 75te kvartil. Kinnskjegg representerer verdier som er ikke større enn 1,5 × IQR. Farget stjerner er uteliggere med verdier større enn 3.0 × IQR. p-verdier ble beregnet ved hjelp av Kruskal-Wallis-Test: * p < 0,05. På grunn av en teknisk feil (kamera, skala) måtte fire mus i gruppen enkelt anestesi bli ekskludert fra den statistiske analysen. Dette tallet har blitt endret fra Hohlbaum et al. 10. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 8
Figur 8 : Nest bygge atferd. Boksen representerer den interquartile rekkevidden (IQR), boksen kantene er det 25th og 75te kvartil. Kinnskjegg representerer verdier som er ikke større enn 1,5 × IQR. Prikkene er outliers med verdier mellom 1,5 til 3,0 × IQR. p-verdier ble beregnet ved hjelp av Kruskal-Wallis-Test; d, dag. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 9
Figur 9 : Matinntaket. Dataene er gjennomsnittlig ± standardavvik. p-verdier ble beregnet ved hjelp av 1-veis VARIANSANALYSE (post-hoc Tukey-"HSD"): * p < 0,05; ** p < 0,01. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 10
Figur 10 : Hjem bur aktivitet. Boksen representerer den interquartile rekkevidden (IQR), boksen kantene er det 25th og 75te kvartil. Kinnskjegg representerer verdier som er ikke større enn 1,5 × IQR. Prikkene er outliers med verdier mellom 1,5 til 3,0 × IQR. p-verdier ble beregnet ved hjelp av Kruskal-Wallis-test Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 11
Figur 11 : Gratis utforskende paradigme. Boksen representerer den interquartile rekkevidden (IQR), boksen kantene er det 25th og 75te kvartil. Kinnskjegg representerer verdier som er ikke større enn 1,5 × IQR. Prikkene er outliers med verdier mellom 1,5 til 3,0 × IQR. Farget stjerner er uteliggere med verdier større enn 3.0 × IQR. (A) total varighet for utforsking. (B) antall undersøkelser. p-verdier ble beregnet ved hjelp av Kruskal-Wallis-Test: * p < 0,05. Dette tallet har blitt endret fra Hohlbaum et al. 10. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 12
Figur 12 : Fecal corticosterone metabolitter (FCM). Boksen representerer den interquartile rekkevidden (IQR), boksen kantene er det 25th og 75te kvartil. Kinnskjegg representerer verdier som er ikke større enn 1,5 × IQR. Farget stjerner er uteliggere med verdier større enn 3.0 × IQR. FCM nivåer ble målt 2 dager før og 1 dag legge prosedyren. Prosentvis endring [%] av FCM konsentrasjoner i forhold til respektive grunnverdi ble beregnet. Dataene ble analysert bruker Kruskal-Wallis-test Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Protokollen ble opprinnelig utviklet for å vurdere for C57BL/6JRj mus som fikk en enkelt anestesi eller gjentatte isoflurane anestesi. Resultatene bekrefter at tester av luksus, i tillegg til andre tiltak (f.eks gratis utforskende paradigmet, MGS, gravende matinntaket) var følsom metoder for å vurdere velvære. Gjentatte isoflurane anestesi forårsaket kortsiktige effekter på trekk angst-relaterte atferd, MGS og gravende atferd. Videre syntes gjentatte isoflurane anestesi å påvirke mat inntak10.

Gratis utforskende paradigmet angitt redusert utforskende atferd, og derfor høyere egenskap angst nivåer i mus som ble gjentatte ganger anesthetized sammenlignet med mus anesthetized bare én gang, og kontroller. Imidlertid utforsket mus i alle grupper gridded bur topp10,20. Når undersøke angst-relaterte atferd, er det viktig å skille mellom trekk og stat angst21,22. Plassere musen i et kjent miljø induserer staten angst. Derimot gratis utforskende paradigmet gjør dyr å bo i burene sine hjem, og dermed undersøker egenskap angst.

Reduksjonen i utforskende atferd blant mus etter gjentatte anestesi ikke forklares med redusert motor aktivitet. Hjem bur aktivitet i mørke perioden skiller ikke betydelig mellom studie. Dette indikerer at mus hadde allerede gjenopprettet av bedøvelsen når gratis utforskende paradigme testen var utført.

MGS faktisk var utviklet for å vurdere smerte, men det er bevis for at ansiktsuttrykk er også endret av stress og positive følelser13,23. Fotografier av musen ansiktene indikerte at både enkelt og gjentatte isoflurane anestesi økt score på MGS kort sikt i den umiddelbare post bedøvende perioden. Som MGS forskjellen stillingen forble under 1, syntes stressnivået å være mild10. Resultatene er enig med nylige observasjoner av Miller et al. 24 , 25 og viste at mus returnerte for å kontrollere nivå 150 min legge anestesi10.

Luksus atferd som gravende og hekker bygge atferd er artsspesifikke og kan brukes som indikatorer for velvære7 og god generell helse i mus26. Mus bare viser luksus atferd når alle sine grunnleggende behov er oppfylt. Hvis velvære er redusert, er luksus atferd først til å være svekket5,7. Tidligere studier har vist at både gravende og redebygging kan svekkes av smerte og nød6,8, men det er også bevis for at hippocampus lesjoner kan påvirke to atferd15,27 , 28 , 29 , 30 , 31.

Luksus atferd ble undersøkt i tidlig post bedøvende perioden (gravende atferd) og morgenen dagen (nest bygge atferd). Testen for gravende oppførsel utviklet av Deacon et al. og vedtatt av Jirkof et al. ble endret Akklimatisering (gruppe bolig i stedet for individuelle boliger) og varigheten av atferdsdata måling (bare 2 timer i stedet for 24 h) 8 , 15 , 16.

Det er kjent som gjentatt anestesi redusert gravende atferd, antyder at det var en svekkelse av velvære umiddelbart bokføre anestesi10, som ble også rapportert av Jirkof et al. 8. men om morgenen dagen når mus hadde mer tid til å gjenopprette fra anestesi, høy og komplekse reir de hadde bygget indikerte at de var opplever velvære10. Disse funnene er forskjellig fra tidligere rapporter som scoret reir på et tidligere tidspunkt32. Derfor kan det være nyttig å tilpasse protokollen og score hekker tidligere i tid. Imidlertid må døgnrytmen av nest bygge atferd fortsatt betraktes som mus pleier å forberede reiret på slutten av den mørke fase32.

Matinntaket ble marginalt redusert 1 dag etter gjentatte anestesi, men det ble økt 1 uke senere. Som mus ikke miste kroppsvekt (se Hohlbaum et al. 10) noen form for kompensasjon mekanismen kan inntreffe, og nedskrivning av velvære med hensyn til matinntaket skal klassifiseres som mild10. Matinntaket gir innsikt i postoperativ smerte, velvære og appetitt i mus, som kan svekkes av postoperativ kvalme26 og postoperativ stress27.

FCM angir pålitelig stress i mus33,34,35. Topp FCM konsentrasjoner vanligvis oppstår 8-10 h etter en stressor men avhenger av intestinal transitt tid18. Derfor er det avgjørende også overvåke hjem bur aktivitet, inkludert i denne protokollen. Fordi døgnrytmen effekten utskilles FCM18er det tilrådelig å samle fecal prøver over en periode på 24 h. FCM konsentrasjoner reflektert akutt stress i 24-h etter bedøvende perioden. Som FCM nivåer varierer fra individ til individ, beregnet Prosentvis endring FCM nivåer i forhold til grunnlinjen. FCM resultatene stede undersøkelsen indikerte at verken en opplevelse av anestesi eller gjentatte anestesi betydelig økt hypothalamus-hypofyse-adrenalin (HPA) aksen aktivitet10.

Alle avslørte funnene at gjentatt isoflurane anestesi forårsaket kortsiktige mild nød og svekket velvære i den tidlige postanesthetic perioden litt mer enn en enkelt opplevelse av isoflurane anestesi10.

En protokoll for å vurdere velvære bør ikke pålegge ytterligere nød på dyrene. En begrensning finnes protokollen er at den inneholder personlige boliger i 24-h observasjon perioden, som er kjent for å øke plasma corticosterone nivåer36. Hensyn til bolig er imidlertid nødvendig å samle inn gyldige data for personer med hensyn til hjem bur aktivitet, matinntaket, reir bygningen atferd og FCM nivåer. Varigheten av personlige boliger ble minimert ved å undersøke de fire parameterne på samme tid (dvs. i 24-h observasjon perioden). For å forhindre resultatene være partisk av hensyn til bolig, kontroll mus gjennomgikk de samme testene og deres resultater tatt i betraktning. Hvis metodene tilgjengelig å måle disse parametrene i et gruppe-bolig miljø, bør de være brukt (f.eksen automatisert hjem-buret analysesystem for hjem bur aktivitet37 og matinntaket). Automatisert hjem bur analyse systemer krever imidlertid ekstra utstyr, som ikke kanskje er tilgjengelig. I studier med fokus på grupper av dyr i stedet for enkeltpersoner, hjem bur aktivitet, matinntak, neste bygningen atferd og FCM nivåer kan også bli vurdert for en gruppe mus. Det samme gjelder gratis utforskende paradigmet, som bare krever at mus til å være tydelig merket slik at de kan skilles. Hvis velvære er redusert i en gruppe, alle mus i gruppen bør kontrolleres nøye (med poengsummen ark og kliniske undersøkelsen) å identifisere mus eller mus bekymret. Ytterligere observasjoner på gruppenivå er nødvendig å angi følsomheten til gruppen verdier.

Med hensyn til raffinement, kan denne protokollen være tilpasset og integrert i pågående studier for å vurdere virkningen av en bestemt fremgangsmåte for mus. Avhengig av bestemt prosedyre og studere utformingen, bør egnede prøvene fra denne protokollen velges. Her syntes gravende og hekker test, MGS, gratis utforskende paradigmet og måling av matinntaket å være spesielt nyttige. Slik oppførsel av mus døgnrytme38, er det tilrådelig å utføre atferdsmessige tester i mus i alle grupper til en angitt tid. Mus er mer aktive om morgenen enn i ettermiddag38. Hvis studien design ikke tillater teste i morgen, kan imidlertid testen gjøres på et senere tidspunkt. Det er også viktig å sikre at hver enkelt test er gjennomført på samme tidspunkt for alle grupper. Ellers kan virkningen av døgnrytmen av parametere resultere i intra- eller mellom grupper forskjeller. Videre bør kontroll mus inkluderes i studien, slik at resultatene fra behandlet mus og kontroll mus kan sammenlignes. Kontroll mus må testes på samme tidspunkt som behandlet mus. Hvis protokollen viser at velvære er svekket, prosedyren skal være raffinert, og protokollen gjentatt. Denne tilnærmingen kan vise om arbeidet med å avgrense prosedyren var effektive.

Nåværende protokollen kan tjene som en generell hjelp å estimere graden av alvorlighetsgrad forårsaket av en prosedyre. Derfor hjelper det for å klassifisere alvorlighetsgraden av en prosedyre på vitenskapelig - og dyr-sentrert nivå. Imidlertid gir protokollen ikke en skala for å klassifisere en prosedyre som mild, moderat eller alvorlig. For å klassifisere alvorlighetsgraden av en prosedyre, er det nødvendig å se eksemplene i vedlegg VIII av EU-direktivet 2010/63.

Avslutningsvis støtter stede protokollen en systematisk vurdering av velvære i mus på en vitenskapelig, dyr-sentrert måte følge prosedyrer som generell anestesi brukes.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne ikke avsløre.

Acknowledgments

Takket være Sabine Jacobs for å assistere med prøvetaking, Edith Klobetz-Rassam for analyse av FCM, PD Dr. med. veterinæren. habil. Roswitha Merle for å assistere med statistisk analyse og Wiebke Gentner for korrekturlesing av manuskriptet. Studiet inngår i Berlin-Brandenburg forskning plattformen BB3R (www.bb3r.de) og ble finansiert av tysk Federal Utdannings- og forskning (gi nummer: 031A262A) (www.bmbf.de/en/index.html).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Isofluran CP-Pharma Handelsgesellschaft mbH 1214
InfraMot - Sensore Units TSE Systems 302015-SENS
InfraMot - Control Units TSE Systems 302015-C/16
InfraMot - Software TSE Systems 302015-S
Nestlet N Ancare - Plexx NES3600
Camera EOS 350D Canon

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. 2010 EU. Directive 2010/63/EU. Official Journal of the European Union. , L276/33-L276/29 (2010).
  2. Russell, W. M. S., Burch, R. The principles of humane experimental technique. , London: Methuen. (1959).
  3. Morton, D. B., Griffiths, P. H. Guidelines on the recognition of pain, distress and discomfort in experimental animals and an hypothesis for assessment. Vet Rec. 116 (16), 431-436 (1985).
  4. Bugnon, P., Heimann, M., Thallmair, M. What the literature tells us about score sheet design. Lab Anim. 50 (6), 414-417 (2016).
  5. Boissy, A., et al. Assessment of positive emotions in animals to improve their welfare. Physiol Behav. 92 (3), 375-397 (2007).
  6. Arras, M., Rettich, A., Cinelli, P., Kasermann, H. P., Burki, K. Assessment of post-laparotomy pain in laboratory mice by telemetric recording of heart rate and heart rate variability. BMC Vet Res. 3, 16 (2007).
  7. Jirkof, P. Burrowing and nest building behavior as indicators of well-being in mice. J Neurosci Methods. 234, 139-146 (2014).
  8. Jirkof, P., et al. Burrowing behavior as an indicator of post-laparotomy pain in mice. Front Behav Neurosci. 4, 165 (2010).
  9. Hawkins, P., et al. A guide to defining and implementing protocols for the welfare assessment of laboratory animals: eleventh report of the BVAAWF/FRAME/RSPCA/UFAW Joint Working Group on Refinement. Lab Anim. 45 (1), 1-13 (2011).
  10. Hohlbaum, K., Bert, B., Dietze, S., Palme, R., Fink, H., Thöne-Reineke, C. Severity classification of repeated isoflurane anesthesia in C57BL/6JRj mice-Assessing the degree of distress. PLoS ONE. 12 (6), e0179588 (2017).
  11. Kilkenny, C., Browne, W. J., Cuthill, I. C., Emerson, M., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: the ARRIVE guidelines for reporting animal research. PLoS Biol. 8 (6), e1000412 (2010).
  12. Hurst, J. L., West, R. S. Taming anxiety in laboratory mice. Nat Methods. 7 (10), 825-826 (2010).
  13. Langford, D. J., et al. Coding of facial expressions of pain in the laboratory mouse. Nat Methods. 7 (6), 447-449 (2010).
  14. Deacon, R. M. Assessing nest building in mice. Nat Protoc. 1 (3), 1117-1119 (2006).
  15. Deacon, R. M., Raley, J. M., Perry, V. H., Rawlins, J. N. Burrowing into prion disease. Neuroreport. 12 (9), 2053-2057 (2001).
  16. Deacon, R. M. Burrowing in rodents: a sensitive method for detecting behavioral dysfunction. Nat Protoc. 1 (1), 118-121 (2006).
  17. Palme, R., Touma, C., Arias, N., Dominchin, M. F., Lepschy, M. Steroid extraction: get the best out of faecal samples. Wien Tierarz Monats. 100 (9-10), 238-246 (2013).
  18. Touma, C., Palme, R., Sachser, N. Analyzing corticosterone metabolites in fecal samples of mice: a noninvasive technique to monitor stress hormones. Horm Behav. 45 (1), 10-22 (2004).
  19. Touma, C., Sachser, N., Mostl, E., Palme, R. Effects of sex and time of day on metabolism and excretion of corticosterone in urine and feces of mice. Gen Comp Endocrinol. 130 (3), 267-278 (2003).
  20. Bert, B., Schmidt, N., Voigt, J. P., Fink, H., Rex, A. Evaluation of cage leaving behaviour in rats as a free choice paradigm. J Pharmacol Toxicol Methods. 68 (2), 240-249 (2013).
  21. Lister, R. G. Ethologically-based animal models of anxiety disorders. Pharmacol Ther. 46 (3), 321-340 (1990).
  22. Belzung, C., Berton, F. Further pharmacological validation of the BALB/c neophobia in the free exploratory paradigm as an animal model of trait anxiety. Behav Pharmacol. 8 (6-7), 541-548 (1997).
  23. Finlayson, K., Lampe, J. F., Hintze, S., Wurbel, H., Melotti, L. Facial indicators of positive emotions in rats. PLoS ONE. 11 (11), e0166446 (2016).
  24. Miller, A., Kitson, G., Skalkoyannis, B., Leach, M. The effect of isoflurane anaesthesia and buprenorphine on the mouse grimace scale and behaviour in CBA and DBA/2 mice. Appl Anim Behav Sci. 172, 58-62 (2015).
  25. Miller, A. L., Golledge, H. D., Leach, M. C. The influence of isoflurane anaesthesia on the rat grimace scale. PLoS ONE. 11 (11), e0166652 (2016).
  26. Deacon, R. Assessing burrowing, nest construction, and hoarding in mice. J Vis Exp. (59), e2607 (2012).
  27. Felton, L. M., Cunningham, C., Rankine, E. L., Waters, S., Boche, D., Perry, V. H. MCP-1 and murine prion disease: separation of early behavioural dysfunction from overt clinical disease. Neurobiol Dis. 20 (2), 283-295 (2005).
  28. Deacon, R. M., Croucher, A., Rawlins, J. N. Hippocampal cytotoxic lesion effects on species-typical behaviours in mice. Behav Brain Res. 132 (2), 203-213 (2002).
  29. Filali, M., Lalonde, R., Rivest, S. Subchronic memantine administration on spatial learning, exploratory activity, and nest-building in an APP/PS1 mouse model of Alzheimer's disease. Neuropharmacology. 60 (6), 930-936 (2011).
  30. Guenther, K., Deacon, R. M., Perry, V. H., Rawlins, J. N. Early behavioural changes in scrapie-affected mice and the influence of dapsone. Eur J Neurosci. 14 (2), 401-409 (2001).
  31. Deacon, R. M., Reisel, D., Perry, V. H., Nicholas, J., Rawlins, P. Hippocampal scrapie infection impairs operant DRL performance in mice. Behav Brain Res. 157 (1), 99-105 (2005).
  32. Jirkof, P., et al. Assessment of postsurgical distress and pain in laboratory mice by nest complexity scoring. Lab Anim. 47 (3), 153-161 (2013).
  33. Atanasov, N. A., Sargent, J. L., Parmigiani, J. P., Palme, R., Diggs, H. E. Characterization of train-induced vibration and its effect on fecal corticosterone metabolites in mice. J Am Assoc Lab Anim Sci. 54 (6), 737-744 (2015).
  34. Voigt, C. C., et al. Hormonal stress response of laboratory mice to conventional and minimally invasive bleeding techniques. Anim Welf. 22 (4), 449-455 (2013).
  35. Walker, M. K., et al. A less stressful alternative to oral gavage for pharmacological and toxicological studies in mice. Toxicol Appl Pharmacol. 260 (1), 65-69 (2012).
  36. Miyashita, T., et al. Social stress increases biopyrrins, oxidative metabolites of bilirubin, in mouse urine. Biochem Biophys Res Commun. 349 (2), 775-780 (2006).
  37. Bains, R. S., et al. Analysis of individual mouse activity in group housed animals of different inbred strains using a novel automated home cage analysis system. Front Behav Neurosci. 10 (106), (2016).
  38. Saibaba, P., Sales, G. D., Stodulski, G., Hau, J. Behaviour of rats in their home cages: daytime variations and effects of routine husbandry procedures analysed by time sampling techniques. Lab Anim. 30 (1), 13-21 (1996).

Tags

Atferd problemet 133 velferd velvære nød alvorlighetsgrad klassifisering alvorlighetsgrad vurdering fecal glukokortikoid metabolitter mus raffinement atferdsmessige test luksus atferd 3R anestesi Mouse grimase skala
Systematisk vurdering velvære i mus for prosedyrer som bruker General Anesthesia
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Hohlbaum, K., Bert, B., Dietze, S.,… More

Hohlbaum, K., Bert, B., Dietze, S., Palme, R., Fink, H., Thöne-Reineke, C. Systematic Assessment of Well-Being in Mice for Procedures Using General Anesthesia. J. Vis. Exp. (133), e57046, doi:10.3791/57046 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter