Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Environment
Click here for the English version

Environment

أثر تطبيق النفط الزعتر على الحمولة الميكروبية أثناء تجفيف اللحوم

Published: March 14, 2018 doi: 10.3791/57054
Automatic Translation
1, 2, 2, 1
1Department of Sustainable Technologies, Faculty of Tropical AgriSciences, Czech University of Life Sciences Prague, 2Department of Quality of Agricultural Products, Faculty of Agrobiology, Food and Natural Resources, Czech University of Life Sciences Prague

Summary

الكائنات الحية الدقيقة مثل الإشريكيّة القولونية التي تلوث منتجات اللحوم تسبب الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية. استخدام الزيوت الأساسية في عملية تجفيف اللحوم لم تدرس عميق. وهنا نقدم طريقة جديدة لتطبيق النفط الزعتر اللحوم أثناء التجفيف لتقليل الحمل الميكروبي في اللحوم المجففة.

Abstract

اللحوم هي وجبة عالية من بروتين المستخدمة في إعداد متشنج، وجبة غذائية شعبية، فيها بأهمية الحفاظ عليها والسلامة. لضمان سلامة الأغذية، وتمديد العمر الافتراضي للحوم ومنتجات اللحوم، استخدام المواد الحافظة الاصطناعية أو الطبيعية تم تطبيقها على عنصر التحكم والقضاء على البكتيريا المنقولة عن طريق الأغذية. ازداد اهتمام متزايد في تطبيق المواد المضافة إلى الأغذية الطبيعية للحوم. الكائنات الحية الدقيقة، مثل الإشريكيّة القولونية، تلوث اللحوم ومنتجات اللحوم، مما تسبب في الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية. ولذلك، من الضروري تحسين عملية حفظ اللحوم. ومع ذلك، لم تدرس عميق استخدام الزيوت الأساسية عندما يتم يجري المجففة اللحوم. وفي هذا الصدد، هناك فرصة لزيادة قيمة اللحوم المجففة والحد من مخاطر الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية عن طريق تطبيق الزيوت الأساسية أثناء عملية التجفيف. في هذا البروتوكول، نقدم طريقة جديدة لتطبيق الزعتر النفط (تيو) أثناء التجفيف، وعلى وجه التحديد في شكل بخار مباشرة في غرفة تجفيف اللحوم. للتقييم، ونحن نستخدم تركيز الحد الأدنى المثبطة (MIC) للكشف عن العدد من البكتيريا الضارة في العينات المعالجة مقارنة بعينات الخام. وتظهر النتائج الأولية أن هذا الأسلوب خيار قابلة للاستمرار والبديلة للمواد الحافظة الاصطناعية وأنه يقلل كثيرا من الحمل الميكروبي في اللحوم المجففة.

Introduction

وقد استخدمت التجفيف كطريقة تقليدية للحفاظ على الأطعمة منذ العصور القديمة. في الوقت الحاضر، هناك اهتمام متزايد بالتجفيف كوسيلة فعالة للغذاء الحفاظ على1،،من23. يتم استخدامه لتقديم مجموعة متنوعة من اللحوم المجهزة خصيصا. واحدة من الأكثر شهرة متشنج.

متشنج، واحدة من أقدم طرق حفظ اللحوم، يستند إلى المعالجة والتجفيف إلى انخفاض المياه النشاط، وبالتالي تمديد لها الصلاحية4. في الوقت الحاضر، متشنج كلحوم شُفي الحفاظ عليها لا تزال تحظى بشعبية كبيرة، حيث سلامة الغذاء والنكهة، والملمس ضرورية. يمكن استخدام إعداد متشنج لما يقرب من أي نوع من اللحوم، بما في ذلك لحم البقر ولحم الخنزير والدواجن، أو لعبة5، ويتطلب تقطيع اللحوم في شرائط العجاف والتجفيف. عادة، التنقيع اللحوم في التدخين أو حل علاج تستخدم جنبا إلى جنب مع التجفيف لإعطاء متشنج نكهة مميزة6.

على الرغم من اهتمام واسعة لتجفيف حقاً الحفاظ على الغذاء، احتمال تفشي الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية من كولاي من اللحوم المجففة سيئة حرج ويلزم التحكم. وهناك بعض الدراسات الإبلاغ عن تفشي الأمراض المعوية المنقولة عن طريق الأغذية خاصة مع O157:H7 كولاي ، يعزى إلى الحرارة عدم كفاية المعالجة أثناء التجفيف الرئيسية. حالات مشابهة حدثت حتى في إعداده تجارياً متشنج7،،من89. ليفين وآخرون. 10 اقترح أن تنتقل عن طريق الكائنات الدقيقة يمكن البقاء على قيد الحياة من ظروف التجفيف معتدلة (حوالي 60 درجة مئوية) المستخدمة من قبل المنتجين متشنج التجارية. كولاي O157:H7 حالات تفشي الأمراض المنقولة بالأغذية في منتصف التسعينات ونسبت إلى الأرض المجففة منتجات اللحوم6،11. من المثير للاهتمام، وفي جميع الحالات السابقة، الخطر الرئيسي هو الناجمة عن مسببات الأمراض البكتيرية المعترف بها كقابلة للتطبيق ولكن غير كولتورابل (فبنك). تحت مختلف الضغوط مثل التغيرات في درجة الحرارة أو المجاعة، يمكن إدخال الخلايا كولاي المعروفة باسم ال12،الدولة فبنك13دولة بعينها. الخلايا فبنك قد أحياء ثم العودة إلى خلايا كولتورابل بالتعرض لظروف مناسبة وبعد ذلك خطرا على صحة الإنسان بسبب تنتقل عن طريق تلوث14،15. وهذا يعني أنه إذا كان يتم استهلاك اللحوم فورا بعد تجفيف المنتج أنها آمنة. بيد في حالة تخزين غير كافية، مثل زيادة الرطوبة، هناك مخاطر عالية لإعادة تنشيط الكائنات الممرضة والنمو الجرثومي.

وإلى جانب أساليب التجفيف وماء مالح، هناك ارتفاع طلب من المستهلكين لاستخدام المنتجات الطبيعية كبديل للمواد المضافة لتحسين نوعية الغذاء16،17. كان هناك اهتمام خاص بتطبيق المواد المضافة إلى الأغذية الطبيعية للحوم بدلاً من المواد الحافظة الاصطناعية الكلاسيكية18،19،،من2021. على الرغم من أن هناك عدم وجود أدلة تجريبية كافية في استخدام الزيوت الأساسية عند تجفيف اللحوم، يوضح البحث المبكر في هذا المجال فعلا نتائج إيجابية22،23.

منذ العصور الوسطى، وقد اعترفت الناس "مجمعات النفط" (الأخلاقيات)25،24،تشراكتيريستيكس مضادات الميكروبات، ومبيدات الحشرات والطفيليات على26. الأخلاقيات اليوم جزء من واحدة من أهم مجموعة من المركبات الطبيعية النشطة بيولوجيا. بين الأخلاقيات المختلفة، ثيمول واحد من أكثر معروفة جيدا. وهو يتألف من أكثر من 85% من تيو23. يمنع هذا الفينول التدهور الجرثومية والكيميائية عند إضافتها للغذاء. بالإضافة إلى ذلك، يمكن تحسين خصائصه المضادة للبكتيريا في تركيبة مع سائر المواد الحافظة الطبيعية27،2،،من2829،30. في الوقت الحاضر، الزعتر (الغدة الصعترية الشائع)، قد اعترفت عشب الذي ينتمي إلى أسرة شفوية ، كعامل توابل، فضلا عن لحوم فعالة جداً حافظة31. دراسة أجرتها غارسيا-Díez وآخرون. 30 على منتجات اللحوم وجدت أن تيو عرض نمط تثبيط أوسع نطاقا ضد مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية عند مقارنتها بالزيوت الأساسية الأخرى. ولذلك، هناك فرصة لزيادة قيمة اللحوم المجففة والحد من مخاطر الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية عن طريق تطبيق الزيوت الأساسية أثناء عملية التجفيف.

في هذا البروتوكول، نقدم طريقة جديدة لتطبيق تيو أثناء تجفيف اللحوم، وعلى وجه التحديد باستخدام ذلك في شكل بخار مباشرة في التجفيف الدائرة. للتقييم، ونحن نستخدم هيئة التصنيع العسكري لتحديد عدم وجود البكتيريا المسببة للمرض في عينات المعالجة بالمقارنة مع الخام منها. وتظهر النتائج الأولية أن هذا الأسلوب بديل فعال للغاية للمواد الحافظة الاصطناعية وأن يقلل إلى حد كبير الحمل الميكروبي في اللحوم المجففة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1-إعداد اللحوم

  1. الحصول حقو قصيرة من لحم البقر (لحم البقر الطازج من العضلة ذات الرأسين الفخذية) من مخبزين محلية ونقلها إلى المختبر.
    ملاحظة: من المستحسن لنقل الخاصرة لحم البقر في درجة حرارة الغرفة (20-25 درجة مئوية)، لفترة لا تزيد عن 20 دقيقة في حقيبة مختومة المحكم.
  2. لتعقيم السطح الخارجي لعضلة لحم البقر، في سلامة الصفحي مجلس الوزراء، يغسل العضلات بالرش مع الإيثانول 70% (v/v) ل 10 s باستخدام زجاجة ضغط من 500 مل. تطبيق 0.025 ز الإيثانول كل 1 سم2 من سطح العضلات.
  3. إزالة السطح الخارجي للحم أسيبتيكالي بسكين لتجنب الإيثانول المتبقي في العضلات الداخلية. قم بإزالة حوالي 3 مم الداخلية العضلات للحفاظ على الاتساق العضلات السطحية.
  4. حزمة العضلات في كيس من بلاستيك مختومة ونقلها إلى ثلاجة.
  5. تخزن في العضلات عند-18 درجة مئوية لمدة يوم واحد. ثم ذوبان الجليد العضلات المجمدة في 4 درجات مئوية عن ح 6.
    ملاحظة: لذوبان الجليد، من المستحسن لنقل عضلة من المجمد إلى الثلاجة.
  6. في مجلس الوزراء سلامة الصفحي، شريحة كل العضلات إلى شرائح سميكة 0.5 سم مع قطع لحم. ثم، بسكين قطع عليه في صغيرة 5 × 2.5 سم2 عينات مستطيلة.
  7. مجموعة عينات اللحوم مستطيلة في أكياس بلاستيكية وتخزينها في الثلاجة عند-18 درجة مئوية لاستخدامها في وقت لاحق.

2-إعداد العدوى موحدة وإجراء التطعيم في خزانة سلامة الصفحي

  1. تعد العدوى موحدة (1.5 × 108 زيمبابوي/mL) من كولاي ATCC 25922 لتطعيم عينات اللحوم.
    1. لإعداد العدوى الأسهم، أولاً الاستغناء عن ثقافة البكتيرية المجففة بالتبريد (تسليم المورد) في أنبوب معقم 15 مل المملوء مسبقاً مع 10 مل من تعقيم مخزنة مولر هينتون مرق (بمهب). زراعة هذا التعليق عن 24 ساعة عند 37 درجة مئوية.
      1. إعداد الحل الأسهم البكتيرية كما يلي: يستغرق حوالي 0.1-0.2 مل من تعليق البكتيرية وتمييع في قنينة 20 مل مغلقة بسداده مطاطية مع غطاء ألومنيوم المملوء مسبقاً مع 15 مل بمهب معقمة. زراعة هذا التعليق عن 24 ساعة عند 37 درجة مئوية.
      2. تخزين داخل الثلاجة عند درجة 4 مئوية للتحضير للعدوى موحدة.
    2. من الحل الأسهم (راجع الخطوة 2.1.1) تأخذ القولونية ه حوالي 0.1-0.2 مل من تعليق البكتيرية وتمييع في بلاستيك 15 مل تعقيم الأنبوب المملوء مسبقاً مع 10 مل من تعقيم مخزنة مولر هينتون مرق (بمهب). احتضان الأنبوب في 37 درجة مئوية ح 24.
    3. لإعداد العدوى موحدة (1.5 × 108 زيمبابوي/mL)، إضافة كميات صغيرة من هذا التعليق في أنبوب معقم 15 مل المملوء مسبقاً مع 10 مل بمهب معقمة.
    4. دقة دوامة الخليط وقياس الكثافة البصرية (OD) 600 نانومتر ب الكثافة32.
    5. كرر الخطوات 2.1.3-2.1.4 حتى OD أعرب كما هو زيادة القيمة ماكفارلاند بواسطة 0.5 مقارنة بقيمة بمهب نظيفة.
  2. لإجراء التلقيح، بوضع عينات اللحوم مستطيلة في رقائق الألومنيوم مختلفة اثنين (20 سم × 30 سم)، واحد لعينات مراقبة والثانية لعينات اللحوم الملقحين.
    1. على رقائق الألومنيوم الثانية، تطعيم عينات اللحوم النيئة مستطيلة مع 800 ميليلتر من تعليق البكتيريا من سلالة المحدد (وهذا يتوافق مع 1.2 × 108 زيمبابوي كل عينة اللحوم) بتوزيع بالتساوي العدوى على السطح.
      1. "الماصة؛" 400 ميليلتر على جانب واحد من العينة ولطف انتشر استخدام الناشرة خلية عقيمة على السطح. والسماح لهم الجافة للحد الأدنى 10 تكرار نفس الإجراء لبقية التعليق على الجانب الآخر من العينة.

3-التجفيف والتطبيق تيو

  1. نقل كلا رقائق الألومنيوم التي تحتوي على عينات اللحوم مستطيلة من سلامة الصفحي مجلس الوزراء إلى المجفف: تغطية كل مع رقائق الألومنيوم، ثم قم بوضع العينات داخل المجفف.
  2. القيام بتجفيف في مختبر قياسية مجفف.
    ملاحظة: أولاً، يسخن الفرن إلى 55 درجة مئوية. هذا الإجراء يمكن أن تستمر لمدة 20 دقيقة.
    1. الجاف لعينات مراقبة ح 6 في 55 درجة مئوية، مع تجفيف قيم الرطوبة النسبية للهواء تتراوح بين 30-45 في المائة.
      ملاحظة: تختلف قيم الرطوبة النسبية لهواء التجفيف في الوقت المناسب تبعاً لمعدل تبخر السائل من اللحم.
  3. حساب حجم تيو المطبقة، والتعبير عن تركيز النفط كوحدة تخزين تيو كل مجلد مجفف (الهواء مل/لتر). على سبيل المثال، ينتج الجرعة من 1.5 مل تيو ل 53 (حجم المجفف) تركيز الهواء 0.028 مل/لتر. لتحديد هيئة التصنيع العسكري تيو كولاي، استخدام جرعات من 1.5 مل (الهواء 0.028 مل/لتر)، 1 مل (الهواء 0.019 مل/لتر)، ومل 0.75 (الهواء 0.014 مل/لتر).
  4. قبل التجفيف، لتطبيق تيو نقع الأبخرة (مع ثيمول كما المجمع الرئيسي 79%)، ورق الترشيح (12 سم × 20 سم) مع جرعة 1.5 مل تيو والمكان إلى المجفف أمام المروحة.
  5. الجاف للحوم تيو تعامل العينات باستخدام نفس الإجراء فيما يتعلق بعينات مراقبة (الخطوات 3.1 و 3.2).
    ملاحظة: بعد إزالة نهايات عملية التجفيف وعينات، التبديل في الفرن ح 3 عند 80 درجة مئوية وتعيين إشارة صمام الهواء لتهوية بنسبة 100% من أجل تنظيف مخلفات الزيوت من الفرن.

4-العوامل الجرثومية التحليل

  1. قبل تلقيح اللحوم مع البكتيريا، فحص عينات اللحوم لأي غش. مظهر الوحل والكشف عن أي رائحة لاذعة وقوية إرشادية لتلف اللحوم. إذا كان النسيج يشعر غروي، قد بدأت البكتيريا تتكاثر على سطح اللحم.
  2. لتقييم كفاءة التطعيم، اختبار العينات الملقحين الخام لوجود كولاي ATCC 25922 ومقارنتها مع عينات مراقبة عدم تلقيح قبل عملية التجفيف. لهذا الغرض:
    1. تغسل كل عينة اللحوم (2 مراقبة العينات وعينات الملقحين 2). تعليق كل عينة اللحوم في قارورة معقمة ماء ببتون مخزنة (8.5 غرام من كلوريد الصوديوم، 1 غرام ببتون، وأقراص 5 من الفوسفات مخزنة المالحة، وز 1 "بولي سوربات" 80 في 1 لتر الماء) في نسبة 01:10 (w/v) مع مجموعة الأس الهيدروجيني من 7-7.3. اهتز باستخدام شاكر 140 لفة في الدقيقة لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
      ملاحظة: يغسل فورا بعد إجراء التطعيم.
    2. تقييم العدد من البكتيريا بمعدل 6 × 6 إسقاط لوحة إجراء تلخيص تشن، والتصنيف، واروين33 على لوحة العد أجار (PCA) وماكونكي أجار (MCA).
      ملاحظة: الأسلوب قطره 6 × 6 يستخدم أسلوب مرق التخفيف الجزئي لإعداد الوقت تخفيف المسلسل من العينة يتم التحقيق مع ماصة متعددة القنوات، وهو أقل من العمالة المكثفة وأكثر اقتصادا بالمقارنة مع الطريقة التقليدية33، 34.
    3. زراعة تخفيف العينة التسلسلي الوقت قبل الإجراء طبق قطره 6 × 6 لتقييم كولاي.
      ملاحظة: خاصة بالنسبة للأسلوب قطره × 6 6، لزراعة استخدام ستة 5 ميليلتر قطرات، من ستة تحديد تخفيف العينة يتم التحقيق مع ماصة متعددة القنوات. على أطباق بيتري المجففة على نحو ملائم، القطرات استيعاب بسرعة إلى أجار وزرع بهذه الطريقة مريحة جداً ويمكن التحكم فيها34.
    4. احتضان أطباق بيتري في 37 درجة مئوية ح 24. وبعد فترة زراعة، تقييم عدد المستعمرات كولاي في أطباق بتري (زيمبابوي ز-1 من اللحوم المجففة) كما هو موضح في القسم 5.
  3. بعد التجفيف، أخذ العينات المجففة الملقحين اثنين ومقارنتها مع عينتي المجففة التحكم غير تلقيح لصالحه كولاي، على التوالي. لتحديد وجود أو عدم وجود كولاي من هذه أمبليس sأربعة، الاضطلاع بعملية تخصيب اليورانيوم قبل كل عينة اللحوم على النحو التالي:
    1. تعليق كل عينة اللحوم في قارورة معقمة ماء ببتون مخزنة بشكل مؤقت (انظر الخطوة 4.2.1) ويهز باستخدام شاكر 140 لفة في الدقيقة لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ثم احتضان كل قارورة في 37 درجة مئوية خلال ح 6 لتخصيب اليورانيوم قبل.
    2. للتقييم وزراعة البكتيريا، اتبع نفس الإجراء كما هو موضح في الخطوات 4-2-2-4-2-4.

5-استعراض النتائج

  1. بعد اكتمال الحضانة، إزالة أطباق بيتري من الحاضنة واستعراض النتائج على النحو التالي:
    1. دراسة لتقييم إجمالي عدد المستعمرات، اللوحات لوجود البكتيريا الهوائية الوسطى في محكمة التحكيم الدائمة (البقع البيضاء) ونموذجية كولاي المستعمرات (أحمر إلى وردي داكن) على هيئة مكافحة الاحتكارات. إذا تغيب مسببات المرض، يقدم كلا أجارس أي نمو.
    2. عد المستعمرات، وتحديد مقدار كولاي (زيمبابوي/غرام-1 من اللحوم المجففة) الحالية.
      ملاحظة: حساب عدد المستعمرات (N) في تخفيف متتالية اثنين تحتوي على المستعمرات 30 أو أقل كل قطره (الشكل 1). ويتحدد عدد N من زيمبابوي/غرام-1 من اللحوم المجففة كالتالي35
      Equation
      فيها، ج هو مجموع المستعمرات في جميع قطرات عدها، الخامس هو حجم تخفيف العينة المستخدمة كل قطره (هنا، مل 0.05)، ن1 هو عدد قطرات المستخدمة في إضعاف الأول، ن2 هو عدد قطرات المستخدمة في تخفيف الثانية، ويمثل د التخفيف منه تم القبض على التهم الأولى.
  2. تحليل البيانات الدقيقة، بتحويل عدد المستعمرات تسجيل زيمبابوي ز-1 وإخضاعها لتحليل التباين (ANOVA) للآثار الرئيسية للعلاج36.
    1. إجراء اختبار "توكي صادقة فرق كبير" (HSD توكي) لعدة مقارنات يعني36 وتحديد الفوارق الكبيرة بين العلاجات.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

ونحن قد أولاً سبق أن وضعت هذا الأسلوب باستخدام توابل النفط (أو) لتعزيز سلامة الأغذية، وزيادة قيمة اللحوم المجففة. وبصفة عامة، أظهرت التجارب السابقة أن كولاي يذهب إلى الدولة فبنك خلال التجفيف كاستراتيجية للبقاء على قيد الحياة. ويتضح من حقيقة أن هناك لا البكتيريا كولتورابل بعد الانتهاء من تجفيف22. ولذلك، عملية تخصيب اليورانيوم قبل ح 6 كان ضروريا للسماح بعملية عد الأصوات من السلالة. في فترات أقصر، إعداد الخلايا المتنامية كانت لا تزال منخفضة جداً. ونتيجة لذلك، يتم عرض النتائج بعد عملية تخصيب اليورانيوم قبل واستبعاد الخام تلقيح العينات التي تشير إلى مراقبة كفاءة التطعيم (انظر الجدول 1). وعموما، لم يكن اللازمة لاختبار الجرعة تيو 3 مل (الهواء 0.057 مل/لتر) منذ في أعمالنا السابقة دراسة22 كولاي لم يتم بعد العلاج أو وأنه جرى تقييم للنكهة مكثفة جداً من قبل المستهلكين. ولذلك، تم اختبار تركيزات أقل من تيو لتعريف هيئة التصنيع العسكري ضد كولاي.

ويعرض الجدول 1 سلوك كولاي في عينات لحوم البقر المجفف في 55 درجة مئوية ح 6، وتعرض لعملية تخصيب اليورانيوم قبل لمحكمة التحكيم الدائمة واتحاد الماليزيين الصينيين. محكمة التحكيم الدائمة يظهر نمو الوسطى البكتيريا الهوائية مثل Pseudomonas spp. و كولاي. مولودية الجزائر يحدد وجود كولاي. الملقحين عينات الخام بعد التطعيم (عنصر التحكم لكفاءة التلقيح) بلغ في المتوسط عدد سكانها سجل 5.31 زيمبابوي ز-1 من البكتيريا، لمحكمة التحكيم الدائمة واتحاد الماليزيين الصينيين، مما يعني وجود أي تلوث في عينات اللحوم في البداية الإجراء. وبعد خلافات كبيرة، والتجفيف (ف <0.05) لوحظت بين عينات غير المعالجة (نويو) ومل 0.75، 1 مل وعينات تعامل تيو 1.5 مل لكلا أجارس، على التوالي. وكشفت هذه النتيجة أداء ناجح لمعاملة تيو، الحد من التهم كولاي مع زيادة الجرعة من الضروري النفط. كذلك، التهم في كلتا أجارس متشابهة جداً، التي تشير إلى أن بعد تخصيب اليورانيوم قبل تقديم العينات كولاي وعدم التلوث بالبكتيريا الأخرى. إلى حد كبير، ألغى كولاي تحت العلاج تيو مع الجرعة 1.5 مل. نتيجة لذلك تم الكشف عن تركيز تيو 0.028 مل/لتر هواء كهيئة التصنيع العسكري المناسب ضد كولاي بسبب انخفاض كبير في فبنك كولاي (ف < 0.05) بعد ح 6 للتجفيف في 55 درجة مئوية. لوحظت اختلافات إحصائية عند إجراء مقارنات يعني متعددة بين جرعة تيو ونوع العينة لمحكمة التحكيم الدائمة و MCA (انظر الجدول 1؛ HSD توكي، ف < 0.05).

Figure 1
رقم 1: مظاهرة لإحصاء عدد المستعمرات (ن) في تخفيف متتالية اثنين تحتوي على المستعمرات 30 أو أقل كل قطره ماء- ينتج هذا المثال بعد الأطباق الحضانة "بيتري محكمة التحكيم الدائمة" في 37 درجة مئوية ح 24. باستخدام طريقة زراعة قطره 6 × 6، زرعت ستة 5 ميليلتر-قطرات من تخفيف المحدد ستة العينة يتم التحقيق مع ماصة متعددة القنوات. على أطباق بيتري المجففة على النحو المناسب، في هذه الحالة محكمة التحكيم الدائمة، يتم تعداد المستعمرات نمت (البقع البيضاء) من هما تخفيف متتالية (10-4 و 10-5)، التي تحتوي على المستعمرات 30 أو أقل كل قطره ماء. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

نوع العينة
نماذج المعالجة عينات غير المعالجة
جرعة من تيو PE 6H_PCA PE 6H_MCA Raw_PCA Raw_MCA
نويو 3.929 (0.44)د 3.833 (0.40)د 5.474 (0.12) 5.516 (0.05)
0.75 مل 2.493 (0.11)ج 2.516 (0.22)ج 5.370 (0.03) 5.452 (0.24)
1 مل 1.574 (1.05)ب 1.579 (1.06)ب 5.129 (0.35) 5.123 (0.40)
1.5 مل ND ND 5.298 (0.09) 5.166 (0.33)

الجدول 1: الوسائل (الانحراف المعياري) لسلوك كولاي ATCC 25922 (سجل زيمبابوي ز-1) في عينات لحوم البقر المجفف في 55 درجة مئوية ح 6 في مجفف تقليدية تتعرض لتخصيب اليورانيوم قبل (PE) ح 6 ومراقبة كفاءة التطعيم (RAW) لكل لوحة العد أجار (PCA) وماكونكي أجار (MCA). رسائل مختلفة ("أ"، "ب"، "ج'،"d") في نفس العمود تمثل المجموعات الإحصائية لوسائل الفئة وتشير إلى اختلافات كبيرة (ف < 0.05). جرعة من تيو، جرعة من زيت الزعتر الأساسي؛ نويو، ليس من الضروري النفط؛ الثانية، ولم يتم الكشف عن. ذكرت القيم ف هي من المقارنات يعني متعددة بين جرعة تيو ونوع العينة لمحكمة التحكيم الدائمة و MCA (HSD توكي، ف < 0.05 يدل دلالة إحصائية).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

وقد أظهرت الأبحاث السابقة أن الكائنات الدقيقة التي تسبب الأمراض المنقولة بالأغذية البقاء التجفيف10. ولذلك من الضروري تطبيق المواد الحافظة قبل التجفيف لضمان سلامة الأغذية. في هذه الدراسة، علينا أن نركز على استخدام تيو. والسبب ذات شقين: أولاً، هناك طلب كبير من المستهلكين لاستخدام المنتجات الطبيعية كإضافات بديلة لتحسين نوعية الغذاء16؛ ثانيا، أظهرت دراسة سابقة لنتائج إيجابية بعد استخدام أو خلال اللحم التجفيف العملية22. ومن ثم، تم تمديد الأسلوب من تطبيق أو أثناء تجفيف اللحوم باستخدام الزيوت الأساسية الأخرى لمراقبة الحمولة الميكروبية.

وفي دراسة سابقة، اختبرناها أو تحسين سلامة الأغذية، وزيادة قيمة اللحوم المجففة. وأظهرت النتائج السابقة أن كولاي قد أعاقت بنجاح باستخدام أو في اللحوم التجفيف، نظراً لتناقص كولاي التهم قابلة للاستمرار بعد ح 6 للتجفيف في 55 درجة مئوية مع 1.5 مل (الهواء 0.028 مل/لتر) من أو22. لهذه الدراسة، قمنا بتنفيذ الأسلوب مع تيو. وثبت أن من الممكن باستخدام هذا الأسلوب لكشف وتعداد، والحد من فبنك كولاي في عينات اللحوم المجففة. ومع ذلك، قد استخدام تيو القيود المفروضة بسبب خصائص عداها نظراً لأنه يؤثر على طعم، ورائحة، ونسيج من منتجات اللحوم المجففة. نظراً لهذا السبب، من المهم لوضع المؤشرات اللازمة للحيلولة دون نمو كولاي ، خاصة البكتيريا المسببة للأمراض التي تسبب الأمراض المنقولة بالأغذية.

وفي كلتا الحالتين، تم تخفيض كولاي تحت العلاج أويو وتيو بجرعة 1.5 مل. نتيجة لكل من الدراستين، تركيز الهواء 0.028 مل/لتر من أو وتيو على التوالي، ذكر كهيئة التصنيع العسكري ضد كولاي سبب انخفاضا كبيرا في التهم الموجهة إليه من فبنك كولاي (ف < 0.05) بعد ح 6 للتجفيف في 55 درجة مئوية. وتظهر النتائج في الجدول 1 أن في عينات تعامل مع 1.5 مل تيو، تمت إزالة كولاي . وفي هذا الصدد، فإنه ليس ضروريا لاختبار الجرعة من 3 مل (الهواء 0.057 مل/لتر) من تيو. وعلاوة على ذلك، أظهرت دراسة سابقة أن البكتيريا تعامل مع الجرعة من 3 مل أو لم يتم الكشف عنه بعد العلاج الضروري النفط22. ولذلك، استخدمت جرعات أقل من تيو في هذا البروتوكول. هذا القضاء كولاي يرتبط بحقيقة أن تيو يحتوي على ثيمول، ونفط أساسية فعالة جداً مجمع ضد نشاط الجراثيم. وخاصة أنها الغالبة ومعظمها معترف بها المادة الكيميائية المركبة ضد سلالات من37، كولاي38.

وقد تم توحيد هذا البروتوكول أساسا الشاشة فبنك كولاي استخدام قبل تخصيب عينات اللحوم المجففة ح 6 للسماح بعملية عد الأصوات للسلالة (والذي ضروري لأنه كان هناك لا البكتيريا كولتورابل بعد الانتهاء من تجفيف). هذا البروتوكول محتملة يمكن أن تتكيف مع كشف الأخرى المسببة للأمراض المنقولة بالأغذية، مثل السالمونيلا الملهبة و الليستريه المستوحدة في منتجات اللحوم المجففة، ولكن هناك حاجة إلى إجراء المزيد من البحوث في هذا المجال.

التحقيقات التي تتعامل مع مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية هي حيوية للغاية وتنطوي على عملية متعددة الخطوات التي قد تختلف وفقا للحالة المحددة والظروف البيئة المحلية. هذه التحقيقات مهمة لأنها تعزز استخدام المضافات الطبيعية في تقنيات حفظ الأغذية المختلفة. وبقدر ما نعلم، هذه الدراسات هي الأول من تكشف عن أسلوب رواية من تطبيق الزيوت الأساسية خلال اللحم التجفيف، وعلى وجه التحديد باستخدام لهم في شكل بخار مباشرة في غرفة التجفيف. وتظهر النتائج الإيجابية أن هذا الأسلوب خيار فعالة بشكل ملحوظ للمواد الاصطناعية المضافة وأنه يقلل إلى حد كبير من النمو الميكروبي في اللحوم المجففة. للبحث في المستقبل، ينصح الجرعة الأمثل للتطبيق في تركيبة مع الزيوت الأساسية الأخرى و/أو الحفاظ على أساليب أخرى بغية تقييم تأثير مضادات الميكروبات تلك التآزر.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgments

هذا العمل كان مدعوم من وكالة المنح الداخلية من "كلية أجريسسيينسيس المدارية"، (رقم المشروع: 20175013) و 20182023 سيجا المنح على حد سواء، من "الجامعة التشيكية لعلوم الحياة".

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Meat cutter Kalorik KP 3530 from Miami Gardens, FL, USA
Laminar safety cabinet Faster s.r.l from Italy
Squeeze bottle of 500 mL Merci 632 524 325 025 from CZ
Standard laboratory drier UFE 400 Memmert DE 66812464 from Germany
Incubator BT 120 N/A from CZ
Refrigerator and Freezer Bosch KGN34VW20G from DE
Densitometer Biosan 220 000 050 122 Latvia; supplier Merci, CZ
Escherichia coli ATCC 25922 Oxoid CL7050 from CZ
Vortex Chromservis 22008013 from CZ
Sterilized plastic tubes 15 mL Gama 331 000 020 115 from CZ, supplier Merci
20 mL injection vial Healthy vial hvft169 from China
20 mm sterile butyl rubber stopper Merci 22008013 from CZ
20 mm aluminum cap Healthy vial N/A from China
Thyme essential oil Sigma Aldrich W306509 from St Louis, MO, USA
Mueller Hinton Broth Oxoid CM0337 from CZ
NaCl Penta 16610-31000 from CZ
Peptone Oxoid LP0034 from CZ
Phosphate-buffered saline Sigma Aldrich P4417 from CZ
Polysorbate 80 (Tween 80) Roth T 13502 from DE, supplier P-lab
Shaker SHO-1D Verkon DH.WSR04020 from CZ,  10 - 300 rpm. 350 x 350 mm with a platform for flasks
Ethanol 70% Bioferm N/A from CZ
MacConkey Agar Oxoid CM007 from CZ
Plate Count Agar Oxoid CM0325 from CZ
Filter paper Merci 480 622 080 040 from CZ
Erlenmeyer flasks 250 mL Simax 610 002 122 636 from CZ; supplier Merci CZ
Multichannel pipette Socorex S852820 from Switzerland; supplier P lab, CZ
Microtiter plate Gamma V400916 CZ
Microlitre pipette 100-1000 μL Eppendorf 333 120 000 062 from Germany; supplier Merci, CZ

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Eklund, M. W., Peterson, M. E., Poysky, F. T., Paranjpye, R. N., Pelroy, G. A. Control of bacterial pathogens during processing of cold-smoked and dried salmon strips. J. Food Prot. 67 (2), 347-351 (2004).
  2. Mahmoud, B. S. M., et al. Preservative effect of combined treatment with electrolyzed NaCl solutions and essential oil compounds on carp fillets during convectional air-drying. Int. J. Food Microbiol. 106 (3), 331-337 (2006).
  3. Rahman, M. S., Guizani, N., Al-Ruzeiki, M. H., Al Khalasi, A. S. Microflora Changes in Tuna Mince During Convection Air Drying. Dry. Technol. 18 (10), 2369-2379 (2000).
  4. Faith, N. G., et al. Viability of Escherichia coli O157: H7 in ground and formed beef jerky prepared at levels of 5 and 20% fat and dried at 52, 57, 63, or 68 C in a home-style dehydrator. Int. J. Food Microbiol. 41 (3), 213-221 (1998).
  5. Hierro, E., De La Hoz, L., Ordóñez, J. A. Headspace volatile compounds from salted and occasionally smoked dried meats (cecinas) as affected by animal species. Food Chem. 85 (4), 649-657 (2004).
  6. Nummer, B. A., et al. Effects of Preparation Methods on the Microbiological Safety of Home-Dried Meat Jerky. J. Food Prot. 67 (10), 2337-2341 (2004).
  7. Greig, J. D., Ravel, A. Analysis of foodborne outbreak data reported internationally for source attribution. Int. J. Food Microbiol. 130 (2), 77-87 (2009).
  8. Eidson, M., Sewell, C. M., Graves, G., Olson, R. Beef jerky gastroenteritis outbreaks. J. Environ. Health. 62 (6), 9-13 (2000).
  9. Allen, K., Cornforth, D., Whittier, D., Vasavada, M., Nummer, B. Evaluation of high humidity and wet marinade methods for pasteurization of jerky. J. Food Sci. 72 (7), (2007).
  10. Levine, P., Rose, B., Green, S., Ransom, G., Hill, W. Pathogen testing of ready-to-eat meat and poultry products collected at federally inspected establishments in the United States, 1990 to 1999. J. Food Prot. 64 (8), 1188-1193 (1990).
  11. Keene, W. E., et al. An outbreak of Escherichia coli O157:H7 infections traced to jerky made from deer meat. JAMA. 277 (15), 1229-1231 (1997).
  12. Oliver, J. D. The viable but nonculturable state in bacteria. J. Microbiol. 43, 93-100 (2005).
  13. Oliver, J. D. Recent findings on the viable but nonculturable state in pathogenic bacteria. FEMS Microbiol. Rev. 34 (4), 415-425 (2010).
  14. Khamisse, E., Firmesse, O., Christieans, S., Chassaing, D., Carpentier, B. Impact of cleaning and disinfection on the non-culturable and culturable bacterial loads of food-contact surfaces at a beef processing plant. Int. J. Food Microbiol. 158 (2), 163-168 (2012).
  15. Li, L., Mendis, N., Trigui, H., Oliver, J. D., Faucher, S. P. The importance of the viable but non-culturable state in human bacterial pathogens. Front. Microbiol. 5, 258 (2014).
  16. Hernández, H., Claramount, D., Kučerová, I., Banout, J. The effects of modified blanching and oregano essential oil on drying kinetics and sensory attributes of dried meat. J. Food Process. Preserv. , (2016).
  17. García-Díez, J., et al. The Impact of Essential Oils on Consumer Acceptance of Chouriço de vinho - A Dry-Cured Sausage Made from Wine-Marinated Meat - Assessed by the Hedonic Scale, JAR Intensity Scale and Consumers' "Will to Consume and Purchase.". J. Food Process. Preserv. 41 (4), (2017).
  18. Govaris, A., Solomakos, N., Pexara, A., Chatzopoulou, P. S. The antimicrobial effect of oregano essential oil, nisin and their combination against Salmonella Enteritidis in minced sheep meat during refrigerated storage. Int. J. Food Microbiol. 137 (2-3), 175-180 (2010).
  19. Holley, R. A., Patel, D. Improvement in shelf-life and safety of perishable foods by plant essential oils and smoke antimicrobials. Food Microbiol. 22 (4), 273-292 (2005).
  20. Petrou, S., Tsiraki, M., Giatrakou, V., Savvaidis, I. N. Chitosan dipping or oregano oil treatments, singly or combined on modified atmosphere packaged chicken breast meat. Int. J. Food Microbiol. 156 (3), 264-271 (2012).
  21. Ballester-costa, C., Sendra, E., Viuda-martos, M. Assessment of Antioxidant and Antibacterial Properties on Meat Homogenates of Essential Oils Obtained from Four Thymus Species Achieved from Organic Growth. Foods. 6 (8), 59 (2017).
  22. Hernández, H., et al. The effect of oregano essential oil on microbial load and sensory attributes of dried meat. J. Sci. Food Agric. 97 (1), 82-87 (2017).
  23. García-Díez, J., Alheiro, J., Falco, V., Fraqueza, M. J., Patarata, L. Chemical characterization and antimicrobial properties of herbs and spices essential oils against pathogens and spoilage bacteria associated to dry-cured meat products. J. Essent. Oil Res. 29 (2), 117-125 (2017).
  24. Cavanagh, H. M. A. Antifungal Activity of the Volatile Phase of Essential Oils: A Brief Review. Nat. Prod. Commun. 2 (12), 1297-1302 (2007).
  25. Tajkarimi, M. M., Ibrahim, S. A., Cliver, D. O. Antimicrobial herb and spice compounds in food. Food Control. 21 (9), 1199-1218 (2010).
  26. Nedorostova, L., Kloucek, P., Kokoska, L., Stolcova, M., Pulkrabek, J. Antimicrobial properties of selected essential oils in vapour phase against foodborne bacteria. Food Control. 20 (2), 157-160 (2009).
  27. Burt, S. Essential oils: Their antibacterial properties and potential applications in foods - A review. Int. J. Food Microbiol. 94 (3), 223-253 (2004).
  28. Ramanathan, L., Das, N. Studies on the control of lipid oxidation in ground fish by some polyphenolic natural products. J. Agric. Food Chem. 40 (1), 17-21 (1992).
  29. Yamazaki, K., Yamamoto, T., Kawai, Y., Inoue, N. Enhancement of antilisterial activity of essential oil constituents by nisin and diglycerol fatty acid ester. Food Microbiol. 21 (3), 283-289 (2004).
  30. García-Díez, J., Alheiro, J., Falco, V., Fraqueza, M. J., Patarata, L. Synergistic activity of essential oils from herbs and spices used on meat products against food borne pathogens. Nat. Prod. Commun. 12 (2), 281-286 (2017).
  31. Hussein Hamdy Roby, M., Atef Sarhan, M., Abdel-Hamed Selim, K., Ibrahim Khalel, K. Evaluation of antioxidant activity, total phenols and phenolic compounds in thyme (Thymus vulgaris L.), sage (Salvia officinalis L.), and marjoram (Origanum majorana L.) extracts. Ind. Crops Prod. 43, 827-831 (2013).
  32. Gouveia, A. R., et al. The Antimicrobial Effect of Essential Oils Against Listeria monocytogenes in Sous vide Cook-Chill Beef during Storage. J. Food Process. Preserv. 41 (4), (2017).
  33. Chen, C., Nace, G., Irwin, P. A 6 x 6 drop plate method for simultaneous colony counting and MPN enumeration of Campylobacter jejuni, Listeria monocytogenes, and Escherichia coli. J. Microbiol. Methods. 55 (2), 475-479 (2003).
  34. Herigstad, B., Hamilton, M., Heersink, J. How to optimize the drop plate method for enumerating bacteria. J. Microbiol. Methods. 44 (2), 121-129 (2001).
  35. Greenwood, M., Roberts, D. Practical food microbiology. , Blackwell Pub. Available from: https://drive.google.com/file/d/0BzyVOLllJ0B1YmlEemZ5M1RZekU/view?ts=590d8019 (2003).
  36. Vaughan, G. M., Corballis, M. C. Beyond tests of significance: Estimating strength of effects in selected ANOVA designs. Am. Psychol. Assoc. 72 (3), Available from: http://dx.doi.org/10.1037/h0027878 204-213 (1969).
  37. Smith-Palmer, A., Stewart, J., Fyfe, L. Antimicrobial properties of plant essential oils and essences against five important food-borne pathogens. Lett. Appl. Microbiol. 26 (2), 118-122 (1998).
  38. Burt, S. a, Reinders, R. D. Antibacterial activity of selected plant essential oils against Escherichia coli O157:H7. Lett. Appl. Microbiol. 36 (3), 162-167 (2003).

Tags

العلوم البيئية، المسألة 133، الزعتر النفط، حافظة طبيعية، تجفيف اللحوم، وحفظ اللحوم، والحمولة الميكروبية، الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية، الإشريكيّة القولونية
أثر تطبيق النفط الزعتر على الحمولة الميكروبية أثناء تجفيف اللحوم
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Hernández, H.,… More

Hernández, H., Fraňková, A., Klouček, P., Banout, J. The Effect of the Application of Thyme Essential Oil on Microbial Load During Meat Drying. J. Vis. Exp. (133), e57054, doi:10.3791/57054 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter