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Medicine

मन्या ऊरु पल्स वेव वेग को मापने (Cf-PWV) धमनी की जकड़न का मूल्यांकन करने के लिए

Published: May 3, 2018 doi: 10.3791/57083

Summary

इस प्रोटोकॉल एक विधि का वर्णन मन्या-ऊरु पल्स वेव वेग की माप के मानकीकरण धमनी कठोरता का मूल्यांकन करने के लिए.

Abstract

बुजुर्गों के लिए, धमनी stiffening उम्र बढ़ने के मूल्यांकन के लिए एक अच्छा मार्कर है और यह अनुशंसा की जाती है कि धमनी की जकड़न ऊरु पल्स वेव वेग (cf-PWV) के लिए मन्या की माप द्वारा इनवेसिव निर्धारित किया जा (वर्ग मैं; तर प्रमाणे एक). साहित्य में, अनेक समुदाय आधारित या रोग-विशिष्ट अध्ययनों ने बताया है कि उच्चतर cf-PWV हृदय जोखिम में वृद्धि के साथ जुड़ा हुआ है । यहां, हम cf-PWV के साथ धमनी कठोरता का मूल्यांकन करने के लिए रणनीतियों पर चर्चा । अच्छी तरह से परिभाषित यहां विस्तृत चरणों के बाद, उदा, उचित स्थिति ऑपरेटर, दूरी माप, और tonometer स्थिति, हम एक मानक cf प्राप्त करेंगे-PWV मूल्य धमनी कठोरता का मूल्यांकन करने के लिए । इस पत्र में, एक विस्तृत stepwise विधि एक गैर इनवेसिव tonometry-आधारित डिवाइस का उपयोग कर एक अच्छी गुणवत्ता PWV और पल्स वेव विश्लेषण (PWA) रिकॉर्ड करने के लिए चर्चा की जाएगी ।

Introduction

धमनी stiffening संवहनी एजिंग मूल्यांकन1,2के लिए एक अच्छा मार्कर है । धमनी stiffening की माप परंपरागत रूप से एक पल्स वेव वेग (PWV) पद्धति है कि धमनी की जकड़न1,3,4,5के एक महत्वपूर्ण और विश्वसनीय उपाय है का उपयोग कर आयोजित किया जाता है । विशेष रूप से, PWV एक विशिष्ट धमनी खंड की कठोरता का प्रतिनिधित्व करता है । पल्स वेव एक विशिष्ट क्षेत्र में धमनी वाहिकाओं के माध्यम से फैलता है, और इसकी गति व्युत्क्रम है दीवार ही6के viscoelastic गुणों से संबंधित है । धमनी stiffening के साथ PWV वैल्यू बढ़ जाती है ।

मन्या-ऊरु PWV (cf-PWV) और बाहु-टखने PWV (ba-PWV) 2 सबसे अक्सर लागू PWV माप रहे हैं. वे व्यापक रूप से नैदानिक अभ्यास में उपयोग किया जाता है, जहां cf-PWV पश्चिमी देशों में लोकप्रिय है और बीए-PWV एशियाई देशों में लोकप्रिय है । 7 , 8. वास्तव में, cf-PWV को धमनी की जकड़न1के ' स्वर्ण-मानक ' मापन के रूप में माना गया है । cf-PWV के लिए, यह पूरे महाधमनी के लिए PWV के प्रतिनिधि के रूप में लिया जाता है । इसके अलावा, ba-PWV के लिए, वहाँ कोई सच है धमनी मार्ग माप साइटों को जोड़ने (टखने के लिए बाहु). अनुमानित बा-PWV मध्य और परिधीय धमनी प्रणालीकी संपूर्णता के लिए PWV का प्रतिनिधित्व करती है. पिछले एक अध्ययन में बताया गया है कि cf-PWV बीए से बेहतर है स्पर्शोन्मुख ग्रस्त लक्ष्य अंग क्षति (टॉड) के साथ संघों में PWV10 (चित्रा 1) ।

एक विशिष्ट tonometer से सुसज्जित क्षेत्रीय जकड़न के लिए गैर इनवेसिव उपकरणों तेजी से ऊरु खंड1के लिए मन्या की जकड़न को मापने के लिए इस्तेमाल किया जा रहा है. cf-PWV माप में, इस डिवाइस और एक handheld tonometer उच्च संकल्प डिजिटल तरंग छवियों और विशिष्ट PWV मूल्यों (चित्रा 2) रिकॉर्ड कर सकते हैं कि कंप्यूटर पर एक स्थिर तरंग बना. इन सभी माप मानकीकृत करने की जरूरत है । यहाँ, हम एक वास्तविक दुनिया की स्थापना में इस गैर इनवेसिव tonometry-आधारित डिवाइस के साथ एक अच्छी गुणवत्ता cf-PWV रिकॉर्ड करने के लिए कैसे दिखा.

Framingham जोखिम स्कोर और स्कोर जोखिम चार्ट के रूप में कुछ स्थापित हृदय जोखिम पूर्वानुमान मॉडल मुख्य रूप से गणना कर रहे हैं और पारंपरिक जोखिम कारकों11,12द्वारा क्रमबद्ध । हालांकि, कुछ उपंयास स्तरीकरण जोखिम में सुधार करने के लिए जोखिम मूल्यांकन मॉडल में जोड़ा जाना चाहिए13। साहित्य में, धमनी stiffening पारंपरिक जोखिम कारकों और नैदानिक हृदय घटनाओं के बीच एक मध्यवर्ती राज्य के रूप में माना जाता है14. इस प्रकार, cf-PWV जोखिम मूल्यांकन मॉडल में जोड़ने जोखिम के लिए एक उपकरण हो सकता है स्तरीकरण15,16.

यहाँ, हम एक पद्धति योजना प्रतिभागियों ' cf-PWV, PWA के साथ, धमनी stiffening आकलन के लिए एक मानक प्रोटोकॉल स्थापित करने के लिए का आकलन करने के लिए उत्पन्न करते हैं ।

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Protocol

इस प्रोटोकॉल को शंघाई दसवें पीपुल्स अस्पताल की एथिक्स कमेटी ने मंजूरी दी थी.

1. प्रतिभागियों की भर्ती

  1. वयस्कों को मॉडरेट हार्ट रेट (४० < HR < १६०) के साथ शामिल करें ।
  2. निंन बहिष्करण मापदंड का उपयोग करें ।
    1. गुर्दे डायलिसिस या किसी भी अन्य परिधीय arteriovenous नालव्रण के लिए आंतरिक arteriovenous नालव्रण के बिना उन लोगों को शामिल नहीं है ।
    2. परिधीय धमनी की ऐंठन के बिना उन बाहर, उदाहरण के लिए रेनॉड रोग ।
    3. महाधमनी वाल्वुलर एक प्रकार का रोग (transprosthetic दबाव ढाल > ६० mmHg) के बिना उन बाहर निकालें ।
    4. द्वितीय या तृतीय-डिग्री अलिंदनिलय संबंधी ब्लॉक (AV) ब्लॉक के बिना उन को छोड़ दें ।
    5. अलिंद अलिंद या अलिंद स्पंदन के बिना उन बाहर निकालें ।
    6. अस्थिर मन्या atherosclerotic पट्टिकाओं कि गूंध के बाद टूटना हो सकता है बिना उन बाहर निकालें । 9) संज्ञानात्मक हानि या सहयोग करने में असमर्थ के बिना ।
  3. सुनिश्चित करें कि प्रतिभागियों मूत्राशय खाली है ।
  4. प्रतिभागियों धूंरपान से बचना है, तंबाकू का उपयोग करें या कैफीन का उपयोग करें माप से पहले कम से कम 3 घंटे के लिए । माप से पहले कम से कम 12 घंटे के लिए शराब से बचना । माप से पहले कम से कम 3 घंटे के लिए उपवास ।

2. संवहनी टॉड की माप

नोट: cf-PWV और PWA माप, जैसे पारंपरिक चार-अंग का रक्तचाप माप, एक गैर इनवेसिव विधि का मूल्यांकन के माध्यम से किया जाता है । एक मानक प्रोटोकॉल एक सटीक मान प्राप्त करने के लिए महत्वपूर्ण है, विशेष रूप से जब वहाँ एक से अधिक ऑपरेटर्स हैं । वास्तविक कार्रवाई करने से पहले विधि अभ्यास करने के लिए सुनिश्चित करें । है भागीदार सहयोग cf-PWV की माप के लिए महत्वपूर्ण है ।

  1. प्रतिभागी को प्रक्रिया समझाएं और अनुमति प्राप्त करें ।
  2. माप की शुरुआत से पहले शरीर की ऊंचाई और वजन को मापने ।
  3. समझा है कि इस प्रक्रिया को 5-10 मिनट लग सकते है और दे भागीदार बिस्तर पर झूठ शामिल है ।
    1. लापरवाह पोजिशन बदलते समय मरीज की त्वचा को साफ और शुष्क रखें । अगर पसीने की वजह से मरीज की त्वचा नम हो जाती है, तो त्वचा को सुखाकर पोंछ लें.
    2. एक स्थिर कमरे के तापमान के साथ एक शांत कमरे में माप प्रदर्शन करते हैं ।
  4. एक चिकनी, अबाधित ईसीजी संकेत है सुनिश्चित करने के लिए उनके शरीर के बगल में भागीदार के हाथ रखो । 3-लीड ईसीजी मॉनीटर से कनेक्ट करें, निम्न आरेख (चित्र 2) के अनुसार तीन इलेक्ट्रोड (RA, LL, ला) की स्थिति.
    नोट: प्रयोज्य इलेक्ट्रोड के उपयोग की सिफारिश की है. ईसीजी सुराग और तारों अन्य ईसीजी ड्राइंग उपकरण में इस्तेमाल नहीं किया जा सकता ।
  5. रोगी को लापरवाह स्थिति में 5 मिनट के लिए आराम कर रहे हैं । फिर semiautomatic oscillometric डिवाइस के साथ रोगी के रक्तचाप को मापने ।
    नोट: रक्तचाप के यूरोपीय समाज की सिफारिशों के अनुसार मापा जाता है17हाइपरटेंशन.
  6. रोगी को कम से 2 मिनट के लिए आराम करो ।
    नोट: परिधीय नाड़ी फैलाव धमनी रोड़ा की वजह से जब बाहु धमनी रक्तचाप को मापने बाहु धमनी पल्स संचरण बदल जाएगा । अत्यधिक विचलन से बचने के लिए आराम करना आवश्यक है ।
  7. जबकि प्रतिभागी आराम करते हैं, माप डिवाइस में लापरवाह रक्तचाप, शरीर की ऊंचाई, शरीर के वजन और ऑपरेटर के नाम सहित प्रतिभागी की विस्तृत जानकारी दर्ज करें (चित्रा 3) ।
  8. सभी जानकारियां दर्ज करने के बाद प्रतिभागियों को लापरवाह पोजीशन में रखें ।
  9. निंन पैरामीटर (mm) (आरेख 3) को मैंयुअल रूप से मापने ।
    1. दूरस्थ पता लगाने बिंदु (ऊरु धमनी) के लिए suprasternal पायदान (एसएसएन) से दूरी को मापने ।
    2. समीपस्थ (मन्या धमनी) का पता लगाने बिंदु के लिए स्टर्नल पायदान से दूरी को मापने.
    3. समीपस्थ (मन्या धमनी) का पता लगाने बिंदु (cf-दूरी) के लिए दूरस्थ पता लगाने बिंदु (ऊरु धमनी) से दूरी को मापने.
  10. PWA मोड का चयन करें । एसएसएन-मन्या दूरी के रूप में ' 0 ' दर्ज करें, और एसएसएन-ऊरु दूरी के रूप में 0.8 * cf-दूरी दर्ज करें । डिवाइस ' 0 ' को स्वीकार नहीं करता है, तो एसएसएन-मन्या दूरी के रूप में कोई अन्य मान रखें और उस मान जोड़ें ८०% cf दूरी के रूप में एसएसएन-ऊरु दूरी5
    नोट: ऑपरेटर एक सबसे आरामदायक स्थिति में बैठना चाहिए ।
  11. डेटा कैप्चर करने के लिए बटन दबाएँ. रेडियल धमनी उतार-चढ़ाव बिंदु पर tonometer रखो (1-2 सेमी रेडियल styloid प्रक्रिया के ऊपर एक बिंदु पर जहां अस्थिरता मजबूत और स्थिर है) को मापने के लिए केंद्रीय रक्तचाप ।
    1. कंप्यूटर पर एक स्थिर तरंग प्राप्त करने के लिए tonometer की स्थिति बनाए रखें । एक बार गुणवत्ता और tonometry माप की reproducibility मानक तक पहुँचने, संकेत रिकॉर्डिंग स्वचालित रूप से कंप्यूटर द्वारा समाप्त हो गया है.
    2. ९० ° पर tonometer रखें ।
    3. परजीवी मूवमेंट से बचने के लिए, उंगलियों के साथ आधार के पास tonometer को मजबूती से tonometer को त्वचा से चिपकाएं ।
      नोट: tonometer को माप साइट के संपर्क में रखे जाने पर सॉफ़्टवेयर स्वचालित रूप से डेटा को रिकॉर्ड कर जाता है । tonometry मापन की गुणवत्ता और reproducibility का स्वतः परीक्षण किया जाता है. एक ऑपरेटर सूचकांक ८०% से अधिक एक विश्वसनीय माप के रूप में माना जाता है । नाड़ी दाब प्रवर्धन (PPA) को परिधीय-से-मध्य नाड़ी दाब अनुपात के रूप में परिभाषित किया जाता है और सूत्र के साथ गणना की जाती है, PPA = (बाहु एसबीपी-बाहु DBP)/(सेंट्रल एसबीपी-सेंट्रल DBP)-1. PWA डिवाइस18 (चित्र 4) पर देखा जा सकता है ।
  12. PWV मोड चुनें । मन्या धमनी उतारना बिंदु पर tonometer रखो. कंप्यूटर पर एक स्थिर तरंग प्राप्त करने के लिए tonometer की स्थिति बनाए रखें । 15-20 सेकंड के लिए एक स्थिर तरंग रिकॉर्डिंग के बाद. tonometry माप की गुणवत्ता और reproducibility मानक तक पहुँचने के बाद, मैन्युअल रूप से रिकॉर्डिंग खत्म (चित्रा 5).
  13. ऊरु धमनी उतारना बिंदु पर tonometer रखो (एक बिंदु पर वंक्षण बंध की मध्यबिंदु नीचे 1-2 सेमी जहां अस्थिरता स्थिर है) । एक स्थिर तरंग रिकॉर्ड करने के लिए tonometer की स्थिति बनाए रखें । 15-20 सेकंड के लिए एक स्थिर तरंग रिकॉर्डिंग के बाद, एक बार गुणवत्ता और tonometry माप की reproducibility मानक तक पहुँचने के लिए मैन्युअल रूप से रिकॉर्डिंग खत्म. PWV मान डिवाइस cf पर देखा जा सकता है-PWV ≥ 10 मी ' धमनी stiffening (चित्रा 5)1के रूप में माना जाता है ।

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Representative Results

Cf-PWV (इस विधि के साथ) और बीए-PWV (अन्य विधि के साथ10) उत्तरी शंघाई अध्ययन19से २०९८ प्रतिभागियों के सभी में आयोजित किया गया. दोनों cf-PWV और ba-PWV एक ही रसद प्रतिगमन मॉडल में इस्तेमाल किया गया । इस मॉडल में, आयु और लिंग समायोजित किया गया । परिणाम से पता चला कि केवल cf-PWV, लेकिन नहीं बा-PWV, काफी वृद्धि हुई आईएमटी और धमनी पट्टिका के साथ जुड़ा हुआ था, जो cf की श्रेष्ठता को इंगित करता है-PWV बुजुर्ग में संवहनी विषमताओं के साथ सहयोग में बीए-PWV पर (चित्रा 1).

Figure 1
चित्रा 1: cf-PWV और बीए-PWV उत्तरी शंघाई अध्ययन से २०९८ प्रतिभागियों में अन्य ग्रस्त लक्ष्य अंग क्षति के साथ सहयोग से. cf-PWV और ba-PWV के बाधाओं अनुपात रसद प्रतिगमन का उपयोग कर जब cf-PWV और ba-PWV दोनों एक ही पूर्ण मोड मॉडल में डाल रहे थे प्रस्तुत किया गया । इस डेटा को वर्तमान २०९८ सहभागियों के साथ पुनर्परिकलित किया गया है । यह आंकड़ा पिछले प्रकाशन10से संशोधित किया गया था ।
संक्षिप्त: आईएमटी, मन्या intima-मीडिया मोटाई; टॉड, लक्ष्य अंग क्षति । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 2
चित्रा 2: इलेक्ट्रोड की स्थिति और मापा धमनियों के खंडों. ईसीजी और tonometer संकेत रिकॉर्डिंग द्वारा, डिवाइस आम मन्या धमनी और आम ऊरु धमनी में पल्स वेव के आगमन के बीच समय देरी के रूप में पारगमन समय उपाय करेगा. मन्या-ऊरु PWV पारगमन समय से कूच दूरी विभाजित करके गणना की है (PWV = दूरी/समय)
संक्षिप्त: RA: दाहिना भुजा; LL: बाएँ पैर; LA: बाएं हाथ कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 3
चित्रा 3: परीक्षकों और रोगियों PWV माप के लिए स्थिति । माप लापरवाह की स्थिति में आराम के ंयूनतम 5 मिनट के बाद किया जाना चाहिए । माप तरजीही सही आम मन्या और आम ऊरु धमनियों पर किया जाना चाहिए. कमरे स्थिर कमरे के तापमान के साथ शांत होना चाहिए ।

Figure 4
चित्रा 4: एक सामान्य पल्स वेव विश्लेषण तरंग (रेडियल धमनी) एक गैर इनवेसिव tonometry-आधारित डिवाइस का उपयोग कर imaged. तरंग डिवाइस में दर्ज किया जाएगा और ऑपरेटर सूचकांक सीधे प्रदान की जाती है । एक ऑपरेटर सूचकांक ८०% से अधिक एक विश्वसनीय माप के रूप में माना जाता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 5
चित्रा 5: एक सामान्य नाड़ी तरंग वेग तरंग (मन्या और ऊरु धमनियों) एक गैर इनवेसिव tonometry-आधारित डिवाइस का उपयोग कर imaged. तरंग डिवाइस में दर्ज किया जाएगा और PWV मूल्य सीधे प्रदान की जाती है. एक cf-PWV ओवर 10 मी. धमनी stiffening के रूप में माना जाता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

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Discussion

यहां, हम प्रतिभागियों के उपंयास का आकलन करने के लिए एक व्यापक रूप से सुलभ पद्धति का प्रदर्शन नैदानिक संवहनी टॉड, धमनी कठोरता, cf द्वारा मूल्यांकन-PWV । आदेश में उपकरणों से पहले किया माप के बीच न्यूनतम hemodynamic मतभेदों के साथ PWs तुलना करने के लिए, केवल डेटा स्वीकार करते हैं जब बाहु सिस्टोलिक और डायस्टोलिक बीपी से कम 3 mmHg द्वारा विविध. यह मानव हेरफेर के कारण विचलन कम कर देता है । इस प्रोटोकॉल में, महत्वपूर्ण कदम है मानकीकृत रोगी स्थितियों मन्या धमनी और ऊरु धमनी साइटों के बीच सीधी सीधे दूरी का ८०% का उपयोग कर रहे हैं और के लिए मानक कट-ऑफ मान के रूप में 10 मी का उपयोग मन्या-ऊरु PWV के रूप में धमनी stiffening.

इस tonometry आधारित डिवाइस के साथ, हम गैर इनवेसिव प्रतिभागियों ' PWV का आकलन कर सकते हैं । वास्तव में, tonometry के बीच आधारित उपकरणों, वे व्यक्तियों के लिए इसी तरह के हृदय जोखिम का आकलन । हालांकि, वे नैदानिक अभ्यास में केंद्रीय बीपी और तरंग प्रतिबिंब के माप में संगत नहीं थे, उनके बीच काफी और महत्वपूर्ण मतभेदों के साथ20। यह tonometry-आधारित डिवाइस सामान्यतः महाधमनी PWV1के मापन में उपयोग किया जाता है ।

हम इस डिवाइस से केंद्रीय बीपी माप भी प्राप्त कर सकते हैं । हालांकि, गैर इनवेसिव उपकरणों से केंद्रीय बीपी माप की सटीकता बहुत बहस की है और सुधार किया जाना चाहिए । सही केंद्रीय बीपी के सटीक गैर इनवेसिव मूल्यांकन को प्राप्त करने के लिए, अंतर धमनी बाहु बीपी के अधिक सटीक गैर इनवेसिव अनुमान21की आवश्यकता है । इस माप से केंद्रीय बीपी के डेटा को अन्य गैर इनवेसिव उपकरणों या इनवेसिव इंट्रा-धमनी मानकों22के साथ तुलना करने के लिए आगे किया जा सकता है ।

धमनी stiffening जोखिम कारकों और नैदानिक CV घटनाओं, जो चिकित्सा निर्णय लेने को प्रभावित करेगा के बीच एक मध्यवर्ती राज्य के रूप में माना जा सकता है । उदाहरण के लिए, दीर्घकालिक उच्च रक्तचाप गंभीर धमनी stiffening में परिणाम हो सकता है । ग्रस्त प्रतिभागियों के लिए एंटी ग्रस्त ट्रीटमेंट जरूरी है । हालांकि, हम रिवर्स करने के लिए पसंद करते हैं, समाप्त या कम से कम दवाओं के साथ धमनी stiffening की प्रक्रिया को नियंत्रित, बजाय सिर्फ उच्च रक्तचाप पर ध्यान केंद्रित. धमनी stiffening बेहतर खुद को उच्च रक्तचाप से जोखिम कारकों के लिए प्रदर्शन का प्रतिनिधित्व हो सकता है । इस प्रकार, धमनी stiffening भी जोखिम पूर्वानुमान मॉडल में विचार किया जाना चाहिए । यह भी है कि टॉड से प्रभाव पर विचार करने के लिए जोखिम स्तरीकरण रणनीति बनाने के महत्वपूर्ण है । वास्तव में, धमनी stiffening जो वृद्धि हुई PWV के रूप में परिभाषित किया गया है उंर बढ़ने और सूक्ष्म परिवर्तन की एक समग्र है । एक बढ़ी हुई PWV कुछ रोगियों में हृदय रोगों के त्वरित विकास की घटना के रूप में माना जाना चाहिए । शोध PWV और इसके प्रबंधन पर ध्यान केंद्रित एक बहुत लंबे समय रोग मुक्त जीवन अवधि23प्रदान कर सकते हैं । इस तरह, हम एक और अधिक सटीक CV आकलन इतना के रूप में प्रबंधन और उपचार के लिए एक अधिक प्रभावी मार्गदर्शन प्रदान करने के लिए कर सकते हैं ।

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

यह काम चीन के राष्ट्रीय प्रमुख अनुसंधान और विकास कार्यक्रम (ग्रांट नो. 2017YFC0111800) और शंघाई नगर निगम सरकार (अनुदान आईडी. 2013ZYJB0902 और 15GWZK1002) से वित्तीय सहायता के अंतर्गत होता है. डॉ यी जांग चीन के राष्ट्रीय प्रकृति विज्ञान फाउंडेशन (अनुदान आईडी. ८१३००२३९ और ८१६७०३७७) द्वारा समर्थित किया गया था ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
SphygmoCor tonometry-based device AtCor Medical, Australia For central blood pressures and cf-PWV
Electrodes AtCor Medical, Australia To record the ECG
Semiautomatic Oscillometric device OMRON Healthcare, kyoto, Japan To measure brachial BP

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References

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चिकित्सा अंक १३५ धमनी की जकड़न मन्या-ऊरु पल्स-तरंग वेग
मन्या ऊरु पल्स वेव वेग को मापने (Cf-PWV) धमनी की जकड़न का मूल्यांकन करने के लिए
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Ji, H., Xiong, J., Yu, S., Chi, C.,More

Ji, H., Xiong, J., Yu, S., Chi, C., Bai, B., Teliewubai, J., Lu, Y., Zhang, Y., Xu, Y. Measuring the Carotid to Femoral Pulse Wave Velocity (Cf-PWV) to Evaluate Arterial Stiffness. J. Vis. Exp. (135), e57083, doi:10.3791/57083 (2018).

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