Summary
我々 は高脂肪、高蔗糖食を使用してウサギの食事誘発代謝症候群 (メッツ) の実験モデルを開発する方法を説明します。動物は、中心性肥満、軽症高血圧、前糖尿病、高脂血症、こうして人間のメッツの主要コンポーネントを再現を開発しました。この慢性的なモデルは、病気の進行のメカニズムを知識の取得になります。
Abstract
近年、肥満および新陳代謝シンドローム (メッツ) 公衆衛生および臨床実習は、座りがちなライフ スタイルや不健康な食習慣の上昇のための彼らの高められた流行を与え成長問題になっています。動物モデルのおかげで基礎研究は、メッツなど病態のメカニズムを調べることができます。ここでは、我々 は食事誘発メッツとその評価の実験的家兎モデルを開発するために使用方法を説明します。風土順化の期間の後、動物は 28 週間高脂肪 (10% 水素化ココナッツ オイルと 5% ラード)、高蔗糖 (15% ショ糖水に溶解) を供給されています。この期間中にいくつか実験的手術はメッツのさまざまなコンポーネントを評価する: 形態と血圧測定、グルコース耐性決定といくつかのプラズマ マーカーの解析。実験期間、動物を開発した中心性肥満、軽症高血圧、糖尿、高脂血症と低 HDL、高 LDL およびトリグリセリド (TG) のレベルの増加の最後に、人間のメッツの主要コンポーネントを再現します。この慢性的なモデルにより新たな視点、リスク、患者の同定や、テストの新しいことができる臨床および臨床マーカーの検出、病気の進行のメカニズムを理解するため治療この複雑な病理学の処置のためのアプローチ。
Introduction
肥満とメタボリック シンドローム (メッツ) 公衆衛生および臨床実習は、座りがちなライフ スタイルと不健康な食べる習慣1の上昇のための彼らの高められた流行を与え成長問題になっています。メッツの複数の定義がありますが、それらのほとんどは、心血管疾患や代謝の変化など腹部肥満、低 HDL と LDL コレステロール、トリグリセリドの上昇、耐糖能異常、高血圧2 のクラスターとしてそれを記述します。 ,3,4。診断は、これらの 5 つの基準のうち 3 人が存在している必要があります。
動物モデルのため基礎研究は、メッツなど病態のメカニズムを調査することができました。いくつかの動物モデルを使用している、しかし、人体病理学 (図 1) の主な臨床症状、選択のモデルを再現非常に重要です。この目的は、(Verkest5と張 & 楯突いて6レビュー参照) 犬と豚では主に、人間に似た動物モデルが開発されました。しかし、動脈硬化症や高血糖食事療法による犬の開発は疑問5モデル犬にはメッツのすべてのコンポーネントは表示されません。実験手順の複雑さとそのメンテナンスに活用が豚モデルは、人間と最も解剖学的および生理学的な類似性を示しメッツの基になるメカニズムを解明するための重要な予測力を提供するためこのモデルの非常に労働集約型、高価な6を実行します。
その一方で、齧歯動物モデル (マウス、ラット) 食餌誘導性自発およびトランスジェニック、広範囲で使用されている文学の異なる臓器やシステム (ウォンを参照してくださいその病理結果とメッツ、高血圧、肥満の研究のためら7レビューのため)。これらのモデルの使用は、犬や豚よりもより手頃な価格は、彼らの重要な欠点があります。確かに、7不在、高インスリン血、高血糖、高血圧など他の人に対し、歪みによって動物はメッツの一部のコンポーネントを開発します。さらに、メッツ、いくつかの遺伝子組み換え系統の肥満の主要なコンポーネントの 1 つはだけ、ダイエットに関連する要因に依存しない、むしろそれはいくつかの動物が正常または減少の食品摂取量8と肥満になることに示されています。最後に、マウスおよびラット コレステリル エステル転送タンパク (CETP) の自然の欠乏を表示して動脈硬化症の発展に比較的抵抗力があるになるコレステロールの輸送の主要な手段として HDL を使用します。これは、CETP を表現し、LDL9を中心に彼らのコレステロールを運ぶ人間と脂質代謝の重要な違いです。
逆に、実験ウサギはより大きい動物と齧歯動物の実験モデルの中間の段階を表します。したがって、人事やメンテナンス、大規模な動物モデルの実験プロシージャでより容易に処理されての最低要件とプロトコルの種類にウサギを簡単に送信できます。さらに、高脂肪食で飼育ウサギ肥満人間8,10,11と同様の血行や神経体液性変化であることが報告されています。脂質代謝に関する注記のウサギ豊富な CETP プラズマでありそのリポタンパク質プロファイル LDL の豊富な12人間のようでもあります。また、ウサギでは高脂血症を非常に急速に開発そう考えると、草食動物、として食餌療法脂肪13に非常に敏感であります。
図 1: メッツ動物モデルの比較。Verkest5チャンと楯突いて6、ウォンらを参照してください。7レビューのため。"
"利点を示しますと"
"の不利な点を示します。*、論争をキャロルらによって研究、 *指摘によって異なります8、いくつかの遺伝子組み換え系統が食品の摂取量とは独立して肥満になります。CEPT: コレステリル エステル転送タンパク質であります。GTT: ブドウ糖負荷試験です。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
さまざまな臓器やシステムにメッツが製造した病理学的改造の基礎となる基本的なメカニズムを解明するために、この複雑な病理学の主要コンポーネントを再現した実験モデルの選択を理解するには人間のメッツは、不可欠です。ウサギは人間生理学および慢性のプロトコルおよび測定で使用の手頃な価格との類似性を与えられる多くの利点を提供できます。このラインで高脂肪・高蔗糖食を使用していくつかのウサギの食事誘発モデルはずっと14,15,16,17,18,19 (表 1) を使用し、メッツのさまざまなコンポーネントの特性評価は、器官の改造と表現型の関連非常に重要なのです。したがって、この記事の主な目的はその病態の研究ができるウサギの食事誘発のメッツと器官の改造の影響のモデルを開発する方法を説明します。
| 研究 | ダイエット | 期間 | 品種 | メッツのコンポーネント | |||
| Ob | HT | HG | Dl | ||||
| 陰 et al. (2002)14 | · 10% の脂肪 | 24 週間 | · 男性 nzw 種 | |
- | |
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| · 37% ショ糖 | · 2 kg | ||||||
| Zhao et al. (2007)15 | · 10% の脂肪 | 36 週間 | · 男性の JW | |
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| · 30% ショ糖 | · 16 週間 | ||||||
| Helfestein et al. (2011)16 | · 10% の脂肪 | 24 週間 | · 男性 nzw 種 | |
- | |
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| · 40% ショ糖 | · 12 週間 | ||||||
| · 0.5 0.1 コレステロール | |||||||
| 寧ら (2015)17 | · 10% の脂肪 | 8-16 週間 | · 男性 WHHL | |
- | |
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| · 果糖 30% * | · 12 週間 | ||||||
| Liu et al. (2016)18 | · 10% の脂肪 | 48 週間 | · 男性 nzw 種 | |
- | |
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| · 30% ショ糖 | · 12 週間 | ||||||
| アリア Mutis ら (2017)19 | · 15% の脂肪 | 28 週間 | · 男性 nzw 種 | |
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表 1: 食事誘発メッツ ウサギの高脂肪、高蔗糖食を用いたモデル。シンボル"「を示しない場合は、」"の存在と"-"は評価されません。* 制限。WHHL、渡辺遺伝性 hiperlipidemic ウサギ。JW、日本白色種ウサギ。Ob、肥満。HT、高血圧。HG、高血糖。Dl、高脂血症。
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Protocol
動物のケアと本研究で使用される実験的プロトコル科学的目的に使用される動物の保護に関する EU 指令 2010/63 遵守し、制度的ケアおよび使用委員会 (2015/VSC/エンドウ/00049) によって承認されました。
注: プロトコルは、28 週間高脂肪、高蔗糖食の慢性の管理とメッツの主要なコンポーネントの評価で構成されます。4.39 ± 0.14 (標準偏差) の重量を量る 11 成人男性のニュージーランド ホワイト (NZW) ウサギを用いて kg、20-22 週齢実験的プロトコルの初めであった。湿度 (50 ± 5%) の部屋に収容された彼らと、12 h 光 (20 ± 1.5 ° C) の温度制御条件のサイクルします。言葉の「食事」と「ダイエット」は、プロトコルの手順で同じ意味で使用可能性があります。
(1) 食事管理
-
取得またはダイエットの準備
- 追加された水素化ココナッツ オイル (10%) と市販の高脂肪の食事を取得し、(5%)19をラードします。このダイエットは、3.7 kcal·g-1を提供します。
- 殺菌水 (例えば、2 L 入荷 15% ショ糖溶液の使用 300 g ショ糖) ショ糖の適切な量を溶解することにより 5 〜 15%ショ糖液を準備します。15% 溶液 0.6 kcal·mL-1を提供します。
- 市販コントロール ダイエット19、2.7 kcal·g-1を提供するを取得します。
-
4 週間の動物を順応させる
- 毎日コントロール ダイエット 120 g 群で各動物をフィードします。水の自由を提供します。
- メッツでの動物の飼料グループ 250 g 食事コントロール 50% と 50% 高脂肪の食事は、4 週の終わりまで 100% 高脂肪の食事に徐々 に増加します。
注: 目的を達成するためになる: (i) 35% の制御と週 1; 末 65% 高脂肪の食事(ii) 25% の制御と週 2; の終わりによって 75% 高脂肪の食事(第 3 週末 iii) 15% コントロールと 85% 高脂肪食事(4 週末 iv) 100% 高脂肪の食事。 - メッツで動物の開始時に、5% スクロース グループ水を与えるし、4 週目の終わりまで 15% のショ糖濃度を高めます。
- 1.1.1 で提供される値ごとのカロリー摂取量を計算するチョウとショ糖溶液の摂取を登録します。1.1.2。
-
メッツ (28 週) を誘発します。
- 食事コントロールのコントロール グループ 120 g で各動物をフィードし、広告の自由を毎日水します。
- 高脂肪の食事と 15% スクロースを水のメッツ グループ 250 g の動物をフィードします。毎日の食事とショ糖液 3 日おきを取り付けます。
- 残りの食事と水を毎日毎日の摂取量を推定するための重量を量る。
2 形態学的評価
- 毎週動物の体重を測定します。
- 高さ、長さ、腹部の輪郭、および脛骨の長さを測定し、管理実験的ダイエットと 14 と 28 日麻酔下の動物は数週間前にbmi 値を推定します。
- 滅菌使い捨てカテーテル (18-22 G) と右耳辺縁静脈を cannulate し、0.9 %nacl 水溶液の 1.5 mL に続いてプロポ フォール (8 mgkg-1) を挿入します。麻酔下のウサギのそれ以降の手順に記載されている測定を実行します。
- 測定の高さと長さ。側臥位 (長さ) で測定テープがあり、測定、記録、鼻からかかとまでの距離を使用してください。同じ位置で肩の肩峰から足 (高さ) の先端までの距離を取る。
- 体重 (kg) · として20体ボディマス指数 (BMI) を計算します。[長さ (m) × 身長 (m)]-1。
- 腹部の輪郭の周りに優しく測定テープを置き、仰臥位で動物と測定を取る。
- アキレス腱の挿入に膝関節の下の部分から脛骨の長さを測定します。
3. 空腹時血糖と静脈内糖負荷試験 (IVGTT)
注: お勧め日 (すなわち2-15) の同時手続きを開始します。
- 0.9 %nacl 水溶液 100 mL にブドウ糖 60 g グルコース ストック溶液 (60%) を準備します。
- 高速 7 h (食品を取り外し、水を維持する) のための動物は、腹臥位で落に意識したウサギを配置します。血糖値計 (メーター内に新しいストリップを挿入) を準備し、ランセットを使用して血を一滴を取得する左耳辺縁静脈から最初のサンプルを取る。[テスト ストリップと測定血糖値血糖値計を使用して、空腹時血糖を確認すると血の滴をタップします。
- 使い捨てカテーテル (18-22 G) と右耳辺縁静脈を cannulate し、60% グルコース溶液 (0.6 g·kg-1) のボーラスを注入します。
注: 膠灰粘土を準備するには、グルコース ストック 1 mL/kg を追加します。 - ブドウ糖注射後 15、30、60、90、120、180 分でランセット (血の一滴) を使用して血液サンプルを取るし、3.2 と同様に血糖値計でそれらを分析します。
- 使い捨てのカテーテルを外し、ピンチ、ガーゼをカテーテル挿入のサイト。血液が凝固すると、一度ガーゼを削除し、動物の状態を確認します。
4. 血圧
- 圧力トランスデューサー、0.9 と 10 mL の注射器を含む集録システムを準備 (血圧記録) の集録ソフトウェアがパソコン/ノート パソコン、アンプ、三方活栓 % 食塩水。
- 機器を設定します。まず、圧力変換器、トランスデューサーと、カテーテルの間で三方活栓と注射器を配置し、圧力トランスデューサーをアンプに接続します。アンプを PC/ラップトップに接続します。
- メーカーの推奨事項に従って圧力トランスデューサーの校正を実行します。
- 腹臥位でウサギ落に意識した動物を配置します。カニューレの前に耳を温める、局所的に挿入のサイトの周りの耳で局所麻酔薬 (2.5% リドカイン/プリロカイン) を適用します。優しく簡単に識別動脈血管パッケージを実行する領域をタップします。その後左耳の中央動脈に滅菌カテーテル (18-22 G) を挿入します。拘束を緩め、30 分間静かにする動物を許可します。
- 心のレベルでの動物の横に配置されます圧力トランスデューサーを配置する、動脈カテーテルから直接 20 分間継続的に血圧を記録 (サンプリング周波数: 1 KHz、図 5 bを参照してください)。
注: 血液凝固の干渉から無料録音血圧 (BP) を保つために (BP 信号振幅を失うまたは消える)、塩化ナトリウム (0.9%) 注射をすべきであります。三方活栓を使用して、カテーテルをトランスデューサーから、カテーテルに注射器からなる回路を開くと 1-2 の mL を注入回路を閉じます。カテーテルで血栓のフォームがありますが削除されます。トランスデューサーと、カテーテルの間の回路を開くし、信号が回復された後に記録を継続します。 - 録音が完了すると、カテーテルを外し、血損失を食い止めるためのカテーテル挿入のサイトでガーゼでピンチします。血液が凝固すると、一度ガーゼを削除し、動物の状態を確認します。
5. プラズマ計測
注: お勧め日 (すなわち2-15) の同時手続きを開始します。
- 高速 7 h (食品を取り外し、水を維持する) のための動物は、腹臥位で落に意識した動物を配置し、左耳辺縁静脈で滅菌 21 G 針を挿入します。点滴に血が開始されると、最初のドロップを破棄し、チューブで示されるレベルまで EDTA 管で血液サンプルを収集します。氷の上のサンプルを格納します。
- 1,500 × g、15 分間、4 ° C での血液サンプルを遠心分離します。遠心分離の後ピペットを使用してプラズマを吸引し、250 μ L の因数を準備します。
- すぐに新鮮なサンプルを分析します。基本的な制御パラメーターは次のとおりです: トリグリセリド、総コレステロール、HDL と LDL コレステロール。
注: いない新鮮な分析したサンプルは、-80 ° C のフリーザーですぐに格納する必要があります。血漿サンプルから血糖値の分析に興味がある、血糖値のテストは EDTA の代わりにフッ化物シュウ酸とチューブを使用する必要があります。
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Representative Results
メッツは、その研究が実験的なモデルの使用によって促進すること代謝と心血管の異常のクラスターを表します。確かに、メッツによって生成される病理学的改造の基になるメカニズムを解明するため適切に人間の条件のような研究に適した実験モデルの選択は非常に重要です。その評価の詳細な特性解析とショ糖、飽和脂肪の多い食事を使用してウサギにメッツを誘導する方法を紹介します。遺伝子組み換え動物モデルではなくダイエットの使用は大きい重要性のダイエットに影響を与える全身の代謝19、従ってに似て密接に人間メッツで起こる。階乗 (混合モデル) を用いて 2 つの要因、1 つの反復測定または「内」要因の分散分析 (時間: 前に、14 週と週 28、分析によって) と 1 つの「間」の要因 (グループ: 制御とメッツ) 統計分析のため。意義が受け入れられたときp < 0.05。
高脂肪、高蔗糖食も動物によって容認されます。4 週間の馴化期間前の供給体制から高脂肪、高蔗糖食への正しい移行に必要です。対照群の動物供給する 120 g の食事は、大人のウサギ8の維持のため適切に示されています。メッツ グループでウサギは、実験的プロトコル (テーブル 2) が終了するまで重量で徐々 に増加しました。動物は、1 週あたりの 50-100 g を得る必要があります。ウサギは十分なスペース、光、環境エンリッチメント (図 2) とケージに個別に収容されて、動物の毎日のチェックを実行していることが重要です。また日常的に食事や飲み物を摂取する必要があります監督、体重増加を達成し、ウサギが容易に重点を置かれ、応答は栄養の消費を停止することがありますので、可能な健康上の問題を検出するために、登録します。さらに、高脂肪ペレットは非常に安定して、非常に簡単に、一貫性を失うどのウサギを食べていない粉に回す傾向がある、のでそれはチョウの毎日の部分を非常に慎重に準備する非常に重要です (図 2 a)。図 3 a、私たちはエネルギー摂取量とその変動は、250 から 815 に至るまでの動作を観察することができますメッツ グループ kCal。図 3 bでエネルギー (食事と飲み物) のさまざまなソースの相対的寄与が描かれています。重要な期間がある週間 14 と 28 日の実験プロシージャによって作成されたストレスを与えられたので、ウサギを減少させるかもしれない食事や水の摂取量。毎日の定量化によりコントロール食事 (80% 高脂肪 20% コントロール) を導入することによって避けることができる、動物まで 2-3 日中に回復、通常の 10% あるいは 5%、15% からショ糖液の減少はこの問題の迅速な同定摂取量の値。体重、腹部の境界とメッツ3を定義するリスク要因と密接に関連がある (表 2)、BMI の増加によって示すように、動物はまた中心性肥満を開発しました。
図 2: ダイエット管理します。パネルAのチョウ (上) を制御し、追加の脂肪のための 2 つの間の違いを示す高脂肪の食事 (下記参照) が描かれています。少ない高脂肪ペレットを作る粉を避けるためにおいしい必要だ高脂肪ペレット粉 (パネル A、下) を分離するストレーナーを使用します。パネルBで (左)、飲酒のソリューションにするために必要な材料を観察することができ、水ディスペンサーで配布する在庫ソリューションを作成することをお勧めです。最後に、動物の福祉は非常に重要であり、個別に十分な領域 (C) ケージに収容したする必要があります光と、可能であれば、環境エンリッチメント (すなわちプラットフォーム、おもちゃのなど)。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 3: エネルギー摂取。進化実験の期間の 28 週の間に毎週摂取量のコントロール、パネル、メッツに描かれています。B. コントロール パネルで高脂肪の食事とメッツ動物の飲酒のソリューションから kCal (パーセンテージ) で相対摂取を示す (n = 5)、メッツ (n = 6)。誤差範囲: アリア Mutisらからの SD 変更。19この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
| 食事前 | 14 週目 | 週 28 | ||||
| コントロール | メッツ | コントロール | メッツ | コントロール | メッツ | |
| 重量 (Kg) | 4.35(0.15) | 4.43(0.14) | 4.49(0.12) | 5.42(0.17) | 4.51(0.13) | 5.75(0.6) |
| 長さ (cm) | 52.4(1.6) | 53.6(1.7) | 52.5(0.8) | 54.4(1.7) | 53.7(0.7) | 54.6(0.8) |
| 高さ (cm) | 25.9(0.7) | 25.5(1.1) | 25.9(2.2) | 26.1(5.3) | 26.0(1.0) | 26.1(1.5) |
| 【 解説 】。境界 (cm) | 39.8(1.7) | 40.5(1.4) | 38.5(1.5) | 47.5(2.2) | 38.1(1.0) | 49.7(3.5) |
| 脛骨の長さ (cm) | 16.4(0.8) | 16.3(0.7) | 16.7(0.3) | 16.7(0.4) | 17.4(0.4) | 16.8(0.6) |
| BMI (Kg/m2) | 32.8(1.9) | 32.9(2.6) | 32.8(1.2) | 36.8(1.9) | 32.6(2.1) | 39.3(6.0) |
表 2: 形態。14 と重量で 28 週でメッツ対コントロールを比較するとき、我々 は違いを発見した (主な効果 p = 0.003、η2 = 0.6; 週 14 p で一対比較 < 0.001 と週 28 p < 0.001)、腹部の境界 (p 主な影響 < 0.001、η2ペアワイズ 0.9 を =週 14 p で比較 < 0.001 と週 28 p < 0.001) と BMI (主な効果 p = 0.016、η2 = 0.5; 週 14 p で一対比較 < 0.001 と週 28 p < 0.001)。コントロール (n = 5)、メッツ (n = 6)。意味 (SD) として表現されます。アリア Mutisらから変更。19。
空腹時の血糖値について、IVGTT への応答はグルコース恒常性21の評価キーの役割を果たしています。高原に到達し、週 28 (図 4 a) で同様の値を維持する、14 週目に軽度の高血糖を遵守します。(AUC) 曲線の下の領域は、メッツ グループ (図 4 b) でも増加します。タイプ II 糖尿病空腹時血糖値に基づくウサギを識別するカットオフ値のこの実験プロトコル、高脂肪の 28 週に提出されたウサギで、認識された19していないにもかかわらず事前に糖尿病を開発高蔗糖飼料空腹時血糖障害、耐糖能異常。
図 4: 血糖調節します。パネル A のコントロールや 14、28 週でメッツ動物の IVGTT の結果が表示されます。180 分に 0 から (AUC) 曲線の下の領域の定量化はボックス パネル B で描かれ、ウィスカのプロットします。このパラメーターは週間 14 コントロール対 28 でメッツ動物の増加 (主な効果 p = 0.001、η2 = 0.5; 週一対比較 14 p = 0.001 と週 28 p = 0.002)。コントロール (n = 5)、メッツ (n = 6)。アリア Mutisらから変更。19この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
高血圧と直接関連している肥満の重症度。ウサギ飼育高脂肪、高蔗糖食 28 週週週 28 (図 5 - E) で 14 日、そしてこの血圧の上昇を維持ですでに収縮期、拡張期、および平均血圧の増加を示した。血圧および bmi 値22の密接な関係を考えると、動物が徐々 に血圧の大幅な増加を得るために重量を得ることを確認する非常に重要なのです。
図 5: 血圧の変更。パネルには、耳介動脈に挿入したカテーテルを示しています。ノートの静脈、耳介動脈は非常に密接に耳の歯列を介して実行ことを考える、それはそれらを区別するために非常に重要です。カニューレの前に血管のパッケージを実行する領域を軽くための局所麻酔後と耳を暖かくことをお勧めします。動脈は血管壁を厚くし、静脈よりも明るい色と血のパルスが観測できます。パネル B は、圧力トランスデューサー、アンプに接続し、連続信号 (BP 記録) を記録、実験のセットアップを示しています。パネル C と両方の実験群でウィーク 14 と 28 日で収縮期および拡張期血圧の D ショー ボックス、ひげプロット。パネル E. 平均動脈圧 (地図) を表示します。違いがみられた週 14 と 28 日にメッツ対コントロールを比較するとき収縮 (主な効果 p = 0.003、η2 = 0.4; 週一対比較 14 p = 0.029 と週 28 p = 0.013)、拡張期 (p 主な影響 0.027、η2 = = 0.3; 週一対比較 14 p = 0.036 と週 28 p = 0.001) とマップ (主な効果 p = 0.006、η2 = 0.4; 週一対比較 14 p = 0.027 と週 28 p = 0.001)。コントロール (n = 5)、メッツ (n = 6)。アリア Mutisらから変更。19この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
最後に、メッツの開発を評価するために血漿生化学的マーカーの変化の評価が必要です。この慢性的なモデルで、14 週目として早く脂質プロファイルの変化を見ましたし、の違いでさらに増加させることがなく、28 週まで安定してこの変化。血中脂質プロフィールの変更はトリグリセリドと LDL、HDL の減少の増加によって特徴付けられるし、両方でコントロール対メッツ動物の総コレステロール値の変化時間ポイントがない (週 14 と 28) (表 3)。
| 14 週目 | 週 28 | |||
| コントロール | メッツ | コントロール | メッツ | |
| 総コレステロール (mg·dL-1) | 20.4(2.3) | 24.0(9.1) | 27.4(15.7) | 21.2(4.4) |
| HDL (mg·dL-1) | 9.1(4.2) | 4.3(1.7) | 11.2(4.2) | 5.1(2.9) |
| LDL (mg·dL-1) | 3.8(1.1) | 8.7(4.5) | 4.0(1.2) | 13.8(9.3) |
| トリグリセリド (mg·dL-1) | 71.2(58.8) | 118.0(40.7) | 30.2(11.4) | 76.8(28.2) |
テーブル 3: 血漿生化学の評価します。14 と HDL で 28 週でメッツ対コントロールを比較するとき、我々 は違いを発見した (主な効果 p = 0.008, η2 = 0.3; 週一対比較 14 p = 0.006 と週 28 p = 0.037)、LDL (主な効果 p 0.040、η2 = = 0.2 週一対比較 14 p = 0.028 と週 28 p = 0.034)、およびトリグリセリド (主な効果 p = 0.002、η2 = 0.4; 週一対比較 14 p = 0.004 と週 28 p = 0.001)。コントロール (n = 5)、メッツ (n = 6)。意味 (SD) として表現されます。アリア Mutisらから変更。19
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Discussion
適切な実験モデルの確立は、メッツの研究開発をより一貫性のある、信頼性の高いメソッドを提供できも臓器や改造システムの根底にある基本的なメカニズムを理解する必要です。ここで、食事誘発メッツとどのようにこのモデルを特徴づける代謝と心血管の異常のこのクラスターの主要なコンポーネントを評価する関連する実験モデルを開発に使用するメソッドを説明: 中心性肥満、高血圧、耐糖能異常、高脂血症と低 HDL、高 LDL と TG 値の増加。
モデルの主要な強さは、病理学の臨床症状の前に条件を勉強する能力です。確かに、代謝の変化に関する 28 週間動物 II 型糖尿病を発症しなかったし、(図 4) 前糖尿病の状態にあった。同様に、プラズマの生化学的マーカーはアテローム性動脈硬化の開発の重要な要因は、総コレステロール値 (表 3) で LDL や TG、HDL の減少が変更なしに伴う脂質プロファイルに明らか変質を示した。増加を観察することができますも、収縮期血圧、拡張期、およびマップ週 28 (図 5)、これは軽症高血圧を考慮することができます。全体的にみて、それらの代謝と心血管のマーカーの効果は控えめであるが、このモデルはこうして臨床及び非臨床の識別を許可状態前、明らかに (およびほとんどの場合不可逆) 病理研究を有効にできます。マーカーの責任で患者の検出可能性があります。
さらに、モデルとは異なり他メッツ動物 (マウス、ラット、および犬)、自発またはトランスジェニック ウサギ モデルはメッツのすべてのコンポーネントを開発できます。興味深いことに、メッツのさまざまなコンポーネントの組み合わせが心血管リスクを増幅できることが報告されています。確かに、高血圧によって生成される病理学的改造は、メッツの複数のコンポーネント表示23時に悪化します。この実験により、基になるメカニズムの研究とさまざまなコンポーネントの効果を組み合わせます。さらに、ダイエットは、全身の代謝を影響することを考える食事誘発モデルの使用は重要な意義は、密接に人間のメッツ19で何が起こるかをエミュレートすることです。
最後、しかし言い忘れた重要な強度は橋渡し研究と経済のコストへの影響の関連性とのバランス。1 つの側面では豚を見つけるが、モデル、時間、リソース、およびコストの面で非常に高価なが、人間に非常によく似て。一方、下の汎化能力を非常に少ないコストで実装が簡単である齧歯動物モデルがあります。中間点、大動物モデルの欠点のいくつかを回避しながら研究の多くの異なる種類の十分な柔軟性があり、人間メッツ8、同様の血行や神経体液性の変更を示していますを表します家兎モデル 10,19。
説明する方法の次の制限事項を考慮してください。中心性肥満、体脂肪分布に関して磁気共鳴イメージ投射の使用利用可能な場合、ゴールド スタンダード、28 週間の終わりに内臓脂肪の定量化を使用それ以外の場合。縦断的研究は、その他の非侵襲的方法など、x 線コンピューター断層撮影より適切な24になります。代わりに腹囲と BMI を測定した (表 2) ではまた中心性肥満25、11,26の指標としてウサギのいくつかの研究で使用されています。脛骨の長さの測定は、超音波検査や脚撮影を使用してより正確な可能性があります。インスリン負荷試験によるまたは空腹時のインスリン レベルを決定するインスリン抵抗性が決定される場合はこの慢性モデルに耐糖能異常の原因であるインスリン抵抗性または減らされたインシュリンの生産、設立するために
最後に、モデルを改善するためにいくつかの措置を取ることができます。高脂肪、高蔗糖ですが、表現型国会のみに起因する可能性がないと我々 がおそらくアロキサン投与の短い期間の組み合わせがグルコ メーターの高速増加を入手しています。年齢も重要な役割を果たすことができる、私たちはしばしば若い大人ウサギ (4.5 ヶ月古い動物が飼養施設、実験的プロトコルの最後で 12.5 13 ヶ月に到着したとき) とメッツ働いていたので古い年齢27で発生します。残念ながら、古いウサギは市販ではなかった。古い動物のこのモデルをテストかどうかは表現型、悪化を確認する興味深いものになるでしょう。
ウサギ メッツのこの実験モデルの開発はここで説明したメソッドは、病理学的改造プロデュース メッツ別の根本的なメカニズムの解明を目指して研究の貴重なツールを指定しなければなりません臓器やシステムでは、この複雑な病理学の理解を得ること。最後に、NZW ウサギは坐った動物なのでこの食事誘発モデルは病理学のさまざまなコンポーネントが人間のメッツで発生し、新たな視点を理解できるよりも同様の方法で進化する方法の研究に有用することができます、病態生理学的メカニズムの責任で患者を識別する前臨床および臨床マーカーの同定やこの複雑な病理学の処置のための新しい治療アプローチのテストも、病気の進行に関与します。
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Disclosures
著者は、彼らは競合する金銭的な利益があることを宣言します。
Acknowledgments
この作品は、セルバンテス ・ デ ・ サラッド カルロス III フェダーイン ・資金 (CIBERCV CB16/11/0486) FJC Generalitat (PROMETEOII/2014/037)、大学バレンシア (UV-INV-PRECOMP14-206372) mz Generalitat (GV2015-062) によって支えられました。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Veterinary scale | SOEHNLE | 7858 | Scale https://www.soehnle-professional.com/en/productgroup/details/103/veterinary-scale |
| Shovel for aluminum feed | COPELE | 10308 | Shovel for aluminum feed http://copele.com/es/herramientas/48-pala-para-pienso-de-aluminio.html |
| Balance | PCE Ibérica | PCE-TB 15 | Balance http://www.pce-iberica.es/medidor-detalles-tecnicos/balanzas/balanza-compacta-pce-bdm.htm |
| Strainer (20 cm diam.) | ZWILLING | 39643-020-0 | Strainer https://es.zwilling-shop.com/Menaje-del-hogar/Menaje-de-cocina/Menaje-especial/Accesorios/Colador-20-cm-ZWILLING-39643-020-0.html |
| Bowl | ZWILLING | 40850-751-0 | Scale https://www.soehnle-professional.com/en/productgroup/details/103/veterinary-scale |
| Funnel | BT Ingenieros | not available | Funnel http://www.bt-ingenieros.com/fluidos-y-combustibles/961-juego-de-4-embudos-de-plastico.html?gclid=EAIaIQobChMIuInui_y-1QIVASjTCh28Zwf-EAQYBSABEgK7xPD_BwE |
| Introcan Certo 22G blue | B Braun | 4251318 | Peripheral intravenous catheter http://www.bbraun-vetcare.es/producto/introcan- |
| Propofol Lipuro 10 mg/ml vial 20 ml | B Braun | 3544761VET | General intravenous anesthetic http://www.bbraun-vetcare.es/producto/propofol-lipuro-1- |
| FisioVet serum solution 500ml | B Braun | 472779 | Scale https://www.soehnle-professional.com/en/productgroup/details/103/veterinary-scale |
| Askina Film Vet 1,25cm x 5m | B Braun | OCT13501 | Plastic Plaster http://www.bbraun-vetcare.es/producto/askina-film-vet |
| Askina Film Vet 2,50cm x 5m | B Braun | OCT13502 | Plastic Plaster http://www.bbraun-vetcare.es/producto/askina-film-vet |
| Injekt siringe 10ml luer | B Braun | 4606108V | Injection-aspiration syringe of two single-use bodies http://www.bbraun-vetcare.es/producto/injekt- |
| Seca 201 | seca | seca 201 | Ergonomic tape for measuring perimeters https://www.seca.com/es_es/productos/todos-los-productos/detalles-del-producto/seca201.html#referred |
| Sterican 21Gx1" - 0,8x25mm verde | B Braun | 4657543 | Single Use Hypodermic Needle http://www.bbraun-vetcare.es/producto/agujas-hipodermicas-sterican- |
| CONTOURNEXT-Meter | BAYER | 84413470 | Blood glucose analysis system http://www.contournextstore.com/en/contour-next-meter-2 |
| CONTOUR NEXT test strips | BAYER | 83624788 | Blood glucose test strips http://www.contournextstore.com/en/contour-next-test-strips-100-ct-package |
| MICROLET NEXT LANCING DEVICE | BAYER | 6702 | Lancing device http://www.contournextstore.com/en/new-microlet-next-lancing-device |
| MICROLET 2 Colored Lancets | BAYER | 81264857 | Ultra-thin sterile lancet for capillary puncture http://www.contournextstore.com/en/microlet2-colored-lancets-100s |
| Injekt 20ml luer siringe | B Braun | 4606205V | Scale https://www.soehnle-professional.com/en/productgroup/details/103/veterinary-scale |
| Askina Mullkompressen 7,5x7,5cm - sterile | B Braun | 9031219N | Sterile gauze packets in envelopes http://www.bbraun-vetcare.es/producto/askina-mullkompressen-esteril |
| Emla lidocaine/prilocaine | AstraZeneca | not available | Local anesthetics https://www.astrazeneca.es/areas-terapeuticas/neurociencias.html |
| Introcan Certo 18G short | B Braun | 4251342 | Peripheral intravenous catheter http://www.bbraun-vetcare.es/producto/introcan- |
| Introcan Certo 20G | B Braun | 4251326 | Peripheral intravenous catheter http://www.bbraun-vetcare.es/producto/introcan- |
| Blood Pressure Transducers-MA1 72-4497 | Harvard Apparatus | 724497 | Transducer for monitoring blood pressure http://www.harvardapparatus.com/physiology/physiological-measurements/transducers/pressure-transducers/research-grade-pressure-transducers.html |
| PowerLab 2/26 | AD Instruments | ML826 | Amplifier https://www.adinstruments.com/products/powerlab |
| LabChart ver. 6 | AD Instruments | not available | Acquisition software https://www.adinstruments.com/products/labchart |
| Animal Bio Amp | AD Instruments | FE136 | Amplifier https://www.adinstruments.com/products/bio-amps#product-FE136 |
| K2EDTA 7.2mg | BD | 367861 | Blood collection tubes http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=367861 |
| Centrifuge | SciQuip | 2-16KL | Centrifuge http://www.sigma-centrifuges.co.uk/store/products/refrigerated-sigma-2-16k-centrifuge/ |
| Eppendorf Reference 2, 100 – 1000 μL | Eppendorf | 4920000083 | Pipette https://online-shop.eppendorf.es/ES-es/Pipeteo-44563/Pipetas-44564/Eppendorf-Reference2-PF-42806.html |
| Eppendorf Safe-Lock Tubes, 0.5 mL | Eppendorf | 30121023 | Tubes https://online-shop.eppendorf.es/ES-es/Puntas-tubos-y-placas-44512/Tubos-44515/Eppendorf-Safe-Lock-Tubes-PF-8863.html |
| NZW rabbits (16-18 weeks old) | Granja San Bernardo | not available | New Zealand White rabbits http://www.granjasanbernardo.com/en/welcome/ |
| Sucrose | Sigma | S0389-5KG | Sucrose for drinking solution http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s0389?lang=es®ion=ES |
| Rabbit maintenance control diet | Ssniff | V2333-000 | Control diet http://www.ssniff.com/ |
| Rabbit high-fat diet | Ssniff | S9052-E020 | High-fat diet http://www.ssniff.com/ |
| Rabbit rack and drinker | Sodispan | not available | Rack for rabbits https://www.sodispan.com/jaulas-y-racks/racks-conejo-y-cobaya/ |
| Rabbit restrainer | Zoonlab | 3045601 | http://www.zoonlab.de/en/index.html |
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