Summary
כאן אנו מתארים הליכים כירורגיים כדי לייצר הפרעה בחוט השדרה הצדדי אמין (HX) ברמה9 בית החזה של חולדות מבוגרים הערכות נוירוהתנהגותיות שנועדו לזהות לגרעונות אסימטריים לאחר פציעה חד צדדית כזו.
Abstract
פגיעה בחוט השדרה השלם (SCI) לעתים קרובות מוביל ליקויים של פונקציות sensorimotor והוא קליני הסוג התכוף ביותר של SCI. תסמונת בראון-סקארד האנושית היא סוג נפוץ של מדעי לא שלם הנגרמת על ידי נגע לחצי אחד של חוט השדרה אשר מביא שיתוק ואובדן של קינסטזיה על אותו (או הפוך) בצד כמו הפציעה, ואובדן של כאב ותחושה הטמפרטורה על הצד הנגדי (או הקונסקיונאל) בצד. מתודולוגיות הולם להפקת הגנה לרוחב השדרה (HX) והערכת ליקויים נוירולוגיים חיוניים כדי ליצור מודל אמין בעלי חיים של תסמונת Brown-Séquard. למרות שמודל החצייה הרוחבי ממלא תפקיד מרכזי במחקרים בסיסיים וטרנסלביים, פרוטוקולים סטנדרטיים ליצירת כזאת הunilateralized והערכת תפקוד חסר. המטרה של מחקר זה היא לתאר הליכים צעד אחר צעד כדי לייצר HX חולדה לרוחב השדרה בביתהחזה 9 (T9) החוליות. אנו, לאחר מכן, לתאר סולם התנהגות משולב עבור HX (CBS-HX) המספק הערכה פשוטה ורגישה של ביצועים נוירולוגיים אסימטרית עבור SCI חד. הלמ ס-HX, החל מ -0 עד 18, מורכב 4 הערכות בודדות הכוללות מעבר חד צדדי (UHS), צימוד, הצבת קשר, הליכה ברשת. עבור הלמ ס-HX, החפסיתיות והשצלעות הרגליים מוערך בנפרד. מצאנו כי, לאחר T9 HX, לאחר שהגפיים החלציתיות הראה לקוי תפקוד התנהגות ואילו האיבר החוצה מוחלק צלעות הראה התאוששות משמעותית. הלמ ס-HX ביעילות מפלים פונקציות התנהגותיות בין ipsilateral וכלה צלעות הרגליים וזיהה התקדמות הזמני של ההתאוששות של האיבר החוצה החלציתית. ניתן לנתח את רכיבי הלמ ס-HX בנפרד או בשילוב עם אמצעים אחרים בעת הצורך. למרות שסיפקנו רק תיאורים חזותיים של הליכים כירורגיים והערכות התנהגותיות של HX הבית החזה, העיקרון עשוי להיות מיושם על SCIs לא שלם אחרים ברמות אחרות של הפציעה.
Introduction
הפציעות הבלתי מושלמות של חוט השדרה (SCI) לעתים קרובות להוביל ליקויים חמורים ומתמידים של פונקציות sensorimotor הם קלינית הסוג התכוף ביותר של SCI1. תסמונת בראון-סקארד בבני אדם נגרמת על ידי נגע למחצית חוט השדרה אשר מביא שיתוק ואובדן של קינסטזיה על אותו (או ipsilesional) צד כמו הפציעה, ואובדן של כאב ותחושה הטמפרטורה על ההיפך (או הקונאלסטיונאל) בצד2,3,4. לרוחב עמוד השדרה מודלים בעלי חיים משמשים באופן כללי כדי לחקות את תסמונת האדם חום-séquard והם דווחו חולדות5,6,7,8,9, אופוסומים10, וקופים7,11,12,13 על ידי מעבדות שונות ברמותהשדרה השונות. יחד עם זאת, לא תוארו הליכים מפורטים להפקת המשך החצייה הצדדית הסטנדרטית. מתן הליכים צעד אחר צעד עבור הגנה לרוחב צריך למטב את המודל ולהקל על השוואה או שכפול של תוצאות ניסיוני מחקר בסיסי וטרנסלבית.
מדע חד-צדדי מייצר לעתים התנהגות סימטרית ותאים שקשה למדוד באמצעות הערכות קונבנציונליות לפציעות סימטריות. מתודולוגיה נאותה להערכת ליקויים נוירולוגיים עבור SCI חד צדדית היא מרכיב חיוני לפיתוח מודל SCI חד-צדדי. למרות התפקיד העיקרי של פגיעה חד-צדדית בעמוד השדרה, פרוטוקולים סטנדרטיים להערכת sensorimotor לבעלי חיים עם פציעה כזאת חסרים. באסו-Beattie רז-Bresnahan (BBB) locomotor בקנה מידה הדירוג הנפוץ ביותר של פונקציה לאחר SCI עבור חולדות למבוגרים 14 אשר מניב תיאור כמותי למחצה של תנועה כמכלול. עם זאת, הוא אינו מודד כל הגפיים בנפרד.
במחקר זה, אנו מדווחים צעד אחר צעד הליכים כדי לייצר HX השדרה מכרסם בביתהחזה 9 (T9) ברמה החוליות. אנו מציגים גם קנה מידה משולב התנהגות עבור hemisection זיהום (CBS-HX) הכולל מעבר חד צדדי (UHS), צימוד, מיקום קשר, הערכות הליכה ברשת להערכת ליקויים נוירולוגיים והתאוששות לאחר SCI חד. אנו מקווים כי דגם זה יהיה מודל שימושי עבור בחינת מנגנוני הפציעה efficacies טיפולית עבור SCIs חד צדדית.
Protocol
כל ההליכים הטיפול כירורגי ובעלי חיים בוצעו כמאושר תחת המדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה (המועצה למחקר לאומי) ואת ההנחיות של אוניברסיטת אינדיאנה בית הספר לרפואה מוסדית טיפול בבעלי חיים ושימוש וועדה.
1. שיקול כללי
- השתמש בוגרים נקבה ספראג-דאולי (SD) חולדות (במשקל 200 g, n = 12) עבור מחקר זה. Habituate בעלי חיים לכל סביבות בדיקה ולאסוף נתונים בסיסיים עבור כל בדיקות התנהגות שבוע לפני ההליך הכירורגי.
- לבצע את ההערכות ההתנהגותית של שני משקיפים העיוורים לקבוצות הנסיוניות.
2. הכנה לבעלי חיים
- נקו את הטבלה הכירורגית עם 70% אתנול. הניחו משטח חימום מחומם מראש על השולחן הכירורגי. כסו את האזור הכירורגי. עם הכיסוי הכירורגי הסטרילי מניחים את גזה סטרילי, מטליות כותנה, וכלים כירורגיים אוטוקלשים על פני השטח של העטוף כירורגי.
- הפעל עיקור מיקרוחרוז לניתוח עיקור של כלים כירורגיים.
הערה: דוגמה לכלים המשמשים בניסוי זה מוצגת באיור 1. - הזרקת החולדה בעזרת הזרקה של קטמין (87.7 מ"ג/ק"ג) ו-xylazine (12.3 מ"ג/ק"ג). ודא כי המטוס המתאים של הרדמה הוא הגיע בתגובה הגירוי צביטה הבוהן. החלת משחה וטרינר לעיני בעל החיים כדי למנוע ייבוש הקרנית במהלך הניתוח.
- הסר את השיער על גבי חוליות בית החזה על ידי גילוח (איור 2A). הסר את הפרווה מגולח עם ואקום מצויד עם מסנן HEPA.
- לנקות את האזור כירורגי עם שלושה חלוקים לסירוגין של יוד מבוסס קרצוף ואתנול.
- לכסות את החיה עם כיסוי סטרילי עם הגדר על פני האתר המבוקש החתך (איור 2B). הערה בווידאו, העטוף הכירורגי הושמט למטרות הדגמה.
3. הילת השדרה
- גע בצלעה -13 שהיא הצלע הנמוכה ביותר בחולדה וצלע צפה שאינה מתחברת לעצם החזה. בצע אתהצלע 13 הצלעות כדי לזהות את הקשר שלה עם חוליית T13 ולאחר מכן לספור כדי לזהות את החוליה T10.
- השתמש להב אזמל (#15, איור 1) כדי לבצע חתך העור בגובה 3-4 ס מ על הגב על גבי התהליכים החוליות של 8-11 השדרההחמישית .
- תחת מיקרוסקופ כירורגי, מנתחים במיומנות ומפרידים בין השרירים הפאראפיתיים לבין התהליכים הספיריתיים לקראת היבטים של T9 ו T10 חוליות משני הצדדים באמצעות להב אזמל זהה.
הערה: גישה זו יהיה יפה להקניט את הרקמה לגזרים בלי לגרום לדימום. - ייצוב עמוד השדרה באמצעות מחזיק ייצוב שונה. לעשות חתך משני הצדדים של עצם החוליות לרוחב. החלק את זרועות נירוסטה מתחת הצדדים חשופים תהליך רוחבי להדק את הברגים כדי לאבטח את היציבות.
- השתמש מפסק כדי למשוך את השרירים מהאזור כירורגי (איור 2B) ולחשוף את החוליות T8-11 למינציה ו spinous תהליכים (איור 2b).
הערה: ישנו פער גדול בין התהליכים T8 ו-T9 spinous, שהם ציוני דרך לזיהוי T9 (איור 2C, תצוגה מתחת). מן ההשקפה לרוחב, התהליך spinous של T9 החוליה נקודות מתרפס, T10 התהליך הספיראלי התהליכים dorsally, ואת T11 התהליך מסתובב בנקודות; כך, 3 תהליכים spinous טופס פירמידה ואת התהליך T10 spinous צורות השיא (איור 2D, מבט לרוחב). - בצעו כריתת למינציה על החוליה הT9 באמצעות רונדל. לגזור את התהליך T9 spinous ולהסיר חלק קטן של לפני האמצע (איור 3a, קו מקווקו), ואת החלק הימני כולו של להיות בדרך כלל ככל האפשר (איור 3a, קו מקווקו). עבור כריתת למינציה, להכניס את rongeur בעדינות תחת טרף ולגזור פיסת עצם קטנה בכל פעם עד האזור הרצוי של כריתת למינציה מסתיימת (איור 3b ואיור 3b).
- תחת מיקרוסקופ כירורגי, לזהות את קו האמצע של חוט השדרה (איור 3C). הכנס מחט (30 גר') אנכית דרך קו האמצע אל חוט השדרה עם הצד השופע מול הצד הימני (איור 4A).
הערה: המחט צריך לחדור את חוט השדרה כולו כדי להגיע אל הקיר הגחוני של התעלה החוליות. - להפסיק לדמם עם חתיכה קטנה. של מקצף סטרילי
- הוסף קצה אחד של מספריים iridectomy/מיקרוכירורגית דרך מסלול המחט באמצע המסלול, ואת הקצה השני לאורך המשטח הצדדי של החבל הימני, ולאחר מכן לבצע לחתוך לחלוטין על הקצה הימני של החוט עם המספריים (איור 4B).
הערה: השתמש מיקרו מספריים חדה עבור חוט השדרה לחתוך כדי למזער את הנגע הדחיסה לחוט השדרה במהלך החיתוך. - השתמש בקצה לרוחב של המחט אותו כמו סכין כדי לחתוך את הפער הנגע כדי לאשר את הזיהום הנכון לחלוטין. בדוק את שלמות החומר הימני על ידי הצגת החלק התחתון של התעלה החוליות עם מיקרוסקופ כירורגי (איור 4C, נוף חוצה-חתך; איור 4D, תצוגה לרוחב; איור 4E, תצוגה משלו.
- המקום פיסת קטן של ספוג ג'לטין מעל לאתר נגע (איור 4F). השתמש תערובת מלט לבנות גשר צר על הספוג ואת התהליכים spinous של T8 ו T10 (איור 4G, H).
הערה: מטרת השימוש בגשר בטון היא שתי מתקפלות: 1) היא מפרידה את הצלקת שפותחה באתר הפציעה משאר הרקמה, ו 2) זה מקל לנתח את מקטע חוט השדרה לאחר הקרבת בעלי חיים. - תפר את השרירים ואת העור בנפרד עם חוט משי 4-0.
- הכנס 0.9% תמיסת מלח סטרילית כדי לשמור על התת-עורי. הכנס סוכן כאבים בופראורפין (0.05-2.0 מ"ג/ק"ג) 8-12 h/day תת-עורי במשך יומיים. לחץ על שלפוחית השתן 2-3 פעמים ביום עבור השבוע הראשון ו 1-2 פעמים בשבועות הבאים עד החזרת השלפוחית הספונטנית שלפוחית.
4. טיפול בבעלי חיים שלאחר הניתוח
- החזר את בעל החיים לכלוב הבית היחיד שלו. לספק צ'או מכרסם לח או ג'ל בתחתית הכלוב כדי לסייע ביכולת של בעל חיים לאכול/הימה. מניחים משטח חימום מתחת לכלוב במהלך ההתאוששות לאחר הניתוח. ודא שמשטח החימום מכסה רק חצי מהחלק התחתון של הכלוב כדי למנוע התחממות יתר.
- הכנס 0.9% תמיסת מלח סטרילית כדי לשמור על התת-עורי. הכנס סוכן כאבים בופראורפין (0.05-2.0 מ"ג/ק"ג) 8-12 h/day תת-עורי במשך יומיים. לחץ על שלפוחית השתן 2-3 פעמים ביום עבור השבוע הראשון ו 1-2 פעמים בשבועות הבאים עד החזרת השלפוחית הספונטנית שלפוחית.
5. להעריך את הצעד החד החד-צדדי (UHS)
הערה: הבדיקה החד הצדדית (UHS) היא מידה ישירה של היכולת של בעלי חיים בתחום המדע הבדיוני לנצל את הגוף הפתוח. כפי שהוזכר ב-1.1, בעלי החיים התמינו לסביבת שדה פתוחה (קוטר 42 אינצ ') 15 פעמיים ביום במשך 7 ימים. שני משקיפים עיוורים לקבוצות החיות לבצע את הבדיקה. הציון UHS בשני בסיס (7 ימים לפני T9 HX) ונקודות זמן לאחר הפציעה ייאספו. השלבים להערכה מתוארים כמפורט להלן.
- הציבו את בעל החיים בסביבת שדה פתוחה ובחנו את תנועה של בעל החיים למשך 4 דקות.
הערה: במהלך הבדיקות ניתן להעניק עידוד לבעל החיים לנוע באופן פעיל. - כאשר הטופס המסופק בטבלה 1, הקצה ערך 1 עבור Yes ו-0 עבור לא עבור כל קטגוריית התנהגות ולאחר מכן סכם את הערך הכולל כדי לתת ציון uhs סופי של 0 עד 8.
הערה: על פי שולחן 1 0: לא התנועה הנצפה של האיבר הראשון; 1 – 4: תנועות מבודדות של 3 מפרקים המפרקים (ירך, ברך, קרסול); 5: גורף ללא תמיכה במשקל; 6: הצבת ללא תמיכה במשקל; 7: הצבת תמיכה במשקל; ו-8: צעד עם תמיכת משקל. - לאסוף ציונים UHS בשני בסיס (7 ימים לפני T9 HX) ואת נקודות הזמן לאחר הפציעה.
הערה: הציונים יהיו מוערך בנקודות זמן שונות לאחר T9 HX.
6. צימוד
- לנתח את הלוח הבקרה (צימוד הילוך) עם הקלטת וידאו חיה הליכה על מכשיר מסלול צר או פשוט שדה פתוח.
- במקטע הצימוד של טבלה 1, הקצה תוצאה של 0 עבור "לא", 1 עבור "לא סדיר/מגושם", ו-2 עבור "רגיל" עבור כל קטגוריית CPL.
הערה: הבדיקה הצימוד (CPL) היא להעריך את הקואורדינציה של תנועות מתחלפות של גפיים, כולל CPL הומוולוגי (חזית-חזית/אחורי-הגפיים האחוריים, איור 5A), לוח הבקרה האלכסוני (מימין לשמאל האחורי או הקדמי ימין-אחורי שמאל, איור 5a ),ו-cpl הומוצלעות (הגפיים הקדמיות בעקבות HX T9, את החסרונות של הגפיים העצמיים על הצד הדו להיות גלוי וכתוצאה מכך התחלפות של CPL הומוולוגי (איור 5D), לוח הבקרה האלכסוני (איור 5d), ו-cpl הומוצלעות (איור 5d).
7. צור קשר עם הצבת
הערה: מערכת המגע הגוף משתמשת במבחן משמש כדי להעריך את השילוב המנוע של תגובות הגוף לגירויים בעלי ערך 16. קינסטזיה נחשבת להיות ללא פגע אם החיה מגיע עם האיבר התחתי שלו על פני השטח לאחר שהוא מוריד את הגפיים מתחת לפני השטח.
- החזיקו את החיה בתנוחה אנכית כך ששתי הגפיים יהיו זמינות לתגובה המציב.
- מצחצח את פני השטח הקדמי של הגפיים קדימה בקלילות לכיוון קצה של משטח (למשל, ספסל בעלי חיים).
- להתבונן מיקום כף הרגל על פני השטח ולהקצות קשר הגוף החוצה הצבת הציון. 0: ללא הצבת; 1: הצבת.
הערה: המשטח הגבי מקבל גירוי ואת הרגל יהיה לאחר מכן להאריך ולמקם את הרגל על פני השטח אם הרפלקס הוא שלם. טופס ההערכה הוא גם בטבלה 1.
8. הליכה ברשת
הערה: מבחן ההליכה ברשת מעריך מנוע ספונטני ותנועות גפיים מעורבים צעד מדויק, תיאום, ומיקום כפה מדויק.
- מניחים עכברוש על רשת התיל מצופה פלסטיק מוגבה (36 × 38 ס"מ עם 3 ס"מ2 פתחים) ולאפשר לו ללכת בחופשיות על פני הפלטפורמה עבור 30 שלבים.
- הרוזן את מספר הצעדים הכולל ואת מספר וטעה רגל עבור כל איבר. הקלטות וידאו עשויות לאשר את הספירה.
הערה: שני משקיפים עיוורים להעריך מיקום כף יד של הגפיים והרגליים כמו בעלי חיים הליכה. - להקצות את התוצאות הליכה ברשת עבור כל האיבר החוצה כדלקמן – 0: וטעה גדול יותר 15; 1: שלבים שאינם משלבים פחות או שווים ל-15; 2: שלבים שאינם משלבים פחות או שווים ל-10; ו-3: שלבים שאינם פחות או שווים ל-5.
הערה: הערכת הניקוד מבוססת על טבלה 1. הניקוד התפשטחשבתי משמש כאמצעי לחומרת המנועים.
9. פרזיה ועיבוד רקמות
- לאחר הרדמה הולמת דומה בשלב 2.3, מבשם בעלי החיים בזהירות בעקבות הפרוטוקול perscardial הפרזיה 17.
- לנתח ולאסוף את הדגימות חוט השדרה ולאחר לתקן אותם ב 4% בארה ב בלילה.
- לאחר מכן ניתן להעביר את הדגימות ל -30% מתמיסת השאיבה.
- חותכים את חוט השדרה בסעיפים לחצות וכתם את הסעיפים שנבחרו עם האקסון סמן SMI-31 ו-astrocytic סמן בחלבון חומצי (GFAP) בהתאם לנהלים סטנדרטיים18.
Representative Results
הליכים כירורגיים המתוארים לעיל לאפשר ייצור של HX עקבית לרוחב ב T9. לאחר הסרת היתוך והעור, האתר כירורגי ב T9 יכול להיות מזוהה בקלות על ידי תפר שיורית (איור 6A). ניתוח נוסף מאפשר חשיפה של גשר הבטון (איור 6B), וספוג ג'לטין (איור 6b) בשכבות. חוט השדרה חשוף לאחר מכן לתעלת החוליות הפתוחה, ולחץ לרוחב בצד ימין מאושר (איור 4D). רמת הפציעה יכולה להיות מאושרת עוד יותר על ידי הקשר שלה עם הגופים החוליות והצלעות החשופות (איור 6D). Immunofluorescence כתמים של חתך רוחב במוקד הפציעה מראה אובדן מוחלט של הזכות הימנית ושימור הגוף השמאלי השמאלית הצלעות לפציעה. המקטע מוכתם עם סמן האקסון smi-31 ו astrocytic הסמן גליה בחלבון חומצי (gfap) (איור 6e).
נוירוביהלבעל פה, הלמ ס-HX מערכת מסוגלת לזהות את החסרונות האסימטריים לאורך זמן בעקבות HX T9. לאחר HX, לאחר שאיבדה את היכולת לאבד את יכולתה לדרוך בעוד שהאיבר המקודמו הצלעות שמרו על היכולת ללכת. עבור כל מדידה התנהגות, ביצעו 3 מבחנים והשתמשנו בממוצע של 3 מבחנים לכימות וניתוח. השתמשנו מידה טרום ניתוח כבסיס שבו אנו מחשיבים את השליטה המדויקת ביותר לעומת באמצעות חולדות אחרות. עשרות של 4 מדדים בודדים, כלומר UHS, CPL, הצבת הקשר, ואת הליכה ברשת ניתן לנתח בנפרד (איור 7A-D) או שהם יכולים להיות משולבים הלמ ס המשולב-hx (איור 7a). דו-way מנתח ANOVA הראה הבדלים משמעותיים UHS (F = 23.199, p < 0.001), צימוד (F = 8.376, p < 0.01), צור קשר הצבת (F = 17.672, p < 0.001), הליכה ברשת (f = 19.261, p < 0.001), CBS-HX (F = 20.897, p < 0.001) בין הצדדים שצלעות ושולי מהצדדים. איור 7A מראה את התוצאות של uhs לאחר T9 hx. ב 3 הימים הראשונים בפוסט, חולדות איבדו את היכולת לדרוך וקיבל ציון של 0-2 עבור האיבר האחרון הלסיללי. תנועות כמו צעד החלו להופיע על הצד הלסילטי ב 7-10 ימים לאחר הפציעה עם רוב השלבים להיות שלבים מעבר. על ידי 28 ימים לאחר T9 HX, החולדות יכול לקחת צעדים plantar עם תיאום כמעט נורמלי עם ציון UHS מוקצה של 8. כהשוואה, האיבר האחרון שהופרע היה מקוטע פחות הציון UHS ירד בתוך 5 ימים הראשונים לאחר T9 HX וחזר לרמה הבסיסית אחרי יום 10 לאחר הפציעה. עבור ה-CPL סה כ (כולל הומווליום, צימוד הומוולוגי ואלכסוני) בדיקה, הן יציבות והסתגלות של תיאום לאחר T9 HX היו מופחתות במידה ניכרת (איור 7B). ב 1-5 ימים לאחר הפציעה, בעלי חיים HX הראו שום סימן של CPL. לאורך זמן, CPL של הגוף האחרון המסילעה הגיח, לעתים קרובות מגושם, לא יציב, ובלתי מכוון שונים במהירות שלהם, כוח, וכיוון. איש הקשר הצבת (איור 7C) ו הליכה ברשת (איור 7c) של האיבר האחרון משוכן הושפעו גם על ידי T9 hx במיוחד בתוך 5 ימים הראשונים לאחר הפציעה, והתאושש בדרך כלל כאשר החיה החלה לקחת צעדים plantar. מערכת CBS מורכבת-HX כוללת את UHS, CPL, הצבת הקשר, והליכה בדיקות רשת עבור ציון אפשרי מקסימלית של 18 (איור 7E). הפונקציה המוטורית של הגפיים השחותיות שהיו בלתי צלעות הפגינו ירידה בציוני CBS-HX לאחר T9 לרוחב HX, אשר תואם את החסרונות לראות את תסמונת חום האדם-Séquard. הפונקציה המוטורית של הגפיים החלבית המוסילצלעות הפגינו ירידה ב-CBS ציונים של HX מ 1 יום עד 4 שבועות לאחר HX T9 לרוחב לעומת הגפיים התותבות שבצלעות (איור 7E).
כך, מערכת CBS מורכבים-HX שילוב של UHS, CPL, הצבת הקשר, ואת הליכה ברשת ניתן להשתמש כדי להעריך את התפקוד ההתנהגותית של חולדות לאחר הפציעה לרוחב של חוט השדרה בבית החזה עבור ציון אפשרי מקסימלית של 18.
איור 1. כלים כירורגיים המשמשים להפקת מT9 צד ימין. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
איור 2. . כירורגית לשעברposure A) לגלח את השיער על הגב על האזור הכירורגי. ב) למשוך את השרירים מהאזור כירורגי באמצעות מפסק. ג) חושפים את החוליה הT8-11 ומגדירים תהליכים מבודדים (חיצים). שימו לב כי ישנו פער גדול בין התהליכים T8 ו-T9 spinous, שהוא נקודת ציון לזיהוי T9. ד) הציור הסכימטי מראה את המראה הרוחבי של התהליכים הספידיים. התהליכים הספינתיים T9-11 יוצרים פירמידה עם התהליך T10 spinous המהווה את השיא. שוב, פער גדול בין T8 ו T9 התהליכים הספילתיים נראה בבירור כנקודת ציון לזיהוי T9 שבו מבוצעת כריתת למינציה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
איור 3. כריתת למינציה וחשיפת. המיקורד הנכון A) הציור הסכמטי מראה את חתך השידרה של חוט השדרה בתוך חוליית T9. הקו המקווקו מציין את מידת הניתוח של הלמינציה בכל צד. ב) הציור הסכימטי מראה את ההסרה של חלק קטן מהאמינה בצד שמאל ואת קשת החוליות כולה בצד ימין. חץ מציין את קו האמצע של הכבל. ג) מראה על חוט השדרה החשוף. שים לב כי וריד הראש היה ממוקם באמצע חוט השדרה חלוקת hemicords שמאל וימין. . המיקורד הימני נחשף לחלוטין אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
איור 4. . הזיהום הרוחבי A-D) ציורים סכמטית מראים את החדרת המחט של קו האמצע לחוט השדרה (א), הT9 תית (ב), כיסוי של ספוג ומלט של ג'לטין (C), ואת ההשקפה הצדדית של הT9 לרוחב (D). קווים מקווקווים ב-C מתווה את החוליות הT9 שהוסרו ואת ההימיקורד הנכון. E) השקפה מצופה על חוט השדרה הימני. F) מיקום חתיכה קטנה של ספוג ג'לטין על האתר. G-H) גשר מלט-P שנבנה מעל הספוג והתהליכים הספיציתיים של T8 ו-T10. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
איור 5. רישום סכמטי של מבחן הצימוד (CPL) . בדיקת הCPL היא להעריך את הקואורדינציה של תנועות מתחלפות של גפיים, כולל הומוולוגי CPL (חזית קדמית/אחורי-הגפיים האחוריים), B) לוח הבקרה האלכסוני ( מימין לשמאל האחורי ימינה/אחורי הימנית השמאלית), ו C) הומוצלעות cpl (הגפיים הקדמיות באותו צד). לאחר T9 HX (התיבה האדומה, D-F), הגרעון הנוכחי הפך גלוי על הצד האיפמי ובעלי חיים להראות חוסר תיאום הומויומן (D), אלכסוני (E), ו הומופולצלעות (F) CPL. נא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
איור 6. . ניתוח רקמות והיסטולוגיה לאחר הפרזיה, הרקמות היו גזור כדי לחשוף את חוט השדרה. מקטעי הצלב עובדו עבור כתמים החיסונית כפולה של חלבון חומצי fibrillary (GFAP, סמן עבור astrocytes) ו SMI31 (סמן עבור axons). A) חשיפת התפר כנקודת ציון לאתר הפציעה (חץ צהוב). ב) חשיפה של מלט שיניים (חץ צהוב). ג) חשיפת ספוג ג'לטין (חץ צהוב). ד) לזהות את עמוד השדרה בצד ימין (חץ צהוב). ה) חתך בחוט השדרה בחלק החיסוני של מוקד הפציעה ויטראז ' עם GFAP (ירוק) ו-smi 31 (אדום). זה מראה שהדקורד הימני של עמוד השדרה נחתך לגמרי והמיקורד השמאלי השתמר היטב. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
איור 7. תוצאות של ציונים נוירוהתנהגותית. גרפים מציגים עשרות מתוך 5 המידות: A, תוצאת החצייה החד-צדדית (uhs); B, צימוד (CPL); ג, צור קשר הצבת; D, הליכה ברשת, ו- E, התנהגות משולב ציון (CBS) על ipsilateral וכלי צלעות הרגליים לאחר T9 hx. נתונים מייצגים ממוצע ± s.e.m. *: p < 0.05, * *: p < 0.01, * * *: p < 0.001 בין ipsilateral וכלה צלעות הרגליים (2-way-ANOVA, מבחן השוואות מרובות של Tukey, n = 12 חולדות/קבוצות). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
| שם/טווח של תוצאת משנה | תיאור/ | ציון | |
| צעד השדרוך חד צדדי | התנועה הקלה הנצפה | לא | 0 |
| UHS | כן | 1 | |
| (0-8) | תנועת הקרסול | לא | 0 |
| כן | 1 | ||
| תנועת הברך | לא | 0 | |
| כן | 1 | ||
| תנועת היפ | לא | 0 | |
| כן | 1 | ||
| גורף (ללא תמיכה במשקל) | לא | 0 | |
| כן | 1 | ||
| הצבת (ללא תמיכה במשקל) | לא | 0 | |
| כן | 1 | ||
| הצבת (בתמיכת משקל) | לא | 0 | |
| כן | 1 | ||
| דרוך | לא | 0 | |
| כן | 1 | ||
| צימוד | הומוצלעות | לא | 0 |
| (0-6) | לא סדיר/מגושם | 1 | |
| נורמלי | 2 | ||
| ומולוגיים | לא | 0 | |
| לא סדיר/מגושם | 1 | ||
| נורמלי | 2 | ||
| אלכסון | לא | 0 | |
| לא סדיר/מגושם | 1 | ||
| נורמלי | 2 | ||
| צור קשר עם ההנחה | לא | 0 | |
| (0-1) | כן | 1 | |
| הליכה ברשת | מיס סטפס | > 15 | 0 |
| (0-3) | ≤ | 1 | |
| ≤ | 2 | ||
| ≤ | 3 | ||
| סך של הלמ ס-HX | |||
| (0-18) | |||
שולחן 1: תוצאות ההתנהגות המשולבת עבור המישנה (CBS-hx)
Discussion
במחקר זה, אנו לדווח על צעד אחר צעד הליכים להפקת פשוט, עקבי, T9 השדרה HX השידרה בחולדות למבוגרים המחקה את התסמונת חום-Séquard בבני אדם. אנו עוד להציג מערכת התנהגות משולבת ציון עבור hemisection זיהום (CBS-HX) אשר רגיש להערכת ליקוי נוירולוגי סימטרי התקדמות של התאוששות, נמדד על ידי שילוב של מעבר חד צדדי הגפיים (UHS), צימוד (CPL), הצבת קשר, והליכה ברשת. למרות שאנו מדגימים את הפציעה ברמה T9, הליך זה ניתן להחיל על אזורים אחרים של חוט השדרה כולל מיתרי הצוואר המותני בדרך פשוטה ובלתי תובענית. אנו מקווים כי דגם זה, יחד עם הערכות התנהגותיות unilateralized, יהיה שימושי לבדיקת מנגנוני הפציעה וefficacies טיפולית עבור סוגים כאלה של SCI.
מאז מודל HX לרוחב רק נגעים החצי הצלעות של החוט, הצד הפנימי של חוט השדרה נשמר במידה רבה והוא יכול לשמש כשליטה פנימית. מסלולים רבים בירידה ובעליות מתוכננות באופן חד-צדדי והדלקת לרוחב בנסיבות רבות מייצרת נזק למערכת העיכול בצד אחד ומשמרת את מערכת העיכול בצד הנגדי ומאפשרת השוואה של ארגון משנה ו ההשלכות הפונקציונליות של אלה משתנה באותה חיה. בנוסף, הפקת נגע מקומי יותר עשוי לאפשר את המיקוד של מסלולים ספציפיים. לדוגמה, נגע הגחוני והנטרואני עלול להשפיע על שבילים של השדרה ואת הפרוזדור. נגע מתחת או דורסוללי צלעות עלול להשפיע על המסלולים corticospinal והשדרה הרורוקתית. מודל הזיהום או הפציעה חלקית יכול לשמש גם כדי ללמוד את האנטומיה והתפקוד של מסלולים אחרים, כגון בעלי השדרה העצביים, נוראדרארירגיות או מסלולים הסרוגיים. לפיכך, מודל הזיהום יכול להיות מועסק באופן ייחודי כדי ללמוד פיצוי על ידי מסלולים סנסוריים, על-ידי שבילים יורדים, ועל ידי מעגלים פנימיים השדרה. מודל זה מתאים גם לחקירת מנגנונים של שחזור locomotor לאחר HX.
HX לרוחב מוביל ליקויים התנהגותיים ברורים, אשר מסוגלים תחת משימות מוטוריות (g., הליכון או הליכון) הפרדיגמה עבור ניתוח הילוך אוטומטי 19. כמו כן, ניתן למדוד את מוליכות האקונאליות על הצד הצידי של הנגע לנגעים באמצעות הקלטות אלקטרופיזיולוגיות, והערכה זו מספקת את האפשרות להקים ארגון מחודש בעקבות טיפולים שונים. יתר על כן, זריקות חד צדדית של המשדרים האנטומיים לתוך הנוירונים של שביל מסוים ויזואליזציה של היתר בדרך מסוימת התווית באמצעות מעבר של סיבי המעבר של הקשר עם הנוירונים שכותרתו באופן מוגרקלי20,21,22,23,24,25.
למרות הניתוח HX אופייני השדרה לוקח פחות מ 20 דקות כדי לסיים, זה דורש קצת תרגול כדי להשיג HX מדויק ועקבי. ראשית, חשוב כי רמת השדרה HX להיות עקבית מבעל חיים לחיה. לכן, חשוב לזהות את המקטע המתאים בחוליות עבור כריתת למינציה. שנית, ודא ש-HX הושלם. כדי לבצע HX מלאה, ניתן להשתמש במחט של 30 מטר מוכנס אנכית דרך קו האמצע כדי להנחות את חיתוך באמצעות מיקרו מספריים. החדרת המחט גם נמנעת מפגיעה בכלי השדרה או בחוט השידרה האחורי. הפונקציה השנייה של המחט 30-מד היא שהוא יכול לשמש סכין כדי לעקוב אחר החתך כדי לוודא כי אין בהירות של הנגע. שלישית, הצבת ג'לטין על האתר נגע יכול למזער את דליפת נוזל שדרתי השדרה, והצבת מלט על גבי הג וגישור החוליות טרף יכול לחזק את היציבות של חוליות השדרה באתר הנגע ולהקל על ריפוי הפצע. כדי למנוע את ההפרעה האות עם היישום של הקלטות אלקטרופיזיולוגיות, השרירים, fascia, ואת העור צריך להיות משמים בשכבות עם חוט משי 4-0. בסופו של דבר, יש לעשות כל מאמץ כדי למזער את הנזק לחוט השדרה הצלעות. יש להקים אימות היסטולוגית כדי לאשר הגנה מלאה על צד אחד ושימור החצי השני של החוט בצד השני (כפי שמוצג באיור 6E).
כדי לשפר את תנועה אחרי SCI, מחקרים קודמים השתמשו מגוון רחב של אסטרטגיות כולל השתלת תאים, אקסון התחדשות 8,18,26,27, ושיקום מבוסס פעילות 28,29,30. בינתיים, מספר בדיקות התנהגותיות הוקמו להערכת פונקציונלי למסך עבור הטיפולים הטובים ביותר בעקבות SCI. קנה המידה של bbb locomotor מיועד להערכת locomotor של פציעות בעמוד השדרה, כגון החבלה באמצע הדרך או פציעות רוחבי המשפיעות על הגפיים הדו 14,31. פרמטרים מסוימים של BBB, כגון תיאום ואישור הבוהן, נרשמים על ידי התבוננות בשני הגפיים. אם אחד הגפיים הוא שלם והשני מראה את החסרונות כפי שנראה פציעות אסימטריים, אז האיבר האחרון שלמים יהיה לבלבל את התוצאה של האיבר האחרון מושפע. מאז הניקוד BBB לא מתאים אחד מהאיברים האחרון מהשני לאחר הפציעה חד צדדית, זה לא אידיאלי להערכת פציעות בחוט השדרה החד צדדית. עם זאת, אם תנועה משותפת ותמיכת משקל בכל צד מוערך בנפרד ולא מחושבים כחלק BBB, אז האיבר הגוף השלם (בדומה לפקד המזויף) לא לבלבל את התוצאה של האיבר המשכן המושפע. יתר על כן, הצד השלם לא מוטה את התוצאה הכוללת של בעל החיים, כי האיבר הגוף השלם אינו מקבל כתמים דרמטיים בתנועה משותפת, תמיכה במשקל או צעידה.
תוצאת ההתנהגות המשולבת באתר מתוכננת להיות הערכה רגישה וקלה לביצוע ההחלמה ההתנהגותית במודל החולדה של המופילה לרוחב. ניתן להשתמש בו להערכת התנהגויות של שלבי התאוששות מוקדמים ומאוחרים. השלב המוקדם הוא בתוך 7-10 ימים שלאחר הפציעה. בשנת 3-5 הראשון הימים post-HX, הפעילות הקודמת התגובה גדל בהתמדה, צריך להיות מוערך לעתים קרובות יותר להקליט ספונטנית או טיפול-מתווך התנועה החלמה הגירה. על ידי 5-7 ימים post-HX, חולדות החלו לבצע תנועות הגוף האחרון סוחף ללא תמיכה במשקל. ב 7-10 ימים, חולדות בדרך כלל החלו לעמוד ולדרוך. במהלך שלב זה, יש לשלם את הטיפול בצעד. בשלב מאוחר (14-28 ימים), פעילות הגוף האחרון הקשור היה יציב וקרוב לנורמלי.
יש לשלם גם תשומת לב מקרוב לקיבולת צימוד (CPL). בדיקת CPL (צימוד הילוך) ניתן לבצע גם עם וידאו (למשל, הליכונים/המסלול) או וידאו צילום במהלך בדיקה בשדה הפתוח. האפשרות השנייה מספקת גמישות אם לחוקרים אין גישה למערכת ניתוח הילוך. עבור שני הפעלות הקלטת וידאו, נדרש מינימום של שני טאצ'דאונים רצופים עבור כל רגל לבדיקה זו. לצורך הניתוח, קיימים שלושה פרמטרים של צימוד: הומוולוגי, הומוצלעות וצימוד אלכסוני (שלב 6.2). כל זיווג כרוך ברגל התייחסות וברגל נתונה. לקחת צימוד הומוולוגי (חזית משמאל לימין, או שמאל העורף הימני) למשל, זה הזמן הטאצ הראשון של הרגל נתון מחולק על ידי זמן אחד שלמים של הרגל התייחסות. מאז רגל ימין ושמאל צריך להיות מחוץ לשלב, הזיווג המושלם צריך להיות 0.5. זה אותו מקרה בצימוד הומוצלעות (שמאלי קדמי שמאלי, או מימין לימין). עם זאת, עבור צימוד אלכסוני (משמאל לימין הימני הקדמי, או ימינה משמאל לימין), צימוד מושלם צריך להיות 0 או 1 מאז שתי הרגליים צריך להיות בשלב. בשלב 6.4, אנו מקצים ניקוד עבור כל CPL מ -0 ל-2. בפרטים, ציון 0 יהיה לייצג את הרגל נתון אינו מסוגל לעבור כדי לסיים טאצ'דאון, ומכאן לא CPL; ציון 1 מייצג כל CPL לא סדיר או מגושם מאז הרגל נתון מסיים טאצ'דאון אבל לא צימוד מושלם; ציון 2 פירושו זיווג מושלם של 0.5. שלושת מושגי הפרמטרים הזיווגים מתוארים היטב בפרסומים הקודמים32,33. CPL ניתן לשלב עם הערכות של הצבת מגע הליכה הרשת. רכיבים בודדים של מערכת הניקוד המשולב בשילוב יהיה פחות או יותר יעיל במודלים עכברוש שונים של SCI. עבור ה-CPL, הפכו החסרונות לגלויים בקצב האללאום ובשלמות הרצף. . יכול להתגלות בבירור לאחר HX חד צדדית במחקר שלנו, כל החולדות הראו מושלהאיבר מעצר מתוך הצבת לוקטנים בעוד הצבת הגוף הקטוע הצלעות הראה שום חסרונות. מבחן הליכה הרשת צריך להיחשב כאשר ליצור קשר הצבת, המערבת את corticospinal בדרכי, מתחיל להתאושש. כדי לשלול כל בעיות עייפות אפשרי, רצף של בדיקות התנהגותיות יכול להיות אקראי בכל מבחן.
לסיכום, אנו מדווחים הליכים צעד אחר צעד כדי ליצור הvivo מודל עכברוש של ה-hx השדרה T9 המחקה את תסמונת חום-Séquard בבני אדם. מערכת התוצאות המשולבת של התוצאה עבור hemisection מציעה מדד מבדיל יותר של התוצאות ההתנהגותית האישית בודדים להערכת מנגנוני הפציעה וטיפולים לאחר מדע חד צדדי. למרות שאנו רק מספקים תיאור חזותי של הליכים כירורגי והערכות התנהגותיות של HX בית החזה, שיטות המתוארות כאן עשויים להיות מיושם על SCIs לא שלם אחרים ברמות פציעה שונים.
Disclosures
. אין לנו מה לגלות
Acknowledgments
אנו מודים למר ג'פרי רצ'צ'יה-רייף על הסיוע הטכני המעולה שלו. עבודה זו נתמכת בחלקו על ידי הקרן של מנהל בית החולים הכללי של ג'ינאן האזור הצבאי של Chines PLA 2016ZD03 ו 2014ZX01 (XJL ו TBZ). מחקר במעבדה של שו נתמך על ידי NIH 1R01 100531, 1R01 NS103481, ופרס ביקורת הצטיינות I01 BX002356, I01 BX003705, I01 RX002687 מהמחלקה האמריקנית לענייני יוצאי צבא.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Baby-Mixter Hemostat | FST | 13013-14 | Can be any brand of choice |
| Elevated plastic coated wire mesh grid | Any | 36×38 cm with 3 cm2 openings | |
| Gel foam | Moore Medical | 2928 | Can be any brand of choice. |
| Grip cement kit, powder and solvent | Dentsply | 675570 | Can be any brand of choice. |
| Microbead Sterilizer | FST | NA | Can be any brand of choice |
| Pearson Rongeur | FST | 16015-17 | Can be any brand of choice. |
| Retractors | Jinxie surgical tools | 6810 | Can be any brand of choice |
| Scalpel Handle | FST | 10003-12 | Can be any brand of choice |
| Simplex-P cement | Stryker | Can be any brand of choice. | |
| TreadScan automatic gait analysis | CleverSys Inc | NA | Can be any brand of choice |
References
- Center, N. S. C. I. S. Spinal Cord Injury Facts and Figures at a Glance. SCI Data Sheet. , (2018).
- Zhang, X. Y., Yang, Y. M. Scissors stab wound to the cervical spinal cord at the craniocervical junction. Spine Journal. 16 (6), e403-e406 (2016).
- Enicker, B., Gonya, S., Hardcastle, T. C. Spinal stab injury with retained knife blades: 51 Consecutive patients managed at a regional referral unit. Injury. 46 (9), 1726-1733 (2015).
- Witiw, C. D., Shamji, M. F. Brown-Sequard syndrome from herniation of a thoracic disc. Canadian Medical Association Journal. 186 (18), 1395 (2014).
- Webb, A. A., Muir, G. D. Compensatory locomotor adjustments of rats with cervical or thoracic spinal cord hemisections. Journal of Neurotrauma. 19 (2), 239-256 (2002).
- Filli, L., Zorner, B., Weinmann, O., Schwab, M. E. Motor deficits and recovery in rats with unilateral spinal cord hemisection mimic the Brown-Sequard syndrome. Brain. 134 (Pt 8), 2261-2273 (2011).
- Friedli, L., et al. Pronounced species divergence in corticospinal tract reorganization and functional recovery after lateralized spinal cord injury favors primates. Science Translational Medicine. 7 (302), (2015).
- Xu, X. M., Zhang, S. X., Li, H., Aebischer, P., Bunge, M. B. Regrowth of axons into the distal spinal cord through a Schwann-cell-seeded mini-channel implanted into hemisected adult rat spinal cord. European Journal of Neuroscience. 11, 1723-1740 (1999).
- Gulino, R., Dimartino, M., Casabona, A., Lombardo, S. A., Perciavalle, V. Synaptic plasticity modulates the spontaneous recovery of locomotion after spinal cord hemisection. Neuroscience Research. 57 (1), 148-156 (2007).
- Xu, X. M., Martin, G. F. The response of rubrospinal neurons to axotomy in the adult opossum, Didelphis virginiana. Experimental Neurology. , 46-54 (1990).
- Wu, W., et al. Axonal and Glial Responses to a Mid-Thoracic Spinal Cord Hemisection in the Macaca fascicularis Monkey. Journal of Neurotrauma. , (2013).
- Shi, F., et al. Glial response and myelin clearance in areas of wallerian degeneration after spinal cord hemisection in the monkey Macaca fascicularis. Journal of Neurotrauma. 26 (11), 2083-2096 (2009).
- Nout, Y. S., et al. Methods for functional assessment after C7 spinal cord hemisection in the rhesus monkey. Neurorehabililation and Neural Repair. 26 (6), 556-569 (2012).
- Basso, D. M., Beattie, M. S., Bresnahan, J. C. A sensitive and reliable locomotor rating scale for open field testing in rats. Journal of Neurotrauma. 12 (1), 1-21 (1995).
- Liu, N. K., et al. Cytosolic phospholipase A2 protein as a novel therapeutic target for spinal cord injury. Annals of Neurology. 75 (5), 644-658 (2014).
- Kunkel-Bagden, E., Dai, H. N., Bregman, B. S. Recovery of function after spinal cord hemisection in newborn and adult rats: differential effects on reflex and locomotor function. Experimental Neurology. 116, 40-51 (1992).
- Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole animal perfusion fixation for rodents. Journal of Visualized Experiment. (65), (2012).
- Deng, L. X., et al. A novel growth-promoting pathway formed by GDNF-overexpressing Schwann cells promotes propriospinal axonal regeneration, synapse formation, and partial recovery of function after spinal cord injury. Journal of Neuroscience. 33 (13), 5655-5667 (2013).
- Liu, J. T., et al. Methotrexate combined with methylprednisolone for the recovery of motor function and differential gene expression in rats with spinal cord injury. Neural Regeneration Research. 12 (9), 1507-1518 (2017).
- Schnell, L., et al. Combined delivery of Nogo-A antibody, neurotrophin-3 and the NMDA-NR2d subunit establishes a functional 'detour' in the hemisected spinal cord. European Journal of Neurosciences. 34 (8), 1256-1267 (2011).
- Arvanian, V. L., et al. Chronic spinal hemisection in rats induces a progressive decline in transmission in uninjured fibers to motoneurons. Experimental Neurology. 216 (2), 471-480 (2009).
- Hunanyan, A. S., et al. Alterations of action potentials and the localization of Nav1.6 sodium channels in spared axons after hemisection injury of the spinal cord in adult rats. Journal of Neurophysiology. 105 (3), 1033-1044 (2011).
- Garcia-Alias, G., et al. Chondroitinase ABC combined with neurotrophin NT-3 secretion and NR2D expression promotes axonal plasticity and functional recovery in rats with lateral hemisection of the spinal cord. Journal of Neuroscience. 31 (49), 17788-17799 (2011).
- Petrosyan, H. A., et al. Neutralization of inhibitory molecule NG2 improves synaptic transmission, retrograde transport, and locomotor function after spinal cord injury in adult rats. Journal of Neuroscience. 33 (9), 4032-4043 (2013).
- Yu, Y. L., et al. Comparison of commonly used retrograde tracers in rat spinal motor neurons. Neural Regeneration Research. 10 (10), 1700-1705 (2015).
- Lu, P., et al. Long-distance axonal growth from human induced pluripotent stem cells after spinal cord injury. Neuron. 83 (4), 789-796 (2014).
- Teng, Y. D., et al. Functional recovery following traumatic spinal cord injury mediated by a unique polymer scaffold seeded with neural stem cells. PNAS. 99, 3024-3029 (2002).
- Wang, H., et al. Treadmill training induced lumbar motoneuron dendritic plasticity and behavior recovery in adult rats after a thoracic contusive spinal cord injury. Experimental Neurology. 271, 368-378 (2015).
- Courtine, G., et al. Performance of locomotion and foot grasping following a unilateral thoracic corticospinal tract lesion in monkeys (Macaca mulatta). Brain. 128 (Pt 10), 2338-2358 (2005).
- Ichiyama, R. M., et al. Step training reinforces specific spinal locomotor circuitry in adult spinal rats. Journal of Neuroscience. 28 (29), 7370-7375 (2008).
- Basso, D. M., Beattie, M. S., Bresnahan, J. C. Graded histological and locomotor outcomes after spinal cord contusion using the NYU weight-drop device versus transection. Experimental Neurology. 139, 244-256 (1996).
- Li, S., et al. Assessing gait impairment after permanent middle cerebral artery occlusion in rats using an automated computer-aided control system. Behavioural Brain Research. 250, 174-191 (2013).
- Bonito-Oliva, A., Masini, D., Fisone, G. A mouse model of non-motor symptoms in Parkinson's disease: focus on pharmacological interventions targeting affective dysfunctions. Frontiors in Behavioral Neuroscience. 8, 290 (2014).
