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Behavior

간, 쥐를 처리할 때 긍정적인 영향을 유발 하는 기술

Published: May 8, 2018 doi: 10.3791/57190

Summary

이 문서에서는 장난 처리, 쥐 난폭 플레이 모방 하도록 설계 tickling 기술의 표준화 된 응용 프로그램을 보여 줍니다. 이 기술은 인 간에 게 공포 반응을 감소에 효과적 이다 고 긍정적인 생성 때 쥐 처리 되는 일반적인 농업 활동 및 의료 주입 등 절차를 연구.

Abstract

쥐 같은 작은 동물을 처리 몇 가지 부작용을 이어질 수 있습니다. 처리, 동물 및 그들의 처리기, 감소 동물 복지와 유효한 연구 데이터 손 증가 부상 위험에 저항, 인간의 두려움 포함 됩니다. 실험 결과 인간-동물 관계에 부정적인 영향을 최소화 하기 위해 동물 연구는 종종 처리 되 고 익혀 진다. 그러나, habituation의 메서드는 매우 다양 하 고 종종 제한 효과의. 더 potently 처리 하는 동안 동물 들의 장난 난폭 행동의 측면을 모방 하는 인간을 위해 가능 하다. 체계적인 방식으로 실험실 쥐에 적용 될 때 간로이 장난 처리는 일관 되 게 긍정적인 행동 반응에 상승을 제공 합니다. 이 문서에는 기술 간 표준화 된 쥐에 대 한 자세한 설명을 제공 합니다. 이 방법은 동물에 긍정적인 감정으로 미래의 수사를 수, 쉽게 처리 변경 케이지 등 일반적인 농업 활동 또는 주입, 등 의료/연구 절차에 대 한 쥐의 소스로 구현 사회 강화입니다. 그것은이 방법은 효율적이 고 것인다 인간의 쥐 떨림이 감소 및 그들의 복지를 향상 시킬 뿐만 아니라 긍정적인 정서 상태를 안정적으로 모델을 사용할 수 있습니다 결론을 내렸다.

Introduction

작은 동물의 처리와 같은 국내 쥐 (Rattus norvegicus)와 애완 동물로, 실험실에 보관 혐오 응답의 암시 뿐 아니라 스트레스1, 행동 및 생리 적 지표에 상당한 증가 일으킬 수 있습니다. 정신적 손해2. 쥐를 처리 하는 것은 공포 기반 응답 인간3,4, 쪽으로 더 처리를 더 어렵게 만들 동물을 처리기, 상해의 위험을 증가 하 고5실험 데이터 유효성을 제한할 수 있습니다 실행할 수 있습니다.

실험 결과 인간-동물 관계에 처리의 부정적인 효과 방지 하려면 그것 실험적 치료에 그들을 할당 하기 전에 인간의 상호 작용에 길 들을 새로 얻은 젊은 동물을 위한 시간을 허용 하도록 일반적인 관행입니다. 이 새 환경 순응 기간 동안 관리 인 쥐 일련의 형태와 기간 변수 매우 될 수 있는 이벤트를 노출 수 있습니다. 이 사람, 감동, 해제, 쓰다 듬,, 수동 노출 포함 될 수 있습니다와 음식 제공. 인간의6의 두려움을 줄이기 위해 이러한 절차의 조합 보고 되었습니다, 하지만 이건 하지 분명 어떤 특정 관행 바쁜 동물 관리 인에 의해 사용 하기 위해 가장 효과적인. 불리 한 반응, 또는 적어도 유리한 무반응, 일부 이러한 개별 기술2,7,,89의 쥐 가질 수 있습니다 보고 있다.

대조적으로, 풍부한 증거는 결론 격 이네요, 쥐, 쾌활 한 난폭 행동의 측면을 모방 하는 처리 기술 튼튼하게 유익한 형태의 사회적 접촉, 특히 청소년 쥐10에 대 한 지원 11,,1213. 쥐가 높게 사회적인 동물을 관찰 하는 시간에서 분명 하다 그들은 청소년14 및 다시 설정 하 고 conspecifics15,16, 사회적 접촉을 유지 그들의 강한 동기 부여로 함께 놀고 지출 17. 쥐 간 장난 사회적 성격의 긍정적인 경험으로 처리를 변환 하는 쥐를 사용 합니다. 이 개념은 사회적 놀이 행동7에의해 갖는 긍정적인 감정 상태의 neurobiological 기초 조사를 위한 모형으로 원래 개발 되었다. 그 이후, 쥐 간 이상 56 다른 실험, 22의 다른 처리 기법13간 비교에 사용 되었습니다.

쥐의 난폭 플레이 두 가지 키 동작이 특징 이다: "등 연락처"와 "pin" (그림 1)18,19. 난폭 플레이 중 쥐 놀이 시작 파트너의 목 덜 미와 등 접촉 하 여. 받는 사람이 뒤로 눕을 압 연 하 여 응답 하 고 초기자 서19위에 고정. 재생 되는 각 위치에, 위에18아래 복용 하는 쥐로 계속 됩니다. 인간의 처리기 쥐의 목 덜 미 (연락처 등)와 함께 연락처와 비슷한 아이 간 할 때 사용 하는 손가락의 격렬 하 고, 빠른 움직임을 사용 하 여 복 부 표면 (핀) 간의 교류에 의해 난폭 놀이의 두 가지 주요 구성 요소를 모방 수 있습니다. 물론, 간지 럼 쥐 난폭 놀이의 정확한 복사본 때문에 아니다 쥐 간 동안 인간의 손을 핀 수 없습니다. 실제로, 난폭 플레이에 간 개인의 포용의 수준은20,21을 달라질 수 있습니다. 그럼에도 불구 하 고, 그것은 그 conspecifics 중 난폭 한 플레이로 동일한 보상 메커니즘을 호출 간 나타납니다. 적극적으로 동물에 의해 요청 된 간, 학습, 기여 하는 증거가 되 고 기뻐할 실질적으로 젊은 쥐7,,1112, 에 대 한 보람 있는 기사에 대 한 보상으로 사용할 수 있습니다. 13 , 22. 쥐 보상으로 부드럽게 쓰 다듬어 대신 작동 작업을 배울 수 또한 보고 되었습니다, 비록 그들이 더 빨리 쓰 다듬어7에 비해 간 제공 하는 사람의 손을 접근 하.

간지 럼에 사용 하는 핀 일반적인 구속 절차와 비슷한 보이지만 다르게 처리의이 종류를 인식 하는 쥐 증거가 있다. 쥐는 반복적으로 제 지 하는 경우와 같은 주입 절차에 대 한 그들은 분 비 과도 한 porphyrins 인 chromodacryorrhea ("붉은 눈물")8. Chromodacryorrhea 급성 스트레스 반응에서 발생 하 고 피부와 눈과 붉은 색23을 스테인드 될 코 주위 모피. 때 반복 해 서 누른 핀 처럼 뒷면에 제 지, 쥐 덜 보여준 매력 보다 인 간에 게 기뻐할12. 이러한 결과 반복된 짧은 억제와 간 질 간 질 하는 동안 자료는 장난 아닌 구속 다르게 인식 하는 의미. 따라서, 간 질 간 질에 사용 되는 정확한 기법 스트레스 처리에 기여 하는 반대로 긍정적인 감정 상태를 생성 하기 위한 중요 한 의미를 갖는다.

간 쥐 감정 상태에의 효과 모니터링 쥐 vocalizations에 참석 하 여 쉽게 수행할 수 있습니다. 일반적으로 쥐 22 kHz 및 50 kHz, 가청 vocalizations 뿐만 아니라 초음파 vocalizations (USVs)의 두 가지 범주에 생산. 기대 혐오 이벤트와 함께 높은 뇌 해 활동2422 kHz USVs 일반적으로 발생 합니다. 따라서, 22 kHz USVs 불안의 부정적인 감정 상태를 나타내기 위해 간주 됩니다. 50 kHz USVs 주파수 변조 "전동음" 유형 (그림 2)의 특히 일반적으로 보람 있는 상황 및 자극에 연관 되며 증가 두뇌 dopaminergic 활동24,25함께. 따라서, 풍부한 50 kHz USVs의 표현 긍정적인 감정 상태24,26,,2728반영으로 간주 됩니다. 마지막으로, 가청 vocalizations 일반적으로 연관 되며 따라서의 마커, 육체적 고 통과 불편으로 사용. 발성 법의 이러한 세 가지 형태의 차동 생산 따라서 쥐26의 감정 상태에 변화의 신뢰할 수 있는 기록의 제공 한다. 쥐 육 식 동물에 노출, 발 충격과 남성 간 싸움28등 고통 스러운 자극에 노출 하는 동안 22 kHz의 주위에 USVs를 생성합니다. 쓰 다듬어도 보고 되었습니다 나타내는 부정적인 영향을 미칠2로 유추 하는 순진한 쥐에서 여러 22 kHz USVs 유도. 반면에, 다른 쥐와 난폭 플레이에 종사 하는 경우로, 인 간에 의해 기뻐할 쥐 다 50 kHz USVs 생성. 그것은 따른다 50 kHz USVs의 속도 등급된 간29,30에 의해 생성 된 긍정적인 감정 반응 측정을 제공 합니다.

"쥐를 간지 럽 히 하는 방법"에 대 한 기존 설명을 오히려 간단한 고 가변 결과 발생할 수 있습니다. 또한, 초보자 "쥐 ticklers" 지나치게 난폭 플레이 모방 하는 그들의 시도에 임시 수 있습니다. 단어 "간지 럼 적극적 으로" 시각적으로 설명 하면 이해 하기 쉽습니다. 따라서,이 문서의 목표는 자세한 설명과 효과적이 고 일관 된 방식으로 안정적으로 처리 하는 경우 대부분 쥐에서 긍정적인 응답을 elicits 쥐 긍정적인 장난이 상호 작용을 모방 하는 방법의 데모 제공 하입니다. 이 프로토콜 표준화 tickling 기법을 설명 하 고 어떻게 간 결합 될 수 있다 자제 등 잠재적으로 불쾌 한 감정 경험을 완화 하기 위해 주입 절차에 설명 합니다.

Protocol

모든 실험 배려를 위한 국가 학회 건강 가이드에 따라 실시 했다 고 시설에서 실험 동물의 사용31,32 AAALAC 국제 공인 워싱턴 주에 의해 승인 되었다 대학 제도 동물 보호와 사용 위원회 다음 프로토콜 직원 실험실 동물 알레르기 증상을 노출할 수 있습니다. 기관 산업 보건 및 안전 프로그램 및 건강 관리 제공자에 의해 권장 하는 대로 개인 보호 장비를 착용 한다. 프로토콜 주택 조건 일반적인 실험실에서 절차를 묘사 하지만 (예: 사용 하 여 캐비닛 biosafety, 등.) 더 높은 생물 시설에 사용 하기 위해 적응 수 있습니다.

1입니다. 장비 및 설치 준비

  1. 처리 상자
    1. 준비는 동물의 집 새 장 또는 다른 인클로저 격 이네요,이 처리 상자 라고 합니다.
    2. 처리 상자 밖으로 점프에서 그들을 방지 하는 동안 주위에 이동 하는 쥐에 대 한 간 질의 손 한 공간을 제공 하기에 충분히 큰 있는지 확인 합니다.
    3. 처리 상자는 장애물의 무료 다는 것을 확인 하십시오. 따라서, 홈 장에 간 실시, 오두막, 및 남기고 종이 갉 아 대 던 같은 모든 개체를 제거 합니다.
    4. 라인 처리 상자33침구와 바닥. 부드러운 바닥 덮개의 다른 유형에 사용할 수 있습니다 하지만 50 kHz vocalizations13도출에 효과적 하지 않습니다.
    5. 테이블 또는 수 처리기의 손을 편안 하 게 처리 상자의 전체 바닥 면적에 도달 하는 높이에 수조에 처리 상자를 놓습니다.
    6. 필요한 경우에 격 이네요, 이전 처리 상자에 쥐를 habituating 여 참신의 효과 최소화 합니다.
  2. 타이머: 시작 및 끝 15 s 관찰을 처리 상자 그것은 쉽게 읽을 수 있습니다 어디 근처 타이밍 장치를 놓습니다. 또는 청각 시간 신호는 이어폰을 통해 간 질에 전송 될 수 있습니다.
  3. 발성 녹음
    1. 발성 법 연구 목적으로 다른 발성 종류 계량, 10-120-kHz 광대역 소리 수 있는 마이크를 사용 하 여 기록 되 고는, 높은 주파수 소리를 녹음 하는 장치에 연결.
    2. 일시 중지 하거나 상단 또는 상자, 명확 하 게 호출을 감지 하 고 근처 연습장에서 하지만 실제 도달의 쥐 쥐에서 통화와 혼동을 피하기 위해 충분히 낮은 마이크로폰을 연결 합니다.
    3. 만약 vocalizations만 적절 한 간 기술을 확인 모니터링할 필요가, 박쥐 탐지기를 사용 하 고 상자의 측에 그것을 설정. 간단 하 고, 헤 테로 검출기를 사용 하 여 50 kHz에서 장치를 설정 합니다.
  4. 실험실 장갑: 간 때 맨 손으로 또는 얇게 gloved 손을 사용 하 여. Tickling 기술은 맨 손을 사용 하 여 개발 되었다.  그러나, 얇게 gloved 손을 움직여서 동작 및 쥐의 시체에 적용 되는 압력을 감지 하 고 느낄 장갑 통해 쥐의 응답 처리기를 허용 하면서 50 kHz USV 생산 유도에 효과적 이기도 합니다.

2. 간 절차

  1. 필요한 경우 실험실 장갑에 넣어. 테이블 또는 작업 대에 홈 케이지를 가져와. 부드럽게 처리 상자에 쥐를 전송 하지 홈 장에 실시 간 경우. 타이머, 그리고 필요한 경우 녹음 하는 오디오를 시작 합니다.
  2. 일관성 있는 응용 프로그램에 대 한 15 사이 대체의 손 접촉 및 2 분의 총에 대 한 접촉에서 15 s 출시. 상호 작용의이 기간 인간11쥐의 매력을 증가 대 한 충분 한 발견 되었습니다.
    1. 15 s 출시 tickling 세션을 시작 하려면 장소 손을 움직이지 않는 한쪽 처리 상자 내부. 손의 존재 쥐 여 기회가 상호 작용을 허용 하 고 빛22상호 작용 하는 쥐의 관심을 나타내는 손 쪽으로 (nibbles)를 물고. 이 경우, 쥐, 쥐에 의해 손 장난 쫓는 요청 수에서 손을 이동 합니다. 또는 15 s 릴리스 동안 상자 밖으로 손을 두십시오.
    2. 15와 함께 출시를 따라 간의 시작 (2-4 s) 등 연락처와 상호 작용. 적극적으로 한 손으로 사용 하 여, 인간의 간에서 일반적으로 수행 하는 빠른 손가락 움직임을 사용 하 여 손끝으로 쥐의 목 덜 미 (목의 등 쪽 표면)를 터치 합니다. 본문의이 지역은 적극적인 만남34중 대상으로 엉덩이와 접촉을 피하십시오.
    3. 핀 등 접촉을 따릅니다. 놓고 엄지와 가운데 손가락에서 쥐의 앞 다리; 쥐, 그냥 신속 하 게 비상 하면서 그것의 뒤에 쥐를 선회 하지 눌릴 얻을지 않습니다 있도록 충분히 높이 들어올립니다.
      참고: 그것은 그것의 뒤에 쥐를 선회 하는 때 작은 손가락으로 쥐의 뒷면에 가볍게 밀어 도움이 될 수 있습니다.
    4. 느슨하게, 하지만 단단히; 쥐를 잡으십시오 독단적만 하지 강력한 수 있습니다. 일단 쥐 바닥에 그것의 뒤에 누른 시체 느슨하게 이동 하면서 손가락 신속 하 고 적극적으로 하지만 부드럽게, 뱃속에 인간의 간에 일반적으로 사용 되.
    5. 비록 자극 신속 하 고 독단적는 고정 활발 (2-4 s/핀) 부정적인 응답을 최소화 하기 위해 유지. 자체 마우스 오른쪽을 지 연락처를 빠르게 따라 쥐를 수 있습니다.
    6. 계속 등 연락처와 핀 사이의 대체. 평균 4 ~ 5 핀/15의35이어야 한다.
    7. 양손으로 쥐를 선택 하지 마십시오. 15 동안 s 격 이네요, 항상 이동 하는 손가락을 유지와 쥐의 신체 접촉 핀 등 연락처 사이 전환에도.
    8. 2 분의 총에 대 한 세 개의 추가 15 s 간지 러 워 하 고 15-s 출시를 수행 합니다.
  3. 처리 상자를 사용 하 여 쥐를 그것의 가정 케이지 돌아갑니다. 홈 케이지를 사용 하 여 다시는 새 장에 농축 개체를 놓습니다. 청소 하지 대변과 소변을 제거 종이 타 올 처리 상자 침구에 의해 흡수.
  4. 필요에 따라 쥐, 다음 케이지와 함께 반복 합니다.

3. 동시에 여러 쥐 간

  1. 쥐 그룹36으로 기뻐할 수 있습니다. 처리 기간 관련, 15 각 쥐 간 다른 경우 s. 각 쥐 받도록 간 손 접촉 릴리스에 의해 산재의 4 개의 관찰 필요에 따라 2 분 넘어 tickling 세션의 시간을 확장할 수 있습니다.
  2. 처리 기간은 관련 연구 결과 대 한 경우 다음 절차를 사용:
    1. 15 한 쥐를 간지 럽 히 쌍, s 다음 15에 대 한 두 번째 쥐 간 바로 뒤에 s (., 첫 번째 쥐의 릴리스 동안), 등등. 간 질에는 휴식 시간 없습니다.
    2. 세 쌍둥이, 쥐의 두를 간지 럽 히 고 다른 손을 사용 하 여 사람의 하나로 동시에 세 번째를 간지 럽 히 3.2.1에 설명 된 절차를 사용 합니다.
    3. 4 이상의 쥐의 그룹에 대 한 각 쥐 또는 쥐 15 켤레 간지 럼 s. 필요에 따라 2 분 넘어 tickling 세션의 시간을 확장할 수 있습니다.

Representative Results

요인에 영향을 미치는, 또는 잠재적으로 영향을 미치는, 응답 격 이네요을 표 1에 요약 되어 있습니다. 쥐 간에서 긍정적인 결과 쥐 복지 하 고 긍정적인 영향을의 여러 측정으로 표시 되어 있다. 일반적인 연구 결과 50 kHz USVs, 증가 접근 동작 및 취급의 용이성을 증가의 생산 증가 포함 한다. 쥐 간 유전 및 세포 수준에서의 효과37시상 하 부 변경 된 유전자 발현 포함 보고 및 해 마38,39의 뇌의 신경 신생을 증가. 일반화 된 불안을 감소 하 고 인간의 두려움을 나타내는 결과 또한 보고 감소와 같은 9 다른 접근 대기 시간 실험13,40,41, 컨디셔닝 공포 후 동결 덜 증가 항목 에 개별적으로 지 내게 쥐36여 오픈 필드 경기장의 센터. 자세한 내용은 운동 외.참조, 22 보고서 쥐 간 다른 기법13비교의 결과 조사 하 고 식별 누가 tickling 문학의 체계적인 검토를 제시 합니다.

Tickling 기술 규제 및 내부 복 막 (IP) 주입 절차와 결합 하는 경우 얻을 수 있는 결과의 다음, 특정 예제에 설명 되어 있습니다.

Sprague Dawley 쥐 (남성; 85-94 일의 나이; n = 48) 직전 및 IP 10 일 동안 매일 식 염 수 주입 후 2 분 동안 기뻐할 청소년 간 결합 될 때 특히 경험 (2 분/일의 나이 25-45 일에서), 단지 더 많은 50 kHz USV 생산 전에 (GLM ANOVA, F3, 44 = 9.59, p < 0.0001; 그림 3A) 그리고 바로 뒤 (F3, 44 8.74, p = 0.0001; = 그림 3B) 주입 (Tukey 크레이 머 p < 0.05) 수동 손10에 노출 된 쥐에 비해. 주입의 실제 간단한 전달, 중 50 kHz USVs의 생산 curbed 했다 (± SE, 15 ± 1.4 의미 USVs/min) 치료 처리 했다10그들의 속도 영향을 주지 않습니다. 그것을 특히 청소년으로 간지 럼에 노출 되었던 그에 대 한 절차의 aversiveness 검토가 긍정적인 감정 상태를 유도 간, 주입 절차 전후에 모두 적용 될 때 종결 되었다.

경우 간 효과적일 것 이라고 하기 전에 또는 둘 다 보다는 주사 후 감소 하는 경우 및 경우에 그래서, 어떤 시간이 더 나은 것 보세요 쥐 응답 후에, 하기 전에, 간 및 전-후 주입을 비교 했다. 50 kHz USVs 및 음성 통화 지표의 긍정적이 고 부정적인 영향을 미칠, 각각12측정 했다. Sprague Dawley 쥐 (남성, 나이 32-41 일, n = 96) 중 제 지 일일 IP 식 염 수 주입 (INJ) 주어진 또는 주사 (컨트롤, 콘)를 받지 않고 제 지 그리고 다음 치료 중에 노출: 쥐 되지 않은 격 이네요, 손도 앞과 뒤 구속 절차 (테네시); (TA), 후 (TB), 바로 전에 2 분 동안 핸드폰 (미정) 구속12전후에 또는. 자제 하기 전에 2 분 쥐 (TB, 미정) 구속 전에 간 받은 처리에서 가장 50 kHz USVs 생산 (GLMM ANOVA, F3,88 49.19, p < 0.0001; = 그림 3C)입니다. TA 및 테네시 쥐 구속 절차 전에 생산 하는 USVs의 속도에 다 하지 않았다. 절차 동안, 어떤 쥐 격 이네요 (TA, TB, 미정)을 받은 자들 하지 (테네시; 기뻐할 보다 더 많은 50 kHz USV 생산 F3,88 50.67, p < 0.0001; = 그림 3D)입니다. 기뻐할된 쥐 중 받는 절차 (TB, 미정) 앞서 간 그 이후에 기뻐할 것 들에 비해 구속 (TA; 더 50 kHz USVs 생산 p < 0.05)입니다. 수술 후 2 분 동안에서 모든 기뻐할된 그룹 (TA, TB, 미정)에 쥐 자들 하지 (테네시; 기뻐할 보다 더 많은 50 kHz USVs 생산 F3,88 53.64, p < 0.0001; = 그림 3E)입니다. 또한, 절차 동안, 쥐 기뻐하기 전에 구속 (TB, 미정) 반면 쥐 나중 기뻐할 (TA) 다른 그룹에서에서 차이가 없 쥐 했던 받지 격 이네요 (TN)에 비해 적은 음성 통화를 생산 (F3,88 = 3.67, p= 0.02; 그림 3 층)입니다. 결과 전에, 동안, 그리고 구속12직후 간 보다 절차 후 기간에 걸쳐 큰 긍정적인 영향 IP 주사에 대 한 그들을 억제 하기 전에 쥐를 간 생산 하는 방법을 보여 줍니다.

관리 인 쥐에는 다음과 같은 처리 치료 중 하나를 적용 (Sprague-Dawley 남성; n = 32) 57 세의 74 일에서: 감 금 소에 주 변경; (1) 최소한의 처리 (2) 노출 2 분 매일; 수동 손 (3) 2 분 간 사회 모방 하기 위해 매일의 재생; (쥐의 뒤쪽에, 지배적인11unreciprocated 고정 시뮬레이션의 4) 2 분 매일. IP 다음 분에 주입, Tickled와 수동 치료에서 쥐 보냈다 더 많은 시간 양육 연구원 서 있었다 가까이 감 금 소의 전면 반에는 최소에서 쥐와 억제 치료 (GLM ANOVA, F3, 27에 비해 = 5.70, p = 0.004; 그림 3)입니다. 또한, Tickled 쥐 쥐 익숙한 또는 익숙하지 않은 손으로 인간의 접근 테스트에서 3 분에 노출 되 면 수동 치료에 보다 더 많은 50 kHz USVs 구절 (로그 변환 평균 ± SE 호출/min, 최소: 0.7 ± 0.26, 수동: 0.6 ± 0.18, 기뻐할: 1.8 ± 0.30, 구속: 1.4 ± 0.28; F3,28 = 4.04, p = 0.02). 따라서, 수동 손의 단순한 존재는 최소한의 처리를 기준으로 인 간에 게 쥐의 습관 들 임 주 었 했지만 간 인간11쪽으로 긍정적인 응답을 생성 하는 가장 효과적인 방법입니다.

Figure 1
그림 1: 쥐 난폭 행동 재생. (A) 등 연락처; (B)18핀. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

Figure 2
그림 2: 50 kHz 초음파 vocalizations 주파수의 변조 "전동음" 유형. 1에서 5 전동음 vocalizations 제작 간 동안 쥐에 의해 s. 17-25 / 70 kHz에서 수평 라인 룸에서 전자 장비에 의해 생산 되었다 (., 컴퓨터, 마이크, 카메라).

Figure 3
그림 3: 쥐 복 막 내부 (IP) 주사 등 이전에 또는 함께에서 간, 실험 절차에 노출의. 50 kHz USVs의 속도 (평균 ± SE 호출/min) 생산 (A) 앞 (B) 성인 남성 쥐에 의해 주입 절차에 최소한의 노출 후 처리 (M) 또는 (T) 청소년 및 수동 손 (P)로 간 또는 전 / 후 (T)를 간 주입 (4 개의 처리 조합 저조한: M-P, T-P, M-T, T-T); Cloutier 에서 10. 속도 50 kHz USVs (평균 ± SE 호출/min)의 생산 (C) 전에, (D), 및 (E) (또는 IP 주사 없이) 구속 후 아무 간 (테네시) 받은 청소년 남성 쥐 여 10 연속 일 동안 매일 한 번 또는 (TA), 후 (TB), 전 간 또는 둘 다 이전과 이후 (미정) 절차; (F) 음성 호출의 속도 감; 동안 생산 Cloutier 에서 12. (G) 기간 (평균 ± SE s), 수동, 간지 럼, 또는 구속 관리;에 의해 처리에 노출 남성 쥐에 따라 IP 주사 1 분 동안 연구원 근처 양육 Cloutier 에서 11. 다른 글자 (a, b의 c)와 바 없음을 비교 (Tukey 크레이 머 p < 0.05)에서 차이 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

요소 효과 참조
내장
나이 쥐 24-44 세 사이의 89-92 일 50 kHz 초음파 발성 법 (USVs)에 차이가 없습니다 18, 29, 42
148 일에 71 일에서 쥐를 위해 50 kHz USVs 감소 29
17 일 이전 남성 만든 7-9 개월 보다 더 많은 50 kHz USVs 오래 된 남성 43
청소년과 성인으로 기뻐할 쥐 아동 또는 성인으로 기뻐할만 쥐에 비해 가장 긍정적인 결과 보여주었다. 10
섹스 남성 쥐 생산 더 많은 50 kHz USVs 44, 71 일 오래 된, 하지만 여성 생산 148 일에 더 많은 50 kHz USVs 29
남자 쥐 44 58 일에서 여성 보다 더 많은 50 kHz USVs를 생산. 43
96 청소년 긴 에반스 쥐 또는 52 청소년 Wistar 쥐 50 kHz USVs에 성별 차이가 없습니다 42, 44
여성 청소년 Wistar 쥐 남성 보다 더 많은 22 kHz USVs 생산 44
개인 간 차이 구절 더 많은 50 kHz USVs 줄된 접근 시간을 보여주었다 쥐 간 자기 관리, 간, 후 긍정적인 판단 바이어스를 증가 하 고 간 후 hippocampal 세포 증식을 증가 27, 37, 45
더 장난 쥐 더 50 kHz USVs 생산 43
스트레인 보고 되지 않은, 그러나 일화 적 증거 건의 한다 다른 긴장에서 쥐 고 간 반응에 브리 더 다. 쥐 선이 낮은 50 KHz USVs 속도 간에 대 고 따라 선택 하면 갈라 졌습니다. 22, 26, 42, 46
간지 러 워의 이전 경험 50 kHz 초음파 USVs의 생산 증가 12
외부
침구 쥐 없는 침구 익숙한 침구 대에 기뻐할 때 더 많은 50 kHz USVs 생산 33
스트레스 1 시간, 하지만 하지 23 시간, 구속 스트레스 감소 50 kHz USVs 생산 후 쥐 격 이네요 47, 48
타이밍 주입은 주입 후 간 보다 50 KHz USVs 증가에 더 효과적인 전에 쥐 격 이네요 12
처리기의 섹스 아무 효과 발견 Panksepp, J. 2014, 게시 되지 않은 데이터
처리기와 쥐의 친숙 쥐 더 50 kHz USVs를 생산 하 고 익숙하지 않은 간 질에 비해 익숙한 근처 더 많은 시간을 보냈다 11
경험 간 처리기 / 처리기 간의 활력 50 kHz USVs 하지만 하지 기본 설정 및 접근 행동의 영향을 받는 생산 Cloutier, S. 2011 데이터 게시
처리기에 의해 핀의 기간 / 등 연락처와 핀 사이의 교체의 주파수 Nibbles (권유를 놀이 해석)의 낮은 주파수 15-s 핀 (구속) 등 연락처 및 15 당 핀 간지 러 워 주는 손 보다 당당한 손 지시 했다 s 11
처리기에서 사용 되는 Odorants (예: 향수, 샴푸, 쉐이 빙 크림) 보고 되지 않은
사회 그룹 크기 개별 주택 증가 긍정적인 답변은 대부분 실험에서 그룹 주택에 비해 격 이네요. 이 차이 감소 집 장에 감 금 소 동료와 함께 그룹 지 내게 쥐 격 이네요 7, 22, 27, 36
빛의 강도 1000 럭 스에 간 50 kHz USVs 25 럭 스에 비해 감소. 43
소음 보고 되지 않은
케이지 간 하기 전에 청소 일부 쥐에서 22 kHz USVs의 생산을 유도 12
하루의 시간 50 kHz USVs 생산 시작 또는 빛 기간의 끝에서 수행 하는 경우에 아무 효과. 밝거나 어두운 기간의 중간 아직 비교 하지 빛 기간 대의 시작/끝에 쥐 격 이네요 Cloutier, S. 2011 데이터 게시

표 1: 목록 요소에 영향을 미치는, 또는 잠재적으로 영향을 미치는, 쥐의 응답을 간, 쥐 난폭 플레이 모방 하기 위한 장난 처리 기술입니다.

Discussion

이 프로토콜 쥐 격 이네요, 긍정적인 영향을 나타내는 vocalizations을 생성 하 고 쥐 처리 하는 경우 접근 행동을 증가에 효과적인 쥐 난폭 놀이 행동을 흉내 낸 장난 처리 기술에 대 한 설명 일반적인 농업 또는 의료에 대 한 IP 주입 등 절차를 연구 하는 고.

사회적 놀이, 일반적으로 긍정적인 형태의 사회적 접촉, 무서운 상황42,43, 정서적 반응의 교정에 불안과 우울증44탄력성을 생성을 제안 하고있다. 흉내 낸 쥐 사회에 의해, 격 이네요 나타납니다 마찬가지로 효능7. 따라서, 응용 프로그램 간의 긍정적인 감정 상태를 유도에 성공 하는 간지 러 워 하는 동안 손을 "플레이 파트너" 역할을 할 것입니다 염두에 유지 하는 것이 중요 하다. 손을 쥐 기대 하 고 난폭 한 플레이 하는 동안 다른 쥐에서 즐길 수 있는 동작 시뮬레이션 하기 때문에 매력적 이다. 따라서, 해제 들고 양손으로 쥐 쥐 놀이, 흉내 낸 하지는 그리고 동일한 효과 없을 수 있습니다. 사실, 실험실 쥐 비 장난 감 있는 처리기 한 손으로 그들을 보유 하 고 다른 손으로45획을 피하기 위해 배우게 됩니다. 쥐 간, 하는 동안 그것은 또한 활발 하 고 경 쾌 하면서 자신 있게 적극, 손을 이동 하는 것이 중요입니다. 고정 유지 활발 (2-4 s/핀)는 쥐 사이 난폭 플레이, 22 kHz USVs18의 믿을을 고정 오퍼를 반복 하기 때문에 부정적인 응답을 최소화 해야 합니다.

비록 청소년 쥐 더 장난 간 성인 쥐18보다 더 강한 응답을 보여, 또한 혜택10있다 성인 기에 간. 쥐가 젊은 때 간지 러 워도 발견 되었습니다 인생36, 쥐 인간 존재에 그들의 감정적인 반응에 장기 긍정적인 효과 경험 하자 나중에 혜택을. 간지 럼에 대 한 응답에서 성별 차이와 일치 하지 않는, 청소년 쥐46,47, 섹스 차이가의 보고서 청소년 남성 청소년 여성29 보다 적은 22 kHz vocalizations 더 50 kHz vocalizations 생산 ,,4839및 더 오래 된 여성 같은 나이 든 남성29, 비슷한 사회적 놀이49에 대 한 연구 결과 보다 더 많은 50 kHz vocalizations 생산.

Tickling 기술의 효과 쥐 운동 패턴과 발성을 사용 하 여 평가 될 수 있습니다. 쥐가 한 입 하 고 간11다음 릴리스의 15의 기간 동안 처리기의 손가락을 핥 아 것입니다. Nibbles 빛, 비 유해한 물린 젊은 쥐22플레이 요청 동작으로 설명 되어 있습니다. 처리기는 손으로 처리 상자 주위를 이동 하면 쥐 따라 하 고 그것을 추적. 쥐, 특히 젊은 사람, 또한 실행, 간 루고 상자 주위 질주 되며 tickling 시 합, 비슷한 특징 난폭 플레이 실행 활동 후 활동에 뚜렷한 증가 보여. 쥐 자료, tickling 기술의 조정 동안 움직이지 경우 핀을 줄이는 기간 또는 더 적은 핀을 주는 아마 필요 합니다. 이 첫 번째 tickling 세션에 대 한 짧은 기간의 핀에 게 좋습니다. 쥐 간 질 간 질 하는 데 사용 얻을 기간 및 핀의 수를 늘릴 수 있습니다. 쥐 50 kHz USVs, 간 및 간 루고 trills를 포함 하 여 완전 한. 47을 안정화 하기 전에 매일 간의 첫 2 주 동안 trills 15의 자료 중 생산의 수에 있는 점진적 증가 볼 수 있습니다. 개인 차가 허용 나눌 수 및 로우 호출자 차동 스트레스 반응, 불안, 그리고 anhedonia46,,4750기뻐할된 쥐.

쥐 간13간 중 50 kHz USVs의 평가에 따라 생산으로 긍정적인 영향을 유발 하 성공적으로 사용 되었습니다. 그것은 최근 그들의 의료의 aversiveness 및 주입 등 연구 절차를 완화 하 고 쥐에 있는 인간의 두려움을 줄이기 위해 기술로 구현 되었습니다. 증거 동물 당 매일 2 분만에 대 한 제공, 간지 러 워는 인간11의 회피를 감소 시키기를 위한 효과적이 고 실용적인 방법을 제안 합니다. 고려는 청소년 쥐 재생 됩니다 함께 약 60 분 매일51,,5253, 매일 2 분 간은 실용적인 하지만 아마도 너무 간단한 쥐 중 사회적 놀이의 전체 효과 복제. 애완 동물 쥐 소유자, 실험실 관리 보다 그들의 쥐를 처리 하기 위한 더 많은 시간이 일반적으로, 추가 간 쥐가 긍정적인 답변을 계속 해와 쥐를 제공할 수 있습니다. Burgdorf 그 외 여러분 에 따라 44 , 45, 난폭 놀이의 첫 번째 15 분 쥐에 대 한 가장 긍정적인 것으로 보인다. 정당한 이유로 그들은 사회 단체에 유지할 수 없는 경우에 특히, 더 효과가 최대 15 분 동안 쥐를 간지 럽 히 수 있습니다. 그러나, "뜻밖에 대 한 교육"38로 플레이 바탕으로, 여기 설명 하는 방법을 수 있습니다 보다 더 다양 한 기술 하는 데 필요한 유지의 더 이상 웃 긴 세션 격 이네요. 추가 간 세션 매일 또한 수 면, 수 유 등 다른 생물학으로 중요 한 활동은 장애인에 도움이 될 수 있습니다. 실험실 및 애완 동물 쥐의 복지 향상에 기여 하는, 뿐만 아니라 기술된 표준화 tickling 기술은 사회적 놀이 및 부품의 효과 이해 하기 위한 지속적인된 연구에 사용할 수 있습니다 대 행동, 사회, 및 뇌 개발입니다.

간 주입을 둘러싼 수행, 특히 이전 간 경험 (끝 40-50 일 이전)와 결합 될 때 그것은 주입, 전후 50 kHz USV 속도 증가 고 주입10 동안 가청 전화 요금을 감소 . 따라서 간 청소년10간 익숙해 쥐에 (서) 특히 IP 주사의 부작용을 완화 할 것 같다. 비록 간 음성 통화의 평가에 따라 생산으로 주사와 관련 된 불편을 방지 하지 않았다, 50 kHz USVs 및 그 이후 구속 절차12전에 컨트롤 상태에 비해 증가 했다. 데이터에 따르면 50 kHz USV, 간지 럼을 적용 하기 위한 가장 효과적인 시간 포인트 직전 보다 구속 절차12후 했다. 간 쥐 주사 했다 그 높은 긍정적인 효과 수행 하기 전에 절차12동안에 영향을. 간지 러 워 따라서 쥐 복지와 행동에 일상적인 의료 절차의 잠재적인 부정적인 영향을 최소화할 수 있습니다. 더 연구는 어떻게 기술 수 수와 결합 하 여 효과적으로 다른 주입 기술 및 다른 의료/실험 절차를 결정 하는 데 필요한.

전반적으로, 우리는 쥐 간 결과 긍정적인 결과에 같은 50 kHz USV 및 접근 행동의 생산을 증가 뿐만 아니라 인간의 회피 그리고 처리 저항 감소를 증명 하고있다. 쥐 쥐 복지를 개선 하 고 긍정적인 정서 상태를 모델링 하기 위한 실행 가능한 방법으로 간 질 간 질 하는 것이 좋습니다.

Disclosures

저자 들은 아무것도 공개 선언 합니다.

Acknowledgments

실 비 Cloutier, 메 간 운동, 브리 Gaskill, 그리고 루스 뉴베리 Jaak Panksepp, 우리의 사랑 하는 공동 저자,이 원고를 완료의 최종 단계 동안 돌아가의 메모리에이 문서 사용 하 길. 우리 쥐 간의 "아버지"로 다 정하게 Jaak 기억-동물 감정에 대 한 그의 통찰력 형성이 작품에 대 한 기초 영감. 이 자료는 부분적으로 워싱턴 주립 대학 수의 여름 연구 친교, 동물 복지 연구소에서 동물 복지 향상 상을 그리고 "보조금에 대 한 실험실 동물 과학"에서 미국에서 지 원하는 작업 기반 실험실 동물 과학을 위한 협회입니다. 이 문서의 게시 Petco 동물 공급, i n c.에 의해 후원 되었다 우리는 우리는 촬영에 대 한 그들의 쥐를 간지 럽 히 수 있도록 캐롤 Dowell와 퍼듀 대학교의 실험실 동물 프로그램을 감사 하 고 싶습니다.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Table or workbench No specific brand is recommended.
Handling box (rat home cage or another enclosure) No specific brand is recommended.
Bedding or or other type of soft cover No specific brand is recommended.
Gloves (thin laboratory gloves) Optional.
Timing device Deltaworks Interval Timer:Timing for HIIT Training, Workouts
https://itunes.apple.com/us/app/interval-timer-timing-for-hiit-training-workouts/id406473568?mt=8
Optional. Any timer will do, although it is convenient to use an interval timer if you are tickling multiple rats.
Ultrasonic microphone such as a bat detector or USB microphone Magenta Electronics LTD Bat4 Bat Detector
https://www.magenta2000.co.uk/acatalog/Bat_Detector_Bat4.html
Optional. The Magenta bat detector is relatively inexpensive and easy to use, but can only detect vocalizations at one range at a time.
Dodotronic Ultramic 200K
http://www.dodotronic.com/ultramics/?v=7516fd43adaa
Optional. This microphone has worked well in our experiments. There are many other options for ultrasonic microphones.
Bioacoustic software CIBRA SeaWave
http://www-3.unipv.it/cibra/seawave.html
Optional. Free software with limited recording capabilities.
CIBRA SeaPro
http://www-3.unipv.it/cibra/seapro.html
Optional. This software has extensive recording capabilities, and has worked well in our studies. There are many other software packages that work with bioacoustic microphones.

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References

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간, 쥐를 처리할 때 긍정적인 영향을 유발 하는 기술
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Cloutier, S., LaFollette, M. R.,More

Cloutier, S., LaFollette, M. R., Gaskill, B. N., Panksepp, J., Newberry, R. C. Tickling, a Technique for Inducing Positive Affect When Handling Rats. J. Vis. Exp. (135), e57190, doi:10.3791/57190 (2018).

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