Summary
Denne protokol beskriver en minimalt invasiv osteosyntese teknik bruger et intramedullære skrue for standardiseret stabilisering af femur frakturer, som kan bruges til at analysere endochondral knogle heling i mus.
Abstract
Knogle helbredende modeller er nødvendige for at analysere de komplekse mekanismer af fraktur healing for at forbedre den kliniske fracture behandling. I det sidste tiår, blev øget brug af musemodeller i ortopædiske forskning bemærket, sandsynligvis fordi musemodeller tilbyder et stort antal genetisk modificerede stammer og specielle antistoffer til analyse af molekylære mekanismer af frakturheling. Du kan styre de biomekaniske forhold ved er godt karakteriseret osteosyntese teknikker obligatorisk, også i mus. Her, rapport vi om design og brug af en lukket knogle heling model til at stabilisere femur frakturer i mus. Intramedullære skruen, i medicinsk-grade rustfrit stål, giver gennem fraktur komprimering en aksial og roterende stabilitet i forhold til det meste brugte simple intramedullært pins, som viser en fuldstændig mangel på aksial og roterende stabilitet. Stabiliteten opnås ved intramedullært skruen giver mulighed for analyse af endochondral healing. En stor mængde af hård hud væv, modtaget efter stabilisering med skruen, tilbyder ideelle betingelser for at høste væv til biokemiske og molekylære analyser. En yderligere fordel ved brugen af skruen er det faktum, at skruen kan indsættes i lårbenet med en minimalt invasiv teknik uden inducerende skade på det bløde væv. Afslutningsvis, er at skruen en unik implantat, der kan ideelt bruges i lukket fraktur healing modeller tilbyder standardiseret biomekaniske forhold.
Introduction
Knogle helbredende studier i mus er i stor efterspørgsel på grund af et bredt spektrum af antistoffer og genetisk modificerede dyr. Disse fakta gør det muligt for at studere de molekylære mekanismer af knogle heling1. I de seneste år udviklet forskellige knogle heling modeller for mus har været2. Disse modeller kan være opdelt i åbne modeller, hvor knoglen er osteotomized ved hjælp af en åben laterale kirurgisk tilgang og i lukkede modeller, hvor knoglen er brækket baseret på fraktur model indført af Bonnares og Einhorn3. Brug af denne teknik, en standardiseret tværgående fraktur kan fremstilles af en 3-punkts bøjning enhed og intramedullært brystimplantater kan indsættes gennem et lille mediale parapatellar snit i en minimalt invasiv teknik at undgå et stort blødt væv traumer.
Intramedullære skruen kan anvendes til lukket fraktur stabilisering i mus. Skruen tilbyder roterende og aksial stabilitet. Dette opnås ved fraktur kompression gennem en proksimal tråd og en distal hoved4. Yderligere fordele ved skruen er den simple kirurgiske teknik, den lave kvalitet af invasivity, lave implantat vægt og, især, en højere stabilitet giver standardiserede og kontrolleret biomekaniske forhold i forhold til andre intramedullært implantater5. I virkeligheden, i de mest lukkede fraktur modeller, fragmenter er stabiliseret kun af simple pins, som er forbundet med en komplet mangel på roterende og aksial stabilitet og en høj risiko for pin og også fraktur dislokation. Dette kan markant indflydelse på helingsprocessen, som kan medføre forsinket heling eller ikke-union dannelsen.
Det er velkendt, at stabilitet af frakturfiksation har en enorm indflydelse på den helbredende proces6,7. En høj rigid fiksation resulterer i intramembranous healing, mens en mindre stive fiksation, som kan give micromovements i fraktur gap, resulterer i endochondral healing. Stabilisering af fraktur med intramedullært skruen viser overvejende en endochondral healing med en stor mængde af hård hud væv, især efter 2 ugers frakturheling. Mulighed for at høste en stor mængde af hård hud væv muliggør analysen af flere parametre ved hjælp af forskellige teknikker.
Her, rapport vi om udformningen og anvendelsen af intramedullært skruen i mus, og om fordele og ulemper i eksperimentelle undersøgelser normale endochondral knogleheling.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle procedurer blev udført Ifølge National Institutes of Health retningslinjer for brugen af forsøgsdyr og fulgt institutionelle retningslinjer (Landesamt für Verbraucherschutz, Zentralstelle Amtstierärztlicher Dienst, Saarbrücken, Tyskland).
1. forberedelse af kirurgiske instrumenter og implantater
- Vælg en skalpel klinge (størrelse 15), en lille vatpind, fine pincet, en 27 G nål, en ikke-resorberbare 5-0 sutur, saks og en nål holder fra boksen microsurgical instrument.
- Pak intramedullært skruen, guidewire (0,3/0,2 mm diameter, 10 cm længde), den centrering bore bit (0,5 mm i diameter) og hånd bore (figur 1, se Tabel af materialer).
Bemærk: Intramedullært skruen (0,5 mm diameter, 17,2 mm længde) er lavet af medicinsk-grade rustfrit stål til retrograd implantering i lårbenet. Skruen har en proksimal tråd (0,5 mm i diameter, 4 mm længde) med en næse (0.2 mm diameter, 0,4 mm længde) henne ved Aflæsse og distale kegle-formet hoved (0,8 mm diameter, 0,9 mm længde) at opnå fraktur kompression samt aksial og roterende stabilitet. - Udsætte implantater og alle kirurgiske instrumenter til en desinficerende løsning (96% alkohol) i 5 min eller sterilisere dem (damp sterilisation, 130 ° C, 25 min). Efter desinfektion eller sterilisering, skal du placere instrumenterne på en operation klud. Placer operation klud støder direkte op til små dyr driften tabellen.
2. dyr, anæstesi og analgesi
- Vælge stamme, alder og køn hos musene efter undersøgelse spørgsmålet, som er rettet.
Bemærk: For denne undersøgelse 12 til 14 uger gamle mandlige CD-1 mus blev brugt. Den passende kropsvægt til at bruge intramedullært skruen er mellem 25-35 g. - Bedøver mus med en intraperitoneal injektion af 15 mg/kg xylazin og 75 mg/kg ketamin. Bekræfte anesthetization af tå knivspids. Anvende øje lubricant for at beskytte dyrenes øjne fra tørring under anæstesi. Efter induktion af anæstesi, skal du placere musen under en varme radiator at holde kropstemperaturen konstant. Under proceduren, blev dyr overvåget med gentagne tå knivspids at sikre en passende plan for anæstesi.
- Anvende tramadol-hydrochlorid i drikkevand (1,0 mg/mL) for analgesi fra dag 1 før operationen indtil dag 3 efter operationen.
Bemærk: Analgesi og infektion forebyggelse bør være i overensstemmelse med de respektive retningslinjer for land og institution hvor eksperimenterne der skal udføres.
3. kirurgisk Procedure og intramedullært skrue Implantation
- Før operationen, barbere det hele højre bagben og anvende en depilatory creme. Efter 5 min, fjerne cremen og rense benet med vand. Derefter, anvende en desinficerende løsning med 96% alkohol. Betadine eller chlorhexidin kan føjes til alkohol til at sikre komplet aseptik.
- Under aseptiske forhold, skal du placere musen i den liggende stilling på små dyr driften tabellen. Bøje det højre knæ til at muliggøre en anterior tilgang til condyles i knæet. Udføre en 5-mm mediale parapatellar incision på højre knæ ved hjælp af en skalpel blade.
- Mobilisere den patella ligament omhyggeligt med skalpel klinge og svaber. Derefter, flytte patella sideværts med den fine pincet til at udsætte den intercondylar notch på lårbenet.
- Åbn den intercondylar notch præcis i midten af lårben mellem begge condyles. Sørg for ikke at overstige 1,0 mm i dybden for boret hul.
- Starte manuel boring ved en langsom hastighed og en 45 ° forskudt ventrally til lårbenet akse ved hjælp af 0,5 mm centrering borehoved og hånd bore (figur 1 c og D, figur 2). Under boring, løbende falde vinklen til 0 ° offset (parallelt med på lårben knogle akse). Stop boring når 1.0 mm dybde er nået.
- Efter åbning af knogle på de intercondylar notch, indsætte 27 G nålen i intramedullært hulrum over hele længden af lårbenet. Ream intramedullært hulrummet af lårbenet manuelt via roterende beslutningsforslag af 27 G kanyle. Tryk nålen frem for at perforere den kortikale knogle på større trochanter proksimalt.
- Fjern 27 G kanyle og anvende guidewire gennem den distale del af lårbenet.
- Gøre en hud snit med en skalpel klinge (størrelse 15) proksimalt over guidewire og skub guidewire, indtil begge ender af guidewire er udenfor. Sørg for at holde guidewire på plads.
- Oprette en defineret lukket fraktur ved hjælp af guillotinen.
- Placere musen i sideleje med det højre ben under guillotinen. Sørg for at den diaphyseal del af lårbenet er placeret midt i guillotinen.
- Tabe vægt (200 g) fra den definerede afstand på 25,5 cm.
- Kontrollere konfigurationen af fraktur samt fraktur holdning og positionen af guidewire (figur 3) ved hjælp af x-ray enhed (Se Tabel af materialer).
- Tilslut intramedullært skrue med næsen i den distale ende til 0,2 mm guidewiren og indsætte det i lårbenet under konstant pres, og uret.
- Vrid af drivakslen når det tilstrækkelige moment er opnået.
- Fjerne guidewire proksimalt.
- Flyt patella og lave patella senen til musklerne med én enkelt sutur ved hjælp af en 5-0 syntetiske monofilamenter, nonabsorbable polypropylen sutur. Bruge enkelt suturer af samme materiale og størrelse til at lukke såret. Styre reduktion af fragmenter og skruen position radiologisk brugen af x-ray enheden (Se Tabel af materialer).
- Holde dyr under den varme radiator, indtil de komme fra anæstesi. Efterlad ikke dyrene uden opsyn indtil de har genvundet tilstrækkelig bevidsthed for at opretholde ventrale recumbency. Returnere dyr til enkelt bure i det animalske facilitet. Ikke vender tilbage dyrene til selskab med andre dyr i løbet af de første 24 timer, selvom de har fuldt tilbagebetalt fra anæstesi.
- Overvåge dyrene omhyggeligt hver dag. Vedligeholde postoperative analgesi ved hjælp af tramadol-hydrochlorid i drikkevand med en dosis på 1,0 mg/mL i løbet af de første tre dage. Fortsætte analgesi hvis på dag 4 efter operationen, at dyrene stadig viser tegn på smerter, som angivet af vocalization, rastløshed, manglende mobilitet, manglende groom, unormal kropsholdning og manglende normale interesse i omgivelserne. Opsige analgesi, når dyrene er smerte-fri.
- I slutningen af forsøget at aflive dyret af en overdosis af barbiturat.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Driftstid fra hud indsnit til sår lukning var 20 min. Kirurgi kan udføres uden et stereo-mikroskop. Efter operationen, var at dyrene overvåges dagligt. Postoperativ analgesi blev afbrudt efter 2 dage, fordi ingen af dyrene viste tegn på smerter efter denne periode. Dyrene viste også normale vægtbærende senest 2 dage efter operationen. Sårinfektioner blev ikke observeret i hele observationsperioden.
Radiologiske analyser efter 2 uger viste en indlysende dannelsen af hård hud væv fraktur kløften (figur 4A). Efter 5 uger, fraktur blev helbredt, og periosteal callus var næsten helt ombygget (figur 4B).
Histologiske analyser af callus og zonen fraktur efter 2 uger viste typisk væv distribution af endochondral healing med brusk væv bygget under chondrogenic processen og vævet knoglen (figur 5A). Efter 5 uger, brusk væv forsvandt, og vævet knoglen var konverteret til gråt knoglen for at rekonstruere den normale anatomiske og belastning informationsbærende egenskaber af knoglen (figur 5B).
Biomekaniske analyser efter 2 uger angivet en bøjning stivhed på 37% i forhold til de kontralaterale ben. Efter 5 uger var bøjning stivhed næsten 100% der angiver komplet healing (figur 6).
Figur 1: implantater. A. intramedullært skruen (0,5 mm diameter, 17,2 mm længde) med tråd (0,5 mm i diameter, 4 mm længde) og næsen (0.2 mm diameter, 0,4 mm længde) proksimale og en kegle-formet hoved (0,8 mm diameter, 0,9 mm længde) distale. B. guidewire (0,3/0,2 mm diameter, 10 cm længde). C. den centrering bore bit (0,5 mm i diameter). D. hånd boret. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: skematisk tegning af lårbenet condyles angiver posten punkt for intramedullært skruen. Lårbenet condyles med intercondylar hakket i anterior-posterior Se (venstre) og sagittal udsigt (til højre). Korset (venstre) angiver indgang til intramedullært skruen, pilen (højre) angiver 45 ° forskydningen til lårbenet akse at starte boring. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: røntgenbillede af lårbenet med en tværgående fraktur og indsatte guidewire. Røntgenbillede viser konfigurationen af tværgående fraktur i den diaphyseal del af lårbenet (pil) og guidewire i intramedullært hulrummet bridging fraktur. Skala søjler repræsenterer 5 mm. venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4: røntgenbilleder efter 2-5 uger af knogleheling. A. Radiografisk analyse af en lårbenet stabiliseret med skruen efter 2 uger, demonstrerer tydeligt callus dannelse. B. Radiografisk analyse af en lårbenet stabiliseret med skruen efter 5 uger, demonstrerer næsten komplet heling af frakturen med ombygning af callus. Skala søjler repræsenterer 5 mm. venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5: histologisk sektioner efter 2-5 uger af knogleheling. A. histologiske analyse af en lårbenet stabiliseret med skruen efter 2 uger, demonstrerer den typiske væv fordeling under endochondral knogle healing med brusk (c) og (b) knoglevæv inden for callus. B. histologiske analyse af en lårbenet stabiliseret med skruen efter 5 uger, demonstrerer næsten komplette ombygninger til gråt knogle. De histologiske sektioner var farves efter trichrome-metoden. Skala søjler repræsenterer 1000 µm. venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 6: biomekaniske analyse. Biomekaniske analyse af bøjning stivhed efter 2 uger (hvid bjælke, n = 9) og 5 uger (sorte bjælke, n = 8). Bøjning stivhed er givet i procent at de kontralaterale ikke brækket lårbenet. Data er angivet som gennemsnit ± standard fejl af middelværdien (SEM), * p < 0,05 vs 2 uger. Efter at bevise antagelsen for normalfordelingen (Kolmogorov-Smirnov-test) og med ens varians (F-test), blev sammenligning mellem de to eksperimenterende grupper udført ved hjælp af Student´s t-test. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Kritiske trin i den kirurgiske procedure er at finde den korrekte indgang til skrue implantation i midten af femur condyles på den intercondylar notch samt den optimale orientering af nålen parallelt med knogle akse for rivning af den intramedullære hulrum. For at undgå en forkert post holdning, skal kirurgen forberede hak indtil en optimal udsigt er opnået. For at styre retning under rivning, bør lårben musenes holdes med fingrene i en stabil stilling. Et yderligere vigtigt skridt er indsættelsen af skruen i lårbenet over guidewire fordi guidewire kan glide ud af proksimal knogle fragment resulterer i en fraktur dislokation. I dette tilfælde, kirurgen kan forsøge at tråd af knoglefragmenter igen, men denne manøvre er for det meste forgæves, og dyrene har derefter at blive udelukket fra undersøgelsen.
Den kirurgiske procedure kan desuden udvikle nogle komplikationer. For eksempel, kan den patella ligament, som er forskudt lateralt til at få en optimal udsigt til condyles, briste. Dette kræver suturering af ligament efter skrue indsættelse. Under åbning af knogle på condyles og rivning intramedullært hulrum, kan condyles briste. I dette tilfælde er der ingen mulighed for fejlfinding, fordi skruen ikke tilstrækkeligt fastsættes til den distale ende og komprimering af fraktur er ikke opnået. En anden komplikation er dislokation af indsatte guidewire eller en forkert holdning af knoglen. Denne komplikation kan nedsættes ved håndtering med forsigtighed og Radiografisk analyse efter indsættelse for at bekræfte den korrekte placering under operationen. Derudover kirurgen skal være opmærksomme på, at skruen er helt sat fordi et fremspring på skruen kan begrænse mobiliteten af musen eller reducere fraktur kompression. Derfor, en x-ray enhed er obligatorisk for den kirurgiske procedure. Eneste dyr efter Radiografisk bekræftelse i slutningen af kirurgi bør indgå i undersøgelsen-protokollen.
Fjernelse af intramedullært skruen i slutningen af forsøget kan udføres uden problemer, fordi hovedet af skruen kan tilsluttes til en særlig fjernelse instrument eller, alternativt, skruen kan fjernes også med nål holder.
En begrænsning af teknikken er at intramedullært skruen er fastsat af virksomheden kun i én størrelse med en defineret længde på 17,2 mm og derfor størrelse af lårbenet må betragtes. En yderligere begrænsning af brugen af intramedullært skruen er, i vivo micro beregnet tomografi-(CT) eller magnetisk resonans imaging (MR) analyser af helingsprocessen er næsten umuligt på grund af implantat materiale, som påvirker billedet kvalitet. Disse analyser kan derfor kun udføres efter eutanasi og fjernelse af implantatet ved udgangen af studieperioden. Endelig kan ikke skruen bruges til at analysere defekt knogleheling, fordi den aksiale stabilitet er opnået gennem kompression af knoglerester af den proksimale tråd og distale hovedet.
Knogle helbredende undersøgelser bruger enten åben8,9,10,11,12,13,14 eller lukket4,15, 16,17 knogle heling modeller. Open ben helbredende modeller tillade en mere rigid fiksation af fragmenter i forhold til lukkede knogle heling modeller, hvilket resulterer i en større mængde af intramembranous healing uden en udtalt callus dannelse. Fordi åben modeller er forbundet med lille callus dannelse, kan disse modeller ikke foretrækkes i eksperimenter, der kræver større mængder af hård hud væv til biokemiske og molekylære analyser. En yderligere ulempe ved de åbne modeller er behovet for en invasiv laterale tilgang med en stor blød væv traumer. Derimod kræver bruger en lukket model kun en lille mindre invasive indsnit. Indtil nu findes kun et par lukkede modeller i mus2.
I lukkede knogle heling modeller, bruges for det meste en simpel intramedullært pinkoden. Dog, denne teknik har forskellige ulemper. Mest bemærkelsesværdigt, manglen aksial og roterende stabilitet. Dette kan resultere i en heterogen helbredende reaktion5. Selvom denne ulempe er kendt for at påvirke eksperimentelle resultater18, bruge nylige undersøgelser, som har til hensigt at analysere mekanismerne af knogleheling, stadig murine modeller hvor bruddet er stabiliseret kun med en pin eller endda tilbage unstabilized7 . Vi føler, at stabile osteosyntese teknikker, sammenlignes med dem, der anvendes i klinisk praksis, bør også anvendes i mus. For at opnå aksial og roterende stabilitet, blev intramedullært skruen udviklet som inducerer fraktur komprimering af en distal hoved og en proksimal tråd. Af interesse, anvendelsen af intramedullært skruen producerer ikke en rigid fiksation, og, således vridningsstivhed af brækkede femora stabiliseret med intramedullært skruen er betydeligt lavere, når sammenlignet med brækket femora stabiliseret med ekstern fiksator eller en låsning plade5. Men en mindre rigid fiksation er forpligtet til at studere endochondral knogleheling, fordi kun en mindre rigid fiksation tillader micromovements af knoglefragmenter, som provokerer endochondral helingsproces. Ikke desto mindre, som vist i en tidligere ex vivo undersøgelse, intramedullært skruen producerer en særskilt aksial og roterende stabilitet. Biomekaniske analyse afslørede, at intramedullært skruen opnår en deformation stivhed på 0,34 ± 0,18 Nmm / °, hvilket er betydeligt højere i forhold til der er opnået med en konventionel pin (0,00 ± 0,00 Nmm / °)5. Intramedullære skruen indført her er således det eneste implantat der kan anvendes i et minimalt invasive teknik og der giver standardiseret biomekaniske forhold for den undersøgelse endochondral frakturheling i mus.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer, at de har ingen konkurrerende finansielle interesser.
Acknowledgments
Dette arbejde blev støttet af RISystem AG, Davos, Schweiz.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Mouse Screw | RISystem AG | 221,100 | |
| Guide wire | RISystem AG | 521,100 | |
| Centering bit | RISystem AG | 590,205 | |
| Hand drill | RISystem AG | 390,130 | |
| Cotton-Swab (150 mm, small head) | Fink Walter GmbH | 8822428 | |
| Suture (5-0 Prolene) | Ethicon | 8614H | |
| Forceps | Braun Aesculap AG &CoKG | BD520R | |
| Scissors | Braun Aesculap AG &CoKG | BC100R | |
| Needle holder | Braun Aesculap AG &CoKG | BM024R | |
| 27 G needle | Braun Melsungen AG | 9186182 | |
| Scalpel blade size 15 | Braun Aesculap AG &CoKG | 16600525 | |
| Heat radiator | Sanitas | 605.25 | |
| Depilatory cream | Asid bonz GmbH | NDXZ10 | |
| Eye lubricant | Bayer Vital GmbH | 2182442 | |
| Xylazine | Bayer Vital GmbH | 1320422 | |
| Ketamine | Serumwerke Bernburg | 7005294 | |
| Tramadol | Grünenthal GmbH | 2256241 | |
| Disinfection solution (SoftaseptN) | Braun Melsungen AG | 8505018 | |
| CD-1 mice | Charles River | 22 | |
| X-ray Device | Faxitron MX-20, Faxitron X-ray Corporation | 2321A0988 | |
| Fracture device small | RISystem AG | 891,100 |
References
- Jacenko, O., Olsen, B. R. Transgenic mouse models in studies of skeletal disorders. J Rheumatol Suppl. 43, 39-41 (1995).
- Histing, T., et al. Small animal bone healing models: standards, tips, and pitfalls results of a consensus meeting. Bone. 49 (4), 591-599 (2011).
- Bonnarens, F., Einhorn, T. A. Production of a standard closed fracture in laboratory animal bone. J Orthop Res. 2 (1), 97-101 (1984).
- Holstein, J. H., et al. Development of a stable closed femoral fracture model in mice. J Surg Res. 153 (1), 71-75 (2009).
- Histing, T., et al. Ex vivo analysis of rotational stiffness of different osteosynthesis techniques in mouse femur fracture. J Orthop Res. 27 (9), 1152-1156 (2009).
- Claes, L., Augat, P., Suger, G., Wilke, H. J. Influence of size and stability of the osteotomy gap on the success of fracture healing. J Orthop Res. 15 (4), 577-584 (1997).
- Histing, T., et al. Characterization of the healing process in non-stabilized and stabilized femur fractures in mice. Arch Orthop Trauma Surg. 136 (2), 203-211 (2016).
- Thompson, Z., Miclau, T., Hu, D., Helms, J. A. A model for intramembranous ossification during fracture healing. J Orthop Res. 20 (5), 1091-1098 (2002).
- Cheung, K. M., Kaluarachi, K., Andrew, G., Lu, W., Chan, D., Cheah, K. S. An externally fixed femoral fracture model for mice. J Orthop Res. 21 (4), 685-690 (2003).
- Garcia, P., et al. A new technique for internal fixation of femoral fractures in mice: impact of stability on fracture healing. J Biomech. 41 (8), 1689-1696 (2008).
- Histing, T., et al. An internal locking plate to study intramembranous bone healing in a mouse femur fracture model. J Orthop Res. 28 (3), 397-402 (2010).
- Garcia, P., et al. The LockingMouseNail-a new implant for standardized stable osteosynthesis in mice. J Surg Res. 169 (2), 220-226 (2011).
- Histing, T., Klein, M., Stieger, A., Stenger, D., Steck, R., Matthys, R., Holstein, J. H., Garcia, P., Pohlemann, T., Menger, M. D. A new model to analyze metaphyseal bone healing in mice. J Surg Res. 178 (2), 715-721 (2012).
- Histing, T., Menger, M. D., Pohlemann, T., Matthys, R., Fritz, T., Garcia, P., Klein, M. An Intramedullary Locking Nail for Standardized Fixation of Femur Osteotomies to Analyze Normal and Defective Bone Healing in Mice. J Vis Exp. (117), (2016).
- Hiltunen, A., Vuorio, E., Aro, H. T. A standardized experimental fracture in the mouse tibia. J Orthop Res. 11 (2), 305-312 (1993).
- Manigrasso, M. B., O'Connor, J. P. Characterization of a closed femur fracture model in mice. J Orthop Trauma. 18 (10), 687-695 (2004).
- Holstein, J. H., Menger, M. D., Culemann, U., Meier, C., Pohlemann, T. Development of a locking femur nail for mice. J Biomech. 40 (1), 215-219 (2007).
- Claes, L. E., et al. Effects of mechanical factors on the fracture healing process. Clin Orthop Relat Res. 355 Suppl, S132-S147 (1998).
