Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Immunology and Infection

הקרנה מבוססת תא מאתר הלבלב איון Diabetogenic כימיקלים סביבתיים

Published: June 25, 2018 doi: 10.3791/57327
* These authors contributed equally

Summary

כאן אנו מציגים פרוטוקול בידוד תאי הלבלב איון העכבר לסינון את inductions ROS מאת ואינטראקציות על מנת לזהות פוטנציאל diabetogenic xenobiotic כימיקלים.

Abstract

חשיפה לכימיקלים סביבתיים מסוימים של האדם ובעלי חיים נמצאה לגרום נזק תאי של תאי β בלבלב אשר יוביל להתפתחות של סוכרת סוג 2 (T2DM). למרות המנגנונים על הנזק תאי β כימית-induced היה לא ברור, עשוי להיות מורכב, ממצא חוזרות אחד היא כי חומרים אלה זירוז סטרס חמצוני שמוביל הדור של מינים חמצן תגובתי מוגזמת (ROS) לגרום נזק התא β. כדי לזהות פוטנציאל diabetogenic כימיקלים סביבתיים, בודדנו תאי הלבלב איון של עכברים C57BL/6 ואיון בתרבית תאים ב 96-ובכן תא תרבות לוחות; לאחר מכן, התאים איון היו עצומות עם כימיקלים, הדור ROS אותרה על ידי 2', 7'-dichlorofluorescein (DCFH-DA) הפלורסנט. באמצעות שיטה זו, אנו נמצא כי ביספנול A (BPA), Benzo [א] pyrene (BaP) ולאחר polychlorinated biphenyls (PCBs), עלול לגרום לרמות גבוהות של ROS, רומז כי הם פוטנציאלי עלול לגרום נזק תאי איון. שיטה זו צריכה להיות שימושית עבור הקרנת diabetogenic ואינטראקציות. בנוסף, התאים בתרבית איון עשוי גם להיות מותאם לניתוח במבחנה רעילות כימית-induced בתאי הלבלב.

Introduction

עולה השכיחות של T2DM הפכו משבר הבריאות העולמי בשנים האחרונות פוזות איום רציני לבריאות הציבור1. גורמים רבים נמצאו להיות מקושר סיבתי הפיתוח של T2DM, ביניהם, חוזרות ממצאים מראים כי נקודה מתכנסת אחת נפוצה עבור גורמים אלה הוא אינדוקציה של סטרס חמצוני, מה שמוביל הדור של ROS מופרז2 , 3.

מגוון רחב של כימיקלים סביבתיים לרבות Pcb, דיוקסינים BaP נמצאה לזירוז סטרס חמצוני, אשר עלול לפגום את תפקוד תאי β בלבלב, להוביל תנגודת לאינסולין ו- T2DM4. למרות הרמה פיזיולוגיים של ROS ממלא תפקיד חשוב בתאיים, חשיפה ROS שחורג הקיבולת של המערכת נוגד חמצון מתבטא הנזק לרקמות/תאים ומוביל מחלות5. תאי β בלבלב אקספרס רמה נמוכה של אנזימים נוגדי חמצון, ולכן הם מטרה רגיש ביותר נזק בתיווך סטרס חמצוני6,7. חשיפה כרונית רמות גבוהות של ROS הוכח לגרום תאי הלבלב מפגינות תפקוד5 וכן לאינסולין בכבד, רקמת שומן8.

המטרה הכוללת של הפרויקט הזה היא לפתח הנועד מבוססת תא כימיקלים המסך שלהם פוטנציאל diabetogenic מבוסס על אינדוקציה שלהם של ROS בתאי הלבלב. הלבלב חסר רעלים מטבוליים, הוא מטרה רגיש הנזק הנגרמת xenobiotic6,7. לכן, על ידי מדידת ישירות את האבחון שנוצר בתאי הלבלב, וזמינותו הזה צריך לספק הערכה ישירה של הפגיעה הנגרמת כימית בלבלב. כדי לפתח שיטה זו, אנחנו מבודדים לנגרהנס עכבר תרבותי של איון מבודד בתנאי התרבות תאים עם כימיקלים, מנוצל הדור ROS כימית-induced כמו המדידה. ההליך זה פשוטה ויעילה בזיהוי בתדר ROS חומרים כימיים איון מבודדים; זה יכול להיות פיתוח נוסף לחקירה על מנגנוני רעילות ספציפיים הלבלב חוץ גופית בתוך.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

ניסויים בבעלי חיים כל הוצאו להורג בדרישות ההנחיות הרלוונטיות כל, תקנות וגופים רגולטוריים. פרוטוקול להיות הפגינו בוצעה תחת הדרכה ואישור של טיפול בעלי חיים מוסדיים ושל שימוש הוועדה (IACUC) של טקסס A & M המכון ללימודי רפואה גנומית.

1. פתרון הכנה

  1. לדלל תמיסת מלח מאוזנת של האנק x 10 ל- x 1 עם כפול מזוקקים H2O, ולאחסן ב 4 º C.
  2. הכינו את הפתרון בידוד על-ידי הוספת HEPES (10 מ מ), MgCl2 (1 מ מ) וגלוקוז (5 מ מ). להתאים את ה-pH ל 7.4 ולשמור על קרח.
  3. להכין את הפתרון collagenase מן collagenase Type 4.
    הערה: באופן ספציפי, collagenase Type 4 מכיל 160 U לכל מ ג של משקל יבש. 1 גר' collagenase Type 4 הוא מדולל 5 מ"ל כפול מזוקקים H2O עם ריכוז של 200 מ"ג/מ"ל. 2 מיליליטר Collagenase מדולל מתווסף 30 מ ל הקרח בידוד קר פתרון, 6 מ של פתרון collagenase מועבר שפופרת 50 מ עבור כל עכבר.
  4. הכינו את הפתרון שטיפת על-ידי הוספת 1 מ"מ CaCl2 הפתרון בידוד.
  5. הכינו את פתרון טיהור בעזרת פתרון diatrizoate polysucrose קר/נתרן (1.1119 g/mL, 5 mL).
  6. להכין 500 מ"ל של איון תרבות בינוני על-ידי הוספת-גלוטמין (20 מ מ), פניצילין (100 U/mL), סטרפטומיצין (100 µg/mL), סרום שור עוברית (FBS) (10%) לתוך RPMI בינונית.
  7. להכין את הפתרון DCFH-DA מניות על ידי המסת אבקה מים מזוקקים-200 מיקרומטר, חנות ב-20 ° C.
    הערה: האבחון מכתים הפתרון נעשה טרי על ידי דילול לפתרון מניות DCFH-DA הריכוז הסופי של 5 מיקרומטר ב- RPMI. ריאגנט הזה צריך להיות מוגן מפני אור.

2. ניתוח הכנה

  1. Intraperitoneally להזריק (I.P.) עכבר עם avertin (2.5% avertin, 0.4 מ ל/20 גרם). אחרי העכבר הוא מורדם לחלוטין, כבר לא מגיב כדי הינד רגל צובט, המתת חסד בעכבר והזז מכסה המנוע ביולוגי.
  2. הנח את העכבר לאללה עם הצד הבטן פונה כלפי מעלה, לרסס את העור עם אתנול 70% עבור עיקור.
  3. פתיחת חלל הבטן עם 1 ס מ U-החתך על הבטן העליונה ומשכו את העור בכיוון rostral החזה כדי לחשוף את חלל הבטן.

3. לבלב זלוף והסרה

  1. כמופיע באיור1, למצוא את המיקום של ampulla. השתמש זוג מלקחיים מעוקל נכנעתי התריסריון קרוב המיקום של הסוגר של Oddi. להשתמש עוד זוג מלקחיים מעוקל תהדק את הקיר התריסריון כדי לחסום את המעבר מרה תריסריון.
    הערה: Ampulla לא הוכנס בשלב זה. שלב זה נועד לחסום את המעבר מרה תריסריון.
  2. למקם מחדש את העכבר עם הראש הפרוקסימלית ואת כפות הרגליים דיסטלי לגבי החוקר.
  3. למצוא את צינור המרה, לאט להזריק 3 מ"ל של collagenase פתרון בעזרת מזרק 5 מ ל ומחט 30 גרם. ודא שאת צינור המרה והלבלב הם בניפוח לאחר הזריקה.
  4. הסר את הלבלב נפוחה באמצעות מלקחיים מעוקל מספריים בסדר כדי להפרידו מן יורד קולון, המעיים, קיבה, טחול. למקם את הלבלב צינור 50-mL המכיל 3 מ"ל של פתרון collagenase ולשמור אותו בקרח.

4. לבלב עיכול

  1. מקם כל שפופרת 50-mL לתוך אמבט מים 37 º C. תקופת דגירה של 15-20 דקות (זמן משתנה עם זן, הגיל של העכברים).
  2. רטט הצינור באמצעות מערבולת.
  3. בריכה 4-5 הלבלב מתעכל במסננת גדולה כיור סטרילי והשתמש סקופ כדי להפוך הלבלב להתפרק ביסודיות. להשתמש בכוח pipette התאים מתעכל מהמסך 23 גרם 10 מ"ל ומחט המזרק המכיל שטיפת פתרון. לאסוף את הפתרון לשטוף בצינור 50-mL.
  4. Centrifuge הצינורות ב g x 97 ב 4 ° C עבור 1 דקות, decant את תגובת שיקוע.
  5. להוסיף 25 מ של פתרון לשטיפת צינורות, מחדש להשעות את הרקמה על ידי עדין vortexing. ספין לאורך הרקמות ב g x 97 ב 4 ° C עבור 1 דקות, decant את תגובת שיקוע. חזור על 3 פעמים. להיזהר לא להוציא את הרקמה pelleted.

5. טיהור של איים קטנים

  1. להוסיף 10 מ של פתרון טיהור בגדר רקמות שטף, resuspend בעדינות את התוכן.
  2. בעדינות כשכבת-על 5 מ של בידוד פתרון על הפתרון טיהור. הקפד לשמור על ממשק נוזלי חדה בין שני הפתרונות.
  3. Centrifuge את הצינור 560 x g ב 4 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות עם האצה איטית, בלי בלמים. להוסיף את פיפטה לתוך הממשק ולאסוף את השכבה איים קטנים לתוך צינורות 50 מ ל חדש.
  4. לשטוף את איונים כפי שמתואר בשלב 3.5.

6. ציפוי וטיפול של תאי איון

  1. Resuspend ע ב 10 מ"ל של איים קטנים תרבות פתרון מערבבים היטב ובעדינות במקום 100 µL טוב עם פיפטה רב-ערוצי על צלחת 96-ובכן. במקום כ 5 איים לכל 96. טוב.
  2. מקם את הצלחת בחממה תרביות רקמה במשך 12 שעות.
  3. Centrifuge (112 x g) של צלחת 96-ובכן ולהסיר המדיום תרבות.
  4. לדלל כימיקלים סביבתיים במדיום תרבות איונים. להוסיף 100 µL של כל אחד מדלל כימי לתוך בארות נפרדים של הצלחת. Resuspend איים על כל היטב, תקופת דגירה של 12 שעות ב 37 מעלות צלזיוס (הריכוז משתנה לחומרים סביבתיים שונים).

7. ROS מכתים ומדידה

  1. לאחר הטיפול איונים, לשטוף עם PBS 1 x (200 µL עבור כל 96-ובכן).
    הערה: ריכוז הכימיקלים הוא כדלקמן: AFB1: 3 מיקרומטר, מסוג אטרזין: 100 מיקרומטר, BaP: 10 מיקרומטר, BPA: 100 מיקרומטר, β-אסטרוגן, PCB126: 10 מיקרומטר, Nonylphenol ו BPA: 100 מיקרומטר.
  2. השתמש N-אצטיל ציסטאין (NAC) כ נוגד חמצון כדי להרוות ROS. להוסיף 5 מ מ של NAC מדלל כימיות הנוצרות על-ידי ROS, תקופת דגירה של 12 שעות ב- 37 מעלות צלזיוס.
  3. Centrifuge את הצלחת 96-ובכן ב g 112 x, דגירה עם 5 מיקרומטר פתרון של בדיקה פלורסנט (H2-DCFH-DA מומס RPMI מדיה) ב 37 מעלות צלזיוס למשך 60 דקות.
  4. לשטוף את התאים איון שטופלו 3 פעמים עם PBS ולמדוד את זריחה עם קורא microplate-488 ננומטר.
    הערה: ההצטברות של DCF בתאים יכול להימדד על-ידי עלייה בזריחה ב- 530 ננומטר כאשר המדגם הוא נרגש-488 ננומטר.
  5. מבצע אינסולין הגלוקוז-גירוי הפרשת (GSIS) assay9 xenobiotic בתדר ROS מטופלים איונים ושל לא מטופל כדי למדוד את ההשפעות xenobiotic על תפקיד פיזיולוגי באיי לנגרהנס.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

מיקרוסקופ של איון מבודד בריא מוצג באיור 2, שבה יש איים קטנים עגולים או אליפטיים צורה עם מדים יחסית לגודל (למרות אחידות הגודל יכול להשתנות זן זן). חקרנו את הפונקציות הלבלב איון assay במבחנה הבא מאת לבודד את איון והמרצת הפרשת אינסולין בלבלב ע תרבות. איור 3 מראה את ניתוח טיפוסי וזמינותו GSIS מ- C57BL/6 איונים העכבר מבודדת הנגרמת על ידי גלוקוז 3.3 מ מ ו- 16.7 מ מ9.

שימוש בשיטת מסך תבנית צלחת, זיהינו מספר ואינטראקציות שגרמו אינדוקציה משמעותית של ROS תאים איון (איור 4). אנחנו מטופלים איים מבודדים עם כימיקלים שונים במשך 12 שעות נמצאו הזו מסוג אטרזין, BPA, BaP, PCB126ו β-אסטרוגן עלול לגרום משמעותי אינדוקציה של ROS איים מבודדים11,10,, או12 , 13.

למרות ROS אינה שווה אינדוקציה diabetogenic, יש ראיות המלמדות המציין את תפקידה החשוב של ROS בגרימת נזק פונקציות פיזיולוגיים של תאי β בלבלב, אשר מוביל T2DM8. לפיכך, הערך של העבודה היא לזהות אלה ROS גרימת כימי כמו המסך הראשוני. יתר על כן, תרכובות זיהו יכולים להיות עוד יותר שנותחה במבחנה ב מערכת התרבות תאים מבודדים הלבלב איון המתואר בכתב היד. הראו לנו את ההשפעות של ROS בתדר ואינטראקציות על גלוקוז-מגרה הפרשת אינסולין איים מבודדים, אשר בקצרה לספק נתונים diabetogenic תרכובות אלו שנבדקו. לנגרהנס טרום טיפול עם PCB126 ו BPA הראו ירידה משמעותית הפרשת אינסולין מאשר קבוצת הביקורת (איור 5).

Figure 1
איור 1 : הליך של העכבר הלבלב זלוף. ההליך מורכב מהשלבים הבאים: (1) למצוא ampulla ולהשתמש שני זוגות של מלקחיים מעוקל נכנעתי ampulla. (2) להוסיף את המחט דרך המרה משותפים. (3) לאט להזריק 3 מ"ל של collagenase מניות פתרון במזרק מ. (4) לאסוף את הלבלב נפוחה החל התריסריון.
 

Figure 2
איור 2 : מבודד העכבר איונים. העכבר מבודד לנגרהנס במדיום תרבות מוצגים. סרגל קנה מידה של מיקרומטר 500.

Figure 3
איור 3 : הפרשת האינסולין מגורה-גלוקוז של איים מבודדים הלבלב. הפרשת האינסולין למינון מגורה-גלוקוז (1, 3.3 ו- 16.7 מ מ, טיפול למשך 15 דקות) נמדד איים מבודדים (ממוצע 5 איים קטנים לכל טוב), באמצעות העכבר אינסולין אליסה קיט. קווי שגיאה הראה סטיות תקן. p < 0.05.

Figure 4
איור 4 : אינדוקציה של ROS מאת ואינטראקציות ב איים מבודדים של עכברים C57BL/6- איים מבודדים (א) היו מטופלים במשך 12 שעות, צבעונית עם פלורסצנטיות לצבוע 2', 7'-dichlorofluorescein (DCFH-DA) לשעה. ידי קרינה פלואורסצנטית נקבע על-ידי קרינה פלואורסצנטית צלחת קורא. (B) כימית-induced ROS היו מתרצה על ידי NAC (5 מ מ). (AFB1: 3 מיקרומטר, מסוג אטרזין: 100 מיקרומטר, BaP: 10 מיקרומטר, BPA: 100 מיקרומטר, PCB126: 10 מיקרומטר, Nonylphenol, BPA: 100 מיקרומטר, ו NAC: 5 מ מ). קווי שגיאה הראה סטיות תקן. p < 0.05. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 5
איור 5 : Xenobiotic השפעות על הפרשת האינסולין מגורה-גלוקוז של איים מבודדים. איים מבודדים טרום טיפול עם PCB126, β-אסטרוגן BPA (4 שעות), המשיך במדיום תרבות איון לשעה. תגובת שיקוע של ע נאסף למדידה של אינסולין על ידי אינסולין העכבר זמינים מסחרית אליסה וזמינותו. קווי שגיאה הראה סטיות תקן. p < 0.05.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

לצבירת ראיות מציע כי החשיפה לכימיקלים סביבתיים ממלא תפקיד חשוב בהתפתחות של T2DM. ROS ואינטראקציות-induced הוכר כגורם etiological פוטנציאליים, תורם להתפתחות של T2DM. בני אדם חשופים למגוון רחב של כימיקלים xenobiotic, ויש צורך גדול עבור מחקר חדשניים טכניקות לזיהוי ביעילות את הלבלב חשיפה לרעלים, לחקור את המנגנון של רעילות ספציפיים בתאי הלבלב.

במחקר זה, המבוסס על הנהלים שפורסמו14, פיתחנו פרוטוקול כדי לבודד לנגרהנס של עכבר ומסך התאים בכימיקלים xenobiotic עבור נזק חמצוני מפגינות בתאי הלבלב. אנחנו גם להשתמש בהליך זה כדי לחקור את התגובות הלבלב רעילים ספציפי המושרה על ידי תרכובות xenobiotic. להשיג הלבלב של העכבר, אנו מעדיפים להשתמש avertin על הרדמה אחרים כי היא אינה משנה את רמות הגלוקוז בדם, לא משפיעה על להערכת הלבלב16,15,, או17. מצאנו כי הצעד צנטריפוגה הדרגתיות צפיפות הוא קריטי עבור בידוד של איון עם טוהר גבוהה. צריך לקחת כדי להשיג את השכבה ברורים בין השלב מאגר polysucrose/נתרן ובידוד כדי להשיג דגימה איונים טהור, ללא פסולת ורקמות אקסוקרינית תאים /. השיטה ניתן לניתוח במבחנה של השפעות סביבתיות כימי על הלבלב איון פיזיולוגיה, כגון וזמינותו GSIS (כפי שמוצג באיור3). ע צריך להיות מפוזר היטב עם pipetting חוזרים ונשנים לתוך תאים נפרדים כדי להבטיח תא במדים בצלחת 96-תא תרבות. השיטה המתוארת כאן בשילוב הבידוד של איון ואת וזמינותו מהירה לדור ROS, לכן, מסך הראשונית פשוטה ויעילה פוטנציאל כימיקלים מזיקות-לבלב.

השתמשנו הפרשת האינסולין בתגובה לאתגר גלוקוז כדי לאשר את הזהות של באיי לנגרהנס מבודד. הנוהל הוא וישימה מאוד לניתוח של שינויים בפרמטרים, כולל הפרשה של אינסולין (איור 3) ויצירת מחנה, בתגובה טיפולים xenobiotic18.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים מצהירים כי יש להם אינטרסים כלכליים אין מתחרים.

Acknowledgments

עבודה זו נתמכה על ידי מענק הפרויקט טייס ממרכז CREH ממומן על ידי NIEHS ועל ידי הלאומי מדעי הטבע קרן של סין (מספר 31572626).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
10×Hank’s balanced salt solution  GIBCO 14185-052
Collagenase Type 4 Worthington Biochemical Corporation CLS-4
polysucrose/sodium diatrizoate solution  Sigma 10771
2’,7’-dichlorofluorescein (DCFH-DA) Sigma D6883-50MG
fluorescence microplate reader  Biotek
L-glutamine Sigma G8540-25G
streptomycin GIBCO 15140148
FBS GIBCO 26140079
RPMI 1640 GIBCO 11875-085
avertin Sigma T48402-25G
Rat/Mouse Insulin ELISA Kit Millipore EZRMI-13K
Centrifuge Sorval Sorval RT7 for 96-well plate centrifuge
Microplate reader Biotek Epoch 2 for fluorescence reading

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Maruthur, N. M. The growing prevalence of type 2 diabetes: increased incidence or improved survival? Current diabetes reports. 13 (6), 786-794 (2013).
  2. Houstis, N., Rosen, E. D., Lander, E. S. Reactive oxygen species have a causal role in multiple forms of insulin resistance. Nature. 440 (7086), 944-948 (2006).
  3. Ma, Z. A., Zhao, Z., Turk, J. Mitochondrial dysfunction and beta-cell failure in type 2 diabetes mellitus. Exp Diabetes Res. , 703538 (2012).
  4. Valavanidis, A., Vlahogianni, T., Dassenakis, M., Scoullos, M. Molecular biomarkers of oxidative stress in aquatic organisms in relation to toxic environmental pollutants. Ecotoxicology and environmental safety. 64 (2), 178-189 (2006).
  5. Robertson, R. P., Harmon, J., Tran, P. O., Tanaka, Y., Takahashi, H. Glucose toxicity in β-cells: type 2 diabetes, good radicals gone bad, and the glutathione connection. Diabetes. 52 (3), 581-587 (2003).
  6. Kaneto, H., et al. Oxidative stress induces p21 expression in pancreatic islet cells: possible implication in beta-cell dysfunction. Diabetologia. 42 (9), 1093-1097 (1999).
  7. Maechler, P., Jornot, L., Wollheim, C. B. Hydrogen peroxide alters mitochondrial activation and insulin secretion in pancreatic beta cells. Journal of Biological Chemistry. 274 (39), 27905-27913 (1999).
  8. Gao, D., et al. The effects of palmitate on hepatic insulin resistance are mediated by NADPH Oxidase 3-derived reactive oxygen species through JNK and p38MAPK pathways. Journal of Biological Chemistry. 285 (39), 29965-29973 (2010).
  9. Efendić, S., et al. Pancreastatin and islet hormone release. Proceedings of the National Academy of Sciences. 84 (20), 7257-7260 (1987).
  10. Tian, Y., Ke, S., Denison, M. S., Rabson, A. B., Gallo, M. A. Ah receptor and NF-κB interactions, a potential mechanism for dioxin toxicity. Journal of Biological Chemistry. 274 (1), 510-515 (1999).
  11. Cui, H., et al. Pregnane X receptor regulates the AhR/Cyp1A1 pathway and protects liver cells from benzo-[α]-pyrene-induced DNA damage. Toxicology Letters. 275, 67-76 (2017).
  12. Li, L. A., Wang, P. W. PCB126 induces differential changes in androgen, cortisol, and aldosterone biosynthesis in human adrenocortical H295R cells. Toxicological Sciences. 85 (1), 530-540 (2005).
  13. Asahi, J., et al. Bisphenol A induces endoplasmic reticulum stress-associated apoptosis in mouse non-parenchymal hepatocytes. Life sciences. 87 (13), 431-438 (2010).
  14. Szot, G. L., Koudria, P., Bluestone, J. A. Murine pancreatic islet isolation. JoVE (Journal of Visualized Experiments). (7), e255 (2007).
  15. Kirstetter, P., Lagneau, F., Lucas, O., Krupa, Y., Marty, J. Role of endothelium in the modulation of isoflurane-induced vasodilatation in rat thoracic aorta. British journal of anaesthesia. 79 (1), 84-87 (1997).
  16. Brown, E., Umino, Y., Loi, T., Solessio, E., Barlow, R. Anesthesia can cause sustained hyperglycemia in C57/BL6J mice. Visual neuroscience. 22 (5), 615-618 (2005).
  17. Vaupel, D., McCoun, D., Cone, E. J. Phencyclidine analogs and precursors: rotarod and lethal dose studies in the mouse. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 230 (1), 20-27 (1984).
  18. Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination. Journal of visualized experiments: JoVE. (88), (2014).

Tags

אימונולוגיה זיהום גיליון 136 לנגרהנס T2DM מינים חמצן תגובתי ואינטראקציות כימיקלים רוס diabetogenic
הקרנה מבוססת תא מאתר הלבלב איון Diabetogenic כימיקלים סביבתיים
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Chen, J., Zhong, L., Wu, J., Ke, S., More

Chen, J., Zhong, L., Wu, J., Ke, S., Morpurgo, B., Golovko, A., Ouyang, N., Sun, Y., Guo, S., Tian, Y. A Murine Pancreatic Islet Cell-based Screening for Diabetogenic Environmental Chemicals. J. Vis. Exp. (136), e57327, doi:10.3791/57327 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter