Summary
Her presenterer vi en pålitelig og enkel todimensjonal (2D) coculture system for å studere samspillet mellom kreftceller og benmarg adipocytter, som avslører en dobbel effekt av melanom celle-avledet faktorer på benmarg adipocytter differensiering og utgjør også en klassisk metode for mekanistisk studier av bein metastasering.
Abstract
Crosstalk mellom benmarg adipocytter og kreftceller kan spille en avgjørende rolle i prosessen med bein metastasering. En rekke metoder er tilgjengelige for å studere den betydelige crosstalk; imidlertid fortsatt en todimensjonal transwell system for coculture en klassisk, pålitelig, og enkel måte for denne crosstalk studien. Her presenterer vi en detaljert protokoll som viser coculture av benmarg adipocytter og melanom celler. Likevel kunne slikt coculture system ikke bare bidra til studiet av cellen signal transductions av kreftceller av benmarg adipocytter, men også i fremtiden mekanistisk studie av bein metastasering som kan avsløre nye terapeutiske mål for bein metastasering.
Introduction
Benmetastaser er utbredt blant avansert kreftpasienter, men en helbredende behandling er fremdeles utilgjengelig. Utover spesialiserer seg på lagring av energi som fett, kan adipocytter støtte tumor vekst og metastasering i benmargen og andre organer1,2,3,4,5,6. Videre spiller adipocytter en viktig rolle i å regulere kreft cellen biologi7,8,9,10 og metabolisme4,11,12 ,13,14,15,16, så vel som i bein metastasering1,4,12. I benmargen nisje, kan adipocytter også påvirke biologisk atferd av kreft celler4,6,17. Samspillet mellom benmarg adipocytter og kreftceller med osteotropism er viktig for en forståelse av bein metastasering. Men er lite kjent.
Basert på dagens studier, brukes ulike metoder på adipocytter, inkludert to - eller tre - dimensjonale (2/3D) og ex vivo kulturer17,18,19,20,21. Nylig utviklet Herroon et al. en ny 3D-kultur tilnærming til studere interaksjoner av benmarg adipocytter med kreft celler22. Selv om det 3D coculture er optimal for mimicking fysiologiske interaksjoner mellom adipocytter og kreft celler i vivo, den lider av dårlig reproduserbarhet22,23. I forhold til en 2D coculture system, kan en 3D coculture-system gi mobilnettet Norge, for eksempel cellen morfologi21,22,24,25,26. Videre kan ex vivo kulturen av isolerte cancellous bein vev føre til en robust utvekst av adipocytter kulturperler bein margtransplantasjon celler17.
I motsetning til disse tidligere modeller imidlertid 2D celle kultur modellen en klassisk, pålitelig og enkel teknikk for raskt skanne kandidat molekyler og av fenotyper i enten adipocytter eller kreft celler i vitro1, 4,6,12,15,27. For bedre å forstå crosstalk mellom benmarg adipocytter og melanom celler, gir vi en detaljert protokoll for et 2D coculture system av benmarg adipocytter med melanom celler.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Merk: Alle cellene som brukes i denne protokollen må være dyrket i minst tre generasjoner etter tining av frosne lager celler.
1. harvest melanom Cell-derived faktorer
-
Forberedelser
- Få B16F10 celler og en mus melanom cellen linje.
Merk: For denne protokollen, en mus melanom cellen linje er Hentet fra den stilk cellen Bank av det kinesiske vitenskapsakademi. - Foreta et komplett medium for B16F10 cellekultur (100 mL). Bruk Dulbeccos endret Eagle's medium (DMEM) med 10% fosterets bovin serum (FBS), 50 U/mL av penicillin og 50 µg/mL av streptomycin.
- Gjør et serum-free medium for sult B16F10 cellene (50 mL). Bruk DMEM medium uten FBS, 50 U/mL av penicillin og 50 µg/mL av streptomycin.
- Få B16F10 celler og en mus melanom cellen linje.
-
Forberede melanom-conditioned medium (CM)
- Frø 2.0 x 105 B16F10 celler i en 100 mm rett med 10 mL 10% FBS DMEM. Deretter ruge cellene i en 37 ° C inkubator i en atmosfære av 5% CO2 24 h.
- Når cellene kommer omtrent 80% av samløpet, fjerne kultur medium, vaske cellene to ganger med 5 mL fosfat-bufret saltoppløsning (PBS) (1 x, pH 7.4) og erstatte mediet med en 10 mL serum-free medium for sult.
- Tilbake cellene til inkubator 18 – 24 h.
- Etter sult, samle betinget mediet (CM) med en pipette og overføre den til en frisk 50 mL sentrifuge rør.
Merk: Betinget mediet er nedbryting av B16F10 cellekulturer. Kontroller B16F10 cellene er i god stand før samle CM. - Sentrifuge CM i 5 min på 1000 x g på 4 ° C.
- Pipetter nedbryting og overføre den til en frisk sterilt rør eller flaske.
Merk: Unngå pipettering av pellets nederst på røret. - Hvis du vil fjerne celle rusk, filtrere CM etter passerer det gjennom en sprøyte-tilkoblet 0,45 µm filter på et sterilt flaske eller rør.
Merk: 0.22 µm filtre er optimal for filtrering CM. - Lagre filtrerte nedbryting på 20 ° C før bruk.
Merk: Det er best å ikke lagre nedbryting på 20 ° C for mer enn en måned. Eventuelt lagre CM-80 ° c for mer lengre perioder for differensiering av adipocyte.
2. induksjon av benmarg adipocytter av melanom Cell-derived faktorer
-
Forberedelser
- Gjøre 100 mL adipogenic induksjon middels28. Bruk en komplett DMEM med 5 µg/mL av insulin, 0,5 mM 3-isobutyl-1-methylxanthine og 1 µM deksametason. Lagre det opp til to uker 4 ° C.
- Forberede 100 mL adipogenic vedlikehold medium. Bruke en fullstendig DMEM eller blandet med 50% melanom CM med 5 µg/mL av insulin.
- Gjør en olje Red O lager løsning. Oppløse 30 mg av olje Red O pulver i 10 mL isopropanol (≥ 99,5%) og bland dem godt av vortex.
Merk: Oppbevar det til 1 år på 4 ° C. - Gjøre en olje Red O fungerende løsning. I avtrekksvifte, fortynne olje Red O lager løsningen (fra trinn 2.1.3) med deionisert vann i forholdet 3:2. Inkuber blandingen i 15 min ved romtemperatur og filtrere det gjennom filtere 0.22 µm før bruk.
Merk: Bruk bare frisk arbeider løsningen innen 2 t.
-
Adipocyte differensiering
- Kultur en stromal celle linje 14F1.1 fra musen benmarg29 i 60 mm parabol med en komplett DMEM på 80% confluency i en 37 ° C inkubator i en atmosfære av 5% CO2.
Merk: Erstatt eventuelt 14F1.1 med primær bein margtransplantasjon-avledet mesenchymal celler30. - Trypsinize cellene med 1,5 mL en 0.25% trypsin i en inkubator for 1-2 min.
- Legge til 5 mL av 10% FBS medium til cellene og telle celle tall med et glass hemocytometer; deretter justere celle tettheten til rundt 1-2 x 105/mL.
- Frø 5 x 10-4 14F1.1 celler per brønn i en 24-vel plate med 0,5 mL av adipogenic induksjon medium. Etter to dager med inkubering nå cellene ca 90% av samløpet.
Merk: Dette trinnet er svært kritisk. Benmarg stromal celler kan ikke bli overtalt til å adipocytter uten et adipogenic induksjon medium. - Fjerne induksjon mediet og vask cellene to ganger med 1 mL av PBS hver gang.
- Endre til 1 mL av adipogenic vedlikehold medium og fortsette å kultur cellene til adipocyte modning.
Merk: Under et mikroskop, adipocytter ser ut som små eller store såpebobler og er veldig lett å gjenkjenne. Vanligvis finnes eldre adipocytter på den 6th eller 8th dag. - Flekker av eldre adipocytter med oljen Red O eller samle adipocytter for en kvantitativ polymerase kjedereaksjon (qPCR) analyse.
- Kultur en stromal celle linje 14F1.1 fra musen benmarg29 i 60 mm parabol med en komplett DMEM på 80% confluency i en 37 ° C inkubator i en atmosfære av 5% CO2.
-
Adipocyte flekker
- Vask det differensiert 14F1.1 celler 2 x med PBS og løse dem i 3,7% formaldehyd 1t.
- Skyll cellene i 60% isopropanol og la dem tørke helt.
- Legg 0,2 mL olje Red O fungerende løsning fordelt og ruge det ved romtemperatur for 0,5 til 2 h.
- Vask cellene med vann for å fjerne de ubundne fargestoffer.
- Foto av farget adipocytter under lys mikroskop.
3. coculture av benmarg adipocytter med melanom celler
-
Forberedelser
- Forberede modne bein margtransplantasjon adipocytter: indusere 14F1.1 cellene i eldre BM adipocytter i 24-vel plater med adipogenic induksjon mediet for 2 dager, og deretter vedlikeholde dem i adipogenic vedlikehold medium for ytterligere 6-8 dager.
- Forberede B16F10 cellene: kultur B16F10 cellene i 60 mm retter med 5 mL av DMEM medium.
- Fukt membran innsatsen (f.eks transwell): legge til 150 µL av FBS-fri DMEM medium 0,4 µm pore-størrelse membran skivene og dyppe dem på brønnene 24-vel plater fylt med 500 µL av FBS-fri DMEM medium.
-
Coculture innstilling
- Sakte Pipetter av mediet av hver sette.
Merk: Ikke ødelegge membranen når du fjerner mediet. - Frø B16F10 cellene (0/103/105/106) i 0,4 µm pore setter inn fra trinn 3.2.1.
- Erstatte adipogenic vedlikehold mediet i brønnene med eldre benmarg adipocytter fra trinn 3.1.1. med 600 µL av komplett DMEM medium.
- Overføre skivene fylt med B16F10 celler (fra trinn 3.2.2) på brønnene med eldre benmarg adipocytter (fra trinn 3.2.3) for coculture eksperimenter.
- Inkuber cocultures på 37 ° C og 5% CO2 i 2 dager.
- Etter 48 timer med inkubering, fjerne innlegg av coculture og så vaske adipocytter 2 x med 500 µL av 1 x PBS.
Merk: Samle eventuelt B16F10 cellene i skivene for analyse hvis nødvendig. - Flekk adipocytter med olje Red O fungerende løsning eller samle inn adipocytter for qPCR analyse.
Merk: Se flekker fremgangsmåten i trinn 2.3. - Foto av farget adipocytter under lys mikroskop.
- Sakte Pipetter av mediet av hver sette.
4. qPCR analyse av Adipocyte-spesifikke Gene signaturen
- Legge til 0,5 mL av klar-å-bruke RNA isolasjon reagensen per brønn i en 24-vel plate som eldre adipocyte er klar til å oppdage.
- Følg en standardprotokoll for RNA utvinning og cDNA syntese31.
- Bruk primer for 18S og GAPDH som kontroll, og CEBPα/β, PPARγ, FABP4, leptin, Pref-1 eller adiponectin for adipocyte-spesifikke genet signaturen (tabell 1).
- Kjør følgende reaksjon i en termisk cycler: 95 ° C for 20 s, etterfulgt av 40 sykluser av 95 ° C for 1 s og 60 ° C for 20 s.
- Bruke metoden for 2--ΔΔCt til å beregne fold endrer32.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I benmargen, adipocytter kan vises i de svulst microenvironment1,13,33,34,35 på et tidlig stadium for å støtte svulst progresjon gjennom løselig faktorer eller aktivere osteoclastogenesis6,12,36, spesielt i sammenheng med fedme6,12 og/eller aldring37. Vår forrige studier1 har bemerket at antall benmarg adipocyte endres dramatisk i løpet av tidlig stadium av melanom metastaser til bein1. Faktisk mengden adipocytter akkumuleres i svulst området og støtte kreftceller vekst i beinmargen når musene matet med en høy-fett diett6, antyder at benmarg adipocytter kan spille en betydelig rolle i metastatisk benet benmarg nisje37. Den dynamiske crosstalk kreftceller og benmarg adipocyte er imidlertid uklart. Derfor var vi dedikert til adressering problemet av 2D coculture systemet av benmarg adipocyte og melanom celler.
Svulst-avledet faktorer fremme differensiering av benmarg adipocytter:
Figur 1 en representerer en typisk arbeidsflyt for å indusere benmarg adipocytter med svulst-conditioned medium (TCM). En representant eksperiment angir 14F1.1 celler, belagt som enkeltceller i en tetthet 5 x 104 celler per brønn i nærvær av en adipogenic induksjon medium i de 3 første dagene, og deretter opprettholdt innen adipogenic vedlikehold mediet (med eller uten TCM) for 6-8 dager. Eldre adipocyte inneholder lipid dråper; Derfor kan de differensierte adipocytter lett identifiseres av olje Red O flekker (figur 1b) og kvantifisert ved qPCR med en adipocyte-spesifikke genet signatur (figur 1c).
Overbelastning av melanom celler induserer de differensiering i benmargen adipocytter:
Kreftceller kan endre miljøet å overleve, spesielt under hypoxic forhold1,4,6. For å etterligne en svulst belastning sekundær virkning på en benmarg adipocyte, utført vi 2D coculture systemet med vedvarende økning av melanom celle nummer i øvre skivene (figur 2en). Figur 2b viser at lipid lagring i adipocytter er berøvet større grad på den høyeste tettheten av melanom celler (106 celler/vel) sammenlignet med deprivasjon på laveste frekvensen av melanom celler (103 celler / Vel). Figur 2 c presenterer en genet profilering av disse adipocytter i adipocytter i coculture. Sammenlignet med coculture med lavest tettheten av melanom celler, pref-1 nivå økt åpenbart, og uttrykk for Leptin, adiponectin, FABP4, CEBPβ og PPARγ ble redusert, noe som antyder at svulsten belastning sekundære effekten kan tilskrives de differensiering prosessen i adipocytter. Dessuten kan en overbelastning av kreftceller indusere nekrose i adipocytter38.
I sammendraget observerte vi en motsatt melanom celle-drevet effekt på benmarg adipocytter av løselig faktorer. Motsatt effekt på benmarg adipocytter er av høy rente, antyder at benmarg adipocytter er dynamisk regulatorer av svulst celle metastase å benmarg.
Figur 1 : Tumor-avledet faktorer fremme en adipocyte differensiering. (en) dette panelet viser en skjematisk visning av eksperimentelle innstillingen som bruker 14F1.1 linjer og melanom-avledet betinget medium. (b) dette panelet viser avbilding av en differensiert benmarg adipocyte. (c) dette panelet viser analyse av en adipocyte-spesifikke genet signatur av qPCR. TCM = svulst-conditioned medium. qPCR: kvantitative polymerasekjedereaksjons. Skala bar = 50 µm. Dette tallet har blitt endret fra Wang et al. 1. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2 : Tumor belastning effekter på adipocyte. (en) dette panelet viser en skjematisk visning for eksperimentell: en coculture av 14F1.1 linjer og melanom celler. (b) dette panelet viser avbilding av en benmarg adipocyte i coculture-systemet. (c) dette panelet viser en genet profilering av adipocytter av qPCR. qPCR: kvantitative polymerasekjedereaksjons. Skala bar = 50 µm. Dette tallet har blitt endret fra Wang et al. 1. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
| Primere | ||
| Gene navn | Videresende sekvens (5' til 3) | Omvendt rekkefølge (5' til 3) |
| PPARΓ | CTGATGCACTGCCTATGAGC | GGGTCAGCTCTTGTGAATGG |
| CEBPΑ | AAG AGC CGC GAC AAG GC | GTC AGC TCC AGC ACC TTG VS |
| CEBPΒ | CAACCTGGAGACGCAGCACAAG | GCTTGAACAAGTTCCGCAGGGT |
| FABP4 | TGAAATCACCGCAGACGACAGG | GCTTGTCACCATCTCGTTTTCTC |
| Leptin | ATC TGA AGC AAG CCA TCA GC | CCA GTC ACC AGA GGT CAA GC |
| Pref-1 | GACACTCGAAGCTCACCTGG | GGAAGGCTGGGACGGGAAAT |
| Adiponectin | GCG ATA KATTEN ATA AGC GGC TTC T | GCA GGC ATC CCA GGA KATTEN C |
Tabell 1: Tabell med primere brukt for qPCR.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Cocultures med innlegg har vært mye brukt til å studere celle til celle interaksjoner. 2D coculture systemet er en effektiv måte å observere hvordan de to delene crosstalk i vitro, som vi her viste to forskjellige kreft celle-drevet effekter på benmarg adipocytter. Mange labs har brukt denne metoden for å undersøke crosstalk mellom adipocytter og kreft celler6,12,27,39.
Generelt, derfor er en 2D coculture den beste enkel tilnærmingen til celle til celle crosstalk studien. Men når det gjelder å forberede en udifferensierte cellen linje for videre forskning, er det noen unike utfordringer. I protokollen beskrevet her, er helse og funksjonell status benmarg stromal cellen svært avgjørende for adipocytter differensiering. Protokollen kan endres for å erstatte 14F1.1 cellene med primære benmarg mesenchymal stamceller. Videre er pre-inkubering 14F1.1 cellene i adipogenic induksjon mediet i flere dager et kritisk steg. Uten denne pre-inkubering, benmarg stromal cellene mislykkes å differensiere i adipocytter, som har blitt oppdaget i våre og andres studier40. Disse fenomenene også forklare hvorfor noen lignende protokoller kan resultere i forskjellige eller selv overfor effekter og markere betydningen av slik en enkel, repeterbare og detaljert protokoll for crosstalk studiet av kreftceller og benmarg adipocytter.
Selv om 2D coculture kan miste noen kritisk informasjon i forhold til 3D eller ex vivo kulturer, det er fortsatt lett å bli standardisert overvåkes og til slutt manipulert for videre bruk20,21,41. En fremtidig anvendelse av teknikken kan bestemme hvordan en osteoblast endres når det er cocultured kreftceller.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingenting å fortolle.
Acknowledgments
Vi takker Dov Zipori (The Weizmann-Instituttet for vitenskap, Rehovot, Israel) ber for å gi oss murine benmarg stromal cellen linje 14F1.1. Denne studien ble støttet av tilskudd fra kinesiske National Natural Science Foundation (nr. 81771729) og Yongchuan Hospital i Chongqing medisinske universitet (Nos. YJQN201330; YJZQN201527).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DMEM | Invitrogen Inc. | 11965092 | |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen Inc. | 16000–044 | |
| Phosphate Buffered Saline | Invitrogen Inc. | 14190-144 | |
| Insulin | Sigma-Aldrich | 91077C | |
| 3-isobutyl-1-methyl-xanthine | Sigma-Aldrich | I5879 | |
| Dexamethasone | Sigma-Aldrich | D4902 | |
| Oil Red o | Sigma-Aldrich | O0625 | |
| 24-well plate | Corning | CLS3527 | |
| Transwell insert | Millipore | MCHT24H48 | |
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen | 15140-122 | |
| isopropanol | Sigma-Aldrich | I9516 | |
| 0.25% trypsin | Thermo Scientific | 25200056 | |
| hemocytometer | Bio-Rad | 1450016 | |
| Culture incubator | Thermo Scientific | ||
| 50 mL falcon | Corning | CLS430828 | |
| Clean Bench | Thermo Scientific | - | |
| Microscopy | Olympus | - | |
| 200 μL pipet tips | BeyoGold | FTIP620 | |
| 1,000 mL pipet tips | BeyoGold | FTIP628 |
References
- Wang, J., et al. Adipogenic niches for melanoma cell colonization and growth in bone marrow. Laboratory Investigation. 97 (6), 737-745 (2017).
- Trotter, T. N., et al. Adipocyte-Lineage Cells Support Growth and Dissemination of Multiple Myeloma in Bone. The American Journal of Pathology. 186 (11), 3054-3063 (2016).
- Morris, E. V., Edwards, C. M. The role of bone marrow adipocytes in bone metastasis. Journal of Bone Oncology. 5 (3), 121-123 (2016).
- Diedrich, J. D., et al. Bone marrow adipocytes promote the Warburg phenotype in metastatic prostate tumors via HIF-1alpha activation. Oncotarget. 7 (40), 64854-64877 (2016).
- Chkourko Gusky, H., Diedrich, J., MacDougald, O. A., Podgorski, I. Omentum and bone marrow: how adipocyte-rich organs create tumour microenvironments conducive for metastatic progression. Obesity Reviews. 17 (11), 1015-1029 (2016).
- Chen, G. L., et al. High fat diet increases melanoma cell growth in the bone marrow by inducing osteopontin and interleukin 6. Oncotarget. 7 (18), 26653-26669 (2016).
- Balaban, S., et al. Adipocyte lipolysis links obesity to breast cancer growth: adipocyte-derived fatty acids drive breast cancer cell proliferation and migration. Cancer & Metabolism. 5, 1 (2017).
- Huang, C. K., et al. Adipocytes promote malignant growth of breast tumours with monocarboxylate transporter 2 expression via beta-hydroxybutyrate. Nature Communications. 8, 14706 (2017).
- Wang, Y. Y., et al. Mammary adipocytes stimulate breast cancer invasion through metabolic remodeling of tumor cells. JCI Insight. 2 (4), 87489 (2017).
- Wang, C., Gao, C., Meng, K., Qiao, H., Wang, Y. Human adipocytes stimulate invasion of breast cancer MCF-7 cells by secreting IGFBP-2. PLoS One. 10 (3), 0119348 (2015).
- Nieman, K. M., et al. Adipocytes promote ovarian cancer metastasis and provide energy for rapid tumor growth. Nature Medicine. 17 (11), 1498-1503 (2011).
- Herroon, M. K., et al. Bone marrow adipocytes promote tumor growth in bone via FABP4-dependent mechanisms. Oncotarget. 4 (11), 2108-2123 (2013).
- Tabe, Y., et al. Bone Marrow Adipocytes Facilitate Fatty Acid Oxidation Activating AMPK and a Transcriptional Network Supporting Survival of Acute Monocytic Leukemia Cells. Cancer Research. 77 (6), 1453-1464 (2017).
- Wen, Y. A., et al. Adipocytes activate mitochondrial fatty acid oxidation and autophagy to promote tumor growth in colon cancer. Cell Death & Differentiation. 8 (2), 2593 (2017).
- Liu, Z., et al. Mature adipocytes in bone marrow protect myeloma cells against chemotherapy through autophagy activation. Oncotarget. 6 (33), 34329-34341 (2015).
- Ye, H., et al. Leukemic Stem Cells Evade Chemotherapy by Metabolic Adaptation to an Adipose Tissue Niche. Cell Stem Cell. 19 (1), 23-37 (2016).
- Templeton, Z. S., et al. Breast Cancer Cell Colonization of the Human Bone Marrow Adipose Tissue Niche. Neoplasia. 17 (12), 849-861 (2015).
- Daquinag, A. C., Souza, G. R., Kolonin, M. G. Adipose tissue engineering in three-dimensional levitation tissue culture system based on magnetic nanoparticles. Tissue Engineering Part C: Methods. 19 (5), 336-344 (2013).
- Emont, M. P., et al. Using a 3D Culture System to Differentiate Visceral Adipocytes In Vitro. Endocrinology. 156 (12), 4761-4768 (2015).
- Katt, M. E., Placone, A. L., Wong, A. D., Xu, Z. S., Searson, P. C. In Vitro Tumor Models: Advantages, Disadvantages, Variables, and Selecting the Right Platform. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 4, 12 (2016).
- Edmondson, R., Broglie, J. J., Adcock, A. F., Yang, L. Three-dimensional cell culture systems and their applications in drug discovery and cell-based biosensors. ASSAY and Drug Development Technologies. 12 (4), 207-218 (2014).
- Herroon, M. K., Diedrich, J. D., Podgorski, I. New 3D-Culture Approaches to Study Interactions of Bone Marrow Adipocytes with Metastatic Prostate Cancer Cells. Frontiers in Endocrinology (Lausanne). 7, 84 (2016).
- Lee, J. M., et al. A three-dimensional microenvironment alters protein expression and chemosensitivity of epithelial ovarian cancer cells in vitro. Laboratory Investigation. 93 (5), 528-542 (2013).
- Imamura, Y., et al. Comparison of 2D- and 3D-culture models as drug-testing platforms in breast cancer. Oncology Reports. 33 (4), 1837-1843 (2015).
- Birgersdotter, A., Sandberg, R., Ernberg, I. Gene expression perturbation in vitro--a growing case for three-dimensional (3D) culture systems. Seminars in Cancer Biology. 15 (5), 405-412 (2005).
- Wang, W., et al. 3D spheroid culture system on micropatterned substrates for improved differentiation efficiency of multipotent mesenchymal stem cells. Biomaterials. 30 (14), 2705-2715 (2009).
- Dirat, B., et al. Cancer-associated adipocytes exhibit an activated phenotype and contribute to breast cancer invasion. Cancer Research. 71 (7), 2455-2465 (2011).
- Scott, M. A., Nguyen, V. T., Levi, B., James, A. W. Current methods of adipogenic differentiation of mesenchymal stem cells. Stem Cells and Development. 20 (10), 1793-1804 (2011).
- Zipori, D., Toledo, J., von der Mark, K. Phenotypic heterogeneity among stromal cell lines from mouse bone marrow disclosed in their extracellular matrix composition and interactions with normal and leukemic cells. Blood. 66 (2), 447-455 (1985).
- Maridas, D. E., Rendina-Ruedy, E., Le, P. T., Rosen, C. J. Isolation, Culture, and Differentiation of Bone Marrow Stromal Cells and Osteoclast Progenitors from Mice. Journal of Visualized Experiments. (131), e56750 (2018).
- Iguchi, T., Niino, N., Tamai, S., Sakurai, K., Mori, K. Absolute Quantification of Plasma MicroRNA Levels in Cynomolgus Monkeys, Using Quantitative Real-time Reverse Transcription PCR. Journal of Visualized Experiments. (132), e56850 (2018).
- Bozec, A., Hannemann, N. Mechanism of Regulation of Adipocyte Numbers in Adult Organisms Through Differentiation and Apoptosis Homeostasis. Journal of Visualized Experiments. (112), e53822 (2016).
- Shafat, M. S., et al. Leukemic blasts program bone marrow adipocytes to generate a protumoral microenvironment. Blood. 129 (10), 1320-1332 (2017).
- Gazi, E., et al. Direct evidence of lipid translocation between adipocytes and prostate cancer cells with imaging FTIR microspectroscopy. The Journal of Lipid Research. 48 (8), 1846-1856 (2007).
- Brown, M. D., et al. Influence of omega-6 PUFA arachidonic acid and bone marrow adipocytes on metastatic spread from prostate cancer. British Journal of Cancer. 102 (2), 403-413 (2010).
- Hardaway, A. L., Herroon, M. K., Rajagurubandara, E., Podgorski, I. Marrow adipocyte-derived CXCL1 and CXCL2 contribute to osteolysis in metastatic prostate cancer. Clinical & Experimental Metastasis. 32 (4), 353-368 (2015).
- Aebi, M. Spinal metastasis in the elderly. European Spine Journal. 12, Suppl 2 202-213 (2003).
- Wagner, M., Bjerkvig, R., Wiig, H., Dudley, A. C. Loss of adipocyte specification and necrosis augment tumor-associated inflammation. Adipocyte. 2 (3), 176-183 (2013).
- Bochet, L., et al. Cancer-associated adipocytes promotes breast tumor radioresistance. Biochemical and Biophysical Research Communications. 411 (1), 102-106 (2011).
- Hirano, T., et al. Enhancement of adipogenesis induction by conditioned media obtained from cancer cells. Cancer Letters. 268 (2), 286-294 (2008).
- Gordeev, A. A., Chetverina, H. V., Chetverin, A. B. Planar arrangement of eukaryotic cells in merged hydrogels combines the advantages of 3-D and 2-D cultures. Biotechniques. 52 (5), 325-331 (2012).
