Summary
Bir kısmi veya tam tıkanma Şiddetli karın ağrısı, bulantı, kusma ve dışkı geçiş engelleme neden olabilir bağırsak bağırsak engelleri vardır. Bağırsak kısmi obsructions farelerde oluşturmak için bu yordamı patolojik hücre büyümesi ve ölüm bağırsak temel mekanizmaları eğitim güvenilirdir.
Abstract
Engel veya Peristaltik hareket engellemek, bağırsak engelleri, karın yapışıklıklar ve tümör büyümeleri de dahil olmak üzere en gastrointestinal (GI) hastalıklar tarafından neden olabilir. Ancak, mekanizmaları remodeling cep dahil ve neden, bağırsak engelleri kötü anlaşılır. Bağırsak engelleri çeşitli hayvan modeller geliştirilmiştir, ama fare modeli en maliyet/saat etkili. Fare modeli doğru şekilde gerçekleştirilir, yüksek mortalite oranına sahip bir bağırsak kısmi tıkanıklık (PO) cerrahi implantasyon kullanır. Buna ek olarak, uygun bir abluka kullanılmaz veya düzgün bir şekilde yerleştirilmiş hipertrofisi geliştirmek fareler PO cerrahi alma başarısız. Burada, biz çok düşük mortalite ile güvenilir ve tekrarlanabilir bağırsak engelleri üreten PO ameliyat için detaylı bir protokol tanımlamak. Bu iletişim kuralı küçük bağırsakta sindirim hareketi kısmen blokları ileum çevreleyen bir ameliyatla yerleştirilen silikon yüzük kullanır. Kısmi tıkanıklık sindirim hareketi durdurmak nedeniyle büyümüş haline bağırsak yapar. Dilatasyon bağırsak düz kas hipertrofisi aşamalı olarak ölüm nedenleri kadar 2 hafta içinde geliştirir yüzüğü ağız tarafında neden olmaktadır. Cerrahi PO fare modeli Hipertrofik bağırsak dokusu patolojik değişiklikler bağırsak hücreleri düz kas hücreleri (SMC), interstisyel hücreleri ve Cajal (ICC), PDGFRα+, dahil olmak üzere, eğitim için yararlı bir vivo içinde modeli sunar ve nöronal hücreleri bağırsak tıkanıklığı geliştirilmesi sırasında.
Introduction
Bir kısmi veya tam tıkanma sindirilmiş gıda, sıvı ve gaz bağırsak1ile hareket etmelerini engeller küçük veya büyük bağırsak bağırsak engelleri vardır. Tıkanıklık nedeniyle, kalınlaşmış olmak için bağırsak duvarlar2Lümen daralması tıkanma neden olmaktadır. Bağırsak tıkanıklığı karın yapışma doku oluşmasına neden olur karın veya pelvik ameliyatlar sonucunda veya iltihabi bağırsak hastalıkları (Crohn hastalığı), divertikülit, Fıtıklar, volvulusu, yapışıklıkları gibi GI bozuklukları ortaya çıkabilir, İnvajinasyon, kabızlık, dışkı sıkışması, Psödo obstrüksiyonu, kanser ve tümör3,4,5. Bu durumda bağırsak engelleri genellikle barsak6tunica muscularis hipertrofisi yol.
Lümen PO bağırsak şişkinlik neden olmaktadır ve düz kas tabakası kalınlığı yanıt olarak fonksiyonel peristaltizm7,8,9,10devam etmek gerek tıkanıklığı çevresinde artırır, 11,12,13. Bağırsak po hayvan modelleri fareler7, fareler10, eskiden şiling şimdi pigs11, köpekler12ve sürekli geliştirmek içinde benzer hipertrofisi kediler13 düz kas hipertrofisi incelemek için geliştirilmiştir bağırsak kas tabakaları.
Bağırsak PO bir fare modeli oluşturmak ve bağırsak engelleri vivo içindeçalışma için en uygun maliyetli yöntemidir. İnce bağırsak engelleri farelerde ileum çevreleyen cerrahi olarak yerleştirilmiş bir silikon ring kullanarak gerçekleştirilir. PO fareler hücreleri (Hiperplazi) erken bir artış ve bir artış sonra PO cerrahi8,15kas tabakası kalınlığı (hipertrofisi) gösterdi. SMC Hipertrofik koşulları14yanıt olarak düz kas katmanlar içinde büyüyen birincil plastik hücreleri ama ICC gibi diğer hücreleri ve SMC ile yakından ilişkili olan, aynı zamanda yeniden doldurulur PDGFRα+ hücreleri vardır. Biz daha önce PO fareler ince bağırsak hipertrofisi geliştirmek bildirdin hangi SMC son derece proliferatif7,15,16PDGFRα+ hücrelere dediferansiye. Diğer taraftan, ICC dejenere ve düz kas Hipertrofik katmanlar içinde bağırsak obsruction7geliştirilmesi sırasında kaybetti. Başka bir önemli yararı PO modelinin enterik sinir sistemi ve sinir motor desen yayılıyor değişiklikleri ikna etmek için onun kapasitesidir. Büyük yayılıyor fare ince bağırsak Nörojenik motor desen Nörojenik ve does değil istemek ICC ya da elektrik yavaş dalgalar17geçirme motor karmaşık (MMC), olduğunu. PO modeli MMC ve enterik sinir tarafından kısmi tıkanıklık nasıl remodeled içine açık anlayışlar sağlayabilir.
Burada, bir fare protokol silikon ring kullanarak bağırsak PO ameliyat için teklif ediyorum. PO cerrahi güvenilir bir şekilde alma fareler bağırsağın tunica muscularis hipertrofisi üretmek. Hipertrofik kas içinde SMC, ICC, PDGFRα+ve nöronal hücre önemli ölçüde remodeled.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Aşağıdaki iletişim kuralı kurumsal hayvan bakım ve kullanmak Komitesi (IACUC) University of Nevada-Reno (UNR) hayvan kaynakları tarafından onaylandı ve araştırma hayvanlar kullanımı ile ilgili tüm kurumsal etik kuralları ile uyumludur.
1. hayvanlar.
- Olgun (4-6 hafta eski) C57BL/6 fareler arasında 20-30 g. ev laboratuvar fareler UNR hayvan kaynakları merkezi bir hayvan tesisi kolonisi Tartım elde edilir.
2. kısmi tıkanıklık cerrahi
Not: Ameliyatları cerrahi işlemler için adanmış bir odada gerçekleştirilir. Tüm cerrahi aletler ameliyat öncesi autoclaved. Steril Cerrahi önlük ve eldiven cerrahi odasında tüm personeli tarafından her zaman giyilmelidir.
- Cerrahi fare için hazırlık
- Oksijen kaynağı sağlamak için anestezik teslim sistemi kontrol edin ve isoflurane yordamı için yeterlidir. Tedarik oksijen açın. Gaz akış ölçer üzerinde açmak ve indüksiyon odasında hayvan 500-1000 mL/dk. yer ayarlamak ve üst mühür.
- %5 için isoflurane Buharlaştırıcı açmak ve yaslanmış şeklini alıncaya kadar hayvan izlemek. Anestezik iletim sistemi için burun konisi geçin.
- Herhangi bir kalıntı gaz oksijen ile indüksiyon TMMOB floş, sonra indüksiyon odası hattan burun konisi satır tutarken açık dönün.
- Hayvan odasından kaldırın ve dikkatle oftalmik merhem hayvan gözler yerleştirin.
- Gaz akışı devam ederken bir Önceden ısıtılmış sıcak yastık üzerinde burun konisi yerleştirin.
- 100-200 mL/dk, % 2-3 isoflurane ile oksijen akışını değiştirmek. Hayvan hareket başlarsa, gentlyrestrain üzerinde burun konisi kadar hayvanla tam olarak tekrar anestezi.
- Solunum ve stimülasyon işlemi sırasında yanıt izlemek ve isoflurane (% 2-5) yüzdesini gerektiği gibi ayarlayın. Cerrahi yapılmadan önce hayvan anesthetization düzey ayak çimdik refleks eksikliği tarafından izlenir.
- Ağrı kesici (buprenorfin, vücut ağırlığının 1 µg/g) intraperitoneally kesi sitesinden ayrıldığınızda enjekte et.
- Saç Temizleme losyonu temiz pamuk bez kullanarak karnına uygulayın. Gazlı bez ve pamuk temizleme bezi kullanarak saç kaldırmak belgili tanımlık losyon oturmak için fare, 3-5 dk sonra izin. Tüm saç fare karından kaldırılıncaya kadar bu adımı yineleyin.
- Cilt gazlı bez ve pamuk temizleme bezi kullanarak % 70 etanol ile temizleyin. Karın temizlemek için swabsticks veya povidone-iyot çözümü uygulayın.
- Kısmi tıkanıklık cerrahi
- Cerrahi alan orta açma 2.5 x 2, 5 cm ile 25 x 50 cm steril kağıt kullanarak cerrahi sitesi asmak. Örtüsü hayvan için açılış ve cilt sınırlarını steril şeritler yerleştirerek güvenli.
- Bir ~3.0 cm karın kesi boyuna No. 15 bıçak neşter sadece cilt basamağında sağlanması ve şu anda musculoperitoneal katman içine kesme kaçınarak kullanarak olun.
- Forseps ve Cerrahi makas kullanarak, dikkatle cilt musculoperitoneal katmanından herhangi bir kesi musculoperitoneal katmana neden olmadan ayırın. Katmanları yeterince (yaklaşık 1 cm x 4 cm) ayrılmıştır sonra linea tanımlamak alba musculoperitoneal katman ve kesme ~ 2 cm boyunca linea alba mikro-forseps ve makas kullanarak mayi boşluğu ortaya çıkarmak için.
- Dikkatle bulun ve çekum tanımlamak. Yavaş ve nazikçe çekum mikro-forseps, proksimal kolon ve steril örtü üzerine dışında çekum ile ileum getirerek ile mayi boşluğu kaldırın. Hemen bağırsak dokusu % 0,9 steril serum fizyolojik batırılmış gazlı bez ile nemlendirin ve karın boşluğu dışında oldukları sırada her zaman nemlendirilmiş maruz doku tutun.
- Bulmanıza ve tanımlamanıza ileum ve proksimal kolon arasında bıçaklanmasından. Bir kesik (~ 1 cm) içinde bıçaklanmasından için ve hemen altında ileum paralel yapmak ve herhangi bir damarlara kesme önlemek.
- Bir autoclaved silikon yüzüğü (uzunluk, 4 mm dış çapı, 3.5 mm iç çapı 6 mm) al. Tüp açın ve mikro-Forseps ile halka açmak için boyuna kesilmiş.
- Açık halka kesi aracılığıyla bir ucunu bıçaklanmasından dokusunda bağlayın. Yüzüğü yüzük tarafından çevrili ileum ile temas başka bir son veriyorum tarafından tamamlanan yüzük şekle geri.
- Silikon halka tamamen ileum çevreleyen emin olun, dikiş yüzükle kapatın ve dikkatle bağırsak mayi boşluğunda yer.
- Cerrahi kapatma
- Basit bir gerçekleştirmek sürekli dikiş boyunca linea musculoperitoneal katmandaki alba musculoperitoneal kapatmak için yara ile absorbe bir dikiş. Dikişi tamamlandıktan sonra kanama % 0,9 steril serum fizyolojik batırılmış gazlı bez ile temizleyin.
- Tamamen ayrı naylon sütür ile yara kapatmak için basit sürekli dikiş cilt üzerinde gerçekleştirin.
- Her iki dikiş tamamladıktan sonra yeni swabstick veya povidone-iyot yarayla temiz.
- İntraperitoneally antibiyotik (gentamisin, 20-30 g vücut ağırlığı üzerinde temel fare başına 150 μL) enjekte et.
- Yordamı, tamamlandıktan açtıktan sonra isoflurane Buharlaştırıcı kapalı ve hayvan o başlamak kadar bilinç kazanıyor tek akan oksijen nefes sağlar.
- Hayvan uyanık olduğunda, hayvan tamamen iyileşti kadar termal destekli bir ayrı kurtarma alana yerleştirin.
3. sonrası operasyon gözlem.
- Cerrahi tamamlanmasından sonra hayvanlar için bir kurtarma odada bir kuluçka nerede sıcaklık ve nem düzenlenmiştir hareket ettirin. Hayvanlar da kuluçka makinesine iken ikinci saat için ilk saat sonra her 30 dakikada hayvanlar postoperatively her 15dk izlemek.
- Reçete gözlem tam olduğu gibi hayvanlar kendi bireysel kafese taşımak ve klinik belirtiler ağrı18ve cerrahi yara düzgün komplikasyonlar () herhangi bir belirti iyileşme sağlamak için günlük izlemek yırtılması) mevcut.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Kısmi obstrüksiyonu (PO) cerrahi olarak silikon ringin etrafında ileum ileocecal sfinkter yakın yerleştirerek bir ay önce fareler akımıdır. Bir kısmi tıkanıklık ileum içinde oluşturulan bu yüzüğü. (Böylece aynı zamanda bir yüzük olmadan açık yaş/cinsiyet gerçekleştirilmiştir) sahte operasyonlar fareler eşleşen ve bu farelerde herhangi bir belirti PO farelerde bulunan belli etmedi. Fare hızlı PO cerrahiden birkaç saat içinde yeniden elde etmek. İlk hafta içinde hiçbir belirgin davranış değişiklikleri veya zayıflık gösterdiler ama ilk hafta sonra onlar giderek PO belirtileri göstermeye başladı: şişmiş bir karın ve daha az ve daha küçük dışkı briketler üretimi. PO fareler 8 ve 13 gün sonrası PO cerrahi SO kontrol fare ile birlikte, kurban edildi. İnce bağırsak kısmen dolu ve 8 gün sonrası PO cerrahi şişmiş ve tamamen dolu ve 13 gün sonrası PO cerrahi, yani kontrol fareler (şekil 1A) göre şişmiş. Kolon dışkı Pelet oluşumu 8 ve 13 gün sonrası PO cerrahi fareler SO kontrol fare ile karşılaştırıldığında (şekil 1B) düşürüldü. Yüzüğü sadece ters yönde ileal doku disseke ve düz kas Hematoksilen ve Eozin (H & E) Boyama tarafından analiz edildi. Düz kas katmanı 8 gün sonrası PO cerrahi Hipertrofik ve çok daha fazla 13 gün sonrası PO cerrahi (Şekil 2) Hipertrofik. Biz de SMC, ICC, PDGFRα+ve nöronal hücrelerin İmmünokimya aracılığıyla PO farelerde tunica muscularis içinde değişiklikler gözlendi. Her hücre hücre tipi belirli işaretleri ile etiketli oldu: MYH11 (SMC), KIT (ICC), PDGFRA (PDGFRα+ hücreleri) ve PGP9.5 (nöronal hücre). SMC doku üç katman içinde bulunur: boyuna kas (LM), dairesel kas (CM) ve ileum içinde muscularis mucosae (MM). SMC kademeli 8 ve 13 gün sonrası PO cerrahi (şekil 3), tüm üç kat hızlı hızlarında büyüyen. ICCs gelince, onların altgrupları derin kas pleksus (DMP), myenteric bölgesi (MY) ve subserosal bölge (SS) yer alır. Ancak, ICC DMP, ICC-MY ve ICC-SS içi/intermuscular katmanları (şekil 3) içinde dönüşmesi. ICC altgrupları benzer, PDGFRα+ hücreleri (PαC) altgrupları DMP, MY ve SS bulunur. PO farelerde PαC DMP, PαC-MY ve PαC-SS dinamik olarak PO fareler intermuscular katmanlar içinde remodeled: onlar 8 gün sonrası PO cerrahi büyüyen edildi ve dejenere 13 gün sonrası PO cerrahi (şekil 3). Son olarak, myenteric pleksus (MP), submucosal pleksus (SP), subserosal nöronlar (SS) ve enterik motor nöronlar (EMN) önemli ölçüde PO fareler 8 ve 13 gün sonrası PO cerrahi (şekil 3), Inter/kas içi bölgelerinde kaybedildi.
Şekil 1. Bağırsak kısmi tıkanıklık ameliyatla bir fare modelinde indüklenen. PO PO cerrahi ile indüklenen. Bir ay yaşlı fareler anestezi, onların karın bir kesi tarafından açıldı, ileum çevreleyen bir silikon yüzük takılmış oldu ve açılış dikiş tarafından kapatıldı. Ameliyat edildi fareler 8 veya 13 gün boyunca kurtarmak için izin verildi. Yaş ve cinsiyet dışında bir yüzük yok yerleşimini fareler PO fareler aynı şekilde ameliyat bu yüzden eşleştirdi. (A) brüt GI yolu PO uygulanan farelerde görüntülerini veya SO ameliyat. Görüntülerdir farelerin 8 ve 13 gün ameliyat sonrası (B) GI yolu üzerinden A. ince bağırsak akıntıya karşı ringin farelerde disseke 8 ve 13 gün sonrası PO cerrahi şişmiş ve kolon dışkı parçaları her iki saat 8'de de daha küçük ve 13 gün sonrası PO cerrahi olarak 13 gün sonrası-SO cerrahi fareler nedeniyle kısmen obstrüktif silikon yüzük ile karşılaştırıldığında. Ölçek barlar vardır 0.5 cm. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 2. Düz kas katmanı cerrahi fare modelinde değişti. Temsilcisi H & E kadar bağırsak Po, ileal kesitleri, boyama ve hiçbir işlemi (NO) fareler. Düz kas (SM) ve Mukoza (Mu) katmanları 8 ve 13 gün sonrası PO cerrahi, PO farelerde bu SO ve hiçbir fareler daha kalın. Ölçek çubukları çoğu 50 µm. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3. Dinamik hücresel düz kas hipertrofisi remodeling indüklenen tarafından bağırsak kısmi tıkanıklık. Hipertrofik ileal kesitleri, Po, görüntüleri çok tarama temsilcisi confocal lazer ve hiçbir fareler. Immunohistochemically antikorlar ile (kırmızı), MYH11 (SMC), boyama KIT (ICC), PDGFRA (PDGFRα+ hücreleri) veya PGP9.5 (NC; nöronal hücre), ortak lekeli DAPI (mavi) ile. SMC mukoza muscularis (MM), dairesel kas (CM), ve boyuna kas (LM) katmanları, hem de PDGFRα+ hücrelerde derin kas pleksus (DMP), myenteric bölgesi (MY) ve subserosal bölge (SS) Büyüyen Hipertrofik ileum 8 ve 13 gün sonrası-PO DMP, MY ve SS, myenteric pleksus (MP), submucosal pleksus (SP), subserosal NC (SS) ve enterik motor nöronlar (EMN) ICC ise ameliyat dejenere. Ölçek çubukları çoğu 50 µm. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 4. Sonuçlar çok büyük, çok küçük veya kolon üzerinde yanlış yerleştirilen silikon halkaları. (A) yüzük tıkanıklığı neden için çok büyükse hiçbir düz kas hipertrofisi ileum içinde gelişir. İleum hiçbir tıkanıklık için küçük yapılmış yüzük. (B) yüzük çok küçük ise Intestinal iskemi ileum içinde gelişir. Yüzüğü dokusuna zarar ve hipertrofisi geliştirir önce erken ölüme yol ileum, neredeyse tam bir tıkanıklık yaptı. (C) düz kas hipertrofisi nedeniyle yanlış yerleştirilmiş bir yüzük Bağırsaktaki geliştirdi. İki nokta üst üste halkada bıçaklanmasından damarlara zarar görmüş ve masif kanama nedeniyle üst üste lumenal içeriği (dışkı), tarafından taşındı. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Biz sürekli olarak ve tekrarlanarak bağırsak PO cerrahi alan fareler insan bağırsak tıkanıklığı hareketini taklit eden nazik bağırsak düz kas hipertrofisi geliştirmek gösterdi. Bağırsak tıkanıklığı ameliyatları fareler7, fareler10, eskiden şiling şimdi pigs11, köpek kedi ve12 13de dahil olmak üzere farklı hayvanlar için geliştirilmiştir. Fare modeli bağırsak tıkanıklığının zaman, maliyet, boyut ve diğer daha büyük hayvan modelleri üzerinde fenotipik avantajları vardır. Fare ya da sıçan hipertrofisi gelişimi 2-4 hafta eskiden şiling şimdi pigs, köpekler ve kediler11,12,13karşılaştırıldığında sadece 10-14 gün10, alır. Satın alma ve fare olduğunu da diğer modellere kıyasla muazzam bir mali avantajı sürdürmek için maliyet. Ayrıca, fareler küçük ve PO ameliyat için kolay değildir. En önemlisi, diğer daha büyük hayvanlar daha az kapsamlı büyüme geliştirirken kademeli ve kapsamlı PO cerrahi alan fareler bağırsağın hipertrofisi geliştirmek.
Bağırsak PO ameliyat yoluyla güvenilir hipertrofisi üretmeye çalışırken dikkat edilmesi gereken birkaç önemli faktör vardır. Birkaç araştırma grupları yüzük irili ufaklı kullanılan ve kısmi engelleri7,9,10,11,12oluşturmak için bağırsak boyunca çeşitli yerlerinde bir yüzük yerleştirilir, 13,14. Daha büyük bir halka az veya hiç tıkanıklık ileum içinde oluşturulur ancak, en uygun boyutta bir silikon yüzük fareler için nerede hipertrofisi yalnızca kısmen geliştirilmiş ya da hiç, (şekil 4A) kullanılmalıdır. Bir yüzük çok küçük, intestinal iskemi indüklenen ve/veya kan zehirlenmesi neden mukoza zarar ileum tam tıkanma oluşturulduğu zaman, bunun tersi olarak, bir hafta (şekil 4B) içinde erken ölüm önde gelen. Bir ay önce fareler (Tablo reçetesi) üzerinde bir silikon yüzük belirli bir büyüklükte (uzunluk, 4 mm dış çapı, 3.5 mm iç çapı 6 mm) kullanılır. Yüzüklerin Efendisi farklı boyutlarda test ve farklı boyutlarda fareler için en uygun tıkanıklık ileum içinde oluşturmak için kullanılır. Başka bir önemli faktör bağırsak halkada konumudur. İleum ileocecal Vana, yakın sağlam kısmi engelleri üretmek için yüzük yerleştirmek için en iyi yerdir. Diğer bölgeler değişir veya farklı ileum ileocecal Vana, uzak bölgelerinde gibi üzerlerine yerleştirilen hipertrofisi7ikna etmek için benzer bir yüzük vardı. Ancak, son derece Periton sıvısı tarafından yağlanır bağırsak serozal yüzeyi nedeniyle, fekal madde itme bağırsak contractile kuvvet nedeniyle bağırsak bu parçaların üzerinde kolayca yerleştirilen bir yüzük taşır. Yüzüğü bağırsak uzunluğu itilir olarak bu kanama neden bağırsak, myenteric bölgesine innervated Mezenterik arterler sunmaktadır. Bir yüzük ileum ileocecal Vana yanındaki sonunda eklediğinizde, fiziksel hareket edebiliyordu çekum hantal doğası gereği daha fazla. Çekum kolayca yer ve ileum ve proksimal kolon çekum bağlanır gibi ileocecal Vana bölge bulmak için ameliyat karnından dışarı çekilmiş. İleum ve iki nokta üst üste çekum bağlı oldukça benzer ve bir yüzük yanlışlıkla proksimal kolon ileum yerine yerleştirilebilir. Ne zaman bir yüzük olarak değişir, aynı zamanda görülen proksimal kolon üzerinde yanlış yüzüğü aşağı itilmiş ve Mezenterik arterler, geniş oturması (şekil 4 c) neden zarar görmüş. Bu saklanmalıdır önlemek için ileum her zaman düzgün yer alan ve yüzük yerine koymadan önce tespit. İki nokta üst üste çekum kese bir tarafı çalışırken ileum çekum ortasına çalışır.
Bu PO cerrahi Protokolü fareler için önemli bir ameliyat olarak kabul edilir. Tüm cerrahi aletler ve malzemeler kullanmadan önce sterilize ve cerrahi enfeksiyon ve inflamasyon farelerde yol açabilir kirlenme en aza indirmek için bir özel cerrahi Oda temiz ortamda gerçekleştirilmesi gereken. Buna ek olarak, ağrı kesici fareler için ameliyattan sonra sağlanmalıdır. 7-8 h22kadar etkili olduğu buprenorfin, yavaş bir sürümünü kullanmayı seçtiniz. Ayrıca, ameliyat sonrası, fareler zorluk çiğneme ve yutma katı yiyecek var. Kadar 5 gün için ameliyat sonrası, fareler olmalı yumuşatılmış gıda (gıda yumuşatmak için eklenen su biraz ile katı diyet) ile sağlanan ve 5 gün sonra normal katı diyet açık için.
Bizim bağırsak PO cerrahi in vivo hipertrofisi modeli için hangi SMC, ICC, bağırsak tıkanıklığı sağlar ve PDGFRα+ hücreleri anormal derecede remodeled. Bu PO modeli de ideal enterik sinir hücreleri PO tarafından değiştirilir ve ana motor faaliyetler içinde küçük ve büyük bağırsak23etkilenen nasıl anlamak için uygundur. Bu hücreler dinamik olarak patolojik durumlarda yanı sıra kültürlü koşullar15,16altında yenilenmiş. Bu hücreler SO farelerde işlemi (Şekil 2 ve şekil 3) olmadan normal farelere biraz farklı davrandığını gözlemledim. Çoğu bağırsak tıkanıklığı insanlarda karın yapışıklıklar düz kas hipertrofisi3,4,5,21' e lider ameliyat sonrası geliştirilen tarafından oluşur. SO ameliyattan sonra da bulduk SMC, ICC ve PDGFRα+ hücreleri bağırsakta, biraz Hipertrofik yok (şekil 3) karşılaştırıldığında, o ameliyat düşündüren bağırsak düz kas hipertrofisi neden olabilir. Bu durumda ise, yani ameliyatı PO ameliyat için negatif üzerinde tam bir kontrol değil. Hayır yanı sıra SO PO bağırsak bir karşılaştırma olarak kullanılmalıdır.
Özet olarak, bir maliyet/saat etkili, güvenilir ve tekrarlanabilir PO cerrahi Protokolü sağlam bağırsak engel oluşturur farelerde bulduk. Tıkanıklık geliştirilmesi sırasında SMC, ICC, PDGFRα+yanı sıra nöronal hücre dinamik olarak çeşitli doku katmanları ve yerel ayarlar içinde yenilenmiş. Nasıl fenotipik değişiklikler ile ilgili bilgilerimizi Teklifler yeni görüşler ortaya bu vivo içinde tıkanıklığı model bağırsak hücresel düzeyde tıkalı.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa gerek yok.
Acknowledgments
Yazarlar Benjamin J Weigler, D.V.M., doktora teşekkür etmek istiyorum ve Walt Mandeville, D.V.M. (hayvan kaynakları ve kampüs katılıyor veteriner, University of Nevada, Reno) mükemmel hayvan hizmet için onların avukatı yanı sıra fareler sağlanan cerrahi işlemler.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Surgical drape | Medical and veterinary supplies | SMS40 | 40”X100 yards |
| Underpad, econ, pro plus | Medical and veterinary supplies | MSC281224 | 17x24” |
| Iris scissors | Braintree scientific, Inc | SC-i-130 | |
| Iris scissors | Vantage | V95-304 | |
| Dumont electronic & jeweler tweezers | Dumont | 98-180-3 | |
| Braided absorbable suture | Covidien polysorb | SL-5687G | 5-0, polyglactin |
| Nylon non-absorbable mono filament | AD surgical | S-N618R13 | 6-0, nylon |
| Surgical blade | Dynarex | No.15 | |
| Needle holder | Jacobson microvascular | 36-1342TC | 8.5 inch |
| Scalpel handle | Flinn scientific | AB1049 | |
| Microsurgical scissor | WPI | 503305 | |
| Petrolatum ophthalmic ointment | Puralube VET | 3.5 g | |
| Fluriso (isoflurane) | Vetone | V1 502017 | 250 ml |
| Steri-strip reinforced skin closure | 3M | R1547 | |
| Surgical gloves | Medline | MSG2270 | |
| Ear loop face mask | The safety zone | RS700 | |
| Avant gauze non-woven sponges | Caring | PRM25444 | |
| Surgical cup | Admiral craft OYC-2 | 725-A42 | 2.5 oz |
| Swabstick | ChloraPrep | 260103 | 2% w/v Chlorhexidine Gluconate (CHG) and 70% v/v Isopropyl Alcohol (IPA) |
| Cotton tipped applicator | Puritan | 806-WC | |
| Buprenorphine | Zoo pharm | BZ8069317 | 1 mg/ml |
| Gentamycin sulfate | Vetone | G-6336-04 | 100 mg/ml |
| Fast acting gel cream remover | Veet | 8111002 | |
| Syringe | AHS | AH01T2516 | 1 ml with needle |
| Silicon ring | VWR | 60985-720 | 6 mm in length, 4 mm exterior diameter, 3.5 mm interior diameter |
| C57BL/6 mice | The Jackson Laboratory | 4-6 weeks old |
References
- Millat, B., Guillon, F. Physiopathology and principles of intensive care in intestinal obstructions. Rev Prat. 43, 667-672 (1993).
- Tonelli, P. New developments in Crohn's disease: solution of doctrinal mysteries and reinstatement as a surgically treatable disease. 1. The process is not a form of enteritis but lymphedema contaminated by intestinal contents. Chir Ital. 52, 109-121 (2000).
- Limsrivilai, J. Meta-analytic Bayesian model for differentiating intestinal tuberculosis from Crohn's disease. Am J Gastroenterol. 112, 415-427 (2017).
- Dvorak, D., Adamova, Z., Bar, T., Slovacek, R. Internal hernia as a cause of small bowel obstruction. Rozhl Chir. 96, 34-36 (2017).
- Massani, M., Capovilla, G., Ruffolo, C., Bassi, N. Gastrointestinal stromal tumour (GIST) presenting as a strangulated inguinal hernia with small bowel obstruction. BMJ Case Rep. , (2007).
- Chen, J., Chen, H., Sanders, M., Perrino, B. A. Regulation of SRF/CArG-dependent gene transcription during chronic partial obstruction of murine small intestine. Neurogastroenterol Motil. 20, 829-842 (2008).
- Chang, I. Y., et al. Loss of interstitial cells of Cajal and development of electrical dysfunction in murine small bowel obstruction. J Physiol. 536 (Pt 2), 555-568 (2001).
- Liu, D. H., et al. Voltage dependent potassium channel remodeling in murine intestinal smooth muscle hypertrophy induced by partial obstruction. PLoS One. 9 (2), e86109 (2014).
- Guo, X., et al. Down-regulation of hydrogen sulfide biosynthesis accompanies murine interstitial cells of Cajal dysfunction in partial ileal obstruction. PLoS One. 7, e48249 (2012).
- Yang, J., Zhao, J., Chen, P., Nakaguchi, T., Grundy, D., Gregersen, H. Interdependency between mechanical parameters and afferent nerve discharge in hypertrophic intestine of rats. Am J Physiol-Gastr L. 310, G376-G386 (2016).
- Zhao, J., Liao, D., Yang, J., Gregersen, H. Biomechanical remodeling of obstructed guinea pig jejunum. J Biomech. 43, 1322-1329 (2010).
- Bowen, E. J., et al. Duodenal Brunner's glade adenoma causing chronic small intestinal obstruction in a dog. J Small Anim Pract. 53, 136-139 (2012).
- Bettini, G., et al. Hypertrophy of intestinal smooth muscle in cats. Res Vet Sci. 75, 43-53 (2003).
- Macdonald, J. A. Smooth muscle phenotypic plasticity in mechanical obstruction of the small intestine. J Neurogastroenterol Motil. 20, 737-740 (2008).
- Ha, S. E., et al. Transcriptome analysis of PDGFRα+ Cells identifies T-types Ca2+ channel CACNA1G as a new pathological marker for PDGFRα+ cell hyperplasia. PLoS One. 12, e0182265 (2017).
- Park, C., et al. Serum response factor is essential for prenatal gastrointestinal smooth muscle development and maintenance of differentiated phenotype. J Neurogastroenterol Motil. 21, 589-602 (2015).
- Spencer, N. J., Sanders, K. M., Smith, T. K. Migrating motor complexes do not require electrical slow waves in the mouse small intestine. J Physiol. 553, 881-893 (2003).
- Langford, D. J., et al. Coding of facial expressions of pain in the laboratory mouse. Nat Methods. 7, 447-449 (2010).
- Terez, S. D., Notari, L., Sun, R., Zhao, A. Mechanisms of smooth muscle responses to inflammation. Neurogastroenterol Motil. 24, 802-811 (2012).
- Chen, W., et al. Smooth muscle hyperplasia/hypertrophy is the most prominent histological change in Crohn's fibrostenosing bowel strictures: A semiquantitative analysis by using a novel histological grading scheme. J Crohns Colitis. 11, 92-104 (2017).
- Huizinga, J. D., Chen, J. H. Interstitial Cells of Cajal: Update on Basic and Clinical Science. Curr Gastroenterol Rep. 16, 363 (2014).
- Jirkof, P., Touvieille, A., Cinelli, P., Arras, M. Buprenorphine for pain relief in mice: repeated injections vs sustained-release depot formulation. Lab Animal. 49, 177-187 (2015).
- Spencer, N. J., Dinning, P. J., Brookes, S. J., Costa, M. Insights into the mechanisms underlying colonic motor patterns. J Physiol. 594, 4099-4116 (2016).
