Summary
Darm Hindernisse sind eine teilweise oder vollständige Blockierung des Darms, die starke Bauchschmerzen, Übelkeit, Erbrechen, und verhindert den Durchgang von Stuhl verursachen können. Dieses Verfahren zum Erstellen von Darm teilweise Obsructions bei Mäusen ist zuverlässig bei der Untersuchung der Mechanismen, die krankhaften Zellwachstum und Tod im Darm.
Abstract
Darm Hindernisse, die behindern oder blockieren peristaltische Bewegung, können durch abdominale Adhäsionen und meist gastrointestinale (GI) Krankheiten einschließlich tumoröse Wucherungen entstehen. Jedoch verursacht durch Darm Hindernisse sind kaum erforscht und die zelluläre Mechanismen Umgestaltung beteiligt. Verschiedenen Tiermodellen der Darm Hindernisse wurden entwickelt, aber die Maus-Modell ist das beste Kosten/Zeit wirksam. Die Maus-Modell nutzt die chirurgische Implantation einer teilweisen Darmverschluss (PO), die eine hohe Sterblichkeitsrate hat, wenn es nicht korrekt durchgeführt wird. Darüber hinaus nicht Mäuse erhalten PO Chirurgie Hypertrophie zu entwickeln, wenn eine entsprechende Blockade ist nicht oder nicht richtig platziert. Hier beschreiben wir ein detailliertes Protokoll auf PO-Operation, die zuverlässige und reproduzierbare Darm Hindernisse mit einer sehr niedrigen Sterblichkeit produziert. Dieses Protokoll nutzt einen chirurgisch platzierte Silikon-Ring, der Ileum umgibt die Verdauungs-Bewegung in den Dünndarm teilweise blockiert. Die teilweise Blockade macht den Darm aufgrund der Halt des Verdauungssystems Bewegung erweitert werden. Die Ausdehnung des Darms induziert Hypertrophie der glatten Muskulatur auf der oralen Seite des Ringes, die nach und nach über 2 Wochen bis es Todesursachen entwickelt. Die chirurgische PO-Maus-Modell bietet eine in Vivo Modell der hypertrophen Darmgewebe nützlich für die Untersuchung von krankhafter Veränderungen der Darmzellen einschließlich der glatten Muskelzellen (SMC), interstitiellen Zellen von Cajal (ICC), PDGFRα+, und neuronale Zellen während der Entwicklung von Darmverschluss.
Introduction
Darm Hindernisse sind eine teilweise oder vollständige Blockierung im kleinen oder großen Darm, der verdaute Nahrung, Flüssigkeit und Gas bewegt durch den Darm-1verhindert. Aufgrund der Obstruktion induziert die Blockade die Darmwände, verdickt werden, Verengung der Lumen-2. Darmverschluss kann auftreten durch Abdominal- oder Becken-Operationen, die Abdominal-Adhäsion Gewebeanordnung verursachen oder von GI Störungen wie entzündlichen Darmerkrankungen (Morbus Crohn), Divertikulitis, Hernien, Volvulus, Striktur, Invagination, Verstopfung, fäkale Impaktion, Pseudoobstruktion, Krebs und Tumore3,4,5. Intestinale Blockaden in diesen Fällen führen oft zu der Hypertrophie der Tunica Muscularis des Darms6.
PO des lumens induziert Darm Ausdehnung und glatten Muskulatur Schichtdicke um das Hindernis als Reaktion auf die Notwendigkeit, funktionellen Peristaltik7,8,9,10weiter erhöht, 11,12,13. Tiermodelle der Darm PO wurden entwickelt, um studieren glatten Muskel-Hypertrophie in Mäusen7Ratten10, Meerschweinchen11, Hunde12und Katzen13 , die konsequent entwickeln ähnliche Hypertrophie innerhalb der intestinale Muskelschichten.
Ein Maus-Modell der Darm PO ist der kostengünstigste Weg zu generieren und Darm Hindernisse in Vivozu untersuchen. Mithilfe von einen Silikonring chirurgisch gelegt Umgebung Ileum sind Dünndarm Hindernisse bei Mäusen durchgeführt. Die PO-Mäuse zeigten frühe Zunahme der Anzahl der Zellen (Hyperplasie) und eine Erhöhung im Muskel Schichtdicke (Hypertrophie) nach PO Chirurgie8,15. SMC sind die primären Kunststoff Zellen, die innerhalb der glatten Muskulatur Schichten als Reaktion auf die hypertrophe Bedingungen14wachsen, aber andere Zellen wie ICC und PDGFRα+ -Zellen, die mit SMC eng verbunden sind, sind auch neu besiedelt. Wir haben bereits berichtet, dass die PO-Mäuse Hypertrophie im Dünndarm entwickeln, in denen SMC sind entdifferenzierten in PDGFRα+ Zellen, die höchst proliferative7,15,16. Umgekehrt sind ICC verkommen und verloren in den hypertrophierten Glattmuskel-Schichten bei der Entwicklung der intestinalen Obsruction7. Ein weiterer großer Vorteil des PO-Modells ist seine Fähigkeit, Veränderungen im enterischen Nervensystem und Vermehrung von neurogenen motorischen Muster zu bewirken. Die große Verbreitung neurogenen motorischen Muster im Dünndarm Maus der migrierenden Motor Komplex (MMC), ist die neurogene und erfordert keine ICC oder elektrische langsame Wellen17. Das PO-Modell kann klare Einblicke in wie MMCs und enterischen Nerven durch partielle Obstruktion umgebaut werden.
Hier schlagen wir eine murinen Protokoll für Darm PO-Operation mit einem Silikonring. PO-Operation zuverlässig empfangen Mäuse produzieren Hypertrophie in der Tunica Muscularis des Dünndarms. Innerhalb hypertrophe Muskeln sind SMC, ICC, PDGFRα+und neuronalen Zellen drastisch umgebaut.
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Protocol
Das folgende Protokoll genehmigt wurde durch die institutionelle Animal Care und verwenden Committee (IACUC) an der Universität von Nevada-Reno (UNR) Tier Ressourcen und erfüllt alle institutionellen ethischen Richtlinien bezüglich der Verwendung von Versuchstieren.
(1) Tiere.
- Erhalten Sie Reifen (4-6 Wochen alt) C57BL/6 Mäusen mit einem Gewicht zwischen 20-30 g. Haus der Kolonie von Labormäusen in eine zentralisierte Tierstation am UNR Tier Ressourcen.
(2) partielle Obstruktion Chirurgie
Hinweis: In einem Raum gewidmet chirurgische Eingriffe sind Operationen durchgeführt. Alle chirurgischen Instrumente sind vor der Operation autoklaviert. Sterile OP Kittel und Handschuhe sollten von allen Personal im OP jederzeit getragen werden.
- Vorbereitung für die OP Maus
- Überprüfen Sie die Narkose Delivery-System um die Versorgung mit Sauerstoff zu gewährleisten und Isofluran ist ausreichend für Verfahren. Schalten Sie die Stromversorgung Sauerstoff. Schalten Sie den Gas-Durchflussmesser und passen Sie an, um 500-1000 mL/min Platz das Tier in der Induktion Kammer und verschließen Sie oben.
- Schalten Sie den Verdampfer Isoflurane auf 5 %, und überwachen Sie das Tier zu, bis es Liegerad wird. Wechseln Sie die Narkose Liefersystem zu die Bugnase
- Spülen der Induktion Handelskammer Restgas mit Sauerstoff, dann schalten Sie die Induktion Kammer Linie unter Beibehaltung der Bugnase Zeile öffnen.
- Entfernen Sie das Tier aus der Kammer zu und legen Sie vorsichtig ophthalmologischen Salbe auf die Augen des Tieres.
- Legen Sie die Bugnase auf einen vorgeheizten warm, wenn Gas fließt weiterhin.
- Ändern Sie die Sauerstoffzufuhr in 100-200 mL/min, mit 2-3 % Isofluran. Wenn das Tier beginnt zu bewegen, betäubt, Gentlyrestrain das Tier mit der Nase Kegel auf bis zu vollständig wieder.
- Überwachung der Atmung und Reaktion auf die Stimulation während des Verfahrens und den Prozentsatz der Isofluran (2-5 %) nach Bedarf anpassen. Tierische Anesthetization Ebene wird durch den Mangel an Zehe Prise Reflex überwacht, bevor Chirurgie durchgeführt wird.
- Injizieren Sie Schmerzmittel (Buprenorphin, 1 µg/g Körpergewicht) intraperitoneal Weg von der Einschnitt-Website.
- Wenden Sie Haar Entfernung Lotion auf dem Bauch mit einem sauberen Wattestäbchen an. Lassen Sie die Lotion sitzen für 3-5 min auf Maus, dann das Haar mit Gaze und Baumwolle Tupfer entfernen. Wiederholen Sie diesen Schritt, bis alle Haare aus dem Bauch der Maus entfernt wurde.
- Reinigen Sie die Haut mit 70 % Ethanol mit Gaze und Baumwolle Tupfer. Gelten Sie Swabsticks oder Povidon-Jod-Lösung um den Bauch zu reinigen.
- Partielle Obstruktion Chirurgie
- Drapieren Sie die Operationsstelle mit sterilen Papier 25 x 50 cm mit einer 2,5 x 2,5 cm Öffnung in der Mitte für den OP-Bereich. Sichern Sie den Faltenwurf des Tieres indem man sterile Streifen an den Rändern der Öffnung und die Haut.
- Machen Sie einem ~3.0 cm Bauchschnitt längs mit Nr. 15 Klinge Skalpell, um sicherzustellen, dass nur die Haut eingeschnitten ist und schneiden in der Musculoperitoneal Schicht zu diesem Zeitpunkt zu vermeiden.
- Mit Zange und chirurgische Scheren, trennen Sie vorsichtig die Haut von der Musculoperitoneal-Schicht ohne jeden Schnitt, die Musculoperitoneal Schicht. Nachdem die Schichten ausreichend (ca. 1 cm x 4 cm) getrennt wurden, identifizieren die Linea Alba auf der Musculoperitoneal Ebene und Schnitt ~ 2 cm entlang der Linea Alba, die intraperitonealen Hohlraum mit Mikro-Pinzetten und Scheren verfügbar zu machen.
- Genau lokalisieren Sie und identifizieren Sie der Blinddarm. Langsam und sanft entfernen der Blinddarm aus dem intraperitoneale Hohlraum mit Mikro-Pinzetten, bringen die proximalen Colon und Ileum mit der Blinddarm außerhalb auf der sterilen Tuch. Sofort befeuchten Sie das Darmgewebe mit 0,9 % sterile Kochsalzlösung getränkten Gaze und halten Sie exponierte Gewebe ständig befeuchtet, während sie sich außerhalb der Bauchhöhle.
- Lokalisieren Sie und identifizieren Sie das Mesenterium zwischen Ileum und proximalen Colon. Machen Sie einen Einschnitt (~ 1 cm) in dem Mesenterium parallel, und knapp unterhalb der Krummdarm und vermeiden Sie, schneiden alle Gefäßsystem.
- Nehmen Sie einen autoklaviert Silikonring (6 mm in der Länge, 4 mm Außendurchmesser, 3,5 mm Innendurchmesser). Längsrichtung geschnitten Sie, um den Schlauch öffnen und öffnen Sie den Ring mit Mikro-Pinzetten.
- Stecken Sie ein Ende des geöffneten Rings durch die Inzision im Mesenterium Gewebe. Eine ausgefüllte Ringform zurückzukehren Sie den Ring bringen ein Ende in Kontakt mit anderen, mit der Krummdarm, umgeben von den Ring.
- Sicherzustellen Sie, dass der Silikonring vollständig Ileum umgibt, schließen Sie den Ring mit Naht und legen Sie den Darm vorsichtig zurück in die intraperitoneale Hohlraum.
- Chirurgie-Schließung
- Führen Sie eine einfache kontinuierliche Naht auf der Musculoperitoneal Ebene entlang der Linea Alba, schließen die Musculoperitoneal Wunde mit einer resorbierbaren Naht. Nachdem die Naht abgeschlossen ist, reinigen Sie eine Blutung mit 0,9 % sterile Kochsalzlösung getränkten Gaze.
- Um die Wunde mit einer separaten Nylon-Naht vollständig zu schließen führen Sie eine einfache kontinuierliche Naht auf der Haut.
- Nachdem beide Fäden abgeschlossen haben, reinigen Sie die Wunde mit neuen Swabstick oder Povidon-Jod.
- Intraperitoneale Injektion Antibiotika (Gentamicin, 150 μL pro Maus basierend auf 20-30 g Körpergewicht).
- Nach Abschluss des Verfahrens, schalten Sie Verdampfer Isoflurane und lassen das Tier nur fließende atmen Sauerstoff bis es beginnen Bewusstsein zu gewinnen.
- Sobald das Tier erwacht ist, legen Sie das Tier in einem separaten Recovery-Bereich mit thermischen Unterstützung bis vollständig erholt.
3. postoperative Beobachtung.
- Bewegen Sie nach Abschluss der Operation die Tiere in einem Inkubator in einen Aufwachraum wo Temperatur und Feuchtigkeit reguliert. Überwachen Sie die Tiere nach der Operation alle 15 min für die erste Stunde dann alle 30 Minuten für die zweite Stunde, während die Tiere in den Inkubator.
- Sobald die vorgeschriebene Beobachtung abgeschlossen ist, bewegen Sie die Tiere an ihre eigenen individuellen Käfig und überwachen sie täglich für klinische Indikationen Schmerzen18, und um sicherzustellen, dass die Operationswunde richtig ohne irgendwelche Anzeichen von Komplikationen (Heilung ist Dehiszenz) vorhanden.
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Representative Results
Partielle Obstruktion (PO) wurde operativ in einen Monat alt Mäuse induziert, indem man einen Silikonring um Ileum in der Nähe der Ileocecal Schließmuskel. Dieser Ring erstellt eine teilweise Blockade im Ileum. Schein-Operationen (SO) auch ohne Ring auf Alter/Geschlecht durchgeführt wurden abgestimmt Mäuse und diese Mäuse nicht zeigen keine Symptome ähnlich denen in PO Mäuse gefunden. Mäuse erholten sich schnell von der PO-Operation innerhalb weniger Stunden. Sie zeigte keine offensichtliche Verhaltensänderungen oder Schwäche innerhalb der ersten Woche, aber nach der ersten Woche begannen sie allmählich Anzeichen einer PO: einen aufgeblähten Bauch und weniger und kleinere fäkale Pelletherstellung. PO-Mäuse wurden auf 8 und 13 Tage Post-PO-Operation zusammen mit SO Kontrollmäusen geopfert. Des Dünndarms war teilweise gefüllt und aufgebläht auf 8 Tage Post-PO Chirurgie und voll gefüllt und aufgebläht auf 13 Tage Post-PO Chirurgie, verglichen, um SO zu steuern, Mäuse (Abbildung 1A). Fäkale Pellet-Bildung im Dickdarm von 8 und 13 Tage Post-PO Chirurgie Mäuse verringerte sich im Vergleich zu SO Kontroll-Mäusen (Abbildung 1 b). Ileale Gewebe, das den Ring nur vorgeschaltet war wurde seziert und der glatten Muskulatur wurde von Hämatoxylin und Eosin (H & E) Färbung analysiert. Die glatte Muskelschicht war Sexualpartners an 8 Tagen Post-PO Chirurgie und viel weiter Sexualpartners an 13 Tagen Post-PO Chirurgie (Abbildung 2). Wir beobachteten auch Veränderungen in neuronalen Zellen innerhalb der Tunica Muscularis in PO-Mäusen durch den Einsatz von Immunchemie, SMC, ICC und PDGFRα+. Jede Zelle war mit Zelltyp spezifische Marker beschriftet: MYH11 (SMC), KIT (ICC), PDGFRA (PDGFRα+ -Zellen) und PGP9.5 (Nervenzellen). SMC sind in drei Schichten des Gewebes gefunden: längs-Muskel (LM), kreisförmigen Muskeln (CM) und die Muscularis Schleimhäute (MM) im Ileum. SMC wuchsen nach und nach zu hohen Wachstumsraten in allen drei Schichten bei 8 und 13 Tage Post-PO Chirurgie (Abbildung 3). Wie bei ICCs befinden sich ihre Subpopulationen in die tiefe muskuläre Plexus (DMP), Auerbach Region (MY) und Subserosal Region (SS). ICC-DMP, ICC-MY und ICC-SS wurden jedoch innerhalb der Intra/intermuscular Schichten (Abbildung 3) verkommen. Ähnlich wie bei ICC Subpopulationen, befinden sich Subpopulationen von PDGFRα+ Zellen (PαC) in das DMP, MY und SS. Im PO-Mäuse, PαC-DMP, mein PαC, und PαC-SS wurden dynamisch innerhalb der intermuscular Schichten der PO Mäuse umgebaut: sie wuchsen auf 8 Tage Post-PO Chirurgie und artete in 13 Tagen Post-PO Chirurgie (Abbildung 3). Zu guter Letzt wurden Auerbach Plexus (MP), submucosal Plexus (SP), Subserosal Neuronen (SS), und magensaftresistenten Motoneuronen (EMN) deutlich in den Inter/intramuskuläre Regionen der PO Mäuse auf 8 und 13 Tage Post-PO Chirurgie (Abbildung 3) verloren.
Abbildung 1: Teilweiser Darmverschluss induzierte chirurgisch in einem Mausmodell. PO PO chirurgisch induzierten war. Einen Monat alten Mäusen wurden betäubt, ihr Bauch wurde durch einen Schnitt eröffnet ein Silikonring wurde gelegt, um Ileum und die Eröffnung wurde durch Vernähen geschlossen. Mäuse, die operiert durften entweder 8 oder 13 Tage lang erholen. Alter und Geschlecht SO Mäuse auf in der gleichen Weise wie PO Mäuse betrieben wurden außer gab es keine Platzierung eines Ringes aufeinander abgestimmt. (A) Brutto-Bilder von den GI-Trakt in den Mäusen, die PO unterzogen oder SO Chirurgie. Bilder sind von Mäusen um 8 und 13 Tage nach der Operation (B) GI-Trakt seziert von Mäusen in A. Dünndarm stromaufwärts des Ringes wurde auf 8 und 13 Tage Post-PO-Operation aufgetrieben und fäkale Pellets im Dickdarm wurden auch kleinere bei beiden 8 und 13 Tageschirurgie als Post-PO im Vergleich zu 13 Tage Post-SO Chirurgie Mäuse aufgrund der teilweise obstruktive Silikonring. Maßstabsleisten sind 0,5 cm. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 2: Glatte Muskelschicht geändert in der chirurgischen Mausmodell. Vertreter H & E Färbung des Ileum Querschnitte aus Darm PO SO und kein Betrieb (NO) Mäuse. Glatte Muskelzellen (SM) und Schleimhaut (Mu) Schichten sind dicker PO Mäuse auf 8 und 13 Tage Post-PO-Operation als die Beschwerdepunkte und keine Mäuse. Maßstabsleisten sind 50 µm. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 3. Dynamische zellulären Umbau im glatten Muskel-Hypertrophie infolge teilweiser Darmverschluss. Repräsentative konfokale Laser-scanning-Bilder der hypertrophen ileal Querschnitte von PO, also und keine Mäuse. -Proteins Färbung mit Antikörper (rot) der MYH11 (SMC), KIT (ICC), PDGFRA (PDGFRα+ -Zellen) oder PGP9.5 (NC, neuronalen Zellen), Co befleckt mit DAPI (blau). SMC in Schleimhaut Muscularis (MM), kreisförmig Muskel (CM), und längs Muskelschichten (LM), sowie PDGFRα+ Zellen in tiefe muskuläre Plexus (DMP), Auerbach Region (MY) und Subserosal Region (SS) wuchsen in hypertrophe Ileum bei 8 und 13 Tage Post-PO Chirurgie beim ICC in DMP, MY und SS, Auerbach-Plexus (MP), submucosal Plexus (SP), Subserosal NC (SS) sowie enterischen Motoneuronen (EMN) waren verkommen. Maßstabsleisten sind 50 µm. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 4. Ergebnisse der Silikonringe, die zu groß, zu klein oder auf den Doppelpunkt fehl am Platze sind. (A) keine glatten Muskel-Hypertrophie entsteht im Ileum, wenn der Ring zu groß, um Verstopfung zu verursachen ist. Der Ring aus wenig bis keine Blockade des Ileum. (B) intestinale Ischämie entsteht im Ileum, wenn der Ring zu klein ist. Der Ring gefertigt eine fast vollständige Blockade des Ileum, die das Gewebe schädigen und zum frühen Tod führen, bevor Hypertrophie entwickelt. (C) Hypertrophie der glatten Muskulatur in den Darm aufgrund einer falschen Ring entwickelt. Der Ring auf den Doppelpunkt wurde durch lumenal Inhalt (Kot), nach unten verschoben das Mesenterium Gefäßsystem beschädigt und verursacht massive Blutungen im Darm. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
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Discussion
Wir zeigten, dass Mäuse erhält der Darm PO-Operation konsequent und reproduzierbar intestinalen glatten Muskel-Hypertrophie, entwickeln die menschliche Darmverschluss imitiert. Intestinale Obstruktion Operationen wurden für verschiedene Tiere wie Mäuse7, Ratten10, Meerschweinchen11, Hund12 und Katzen13entwickelt. Die Maus-Modell der Darmverschluss hat Zeit, Kosten, Größe und phänotypischen Vorteile gegenüber anderen größeren Tiermodellen. Die Entwicklung der Hypertrophie bei Mäusen oder Ratten dauert nur 10-14 Tagen10, im Vergleich zu 2-4 Wochen in den Meerschweinchen, Hunde und Katzen11,12,13. Kosten für Kauf und Pflege Mäuse ist auch einen enormen finanziellen Vorteil im Vergleich zu anderen Modellen. Darüber hinaus sind Mäuse, kleine und einfache Handhabung für die PO-Operation. Am wichtigsten ist, entwickeln Mäuse PO-Operation erhalten, schrittweise und ausführlich Hypertrophie im Dünndarm, während andere größere Tiere weniger umfangreiches Wachstum entwickeln.
Es gibt mehrere wichtige Faktoren zu berücksichtigen, wenn Sie versuchen, zuverlässige Hypertrophie durch Darm PO-Operation zu produzieren. Mehrere Forschergruppen haben verwendet Ringe in verschiedenen Größen und platziert einen Ring an verschiedenen Standorten entlang der Darm teilweise Hindernisse7,9,10,11,12zu erstellen, 13,14. Jedoch sollte ein Silikonring der optimalen Größe für Mäuse verwendet werden wie ein größerer Ring erzeugt wenig oder gar keine Blockade im Ileum wo Hypertrophie entwickelt nie, oder nur teilweise (Abbildung 4A). Umgekehrt, wenn ein Ring zu klein war, es in der Nähe von vollständigen Blockierung des Ileum erstellt die induzierte intestinale Ischämie und/oder beschädigt die Schleimhaut verursacht Sepsis, zum frühen Tod innerhalb einer Woche (Abbildung 4 b). Wir verwendeten einen Silikon-Ring mit einer bestimmten Größe (6 mm in der Länge, 4 mm Außendurchmesser, 3,5 mm Innendurchmesser) auf einen Monat alt Mäuse (Table of Materials). Verschiedene Größen der Ringe sollten getestet und für Mäuse in verschiedenen Größen verwendet, um die optimale Blockade im Ileum zu erstellen. Ein weiterer wichtiger Faktor ist die Position des Ringes auf den Darm. Das Ileum, in der Nähe von Ileocecal Ventil, ist der beste Ort um den Ring zu platzieren, um teilweise Hindernissen robust zu produzieren. Andere Regionen wie das Jejunum oder verschiedene Regionen des Ileum vom Ileocecal Ventil, haben einen ähnlichen Ring um Hypertrophie7induzieren auf sie gesetzt hatte. Allerdings bewegt sich durch die serosal Oberfläche des Darms wird stark von peritonealen Flüssigkeit geschmiert, ein Ring einfach auf diese Teile des Darms platziert wegen die Kontraktionskraft des Darmes fäkal Material durchschieben. Da der Ring über die gesamte Länge des Darms geschoben wird, schneidet es mesenterialen Arterien in Auerbach und Umgebung: Darm, verursacht Blutungen innerviert. Wenn ein Ring am Ende des Ileum neben Ileocecal Ventil eingefügt wird, wird es körperlich bewegen verhindert weitere sperrige naturgemäß der Blinddarm. Der Blinddarm kann leicht entfernt und genommen aus dem Bauch in der Chirurgie um den Ileocecal Ventil-Region zu finden, da der Blinddarm mit dem Ileum und proximalen Colon verbindet. Das Ileum und Colon an der Blinddarm verbunden ganz ähnlich aussehen und ein Ring kann versehentlich auf den proximalen Colon statt Ileum platziert werden. Wenn ein Ring auf den proximalen Colon, wie auch auf das Jejunum verlegt wurde der Ring wurde nach unten gedrückt und beschädigt mesenterialen Arterien, was zu umfangreichen Blutungen (Abb. 4). Zur Vermeidung dieses Abhandenkommen sollten Ileum immer richtig gelegen und erkannt, bevor der Ring eingeführt ist. Ileum läuft in der Mitte der Blinddarm während der Doppelpunkt in einer Seite des Beutels Blinddarm ausgeführt wird.
Dieses PO-Operation-Protokoll gilt als eine größere Operation für Mäuse. Alle chirurgischen Instrumente und Materialien sollten vor Gebrauch sterilisiert werden, und Operation sollte in die saubere Umwelt von einem speziellen Operationssaal durchgeführt werden, um Verschmutzung, zu minimieren, was zu Infektionen und Entzündungen bei Mäusen führen kann. Darüber hinaus sollte ein Schmerzmittel zu Mäusen nach der Operation erfolgen. Wir haben eine slow-Release-Version von Buprenorphin ist wirksam bis zu 7-8 h-22. Darüber hinaus haben die Mäuse nach der Operation, schwer zu kauen und schlucken festen Nahrung. Für bis zu 5 Tage nach der Operation, die Mäuse mit weiche Nahrung (solide Diät mit ein bisschen Wasser hinzugefügt, um Nahrung zu erweichen) zur Verfügung gestellt und nach 5 Tagen auf normale feste Ernährung umgestellt.
Unser Darm PO-Operation stellt eine in Vivo Hypertrophie Modell für intestinale Obstruktion in der SMC, ICC, und PDGFRα+ Zellen sind ungewöhnlich umgebaut. Dieses PO-Modell eignet sich auch ideal für Verständnis wie enterische Neurone durch PO verändert werden und wie die großen motorischen Aktivitäten in der kleinen und großen Darm23betroffen sind. Diese Zellen können dynamisch unter pathologischen Bedingungen sowie unter kultivierten Bedingungen15,16umgebaut werden. Wir beobachteten, dass diese Zellen in Mäusen SO verhielt sich ein bisschen anders als normale Mäuse ohne Operation (Abbildung 2 und Abbildung 3). Die meisten Darmverschluss beim Menschen erfolgt durch abdominale Verwachsungen nach der Operation führt zu glatten Muskel-Hypertrophie3,4,5,21entwickelt. Nach der Operation SO haben wir auch festgestellt, dass SMC, ICC und PDGFRα+ Zellen wurden leicht hypertrophe im Dünndarm, im Vergleich zu (Abbildung 3), was darauf hindeutet, dass eine Operation selbst intestinalen glatten Muskel-Hypertrophie auslösen kann. Wenn dies der Fall ist, SO ist Chirurgie keine komplette Negativkontrolle für PO-Operation. Nein und SO als ein Vergleich mit PO Darm verwendet werden sollte.
Zusammenfassend lässt sich sagen fanden wir ein Kosten/Zeit effektive, zuverlässige und wiederholbare PO chirurgische Protokoll bei Mäusen, die robust Darm Hindernisse erzeugt. Während der Entwicklung der Behinderung SMC, ICC, PDGFRα+sowie neuronale Zellen sind dynamisch in verschiedenen Gewebeschichten und Gebietsschemas umgebaut. Dieses in-Vivo Obstruktion-Modell bietet neue Einblicke in unser Wissen wie phänotypischen Veränderungen auftreten behindert Darm auf zellulärer Ebene.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Acknowledgments
Die Autoren möchte Benjamin J Weigler, D.V.M, Ph.d. und Walt Mandeville, D.V.M (Tier-Ressourcen & Campus besuchen Tierarzt, Universität von Nevada, Reno) für ihre hervorragende Tieren Dienstleistungen bereitgestellt, um die Mäuse sowie ihren Rat auf chirurgische Eingriffe.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Surgical drape | Medical and veterinary supplies | SMS40 | 40”X100 yards |
| Underpad, econ, pro plus | Medical and veterinary supplies | MSC281224 | 17x24” |
| Iris scissors | Braintree scientific, Inc | SC-i-130 | |
| Iris scissors | Vantage | V95-304 | |
| Dumont electronic & jeweler tweezers | Dumont | 98-180-3 | |
| Braided absorbable suture | Covidien polysorb | SL-5687G | 5-0, polyglactin |
| Nylon non-absorbable mono filament | AD surgical | S-N618R13 | 6-0, nylon |
| Surgical blade | Dynarex | No.15 | |
| Needle holder | Jacobson microvascular | 36-1342TC | 8.5 inch |
| Scalpel handle | Flinn scientific | AB1049 | |
| Microsurgical scissor | WPI | 503305 | |
| Petrolatum ophthalmic ointment | Puralube VET | 3.5 g | |
| Fluriso (isoflurane) | Vetone | V1 502017 | 250 ml |
| Steri-strip reinforced skin closure | 3M | R1547 | |
| Surgical gloves | Medline | MSG2270 | |
| Ear loop face mask | The safety zone | RS700 | |
| Avant gauze non-woven sponges | Caring | PRM25444 | |
| Surgical cup | Admiral craft OYC-2 | 725-A42 | 2.5 oz |
| Swabstick | ChloraPrep | 260103 | 2% w/v Chlorhexidine Gluconate (CHG) and 70% v/v Isopropyl Alcohol (IPA) |
| Cotton tipped applicator | Puritan | 806-WC | |
| Buprenorphine | Zoo pharm | BZ8069317 | 1 mg/ml |
| Gentamycin sulfate | Vetone | G-6336-04 | 100 mg/ml |
| Fast acting gel cream remover | Veet | 8111002 | |
| Syringe | AHS | AH01T2516 | 1 ml with needle |
| Silicon ring | VWR | 60985-720 | 6 mm in length, 4 mm exterior diameter, 3.5 mm interior diameter |
| C57BL/6 mice | The Jackson Laboratory | 4-6 weeks old |
References
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