Summary
창 자 방해는 심한 복 부 통증, 메스꺼움, 구 토, 그리고 대변의 통과 방지 하면 내장의 부분적 또는 완전 한 막힘. 쥐에서 장 부분 obsructions를 만들기 위한이 절차는 병 적인 세포 성장 및 소장에서 죽음을 기본 메커니즘을 공부에서 신뢰할 수 있는.
Abstract
장 장애물, 방해 하거나 차단 연동 운동, 복 부 유착 및 tumorous 종양을 포함 하 여 가장 위장 (GI) 질환에 의해 발생할 수 있습니다. 그러나, 개장 하는 메커니즘 휴대에, 참여 하 고, 창 자 방해는 제대로 이해. 창 자 방해의 여러 동물 모델 개발 되었습니다, 하지만 마우스 모델은 가장 비용/시간 효과적인. 마우스 모델 장 부분 방해 (PO)를 올바르게 수행 하지 경우 높은 사망률의 수술 주입을 사용 합니다. 또한, 쥐가 수술을 받고 적절 한 봉쇄는 사용 되지 않습니다 또는 제대로 배치 하는 경우 비 대를 개발 하기 위해 실패. 여기, 우리는 매우 낮은 사망률과 안정적이 고 재현 장 장애물 포 수술에 대 한 상세한 프로토콜을 설명 합니다. 이 프로토콜을 부분적으로 차단 하는 작은 창 자에서 소화 운동 회장을 둘러싸는 수술 배치 실리콘 반지를 이용 한다. 부분 막힘 소장 소화 운동의 중단으로 인해 열려진 될 게. 내장의 팽창 반지 점차적으로 죽음을 일으키는 원인이 될 때까지 2 주 동안 개발의 구두에 부드러운 근육 비 대를 유도 합니다. 수술 포 마우스 모델 hypertrophic 장 조직 평활 근 세포 (SMC), 중간 셀의 Cajal (ICC), PDGFRα+를 포함 하 여 장 셀의 병 적인 변화를 공부 하는 데 유용의 비보에 모델 제공 및 신경 장 방해의 발달 동안에 세포입니다.
Introduction
창 자 방해는 소형 또는 대형 내장 내장1통과 음식을 소화, 유체 및 가스 방지에서 부분적 또는 완전 한 막힘. 방해, 때문 방해 좁히는 루멘2장 벽 두껍게 될을 유도 합니다. 장 방해의 결과로 복 부 접착 조직 형성을 일으키는 원인이 되는 복 부 또는 골반 수술 또는 염증 성 장 질환 (크 론 병), 계실 염, 탈 장, volvulus, 준한, GI 무질서에서 발생할 수 있습니다. intussusception, 변 비, 지저분한 impaction, 의사 방해, 암 및 종양3,,45. 이러한 경우 장 장애물은 종종 내장6tunica muscularis의 비 대도 이어질.
루멘의 포 장 팽창, 유도 및 기능 연동7,,89,10, 계속 필요에 응답에서 방해 주위 부드러운 근육 층 두께 증가 11,,1213. 장 포의 동물 모델 부드러운 근육 비 대에 쥐7, 쥐10, 기니 돼지11, 개12, 고양이13 일관 되 게 내에서 유사한 비 대를 개발 하는 연구 개발 된는 장 근육 레이어입니다.
장 포의 마우스 모델 생성 및 창 자 방해에서 vivo에서공부를 가장 비용 효율적인 방법입니다. 작은 창 자 방해는 회장을 둘러싼 배치 수술 실리콘 링을 사용 하 여 마우스에 수행 됩니다. 포 쥐 포 수술8,15후 근육 레이어 두께 (비 대)에서 초기 셀 (증식)의 수 증가 및 증가 보였다. SMC는 기본 플라스틱 셀 hypertrophic 조건14응답에서 평활 근 층 내에서 성장 하지만 ICC 등 다른 세포와 PDGFRα+ 셀 SMC와 밀접 하 게 관련 된, 또한 다시 채워집니다. 우리가 이전에 보고 된 포 쥐 작은 창에 비 개발 어떤 SMC에서 높은 증식7,,1516PDGFRα+ 셀으로 dedifferentiated는. 반대로, ICC 전락 되며 장 obsruction7의 개발 기간 동안 hypertrophied 부드러운 근육 층 내에서 잃었다. 포 모델의 또 다른 주요 장점은 장 신 경계와 전파 neurogenic 모터 패턴에 변화를 유도 하는 능력 이다. 주요 전파 마우스 작은 창 자에서 neurogenic 모터 패턴은 마이그레이션 모터 복잡 한 (MMC), neurogenic 이며 ICC 또는 전기 느린 파도17필요 하지 않습니다. 포 모델 부분 방해에 의해 Mmc와 장 신경 개조 어떻게에 명확한 통찰력을 제공할 수 있습니다.
여기, 우리는 실리콘 링을 사용 하 여 장 포 수술 murine 프로토콜을 제안 합니다. 쥐 포 수술을 안정적으로 수신 소장의 tunica muscularis 비 대 생산. Hypertrophic 근육 내 SMC, ICC, PDGFRα+, 그리고 신경 세포는 극적으로 리 모델링.
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Protocol
다음 프로토콜 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) 네바다 대학 리노 (UNR) 동물 자원에 의해 승인 되었습니다 고 연구 동물의 사용에 관한 모든 기관 윤리 지침을 준수.
1입니다. 동물입니다.
- 성숙 (4-6 주 이전) C57BL/6 쥐 20-30 g. 집 UNR 동물 자원에서 중앙된 동물 시설에 실험실 쥐의 식민지 사이 무게를 얻을.
2. 부분 방해 수술
참고: 수술 수술에 전념 한 방에 수행 됩니다. 모든 수술 기구는 수술 전에 압력가 마로 소독. 수술 실에서 모든 직원에 의해 불 임 수술 가운과 장갑을 항상 착용 되어야 한다.
- 수술 마우스에 대 한 준비
- 산소의 공급을 보장 하기 위해 마 취 전달 시스템을 확인 하 고 isoflurane 절차에 대 한 적절 한입니다. 공급 산소를 켭니다. 가스 유량 계 및 유도 챔버에서 동물 500-1000 mL/분 장소에 그것을 조정 켜고 상단 인감.
- 5%, isoflurane 기화 기를 켜고 휴식 될 때까지 동물을 모니터링. 코 콘 마 취 전달 시스템을 전환.
- 산소, 어떤 잔류 가스의 유도 챔버를 플러시 다음 해제 유도 챔버 라인 코 콘 라인을 유지 하면서 오픈.
- 상공에서 동물을 제거 하 고 신중 하 게 동물의 눈에 안과 연 고를 배치.
- 가스 흐름을 계속 하는 때 데워 따뜻한 패드에 원뿔을 놓습니다.
- 100-200 mL/min, 2-3 %isoflurane 산소 흐름을 변경 합니다. 동물 이동 하기 시작, gentlyrestrain까지에 코 콘 동물 완전히 취 다시.
- 호흡 및 절차 동안 자극에 응답을 모니터링 하 고 필요에 따라 isoflurane (2-5%)의 비율을 조정. 동물 anesthetization 수준의 수술을 수행 하기 전에 발가락 핀치 반사의 부족에 의해 모니터링 됩니다.
- Intraperitoneally 절 개 사이트에서 통증 의학 (buprenorphine, 몸 무게의 1 µ g/g)을 주사.
- 깨끗 한 면봉을 사용 하 여 복 부에 머리 제거 로션을 적용 합니다. 로션 앉아 보자 마우스, 3-5 분 후 거 즈 및 면 면봉을 사용 하 여 제거. 모든 머리는 마우스의 복에서 제거 되었습니다 때까지이 단계를 반복 합니다.
- 70% 에탄올 거 즈 및 면 면봉을 사용 하 여 피부를 청소. 복 부를 청소 하려면 swabsticks 또는 povidone-요오드 솔루션을 적용 합니다.
- 부분 장애 수술
- 2.5 x 2.5 cm 수술 영역에 대 한 중간에 여 25 x 50 cm 메 마른 종이 사용 하 여 외과 사이트 드러 워 진. 피부와의 경계에 메 마른 스트립을 배치 하 여 동물에 드 레이프를 보안 합니다.
- ~3.0 cm 복 부 절 개를 15 블레이드 메스, 피부만 베 고이 이번에 musculoperitoneal 레이어로 절단 방지를 사용 하 여 경도 확인 합니다.
- Using 집게와가 위 수술, 신중 하 게 별도 피부 musculoperitoneal 계층에서 발생 musculoperitoneal 레이어에 어떤 절 개 하지 않고. 레이어 충분히 분리 된 (약 1 c m x 4cm), 후 식별는 교육 musculoperitoneal 레이어는 교육 따라 컷된 ~ 2 cm에 알바 알바 노출 마이크로 집게와가 위를 사용 하 여 복 강.
- 신중 하 게 찾아서 맹을 식별 합니다. 천천히 그리고 부드럽게 마이크로-집게, 근 결 및 살 균 드 레이프에 밖에 서 맹와 회장와 복 강에서 맹을 제거 합니다. 즉시 0.9% 멸 균 식 염 수 젖은 거 즈로 장 조직 축 축 하 게 하 고 항상 습 하는 동안 그들은 복 부 구멍의 이상으로 노출된 조직 유지.
- 찾아서 회장 및 인접 콜론 사이 mesentery를 식별 합니다. 절 개 (~ 1 cm)는 mesentery에서, 그리고 바로 아래, 회장, 병렬 확인 하 고 모든 맥 관 구조를 절단 하지 않도록.
- 압력가 실리콘 링 (길이, 4 m m 외부 직경, 3.5 m m 내부 직경 6 m m)를 가져가 라. 경도 잘라 튜브를 열고 마이크로 집게와 반지를 엽니다.
- Mesentery 조직에는 절 개를 통해 열린된 링의 한쪽 끝을 삽입 합니다. 반지에 의해 포위 하는 회장으로 접촉, 다른 한쪽 끝을 가져와서 완성 된 고리 모양 반지를 반환 합니다.
- 실리콘 링 완전히는 회장 주변을 확인 하 고 봉합으로 반지를 닫습니다 신중 하 게 내장 복 강에 다시 배치.
- 수술 폐쇄
- 간단한 수행 하는 교육을 따라 musculoperitoneal 레이어에 연속 봉합 알바는 musculoperitoneal을 흡수 되기 쉬운 봉합 된 상처. 봉합 후 깨끗 한 거 즈 배어 0.9% 멸 균 식 염 수와 어떤 출혈.
- 완전히 가까운 별도 나일론 봉합, 상처, 피부에 간단한 연속 봉합을 수행 합니다.
- 두 봉합 완료 된 후 새로운 swabstick 또는 povidone-요오드 상처 청소.
- Intraperitoneally 주사 항생제 (gentamicin, 20-30 g 몸 무게에 따라 마우스 당 150 μ).
- 절차의 완료 후 isoflurane 기화 끄고 식을 얻고 시작 때까지 유일한 흐르는 산소 호흡을 동물 허용.
- 일단 동물 깨어, 완전히 복구 될 때까지 열 지원으로 별도 복구 영역으로 동물을 놓습니다.
3. 작업 후 관찰입니다.
- 수술의 완료 후 이동 동물 복구 방에 인큐베이터 온도 습도 통제 된다. 동물 들이 인큐베이터에서 동안 두 번째 시간에 대 한 첫 번째 시간 30 분에 다음에 대 한 동물 postoperatively 매 15 분을 모니터링 합니다.
- 소정의 관찰 완료 되 자 마자 그들의 자신의 개인 감 금 소 동물 이동 및 통증18, 그리고 합병증 (의 어떤 표시 없이 수술 상처가 제대로 치유 되도록 임상 표시에 대 한 매일 그들을 모니터합니다 dehiscence) 현재.
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Representative Results
부분 방해 (PO) 수술 ileocecal 괄약근 가까운 회장 주위 실리콘 링을 삽입 하 여 1 개월 된 생쥐에서 유도 했다. 이 반지는 회장에 부분적인 방해를 만들었습니다. 가짜 작업 (그래서) 나 이/성별에 반지 없이 수행 했다 쥐와이 쥐가 어떤 증상 포 쥐에서 찾아낸 그들과 유사한를 표시 하지 않았습니다. 마우스는 신속 하 게 몇 시간 포 수술에서 회복. 그들은 명백한 행동 변화 또는 약점 첫 주 내에서 보여주지만, 후 첫 번째 주, 그들은 점차적으로 포의 흔적을 표시 하기 시작 했다: 부풀어 복 부와 더 적은 더 작은 배설물 펠 릿의 생산. 포 쥐 8과 13 일 포스트 포 수술 등 제어 마우스 함께 희생 되었다. 소장 부분적으로 가득 고 8 일 포스트 포 수술에서 불어와 완전히 가득 이었고 그래서 (그림 1A) 마우스를 제어에 비해 13 일 포스트가 수술에 불어. 8과 13 일 포스트 포 수술 쥐의 결에 찌 끼 펠 릿 형성 등 제어 마우스 (그림 1B)에 비해 감소 했다. 그건 그냥 링의 업스트림 ileal 조직 했다 해 부 고 부드러운 근육 되며 & 오신 (H & E) 얼룩 분석 했다. 부드러운 근육 층 8 일 포스트 포 수술에서 hypertrophied 되었고 13 일 포스트 포 수술 (그림 2)에서 훨씬 더 hypertrophied. 우리는 또한 SMC, ICC, PDGFRα+, 및 immunochemistry의 사용을 통해 포 쥐에서 tunica muscularis 내 신경 세포 변화 관찰. 각 셀은 셀 형 특정 마커 분류 되었다: MYH11 (SMC), 키트 (ICC), PDGFRA (PDGFRα+ 세포), 및 PGP9.5 (신경 세포). SMC 조직의 3 개의 층 내에서 발견 된다: 경도 근육 (LM), 원형 근육 (CM), 및 muscularis 거칠어 (MM)는 회장에서. SMC는 점차적으로 8 그리고 13 일 포스트 포 수술 (그림 3)에서 모든 3 개의 층에서 급속 한 속도로 성장 했다. Icc에 관해서는 그들의 모집단 깊은 근육 총 (DMP), myenteric 지역 (내), 그리고 subserosal 지역 (SS)에 있습니다. 그러나, ICC-DMP, ICC 내, 그리고 ICC-SS 내부/질의 레이어 (그림 3)에서 전락 했다. 마찬가지로 ICC 모집단, PDGFRα+ 셀 (PαC)의 모집단 DMP, 내, 및 SS에 있습니다. 포 쥐, PαC-DMP, PαC-내, 그리고 PαC SS 동적으로 리 모델링 했다 포 쥐의 질의 레이어 내의: 그들은 8 일 포스트 포 수술에서 성장 하 고 13 일 포스트 포 수술 (그림 3)에서 퇴 화. 마지막으로, myenteric 총 (MP), submucosal 총 (SP), subserosal 신경 (SS), 그리고 장 모터 신경 (EMN) 크게 8과 13 일 포스트 포 수술 (그림 3)에서 포 쥐의 간/근육 지역에서 분실 되었다.
그림 1입니다. 장 부분 방해는 수술 마우스 모델에서 유도 된. 포가 수술에 의해 유도 되었다. 한 달 된 쥐 취 했다, 그들의 복 부를 절 개 하 여 열렸다, 실리콘 반지와 배치 되었다 회장, 주변 개통 봉합에 의해 폐쇄 되었습니다. 마우스는 수술 8 ~ 13 일에 대 한 복구 허용 되었다. 나이 고 쥐 운영에 포 쥐로 같은 방식으로 링의 아무 배치 했다를 제외 하 고 그래서 일치 하는 섹스. (A) 총 포를 받았다 쥐에 기 관의 이미지 또는 등 수술. 이미지는 8에서 마우스와 13 일 수술 후 (B) 기 관 A. 소장 상류의 반지에에서 쥐에서 해 부 8과 13 일 포스트 포 수술에서 팽창 했다 및 콜론에 찌 끼 펠 릿은 또한 작은 모두 8과 13 일 포스트 포 수술으로 13 일 게시물-그럼 수술 쥐 때문에 부분적으로 폐쇄성 실리콘 링에 비해. 스케일 바는 0.5 cm. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2입니다. 부드러운 근육 층 외과 마우스 모델에서 변경. 대표 H & E에서 장 포, ileal 횡단면의 그래서 얼룩 그리고 아무 작업 (NO) 쥐. 부드러운 근육 (SM) 및 점 막 (Mu) 레이어는 so에서 들과 아무 마우스 보다 8과 13 일 포스트 포 수술에서 포 쥐에 두꺼운. 스케일 바는 50 µ m. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3입니다. 장 부분 방해에 의해 유도 된 동적 셀룰러 리 모델링 부드러운 근육 비 대에. 그래서 hypertrophic ileal 횡단면, 포에서 이미지를 스캔 하는 대표적인 confocal 레이저 고 아니 쥐. Immunohistochemically 키트 (ICC), (빨간색)의 MYH11 (SMC), 항 체와 얼룩 PDGFRA (PDGFRα+ 세포) 또는 PGP9.5 (NC; 신경 세포), 공동 스테인드 DAPI (파란색)와 함께. 점 막 muscularis (MM), 원형 근육 (CM), 및 경도 근육 (LM) 레이어, SMC 뿐만 아니라 깊은 근육 총 (DMP), myenteric (내), 지역과 subserosal 지역 (SS) PDGFRα+ 셀 8과 13 일 포스트 포에 비 대 회장에서 성장 했다 DMP, 내, 그리고 SS, myenteric 총 (MP), submucosal 총 (SP), subserosal NC (SS), 및 장 모터 신경 (EMN) ICC 동안 수술 전락 했다. 스케일 바는 50 µ m. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 4입니다. 결과 너무 큰, 너무 작은 또는 콜론 잘못 실리콘 링입니다. (A) 링이 너무 커서 방해를 일으킬 수 없는 부드러운 근육 비 대는 회장에서 개발. 반지는 회장의 아무 막힘을 거의 만든. (B) 장 허 혈에서에서 발전 한다는 회장 반지가 너무 작은 경우. 반지는 조직을 손상 하 고 비 대를 개발 하기 전에 조기 사망으로 이어질 수 있는 회장의 거의 완전 한 방해를 했다. (C) 평활 근 비 대는 콜론 잃어버렸던된 반지 때문에 개발. 결에 반지 lumenal 콘텐츠 (배설물), mesentery 맥 관 구조를 손상 하 고 콜론에서 대규모 출혈 발생에 의해 옮겨 졌다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
우리는 지속적으로 그리고 reproducibly 장 포 수술을 받는 쥐 장 평활 근 비 대를 인간의 창 자 방해를 모방 개발 시연. 장 방해 수술 마우스7, 쥐10, 기니 돼지11, 개 고양이12 와13를 포함 하 여 다른 동물에 대 한 개발 되었습니다. 마우스 모델 장 방해의 시간, 비용, 크기, 및 다른 더 큰 동물 모델에 비해 phenotypic 장점이 있다. 쥐 또는 쥐에 비의 개발 10-14 일10, 기니 돼지, 개 및 고양이11,,1213에 2-4 주에 비해 걸립니다. 구매 하 고 마우스는 또한 다른 모델에 비해 엄청난 재정적 우위를 유지에 대 한 비용. 또한, 마우스는 작고 포 수술에 대 한 취급 하기 쉽다. 가장 중요 한 것은, 쥐 점차적으로 광범위 하 게 포 수술 받고 다른 더 큰 동물 개발 덜 광범위 한 성장 하는 동안 작은 창 자에서 비 대를 개발 합니다.
장 포 수술을 통해 안정적인 비를 생성 하려고 할 때 고려해 야 할 몇 가지 주요 요인이 있다. 여러 연구 그룹 다양 한 크기의 링을 사용 하 고 반지를 만드는 부분 장애물7,,910,11,12, 소장을 따라 다양 한 위치에 배치 13,14. 그러나, 가장 적합 한 크기의 실리콘 링 사용 되어야 한다 마우스로 더 큰 반지는 회장에 거의 또는 전혀 막힘 어디 비 부분적 으로만, 또는 적, 개발 (그림 4A). 반대로, 반지는 너무 작고, 회장이 장 허 혈 유발 및 패 혈 증을 일으키는 점 막 손상의 완전 한 막힘 근처 만든 때 이른 죽음 (그림 4B) 1 주일 이내에 선도. 우리는 한 달 된 쥐 (자료 테이블)에 특정 크기 (길이, 4 m m 외부 직경, 3.5 m m 내부 직경 6 m m)의 실리콘 링을 사용합니다. 링의 다른 크기 테스트 하 고는 회장에 최적의 막힘을 만들기 위해 다양 한 크기의 마우스 사용 한다. 또 다른 주요 요소는 소장에 링의 위치입니다. Ileocecal 밸브, 가까운 회장 튼튼하게 부분 장애물을 생성 하기 위하여 반지를 최고의 장소입니다. 공장 등 ileocecal 밸브에서 회장의 다른 지역, 다른 지역의 비슷한 반지 비7을 유도 하기 위하여 그들에 배치 했다. 그러나, 높은 복 막 액체에 의해 윤 활 되 고 내장의 serosal 표면으로 인해 내장의이 부분에 쉽게 배치 하는 반지 배설물 소재를 밀어 내장의 수축 성 힘 때문에 이동 합니다. 로 링 내장의 길이 눌러졌는지, 그것 mesenteric 동맥 출혈을 일으키는 내장의 myenteric 지역으로 innervated 잘라냅니다. 이동에서 막을 물리적으로 반지 ileocecal 밸브 옆 회장의 끝에 삽입 될 때 맹의 부피가 본래 더. 맹 수 수 쉽게 있으며 회장 인접 콜론에 연결 하는 맹으로 ileocecal 밸브 지역 찾을 위해 수술에서 복 부를 꺼내. 회장 및 콜론 맹에 연결 된 아주 유사 하 고 반지는 회장 대신 근 위 결에 실수로 놓일 수 있다. 반지는 공장에도 본 인접 콜론에 잃어버렸던 했다 반지 아래로 밀 렸 다 고 일으키는 광범위 한 출혈 (그림 4C) mesenteric 동맥을 손상. 이 방치를 방지 하는 회장 해야 항상 수 제대로 있으며 반지에 배치 되기 전에 식별. 회장 결 맹 주머니의 한쪽에 실행 되는 동안 맹의 중간에 실행 됩니다.
이 포 수술 프로토콜 마우스에 대 한 주요 수술으로 간주 됩니다. 모든 수술 기구와 재료 사용 하기 전에 소독 해야 하 고 수술 전용된 수술 방 깨끗 한 환경에서 오염, 감염 그리고 염증 쥐에서 이어질 수 있는 최소화 하기 위해 수행 되어야 합니다. 또한, 수술 후 진통제는 마우스 제공 되어야 한다. 우리는 7-8 h22까지 효능 buprenorphine의 느린 릴리스 버전을 사용 하기로 결정 했습니다. 또한, 수술 후, 쥐 있고 어려움 씹는 단단한 음식을 삼 키는. 대 한 최대 5 일 후 수술, 쥐 해야 부드럽게 음식 (고체 다이어트 물 식품을 부드럽게에 추가의 비트와 함께)와 함께 제공 되며 5 일 후 정상 고체 다이어트로 전환.
우리의 장 포 수술 어떤 SMC, ICC, 장 방해에 대 한 vivo에서 비 모델을 제공 하 고 PDGFRα+ 세포는 비정상적으로 리 모델링. 이 포 모델 장 신경 포에 의해 수정 하는 방법 및 주요 모터 활동은23크고 작은 창 자 영향을 어떻게 이해 또한 이상적으로 적합 하다. 이 세포 병 적인 조건 뿐만 아니라 경작된 조건15,16에서 동적으로 모델링 될 수 있습니다. 그래서 쥐에서이 세포 (그림 2 및 그림 3) 작업 없이 정상적인 쥐 보다는 조금 다르게 행동 관찰 합니다. 대부분 장 방해 인간 복 부 유착 수술, 부드러운 근육 비 대3,,45,21로 이어지는 후 개발에 의해 발생 합니다. 등 수술 후, 우리는 또한 발견 하는 SMC, ICC, 및 PDGFRα+ 셀은 작은 창 자에서 약간 hypertrophic (그림 3)에 비해, 장 평활 근 비 대 유도 수 그 수술 자체를 제안. 이 경우 그래서 수술은 하지가 수술에 대 한 완전 한 부정적인 제어. 아니 등 뿐만 아니라 포 소장에 대 한 비교로 사용 해야 합니다.
요약, 우리 쥐 튼튼하게 장 장애물을 생성 하는 비용/시간 효과적, 안정적이 고 반복 가능한 포 수술 프로토콜을 발견 했다. 방해의 개발, SMC, ICC, PDGFRα+, 뿐만 아니라 신경 세포는 동적으로 리 모델링 다양 한 조직 레이어 및 로케일. 이 비보에 방해 모델에서 발생 하는 어떻게 phenotypic 변경의 우리의 지식에 새로운 통찰력을 제공 세포 수준에서 창 자 방해.
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Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
저자 벤자민 J Weigler, D.V.M., 박사에 게 감사 하 고 월트 맨 더 빌, 그들의 우수한 동물 서비스에 대 한 D.V.M. (동물 자원 및 캠퍼스 참석 수 의사, 네바다 대학 리노)에 그들의 변호사 뿐만 아니라 쥐 제공 수술 절차입니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Surgical drape | Medical and veterinary supplies | SMS40 | 40”X100 yards |
| Underpad, econ, pro plus | Medical and veterinary supplies | MSC281224 | 17x24” |
| Iris scissors | Braintree scientific, Inc | SC-i-130 | |
| Iris scissors | Vantage | V95-304 | |
| Dumont electronic & jeweler tweezers | Dumont | 98-180-3 | |
| Braided absorbable suture | Covidien polysorb | SL-5687G | 5-0, polyglactin |
| Nylon non-absorbable mono filament | AD surgical | S-N618R13 | 6-0, nylon |
| Surgical blade | Dynarex | No.15 | |
| Needle holder | Jacobson microvascular | 36-1342TC | 8.5 inch |
| Scalpel handle | Flinn scientific | AB1049 | |
| Microsurgical scissor | WPI | 503305 | |
| Petrolatum ophthalmic ointment | Puralube VET | 3.5 g | |
| Fluriso (isoflurane) | Vetone | V1 502017 | 250 ml |
| Steri-strip reinforced skin closure | 3M | R1547 | |
| Surgical gloves | Medline | MSG2270 | |
| Ear loop face mask | The safety zone | RS700 | |
| Avant gauze non-woven sponges | Caring | PRM25444 | |
| Surgical cup | Admiral craft OYC-2 | 725-A42 | 2.5 oz |
| Swabstick | ChloraPrep | 260103 | 2% w/v Chlorhexidine Gluconate (CHG) and 70% v/v Isopropyl Alcohol (IPA) |
| Cotton tipped applicator | Puritan | 806-WC | |
| Buprenorphine | Zoo pharm | BZ8069317 | 1 mg/ml |
| Gentamycin sulfate | Vetone | G-6336-04 | 100 mg/ml |
| Fast acting gel cream remover | Veet | 8111002 | |
| Syringe | AHS | AH01T2516 | 1 ml with needle |
| Silicon ring | VWR | 60985-720 | 6 mm in length, 4 mm exterior diameter, 3.5 mm interior diameter |
| C57BL/6 mice | The Jackson Laboratory | 4-6 weeks old |
References
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