Summary
Мы представляем простой и надежный протокол для измерения содержания железа в тканях растений, с помощью метода колориметрические лазурь.
Abstract
Железо, один из самых важных микроэлементов в живых организмов, участвует в основных процессов, таких как дыхания и фотосинтеза. Содержание железа является довольно низким во всех организмах, равнозначно примерно 0,009% от сухого веса в растениях. На сегодняшний день, один из наиболее точных методов для измерения концентрации железа в тканях растений является пламя атомной абсорбционной спектроскопии. Однако этот подход является длительным и дорогостоящим и требует специального оборудования, не встречаются в лабораториях завода. Поэтому необходима более простой, но точный метод, который может использоваться регулярно. Колориметрический метод лазурь регулярно используется для качественного железа, пятнать в гистологических срезах животных и растений. В этом исследовании мы адаптировали лазурь, метод для количественных измерений железа в табачных листьев. Мы проверить точность этого метода, с помощью атомной спектроскопии и лазурь пятнать измерить содержание железа в том же образцах и нашли линейной регрессии (R2 = 0.988) между этими двумя процедурами. Мы заключаем, что метод лазурь для измерения количественных железа в тканях растений точный, простой и недорогой. Однако линейной регрессии, представленные здесь могут не подходить для других видов растений, из-за потенциального взаимодействия между образцом и реагент. Создание кривой регрессии таким образом необходима для различных видов растений.
Introduction
Железо (Fe) является важным микроэлементов во всех живых организмах. В растениях это важнейших микроэлементов1 из-за его участия в основных процессов, таких как биосинтеза хлорофилла, дыхание и фотосинтез. Высокое накопление ионов свободного железа вредно для растительных клеток за счет реакции, ведущие к освобождению свободных радикалов, вызывая оксидативного стресса. Для поддержания гомеостаза железа в растительной клетке, ионы хранятся в вакуоли и поглощенных внутри ferritins, белок клеток, непосредственно участвующих в Железный гомеостаза2 и структуры основного хранения железа во всех живых организмах. В то же время железо дефицитной анемии затрагивает значительную долю населения, привело растущую потребность растений рекомендовавшая Fe. Благодаря уникальным свойствам растений ферритина обогащение пищи с ферритина железом предлагает перспективные стратегии для борьбы с этой проблемой недоедания3.
Ионы железа, главным образом в двух окисления, а именно черных (двухвалентной Fe2 + или железа (II)) и железа (Fe трехвалентного3 + или железа (III)) формы. Несколько других форм железа, например кластеров железа4, также находятся в клетках. FE хранится в виде оксида железа в клетки и естественно форм hematites (Fe2O3) и ferryhidrites ((Fe)3 +2O3•0.5 H2O) при физиологических условиях5. Гидроксиды, сформированные в этих реакциях, особенно железа форме, имеют очень низкую растворимость. Удержание железа поэтому зависит от рН раствора и в значительной степени в твердом состоянии выше рН 5-6.
Учитывая плохая растворимость и высокая реакционная способность Fe ее передачи среди растительных тканей и органов должен быть связан с подходящим хелатирующий молекул. Кроме того необходимо контролировать его редокс государств между черной и железа формы1 . В листьях около 80% железа находится в фотосинтезирующих клеток, из-за ее существенную роль в транспортная система электронов, в биосинтезе цитохромов, хлорофилл и других молекул гема и в формировании Fe-S7кластеров. В случае железа избыток в ячейке излишек является перемещен в вакуоль, где Металл хранится в ферритина молекул8.
Железо может измеряться в тканях растений на несколько методов, включая пламени атомной абсорбционной спектроскопии9 (ФААС) или колориметрический анализов10, бывший, будучи гораздо более точным, чем последний. ФААС это очень точная техника, которая позволяет одному определить химический состав выборки на основе электромагнитного излучения отдельных элементов. ФААС преобразует ионов металлов в атомной государствам, пламя Отопление образца, привело к Ион возбуждения и выбросов определенной длины волны, когда данный Ион возвращается в состояние земли. Выбросы из различных ионов разделенных монохроматора и обнаружен датчик поглощения11. ФААС таким образом служит для непосредственно количественного определения концентрации железа. Другие методы для визуализации железа в биологических тканях доступны, однако. Индуктивно связанная плазма масс-спектрометрия (ИСП-МС)12 является очень точный метод измерения железа и других микроэлементов, но отсутствие оборудования, как для ФААС и ИСП-МС, является общей проблемой. С другой стороны измерения железа тиоцианат колориметрии13 недостает точности и не удается обнаружить небольшие вариации между выборками. Прусский синий окрашивание,14,,151617 это косвенный метод, основанный на реакции железа Ферроцианид калия (K4Fe(CN)6) с катионов Fe, производство сильный синий цвет и используется для обнаружения качественной железа в гистологических срезах тканей животных и растений.
Металлические (нулевой Валент) железо является редким в литосфере. Доминирующей не complexed ионной форме железа в окружающей среде основном диктуется количество кислорода в окрестностях, с будучи относительно более обильные в анаэробной среде черных и железа чугуна, преобладающая в аэробных сайтов. Эта последняя форма также является доминирующей в крайне-кислых средах, хотя возбудители черных железа окисления часто отличаются в анаэробных и кислой окрестности18. Когда железа солюбилизирован в 4% HCl (рН 0) в аэробных условиях, большая часть разреженных железа существует как железа (Fe)3 +19,20.
Реакции между ионами Fe и K4Fe(CN)6 являются следующие:
FE3 +: FeCl K4Fe(CN)6 +3 = KFe(III)Fe(II)(CN)6¯ + 3KCl
FE2 +: 4 FeCl2 + 2 K4Fe(CN)6 =4(Fe(CN)6) Fe2 + 8 KCl
В настоящем исследовании мы спросили ли Прусский голубой окраски может быть полезен для измерения уровня железа в растворе.
Первоначально мы проверили корреляции между концентрацией Fe в водном растворе и прусского синего окрашивания. Концентрация в водных растворах Fe (как FeCl2, FeCl3 или 1:1 смесь двух) был измерен атомной спектроскопии и поглощения (OD) после добавления лазурь. Рисунок 1 показывает кривые линейной регрессии для измерений, полученных каждым методом. Мы пришли к выводу, что Прусский синий метод может использоваться для количественного анализа концентрации железа в растворе.
Рисунок 1: линейной регрессии между Fe концентрация измеряется ФААС и поглощения света (OD, 715 Нм) получены методом Прусский синий. Синие квадраты и линии представляют собой Fe2 + решение, красные квадраты и линии представляют собой решение3 + Fe и черные квадраты и линии представляют собой смесь 1:1 между Fe2 + и Fe3 +. Были получены следующие регрессии: [Fe2 +] = 3 + 123 x ОД, r = 0.996, R2 = 0.989; [Fe3 +] = 1 + 292 x ОД, r = 0,999, R2 = 0,997; и [Fe2 +/ 3 +] = 11 + 146 x ОД, r = 0.983, R2 = 0.956. Fe2 + доноров был FeCl2 и Fe3 + доноров был FeCl3. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Адаптировать колориметрические Прусский синий метод для анализа количественных железа растительных тканей, содержание железа табачных листьев пепел был измерен пламени атомной абсорбционной спектроскопии и Прусский синий окрашивания. Там была хорошая корреляция между результаты из двух методов.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. завод материал и условия роста
- Семян один табака (сорт Самсун) семян на 5 х 5 см горшок заполнены среднего стандарта горшок. Поместите горшки на поддоны. Растут растения в комнате роста в условиях насыщенного дня (16/8 h свет/темно) при постоянной температуре 23 ° c. Орошения с водопроводной водой до водостоков из горшка.
- После 50±5 дней Начните лечение Fe в ирригации, согласно концентрации подходит для эксперимента. Например мы использовали широкий спектр концентрации железа от 0 до 6 мм, дополнена растворимых хелатором Fe (Fe EDDHA). Поливать растения с подходящим решением каждые два дня (чтобы избежать обезвоживания) для 6-8 дней.
2. подготовка листья для измерения железа
Примечания: Все материалы, используемые должны быть бесплатно утюг с тем, чтобы снизить риск загрязнения железом. Очистить ступку и пестик дважды с 4% раствор HCl и высушить фильтровальную бумагу каждый раз перед использованием. Если повторно любой материал, очистить его дважды с 4% раствор HCl и высушить фильтровальную бумагу.
- Отсоедините листья от ствола вручную, используя перчатки (не использовать любое оборудование, металлические). Используйте около 10 г листьев (свежего веса) для каждого образца. Очистите каждый лист с двойной дистиллированной воды (DDW), используя распылитель. Этот шаг важен избежать загрязнения Fe.
- Сухие листья на бумажное полотенце и положите их в бумажный пакет. Передавать бумажные мешки в духовке при постоянной температуре 80 ° c на 2-3 дней.
- При сухой, раздавить листья порошок, используя ступку и пестик и передачи для стерильных 15 мл пластиковых труб.
3. сожжение листья ясеня
Примечания: Использование низкого pH (ближе к 0) раствор HCl предназначен для повышения растворимости железа. Минеральная вата используется для предотвращения побега флакона во время сжигания газов.
- Весят новый, запечатанном 20мл флаконе сцинтилляционные без его крышкой. Обратите внимание на значение или задать значение ноль с помощью кнопки тары. Добавьте измельченные сухие листья (образец) флакон.
- Взвесить образец и контейнера и обратите внимание на значение. Закройте флакон с ватой.
- Весят 3 дополнительных флаконах без добавления образцов и запишите их значения. Эти пузырьки будут использоваться как элементы управления для оценки объема минваты, что могло бы вызвать любое увеличение веса пробы.
- Поместите образец и контроля ампул в печи и начать запись, используя следующие шаги температуры: температура в помещении, быстрый рост за 4 часа до 425 ° C и, наконец, 425° C. К этому времени сухие листья будет превратились в пепел.
- Пусть прохладно образцы около 100 ° c, но не ниже этой температуры для следующих двух шагов избежать влажности, которые могут повлиять на окончательный вес образца. С помощью тяжелого перчатки, удалите образцы из печи с помощью пинцета, держа флакон внешне.
- Поместите флаконов на плоскую поверхность, удалить минеральной ваты и закрыть флаконы с их оригинальной крышками.
- Весят 3 управления флаконы (см. 3.3) и вычислить их средний прирост веса. Если увеличение веса равна или выше 1% массы золы (см. шаг 4.2), это значение используется в качестве оценки погрешности измерения.
4. Подготовка пепла для измерения железа
Примечания: Концентрация окончательный железа в первоначальной выборки вычисляется как вес пепла, разделенных добавлен объем HCl.
- Приготовляют раствор HCl 1 M (4% HCl), добавив 12,5 мл Стоковый раствор HCl 37% до 87,5 мл DDW (в пластиковые или стеклянные колбы).
- Взвешивать 15 мл пластиковую трубку и обратите внимание на значение или задать значение ноль с помощью кнопки тары. Перенести прах на трубу, весят и обратите внимание на значение. Это вес золы.
- Добавьте 5 мл 1 M HCl в пепел. Через 22 мкм фильтр фильтр пепла и добавить еще 5 мл 1 М HCl через тот же фильтр.
- Окончательный объем должен быть 10 мл. Обратите внимание, что часть решения будет потеряно в фильтре.
Примечание: Образцы теперь готовы для Fe измерения ФААС либо методом лазурь. - Сделать калибровочной кривой с Fe концентрация измеряется атомная спектроскопия и Прусский синий методом (см. Рисунок 4) для каждого вида растений. Впоследствии Fe концентрация может быть измерен только метод Прусский синий.
5. измерение концентрации Fe, ФААС
- Удалите из каждого образца для измерения, ФААС 4 мл.
- Разделите результаты, полученные от ФААС измерения веса пепла. Разделите полученное значение на 0,01 (потому что пепла были солюбилизирован в 10 мл). Полученное значение является концентрация железа на грамм золы (ppm).
6. Подготовка лазурь, окрашивание раствора
- Подготовка 4% Прусский синий раствор путем добавления 4 g K4Fe(CN)6 до 100 мл DDW и вихревые (другие тома или концентрации может использоваться для различных требований). Следует отметить, что в этом исследовании, менее концентрированный раствор Прусский синий, чем сообщалось ранее (20%)14 .
- Держите решение в темноте при температуре 4 ° C до использования. Решение является стабильным за 6 месяцев при хранении в таких условиях.
7. Создание Калибровочная кривая для метода лазурь, использованием ФААС результаты
Примечание: Рассчитайте концентрации железа в пепел, по следующей формуле
Уравнение 1
C: концентрация, объем образца V:, W: золы вес (г).
- Смешайте 0,50 мл раствора Прусский синий и 0,50 мл 1 M HCl. Это будет служить пустое решение.
- Перемешать 0,5 мл образца (пепел в 4% HCl, как описано в разделе 3) и 0,5 мл раствора (шаг 6.1) прусский Синий, закупорить. Подождите, по крайней мере 1 минута, но не более 5 минут. После 5 минут будет происходить седиментации в образцах.
- Передача смеси в кювет и измерить ОД на 715 Нм, используя спектрофотометр. Обратите внимание на значение.
- Разделите значение OD (шаг 7.3) масса золы (шаг 3.2) образца. Результат представляет собой ОД за грамм золы.
- Участок линейной регрессии между концентрации железа, полученных из ФААС измерениях (ось Y) и ОД значения (ось X). Используйте результаты, полученные в пунктах 5.2 и 7.4. Вычислить формулу регрессии Y = a + bX, где Y представляет концентрации железа, представляет поглощения пересекаются, b представляет собой поглощение склона и X представляет ОД.
8. использование метода лазурь для определения уровня железа в других образцах из того же типа растений
Примечания: Поскольку калибровочной кривой уже создана для этого вида растений, концентрации железа в любых новых образцов из того же типа растений могут быть непосредственно рассчитаны с использованием формулы линейной регрессии.
- Выполните шаги в разделах 3 и 4, а затем шаги 7.1-7.4.
- Рассчитайте концентрации железа в растворе с использованием формулы, полученные от линейной регрессии (шаг 7.5).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Когда этот протокол осуществляется правильно, один должен получить отличную корреляцию между результаты, полученные методами Прусский синий и атомной спектроскопии. Таким образом метод Прусский синий может легко использоваться для получения точного измерения концентрации железа в образцы растений, как это отражено в следующем эксперименте.
Заводы табака выращивается как описано в протоколе и орошается водой, содержащей различные железа концентрации (0, 1, 2, 3, 4, 5 или 6 мм) более 7 дней. Растения были затем собирают, очищается и высушивается в течение 3 дней на 80 ° C. Следующие шаги (т.е., от шага 2.3) Протокола соблюдались как описано. Так как флаконы управления показал вариант менее чем 1% от массы золы, это значение не был добавлен для дальнейших расчетов.
Концентрация железа был измерен ФААС. Таблица 1 показывает представитель результаты таких измерений. Данные, полученные из 21 образцов (7 концентрации в 3 реплицирует) были использованы для создания калибровочной кривой.
| Лечение (мм железа в ирригации) | Завод | Концентрация железа в раствор HCl (ppm) |
| 0 | A | 7.1 |
| 1 | B | 16,6 |
| 2 | C | 23.4 |
| 3 | D | 31,2 |
| 4 | F | 47,4 |
| 5 | G | 50.7 |
| 6 | H | 41,6 |
Таблица 1: Концентрация железа в растворах золы табака листья из растений, орошается водой, содержащей уровни различные железа.
Концентрация железа в золе упомянутых выше 21 образцов была рассчитана с использованием значений, полученных путем ФААС (см. Примечание в шаге 7). Результаты показали, что концентрация железа в воде орошения сильно зависит содержание железа листа (рис. 2).
Рисунок 2: эффект железа поставляется в орошения на концентрации железа в табачных листьев. Бары представляют стандартных отклонений (n = 3). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
В предварительных эксперимент (не показан), были измерены спектры поглощения растворы, содержащие различные концентрации Fe2 + и Fe3 + и лучшие пик был получен в 715 Нм. Все спектры образцов 21 были также протестированы с методом Прусский синий. Было ясно, что поглощение в 715 Нм был также оптимальной длины волны также здесь (рис. 3). Соответственно эта длина волны был использован в всех экспериментов.
Линейной регрессии кривая был заговор между значения концентрации железа, полученная ФААС и поглощения (OD) значения, полученные с помощью метода Прусский синий для образцов, представленных на рисунке 3 (рис. 4). Были получены следующие регрессии: [Fe] = 0,32 + 25,3 x ОД, r = 0.994 и R2= 0.988.
Рисунок 3: спектры поглощения волны табака пепла смешанного с Прусский синий решение, как описано в протоколе. Спектры волны были разделены концентрация пепла. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 4: линейных регрессий Fe концентрации пепла табака измеряется ФААС и поглощения света (OD, 715 Нм) получены методом лазурь. Были получены следующие регрессии: [Fe] = 0,32 + 25,3 x ОД, r = 0.994, R2= 0.988. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Полученные линейной регрессии теперь может использоваться для новых образцов из того же типа растений, как указано в шаге 8.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Измерения железа в тканях растений очень важно для оценки влияния орошения или других экологических условий. Здесь мы описали, легкой и точной колориметрический метод для Fe содержимого измерения в табачных листьев, которые могут быть легко адаптированы для других видов растений и тканей.
В оптимизации условий для колориметрического метода, мы использовали низкий рН среды (рН < 1.0) чтобы растворимость железа. Процесс горения была проведена освободить всех форм железа и обеспечить, что нет загрязнений, присутствующих в образцах будет изменять результаты. Что касается загрязнения железа, следует иметь в виду, что 6,7% земной коры состоит из оксида железа видов (FeOn)21 и что их концентрация может достигать 0,009% завод сухого веса22. Таким образом следует учитывать риск загрязнения, поскольку пыль, который может содержать как 3-7% железа (в зависимости от региона)23, может значительно повлиять на результаты. Это также необходимо тщательно проверить содержание железа все оборудование, используемое в эксперименте и принять все необходимые меры предосторожности, чтобы избежать загрязнения. Рекомендуется очистить все оборудование, которое было при контакте с воздухом или который используется повторно в эксперименте с 4% раствор HCl. Следует полностью избегать использования любых металлических инструментов, таких как ножницы или ложки, вместо заменены стекла или пластика версий. Важнейшие шаги, чтобы избежать загрязнения железа были выделены в шагах 3.1 и 4.1, например.
Неспособность получить сигнал от образца может произойти из-за проблем, возникающих на различных этапах в протоколе. В этом случае рекомендуется проверить против решения с известным железа концентрации реагентов. Если проблемы сохраняются, свежие Прусский синий Реагент должен быть подготовлен. Следует стандарт, однако, показывают сигнал, это означает, что концентрация железа в примере ниже порога определения и что образец должен быть более концентрированным. Большие различия между реплицирует может вытекать из железа загрязнения и потребует использования новых образцов.
Калибровочные кривые должны создаваться каждые шесть месяцев или используется каждый раз, когда новый пакет Прусский синий реагента. Первоначальный Калибровочная кривая должно быть revalidated путем измерения содержания железа в по крайней мере 6 образцов и подтверждает, что до сих пор точной линейной регрессии. В калибровочных кривых важно для получения значений рядом + 1 или -1 для r (коэффициент корреляции) и недалеко от 1 для R2 (коэффициент детерминации)24,25,26. В то время как идеальная линия будет иметь значение R2 = 1, большинство значений R2 над 0,95 являются приемлемыми для калибровочных кривых.
Ограничения протокола включают тот факт, что видов и различных растительных тканей может показать различные корреляции кривых с помощью описанных процедур для определения концентрации железа. Поэтому рекомендуется для выполнения пилотного тестирования для обеспечения точности кривой корреляции для данного эксперимента. Чтобы использовать кривую для полученных результатов, недавно измеряемых ОД следует заменить в формуле Y = a + bX. В данном случае, используется следующая формула: [Fe] = 0,32 + 25,3 x ОД.
Другое ограничение возникает из необходимости довольно большое количество растительной ткани. Это можно обойти в некоторой степени адаптации HCl объем, используемый для растворения пепла (см. шаг 5.3) с тем, чтобы получить соответствующий сигнал. Тем не менее метод, описанный здесь является хорошим вариантом, если дорогостоящего оборудования, например, использоваться для ICP-MS, или доступ к ФААС не доступен или многочисленные образцы же видов растений должны быть проанализированы.
Возможные дополнительные приложения метода Прусский синий как системы обнаружения железа включают количественные железа обнаружение любых органических материалов, которые могут быть доведены до пепла, а также в неорганических веществ, таких как почвы.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют ничего сообщать.
Acknowledgments
Эта работа была поддержана Израиля Министерства науки, технологии и Spaceand грант от главного ученого израильского министерства сельского хозяйства (#16-16-0003).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Potassium Hexacyanoferrate(II) | Fisher Chemical | 14459-95-1 | Reagent for the Pussian Blue |
| Millex Syringe Filter Unit, Vial Vent 0.22 μm | Millec | SLGP033RS | Filter used to filter the ashes + 4% HCl Solution |
| Scintillation Vials | Fisherbrand | 03-337-4 | Used to keep the dry powdered plant material during the burning procedure. |
| Disposable Syringe 10 ml | Medi-Plus | 1931 | Syringe used during the filtration |
| Hydrochloric acid | Sigma-Aldrich | 231-595-7 | Used in the 4% HCl solution to dilute the ashes and clean the materials |
| Tobacco, Nicotiana tabacum cv. Samsun NN | Obtained from Prof. Simon Barak and routinely used in the Zaccai Lab | Barak S, Nejidat A, Heimer Y, Volokita M. Transcriptional and posttranscriptional regulation of the glycolate oxidase gene in tobacco seedlings. Plant Molecular Biology. 2001 Mar 1;45(4):399-407. | Tobacco cultivar used in this protocol |
| Glass Wool (Rock Wool) | Sigma-Aldrich | 659997-17-3 | Used in the procedure of burning samples in the furnace. |
References
- Kobayashi, T., Nishizawa, N. K. Iron uptake, translocation, and regulation in higher plants. Annual Review of Plant Biology. 63 (1), 131-152 (2012).
- Bradley, J. M., Le Brun, N. E., Moore, G. R. Ferritins: Furnishing proteins with iron. Journal of Biological Inorganic Chemistry. 21 (1), 13-28 (2012).
- Zielińska-Dawidziak, M. Plant ferritin - a source of iron to prevent its deficiency. Nutrients. 7 (2), 1184-1201 (2015).
- Johnson, D. C., Dean, D. R., Smith, A. D., Johnson, M. K. Structure, function, and formation of biological iron-sulfur clusters. Annual Review of Biochemistry. 74 (1), 247-281 (2015).
- Guo, H., Barnard, A. S. Naturally occurring iron oxide nanoparticles: morphology, surface chemistry and environmental stability. Journal of Materials Chemistry A. 1 (1), 27-42 (2013).
- Hem, J. D., Cropper, W. H. Chemistry of iron in natural water. Report US Geological Survey. , 1-31 (1962).
- Rout, G. R., Sahoo, S. Role of iron in plant growth and metabolism. Reviews in Agricultural Science. 3, 1-24 (2015).
- Speretto, R. A., Ricachenevsky, F. K., Stein, R. J., de Abreu Waldow, V., Fett, J. P. Iron stress in plants Dealing with deprivation and overload. Plant Stress. 4, 57-69 (2010).
- Tautkus, S., Steponeniene, L., Kazlauskas, R. Determination of iron in natural and mineral waters by flame atomic absorption spectrometry. Journal of the Serbian Chemical Society. 69 (5), 393-402 (2006).
- Braunschweig, J., Bosch, J., Heister, K., Kuebeck, C., Meckenstock, R. U. Reevaluation of colorimetric iron determination methods commonly used in geomicrobiology. Journal of Microbiological Methods. 89 (1), 41-48 (2012).
- PerkinElmer. Atomic Spectroscopy - Guide to Selecting the Appropriate Technique and System. 16, (2011).
- Wachasunder, S. D., Nafade, A. Precision and accuracy control in the determination of heavy metals by atomic absorption spectrometry. Science. 58, 517-528 (2001).
- Woods, J. T., Mellon, M. G. Thiocyanate method for iron. A spectrophotometric study. Industrial & Engineering Chemistry Analytical Edition. 13 (8), 551-554 (1941).
- Perls, M. Nachweis von Eisenoxyd in gewissen Pigmenten. Virchows Archiv Fur Pathologische Anatomie Und Physiologie Und Fur Klinische Medizin. 39 (1), 42-48 (1867).
- Connorton, J. M., Jones, E. R., Rodriguez-Ramiro, I., Fairweather-Tait, S., Uauy, C., Balk, J. Altering expression of a vacuolar iron transporter doubles iron content in white wheat flour. bioRxiv. , 1-25 (2017).
- de la Fuente, V., Rufo, L., Rodríguez, N., Franco, A., Amils, R. Comparison of iron localization in wild plants and hydroponic cultures of Imperata cylindrica (L.) P. Beauv. Plant Soil. 418 (1-2), 25-35 (2017).
- Hsiao, P. Y., Cheng, C. P., Koh, K. W., Chan, M. T. The Arabidopsis defensin gene, AtPDF1.1, mediates defence against Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum via an iron-withholding defence system. Science Reports. 7 (1), 1-14 (2017).
- Johnson, D. B., Kanao, T., Hedrich, S. Redox transformations of iron at extremely low pH: Fundamental and applied aspects. Frontiers in Microbiology. 3, 1-13 (2012).
- Stumm, W., Lee, G. F. Oxygenation of ferrous iron. Industrial & Engineering Chemistry. 53 (2), 143-146 (1961).
- Jones, A. M., Griffin, P. J., Collins, R. N., Waite, T. D. Ferrous iron oxidation under acidic conditions - The effect of ferric oxide surfaces. Geochimica et Cosmochimica Acta. 145, 1-12 (2014).
- Hawkesworth, C. J., Kemp, A. I. S. Evolution of the continental crust. Nature. 443 (7113), (2006).
- Thompson, L. M. Soils and soil fertility. Louis, M., Troeh, F. R., Thompson, L. M. , (1973).
- Krueger, B. J., Grassian, V. H., Cowin, J. P., Laskin, A. Heterogeneous chemistry of individual mineral dust particles from different dust source regions: The importance of particle mineralogy. Atmospheric Environment. 38 (36), 6253-6261 (2004).
- Bewick, V., Cheek, L., Ball, J. Statistics review 7: Correlation and regression. Journal of Critical Care. 7 (6), 451-459 (2003).
- Asuero, A. G., Sayago, A., González, A. G. The correlation coefficient: An overview. Critical Reviews in Analytical Chemistry. 36 (1), 41-59 (2006).
- JoVE Science Education Database. Analytical Chemistry. Calibration Curves. , Journal of Visualized Experiments. Cambridge, MA. Available from: https://www.jove.com/science-education/10188/calibration-curves (2018).
