Summary
ここで外科的鶏腸内 '腸管結紮ループ' を作成するためのプロトコルを提案する.この手順は、複数ウェルシュ菌病原性上皮内の単一のホストでの比較のためことができます。このメソッドは、同様の生体内で実験に必要な通常の鶏の数を著しく減少します。
Abstract
壊死性腸炎は、様々 な生体内感染モデルを用いた鶏で調べた。これらのほとんどは、強制経口投与とウェルシュを使用してフィードを介して管理素因、コクシジウム症、ダイエットなどの組み合わせを使用します。これらのモデルで病原性の研究複数C. ウエルシュ菌の比較多数の重要な結果を取得するホストが必要です。研究の過程で死亡は、それゆえ研究における動物福祉に関する倫理的な問題を上げる実験的モデルによって高ことができます。発症機序は、まだ統計的に重要かつ有効な結果を提供することを勉強するより少ない動物を必要とする新しい感染症モデルの開発研究における動物の使用量の削減に重要です。腸管結紮ループ モデルは、マウス、ウサギ、牛など様々 な種のクロストリジウム感染症の研究に使用されています。手術結紮ループ セグメントを作成するのには、以下のC. ウエルシュ菌は細菌と粘膜の間の密接な接触を確立するループに直接注入されます。小腸と内容のサンプルは、プロシージャの終了数時間後で撮影されます。複数菌株は、実験に必要な科目数を減らし、それぞれの動物に接種することができます。また、動物の痛みを軽減する麻酔下で手順を実行します。鶏、このモデルが少ない動物が必要なため、素因が、病気を誘発する必要はありません、鎮痛薬によって痛みを制御C. ウエルシュひずみ病原性を比較する経口投与よりも適切だろう.腸管結紮ループ モデルは鶏で不完全に記述されて、標準化はその最適な使用のために不可欠です。この原稿鶏で多数の腸管結紮ループを作成するすべての必要な手順を提供し、については有効な結果を得るための重要なポイントをもたらします。
Introduction
人間や動物に影響を与える伝染病の研究の動物モデルの使用は規制を防ぐか、または治す疾患1戦略を詳しく説明として同様に特定の条件の病因病原因子を評価する上で中心的なツールです。様々 な疾患を勉強する動物モデルを使用して多数の利点、にもかかわらずこの実践に関する倫理的な問題が生じる。研究者は、重要かつ有効な結果を得ながら動物の使用を最小限に抑える必要があります。3 原則の Rs (置換、削減、リファイン) の概念は、福祉の問題はこのような試験に当たったように精緻化された.鶏壊死性腸炎の研究で鶏モデル生体内では、病因、予防、およびこの条件2,3,4、5の治療を調査するため使用されます。鶏7で壊死性腸炎を引き起こす病原性株C. ウエルシュNetB 毒素6などの特定の病原因子を運ぶを管理します。交換の原則は、したがって、これらの病原因子は他の動物種で重大ようにではないかもしれないこのようなケースで達成することは困難。鶏の壊死性腸炎のほとんどのモデルはコクシジウム症などの危険因子の組み合わせを使用し、 C. ウエルシュ2.の大規模な番号を含むスープ文化の強制経口投与に続いて壊死性腸炎を誘導するために食事療法を変更これらのモデルは多数、鶏の病気を誘発して死亡率はそのような試験の8、従って動物研究の削減・洗練の原則についての懸念を高める重要なすることができます。
腸管結紮ループ モデルに関して原則の削減、および洗練された腸内病原体による疾患の研究の望ましい代わりであります。これらのモデルで 'ループ' と呼ばれる腸管が病原体は、単独で9を注入することができます独立して気密区画を形成するため腸管に沿ってまたはワクチン候補など、他の分子との合字を配置することによって作成されます。10,11. 興味の病原体が腸の細胞と連絡を密に配置され、感染時間の数時間後腸サンプルを詳しく分析するためリカバリできます。これは同じ動物の複数の治療とコントロール グループを使用できます。繰り返し測定モデルをグループ間の差別の力を増加し、経口試験と比較して必要な鶏の数が減ると統計分析を実行できます。また、継続的な全身麻酔と鎮痛、それ故に動物の痛みを最小限に抑える手術とその後の感染の時間を実行します。閉ループをホスト番号を減らすと動物研究のより慈悲深いシステムを作成するための理想的なテンプレートです。
腸管結紮ループ モデルは子牛、ウサギ、マウス2,9などの様々 な種でも説明されているが、あまり鶏7で記述。この手術モデルの最適な利用、適切な技術と実行は、腸内の整合性への損傷を避けるために結紮腸管ループの作成に不可欠です。この原稿の目標は、鶏モデルで複数の腸ループの作成のステップ バイ ステップ方法について説明することです。この手法は、正確な手順は、プロジェクトの成功に不可欠な外科医の経験と技術によって制限されます。
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Protocol
生きている動物の使用をすべてのプロシージャはユニヴェルシテ ドゥ モントリオール獣医医学部倫理委員会によって承認された (CÉUA, 'Comité d' éthique デ l'utilisation デ Animaux')。
1. 手術前に、の考慮事項
- 10 週齢特定病原体無料 (SPF) レグホン鶏、手術を選択します。
注: 自分の体重は 1.0 と 1.2 キロの間ある必要があります。 - フィード腸管を空にする手続き前 12 h を撤回します。
- 手術前に麻酔科医によって検証プロトコルに続く全身麻酔下鶏を配置します。それぞれの鶏のミダゾラムの投与 (IM) と手術前に 15 分を premedicate 1 mg/kg、ブトルファノール 4 mg/kg。すべての 4 h、ブトルファノールの注入を繰り返します 4 mg/kg IM または麻酔中の呼吸パターンの変化と頻度が増えたとき。全身麻酔のためすべてのプロシージャの間に 1.5 と気管内チューブと 2.5% の濃度でイソフルランを管理します。
注: 彼らが大幅麻酔深度を向上させる、すべてのプロシージャの間に必要な麻酔薬の量を減らすだけでなく痛みのレベルを制御する研究者を有効にすると、鎮静と鎮痛のため麻酔前投薬の使用はお勧めします。 - 体温、心拍数、心電図 (ECG) 呼吸速度とリズム、酸素飽和度、有効期限の切れた二酸化炭素 (CO2) と神経反射を記録することによって麻酔を監視します。
注: すべての手順にこれらのパラメーターを監視する人を割り当てる必要があります。 - 不妊手術の手順全体において原則に従ってください。外科医とアシスタントの外科医ドレス滅菌ガウン、手袋、マスク、保護メガネ機関術前プロトコルに従ってを確認します。外科医が爪と各指表面を中心に肘までクロルヘキシジン含浸グルコン酸滅菌ブラシと手をスクラブを確認します。
- 殺菌剤で手術器具を滅菌します。
2. 手術部位の準備
- まず、穏やかなトラクションと腹部から羽を手動で削除します。
- 洗剤含浸滅菌ブラシをごグルコン酸クロルヘキシジンで手術部位をスクラブします。5 分の合計接触時間の中心に戻ってくることがなく外にセンターから肌をやさしくスクラブします。
- クロルヘキシジン ・ グルコン酸ソリューションとイソプロピル アルコール滅菌ガーゼを使用して手術部位で 3 代替通路を実行します。
注: 通路は、非消毒エリアから手術部位の汚染を避けるためにボーダーに手術部位の中央から開始する必要があります。 - 鶏に滅菌手術用ドレープを配置します。
3. 腹腔内から小腸の抽出
- 手術部位の皮膚のみを公開するハサミで手術用ドレープを切開します。
- #3 のメス刃で「L」形低正中線切開を実行することによって皮膚を切開します。
- 1 cm に胸骨尾側の最初の切開を開始および頭蓋腔に 1 cm で終了します。
- 最初の切開に垂直な 2 つ目の切開を行います。最初の切開の尾側端から開始し、骨盤ラインに従うことによって腹部の左側に 5 cm を継続します。
注: この開口部は腸の簡単抽出は、フラップを作成します。
- 手術ハサミ、腹膜と腹腔内を開く同じ 'L' の形状パターンと腹部の筋肉をカットします。
注: これは気嚢が公開されます。腸はこれらの構造の下に位置しています。気嚢は、乾燥と、プロシージャ全体が大きく破裂を避けるために滅菌生理食塩水 0.85% で飽和したガーゼで加湿する必要があります。 - あかんべーを卵巣摘出する挿入は左の腹部壁に従うことによって腹腔内でフックし、腹部の空気嚢の周りのように動作します。
- 優しく腸を外在し、手術野のこれらを広げなさい。
注意: 腸プロシージャ全体で滅菌生理食塩水 0.9% を頻繁に噴霧して加湿します。また、ガーゼ滅菌生理食塩水で加湿は、乾燥を避けるために腸に配置できます。 - 乾燥滅菌ガーゼを使用して腸をつかんで、空腸を公開する徒手による牽引で小腸をそっと引き出します。
注: 腸間膜血管は壊れやすい、過度の緊張が破裂して腸虚血病変につながる可能性があります、プロシージャの結果を非常に妥協します。
4. 腸ループの製作
- 第 1 のループを作成します。
- 主要な腸間膜血管の結紮を避けることによって、近位空腸に polyglactin マルチ フィラメント合成吸収性材料と単純な合字を配置します。
- 近位の合字から 2 cm 遠位合字を配置します。
注: マルチ フィラメント縫合糸で作られたシンプルな合字は、ハーメチックのセグメントを作成する腸管に沿って配置されます。スキーマ (図 1) では、すべての合字の場所について説明します。ループは 2 cm で区切られた近位と遠位の合字から成っています。
- Interloop 第 1 を作成します。
- シンプルな合字ループ no.1 の遠位の合字へ aborally 0.5 cm を配置します。
注: 連続したループ間ループ間の物理的な分離セグメントすなわち1 cm の interloops があります。1 つのループから別への交差汚染のリスクの可能性を減らす可能性が高い、シンプルな合字は interloop (2 隣接するループの遠位と近位の合字から 0.5 cm) の中央に配置されます。これは隣接するループの合字に到達するループから、流出した汚染物質のリスクを低減します。これらのセグメントは必須ではありませんが、交差汚染のリスクを減らします。
- シンプルな合字ループ no.1 の遠位の合字へ aborally 0.5 cm を配置します。
- 次のループと interloops を作成します。
- 4.1 と 4.2 必要なループの数を取得する手順を繰り返します。
注: この実験で 9 ループと 8 interloops 作成されました。全体の長さは 26 cm に達した。ループの数は、研究によって調整できます。
- 4.1 と 4.2 必要なループの数を取得する手順を繰り返します。
5.ウェルシュ菌にはループの注入
- 滅菌注射器と針 26 G ループ no.1 で病原体を注入します。45 ° の角度で腸の対側に針をそっと挿入します。
注: この実験で中間ログ成長段階で 1 × 106 c. ウエルシュの CFU (コロニー形成単位) を含む脳心臓注入 (BHI) の 0.2 mL 各ループに注入しました。5 異なるループで 5 異なる菌株を投与、残りのループ 4 は細菌 (滅菌 BHI)、交互に病原体および滅菌 BHI ループが含まれていないネガティブ コントロールを注入しました。 - 5.1 すべてのループを挿入する手順を繰り返します。
- そっと背地区空気嚢の下に、腹腔内の腸管を置き換えます。
6. 腹部キャビティの閉鎖
- 腹膜と腹部の筋肉の縫合。
- Polyglactin マルチ フィラメント合成吸収性材料を用いた単純な連続縫合パターンを持つ腹膜と骨盤 (ステップ 3.3 製) に沿って腹部の筋肉を縫合します。
- 腹膜と腹筋胸骨腔を縫合 (手順 3.3。 polyglactin マルチ フィラメント合成吸収性材料を用いた単純な連続縫合パターンを持つ。
- 皮膚の縫合。
- Polyglactin マルチ フィラメントの合成材料と単純な連続縫合パターンを使用して、手順 3.2 骨盤に沿って皮膚の切開を閉じる。
- 同じマルチ フィラメント合材料と単純な連続縫合パターンを使用して、3.2 は、総排出腔に胸骨からの皮膚の切開を閉じる。
7. 結論
- 手術後感染時に動物の痛みを抑える鎮痛薬の適切な使用と全身麻酔下で鶏を維持します。適切な麻酔レベルを確保する麻酔監視を継続します。
- 目的感染時間後全身麻酔下頚部転位によって、鶏を人道的安楽死させます。
注: これらの手順C. ウエルシュ病原性系統の顕微鏡的病変を誘導するために必要な時間は 7 h だった。 - メスの刃は、#3、1 cm 長いループ セクションに 0.5 cm をカットし、10% ホルマリン固定一晩、さらに病理組織学的分析のためにそれを置きます。
- 同じメスの刃、残りのループのセクションをカットし、滅菌遠心チューブにおける各ループさらに細菌の遺伝学的解析のためC. ウエルシュ菌の分離のためにそれを置きます。
- すべてのループの間メスの刃を変更することによってすべてのループの 7.2 と 7.3 の手順を繰り返します。
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Representative Results
9 腸ループと 8 interloops の回路図は図 1に示します。このモデルで 9 ループと 8 interloops の合計は、単純な合字で作成されます。ループは、2 cm 近位の合字から測定間隔近位と遠位の合字で構成されています。2 つの隣接するループは、1 cm の interloop で区切られます。合字からの漏れによるループ間の交差汚染のリスクの可能性を減らすには、interloop の合字を遠位の字と 2 隣接するループの近位の合字から途中入れています。ループの数は、研究の要件に応じて調整できます。
図 1: 結紮腸管ループの略図。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 2A(HPS 染色) は、コントロールの生殖不能媒体を注入した腸管ループの顕微鏡の外観を示します。粘膜の刷子縁はそのまま、壊死] セクションで存在もないです。軽度渋滞セグメントの腸管の層 (粘膜、粘膜下層、筋層、漿膜) に存在します。図 2B(HPS 染色) は、粘膜壊死ウェルシュ養鶏場に壊死性腸炎の臨床例から回復の病原性株の投与 7 時間を示しています。絨毛のヒントも壊死腸絨毛先端を取り囲むと浸食し.絨毛の周囲壊死物質、大きな棒状の細菌群は、(矢印) が観察されます。これらの細菌はグラム陽性菌とトゥウォートの汚れ (図示せず) でさらに同定されました。この発見はウェルシュの多数の細菌によって分離と結合、病変がこの細菌によって引き起こされたことを示します。図 2(HPS 染色) は虚血性ループの組織学的病変を示しています病原性c. ウエルシュの注入に壊死を関連していない系統が悪いの結果実行手順。この倍率は、ウェルシュ菌により引き起こされる病変として誤って解釈される可能性があります重度の凝固壊死を示しています。ただし、このセクションで細菌は認められなかった。また、筋層の血管変性赤血球 (矢印) の多数の蓄積によって拡張されます。血管の輻輳を示す、この場合、混雑は腸間膜血管結紮によって引き起こされました。虚血性ループ簡単に識別できる肉眼的外科手術の時以下の重度の血管混雑漿膜はその通常のピンク赤着色ではなく濃い青色になります。
図 2: 病理組織学的所見 7 h 後感染。(A)壊死病変粘膜には病理組織学的の脳心臓注入 (BHI)、無菌培養の培地を注入します。(B) ウェルシュ菌の病原性株を注入、ループであるされて粘膜の壊死粘膜をカバー多数大グラム陽性桿菌菌。(C)虚血病変C. ウエルシュによる壊死斑のようにすることができます。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
本研究ではループは (BHI) 培地滅菌コントロールまたはウェルシュ影響を受ける様々 な抗生物質フリー鶏の群れからや壊死性腸炎12 ではなく回復の 5 つの異なる系統の 1 つを注入しました。.10 鶏は、この研究で使用されました。菌株の病原性は、病変粘膜に壊死性腸炎と互換性が繰り返し発生する能力に基づいて決定でした。系統 7 h 後感染株粘膜壊死を引き起こす能力を示した壊死性腸炎の臨床例から回復回復から臨床的に健康な鶏農場は粘膜壊死を誘発しなかったし、粘膜は正常に似ていたBHI12注入制御ループからの調査結果。同じ動物の多数のループを使用して、5 つのC. ウエルシュ菌と 4 つの制御ループは同じ鳥で使えます。
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Discussion
腸管ループのモデルは、宿主-病原体相互作用やウェルシュクロストリジウム ・ ディフィシルなどさまざまな腸内病原体によって引き起こされる病気の病因を研究する多くの種に記載されています。サルモネラ7,9,13,14,15。それはまた粘膜免疫応答16、腸疾患10 を防ぐワクチン候補者を評価する腸内病原体11によって排泄される細菌の毒素を中和する抗体の有効性を分析するために使用されています.ただし、単一の個々 の動物で多数結紮ループを使用してこのモデルは鶏で不完全に記述されて、この手法の標準化が偽の結果や誤解につながる可能性があります不適切な操作として有効な結果を取得するために必須.この原稿は、空腸および回腸鶏の消化管にある 9 連続結紮ループの作成を示します。本研究では、1.0 と 1.2 キロの間の重量を量る男性特定病原体無料 (SPF) レグホンが使用されます。小腸の 26 cm を簡単に体腔の空洞から体外する可能性がありますので、この重量でこの品種によって許可されているループの最大数は 9 をだった。別の品種および/または重いレグホン オス鶏を使用して、作成ループの合計数は異なる、9 よりも高いをされることがあります、それは除外されません。腸ループの長さも変更可能性があります、しかし、2 cm の長さは使用可能な腸の長さの最大容量を使用している間病理学的および細菌学のサンプル収集を許可するが最適と考えられていた。
この資料に記載されている腸管結紮ループ法はウェルシュ菌により引き起こされる鶏の壊死性腸炎の研究に利用可能な現在のモデルに貴重な代替をすることができます。前の記事12で説明した結果によると 10 鶏と 5 c. ウエルシュ菌の評価はc. ウエルシュの高病原性と共生の系統を区別するために十分だった。比較では、同じ結果を取得する個人の数が多い必要C. ウエルシュと壊死性腸炎を再現するos ごと接種を使用して他の感染モデルになります。文学、鳥の数がグループ17,18,19グループ20あたりのホスト数百にあたり 30 鶏 10 からC. ウエルシュ菌範囲の病原性を評価します。研究の動物の使用のため洗練された原理に関しては重要な結果を取得するホストの最小数を必要とする技術を使用することが勧めします。この資料に記載されている腸管結紮ループ モデルは、ほとんどの場合C. ウエルシュ菌の病原性を比較する鶏の最小数を必要とするモデルです。
これを最小限に抑えるために非常に重要のだったC. ウエルシュ文化そして性格描写によってパルス フィールド電気泳動 (PFGE) 手続後の多くの日後にのみ、合字からの漏れによる交差汚染を評価でした、ので1 cm を含むリスク interloops 2 隣接するループの間 interloop 合途中を含みます。これらの対策を講じることが可能なクロス汚染を避けるために可能だった。確かに、一方、病原菌を引き起こした微小壊死巣壊死性腸炎と非病原性を注入した隣接するループの重要な光学顕微鏡的病変がないC. ウエルシュ菌や、BHI 培養液否定的な制御。今回は異なる系統が同じ鶏の隣接する腸管ループで安全に注入できることを示す。
このモデルの最も困難な問題の 1 つは換気および腸内血管新生を損なうことがなく小腸の外在化だった。鳥は哺乳類とは異なる呼吸システムをあります。横隔膜は不在で、換気が airsacs、腹腔内での薄肉構造によって制御されます。鶏でこれらの 7、彼らは子宮頸 (1)、前胸部 (2)、後頭胸部 (2)、腹部 (2) 空気嚢で分けられます。これらの風船のような構造は肺に直接接続されているし、上気道の空気の動きを可能にします。開くと胸骨と総排出腔と腹腔内、腹部 airsacs は顕著であるし、簡単に破裂する傾向にある場合は特に、乾燥。このため、滅菌生理食塩水を浸したガーゼで一定の加湿は、手順の中で適切な換気と麻酔を容易にするため重要です。また、腹腔内から腸を exteriorizing しながら腹部の airsacs の小さな穿刺を避けるために困難になることができます。呼吸数とパターン、眼瞼反射、心拍数や麻酔の十分な平面に晒され、鶏を確認する、鶏の動きなど、麻酔のパラメーターを監視することが重要です。小さな空気漏れは麻酔の質に影響を及ぼさないが、この漏れを最小化する必要があります。密閉手続後腹膜を閉じることが重要です。これは内部の空気圧を再確立し、換気はこのステップの後正常に戻ります。この構造体の閉鎖後は、腹部から空気漏れがない必要があります。これは、縫合糸に少量の滅菌生理食塩水を噴霧することにより確認することができ、腹腔内から来るバブル形成を示す空気を探します。この場合、追加の単純な皮膚縫合糸は空気漏れのサイトに配置できます。
もう一つの技術的に挑戦的な側面は、不完全に実行された手術による腸の虚血性病のリスクに関連です。虚血は、他の分子は、細胞の代謝に必要な酸素の不足を引き起こす、組織への血液供給の制限があるときに発生します。この場合、腸が急速にピンクの赤ではなく肉眼的に濃い青となって、腸粘膜細胞はすぐに退化します。これは、注入された病原体とは無関係な虚血病変と病理組織学的解釈が妨害されます。2 つの問題がある状況は、虚血につながることができます。まず、不注意で腸間膜の血管の結紮はこの状態になります。このため、腸間膜の血管を含むを避けるために腸管に沿って合字の配置をよく見てすることが重要です。第二に、虚血腸間膜血管の出血は、手順中に発生する可能性があります。これらの構造は、薄い壁と壊れやすいです。過度の緊張は、手動で腸を exteriorizing、その破裂につながることができます、注意は、この段階の整合性を確保する腸間膜血管の緊張に与えられる必要があります。また、腸間膜血管の出血は、これらは外科的縫合針で穴をあけられる場合に発生します。外科医は、腸間膜を針で貫通場所を慎重に見てする必要があります。両方の状況で出血を停止することができますが、凝固プロセスは停止またはこれらの腸管、それ故に不可逆的な病変を引き起こし、結果の妥当性を損なうことに著しく血流を減らします。
このモデルは、宿主-病原体相互作用の研究と感染性病原体によって引き起こされる小腸の疾患の病態に適しています。作成のループの数を変更するか、各ループの長さを変更することにより、提案モデルが研究によって合わせることができます。このような変更を実施する前に、重要な結果を保証する方法を標準化することをお勧めします。この手法の限界スキル指向でだけ適切に訓練された人員は生きている動物にこの手術を行う必要があります。
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Disclosures
著者が明らかに何もありません。
Acknowledgments
この作品は、ユニヴェルシテ ドゥ モントリオールの獣医学部から家禽研究 (M. Boulianne) の椅子によって支えられました。博士 Boulianne と親モデルを開発しました。博士 Boulianne と親が手術を行った先生は、麻酔プロトコルの開発を支援しました。博士の親はビデオを編集し、原稿を書いていた。Drs やけど、クラシックと Boulianne は原稿を編集しました。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| EZ-Scrub 747 | Becton Dickinson and Company | 4% chlorhexidine gluconate detergent impregnated sterile brush. No catalog number available. Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/infection-prevention/surgical-hand-scrubs/ez-scrub-preoperative-surgical-scrub-brushes | |
| Isopropyl alcohol 70% USP 4 L | Commercial isopropyl alcohol | P016IP70 | Web address: http://www.comalc.com/products/ |
| Chlorexidine | Sigma-Aldrich | 282227-1G | Chlorhexidine gluconate solution, must be diluted to 4%. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/282227?lang=fr®ion=CA&gclid=EAIaIQ obChMI8vHr4_OY1wIV3rrACh2Z WQKuEAAYAiAAEgLKx_D_BwE |
| Surgical Drape Small (27 inch x 24 inch) with 3 x 6 inch Fenestration | Veterinary Specialty Products | 32724 | Web address: http://www.vetspecialtyproducts.com/index.cfm?fuseaction=ecommercecatalog. detail&productgroup_id=15 |
| Scalpel blades #3 | Swann-Morton | 301 | Web address: https://www.swann-morton.com/product/16.php |
| Sterile saline NaCl 0.9% | Sigma-Aldrich | S8776-100ML | Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8776?lang=fr®ion=CA |
| Vicryl 3-0 | Ethicon | D9003 | Polyglactin multifilament absorbable suture material. Web address: http://www.ethicon.com/healthcare-professionals/products/wound-closure/absorbable-sutures/coated-vicryl-polyglactin-910-suture |
| Syringe 1 ml with 26G needle | Becton Dickinson and Company | 329652 | Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/diabetes-care/insulin-syringes/bd-1-ml-conventional-insulin-syringes |
| Brain Heart Infusion | Sigma-Aldrich | 1104930500 | Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/110493?lang=fr®ion=CA&cm_sp=Insite-_-prodRecCold_xorders-_-prodRecCold2-1 |
| Eppendorf tube | Sigma-Aldrich | T9661-500EA | Microcentrifuge tube. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t9661?lang=fr®ion=CA&gclid=EAIaIQ obChMI-YizzfiY1wIVRkCGCh 30SQjuEAAYAiAAEgLK5fD_BwE |
| Formalin solution, buffered neutral, 10% | Sigma-Aldrich | HT501128-4L | Ratio tissue : formalin of 1: 10 for adequate fixation. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht501128?lang=fr®ion=CA |
| Clostridium perfringens strains | Université de Montréal, Chaire en recherche avicole | N/A | Specific to each laboratory, available upon request to correspondant author |
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