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प्रसवकालीन Asphyxiated भेड़ का बच्चा मॉडल: नवजात पुनर्जीवन के लिए एक मॉडल

Published: August 15, 2018 doi: 10.3791/57553
Automatic Translation
*1, *2, 2, 2, 2, 2, 1, 2
1Department of Pediatrics, University of California Davis, 2Department of Pediatrics, University at Buffalo
* These authors contributed equally

Summary

भ्रूण मेंने के इनवेसिव इंस्ट्रूमेंटेशन बारीकी से नए जंम शिशु की नकल है कि एक मॉडल में संक्रमण परिसंचरण के सटीक शारीरिक माप प्रदान करता है ।

Abstract

जंम श्वासावरोध हर साल दुनिया भर में लगभग १,०००,००० मौतों के लिए खातों, और जल्दी नवजात रुग्णता और मृत्यु के प्राथमिक कारणों में से एक है । वर्तमान नवजात पुनर्जीवन दिशा निर्देशों के कई पहलुओं को व्यापक पुनर्जीवन के लिए निराला और अक्सर अप्रत्याशित जरूरत के कारण यादृच्छिक नैदानिक परीक्षणों के संचालन में कठिनाइयों दिया विवादास्पद रहते हैं । नवजात पुनर्जीवन पर सबसे अधिक अध्ययन पुतला मॉडल है कि वास्तव में शारीरिक परिवर्तन या घेंटा मॉडल है कि उनके फेफड़ों के द्रव को मंजूरी दे दी है और है कि भ्रूण से नवजात संचलन के लिए संक्रमण पूरा कर लिया है प्रतिबिंबित विफल से स्टेम । वर्तमान प्रोटोकॉल कैसे एक प्रसवकालीन asphyxiated भ्रूण भेड़ का मॉडल बनाने के लिए पर एक विस्तृत कदम दर कदम विवरण प्रदान करता है । प्रस्तावित मॉडल एक संक्रमण परिसंचरण और तरल पदार्थ से भरा फेफड़ों, जो प्रसव के बाद मानव नवजात शिशुओं नकल है, और इसलिए, नवजात शरीर क्रिया विज्ञान का अध्ययन करने के लिए एक उत्कृष्ट पशु मॉडल है । भेड़ के प्रयोगों के लिए एक महत्वपूर्ण सीमा उच्च संबद्ध लागत है ।

Introduction

प्रसवकालीन श्वासावरोध संयुक्त राज्य अमेरिका में लगभग १,००० अवधि के जंम के अनुसार 4 में होता है और ४,०००,००० नवजात दुनिया भर में1,2के लगभग 25% के लिए जिंमेदार है । भ्रूण के प्राकृतिक विकास के दौरान, कई रूपांतरों श्रम के दौरान जगह ले और जंम के समय के लिए extrauterine पर्यावरण को इंट्रा से एक निर्बाध संक्रमण के लिए अनुमति जब फेफड़ों गैस विनिमय के अंग के रूप में अपरा की भूमिका पर ले जाना चाहिए । नवजात शिशु की किसी भी विफलता के लिए पर्याप्त रूप से जंम में संक्रमण आगे समझौते resuscitative प्रयास । उदाहरण जब भ्रूण फेफड़ों निकासी अधूरा है या देरी3,4, और परिस्थितियों है कि एक लगातार उच्च फुफ्फुसीय संवहनी प्रतिरोध (पीवीआर)5 प्रभाव वेंटिलेशन की प्रभावकारिता है, जो सबसे अधिक रहता है में परिणाम asphyxiated नवजात की पुनर्जीवन में महत्वपूर्ण हस्तक्षेप6. इसके अलावा, तुरंत गर्भनाल और कम प्रतिरोध अपरा को हटाने के कार्डियक आउटपुट है कि रोधगलन7,8कारण हो सकता है में अचानक परिवर्तन करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं ।

आक्रामक पुनर्जीवन के लिए निराला की जरूरत के कारण (छाती संपीड़न और/एड्रेनालाईन प्रशासन के लिए की जरूरत है)1,9, वहां बड़े यादृच्छिक नैदानिक परीक्षणों से मजबूत सबूत की कमी के लिए वर्तमान समर्थन है नवजात पुनर्जीवन कार्यक्रम (NRP) दिशानिर्देश । नवजात पुनर्जीवन में कई शोधों अनुसंधान अध्ययन जन्मोत्तर पशु मॉडल (विशेष रूप से piglets) है कि पर्याप्त रूप से संक्रमण भ्रूण परिसंचरण और तरल पदार्थ से भरा प्रसव में नवजात शिशु के लिए निहित चित्रित करने में विफल का उपयोग कर आयोजित कर रहे है कमरे. अद्वितीय भ्रूण परिसंचरण से नवजात संचलन करने के लिए संक्रमण से संबंधित चुनौतियों को देखते हुए, प्रसवकालीन asphyxiated कार्डिएक गिरफ्तारी भ्रूण भेड़ का बच्चा मॉडल नवजात resuscitative शरीर क्रिया विज्ञान का अध्ययन करने के लिए आदर्श है ।

भ्रूण भेड़ के समान पर यूसुफ Barcroft द्वारा अध्ययन, के रूप में जल्दी है 1930, भ्रूण और नवजात फिजियोलॉजी10के लिए नींव रखी । 20वीं सदी के दूसरे हाफ में, जेफ्री डावेस ' भ्रूण भेड़ के मॉडल पर अभिनव और जटिल प्रयोगों, और बाद में इब्राहीम रूडोल्फ द्वारा उन जबरदस्ती भ्रूण में हृदय और फुफ्फुसीय फिजियोलॉजी के ज्ञान में योगदान दिया है 11 , 12. हाल के वर्षों में भ्रूण/नवजात मेमने मॉडल पर अध्ययन13hemodynamics पर वेंटिलेशन के प्रभाव की एक बेहतर समझ प्रदान की है,14, पीवीआर पर ऑक्सीजन के प्रभाव15,16, साथ ही संचार परिवर्तन है कि गर्भनाल के दौरान हो7,17clamping । अंतत: पिछले साल ही नवजात मेमन ने पुनर्जीवन18,19,20के दौरान hemodynamic इफेक्ट का अध्ययन करने के लिए एक उपन्यास मॉडल के रूप में कार्य किया है । एक कदम दर कदम क्या एक भेड़ का प्रयोग आयोजित करने में शामिल है कथा, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से शल्य चिकित्सा उपकरणों और प्रयोगात्मक पद्धति का विस्तृत वर्णन प्रस्तुत किया जाएगा ।

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Protocol

सभी प्रोटोकॉल ंयूयॉर्क भैंस के राज्य विश्वविद्यालय द्वारा संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) द्वारा अनुमोदित किया गया है । इनवेसिव और गैर इनवेसिव निगरानी चित्रण पद्धति का एक उदाहरण चित्रा 1में दिखाया गया है ।

1. पशु

  1. समय-दिनांक का उपयोग करें, Q-बुखार seronegative, गर्भवती फिरने (मिश्रित-नस्ल, Suffolk-डोरसेट-Katahdin नस्ल) भ्रूण भेड़ के साथ 127 – 143 दिन हमल ।
    नोट: भेड़ अवधि के गर्भ १४५ दिन और १२७ हमल भेड़ियों चरम समय से पहले शिशुओं की तरह व्यवहार है ।

2. प्री-सर्जिकल तैयारी

  1. सर्जरी से पहले बिखेरते 12 एच से खाना रोक ।
  2. नसों (IV) डायजेपाम (0.25-1.5 मिलीग्राम/किग्रा) और ketamine (4 मिलीग्राम/) के साथ बिखेरते हुए बेहोश ।
  3. एक लिफ्ट गाड़ी पर पार्श्व recumbency में बिखेरते गाइड ।
  4. एक वी टॉप सर्जिकल टेबल पर पृष्ठीय recumbency को बिखेरते हुए ले जाएं ।

3. संज्ञाहरण

नोट: सीजेरियन अनुभाग से पहले, बिखेरते डायजेपाम और ketamine और intubated isoflurane (1 – 4%) की सतत साँस लेना द्वारा पीछा के साथ बेहोश है । संज्ञाहरण की पर्याप्तता एक पल्स oximeter और हृदय की दर के साथ रक्त ऑक्सीजन के स्तर की सतत निगरानी के साथ-साथ मांसपेशी टोन और आँख सजगता के मूल्यांकन से नजर रखी है । इंस्ट्रूमेंटेशन के दौरान भेड़ियों मातृ संज्ञाहरण के प्रभाव के तहत किया जाएगा और भी इंस्ट्रूमेंटेशन की साइटों के लिए स्थानीय संवेदनाहारी प्राप्त होगा ।

  1. Intubate को १०.० एमएम के कफ endotracheal ट्यूब (ईटीटी) के साथ बिखेरते हुए । मुखर डोरियों के माध्यम से ईटीटी अग्रिम कफ से परे 1-2 सेमी । ईटीटी कफ फुलाना और ईटीटी के जबड़े के चारों ओर टाई बिखेरते हुए इसे स्थान में सुरक्षित करने के लिए ।
    1. जब palpebral प्रतिक्रिया अनुपस्थित है, isoflurane समायोजित करें (2 – 3% आमतौर पर पर्याप्त है) ।
    2. ०.२१ के प्रेरित ऑक्सीजन (फियो2) के एक अंश के साथ पारंपरिक यांत्रिक वेंटिलेशन (सीएमवी) द्वारा कृत्रिम सांस प्रदान करें । 10-15 मिलीलीटर/किलोग्राम के ज्वारीय मात्रा प्रदान करने के लिए वेंटीलेटर सेट ।
    3. oxyhemoglobin संतृप्ति लगातार एक पल्स बिखेरते की जीभ पर रखा oximeter द्वारा मॉनिटर.
    4. एक capnograph के साथ अंत ज्वार कार्बन डाइऑक्साइड (EtCO2) को मापने ।
    5. फियो2 और सीएमवी के बीच ९०-९७% और exhaled CO2 के बीच 35-45 मिमी पारा, क्रमशः के बीच oxyhemoglobin संतृप्ति बनाए रखने के लिए समायोजित करें ।
  2. सर्जिकल टाई-डाउन के साथ शल्य तालिका को बिखेरते हुए अंगों को सुरक्षित करें ।
    1. भ्रूण पर दबाव को दूर करने के लिए Trendelenburg स्थिति रिवर्स करने के लिए शल्य तालिका समायोजित करें ।
  3. एक orogastric ट्यूब प्लेस दबाव हटाना और गैस्ट्रिक सामग्री नाली ।
  4. पूरक चतुर्थ द्रव (सामान्य खारा या स्तनपान कराने वाले रिंग्स समाधान) पर 10 मिलीलीटर/
  5. लगातार कोर तापमान प्राप्त करने के लिए एक गुदा तापमान जांच प्लेस ।

4. सर्जरी

नोट: सीजेरियन सेक्शन और भ्रूण प्रक्रियाओं को तीव्र सर्जरी माना जाता है जिसमें पशुओं को euthanized कर सोडियम pentobarbital १०० मिलीग्राम/ मेमनों की डिलिवरी के बाद घूमने-फिरने के euthanized होते हैं और प्रयोगों के पूरा होने के बाद मेमनों को euthanized जाता है । इच्छामृत्यु की पुष्टि asystole ने की है । द्विपक्षीय thoracotomy या exsanguination की एक द्वितीयक पद्धति भी कार्यरत है. इस मामले में सर्जरी के दौरान अपूतित तकनीक का अभ्यास नहीं किया जाता है । कर्मियों को अब भी पशु संपर्क के दौरान सुरक्षात्मक पोशाक पहनने की जरूरत है ।

  1. ventral पेट से ऊन दाढ़ी ।
  2. दाग़ना का प्रयोग करें एक 15-18 सेमी उदर त्वचा-लीनिया अल्बा पर गहरा चीरा करने के लिए प्रावरणी का पर्दाफाश करने के लिए ।
    1. एक कुंद hemostat इत्तला दे दी के साथ दबाव का उपयोग कर पेट में एक छोटे से खोलने बनाएं ।
    2. इस खोलने को बनाए रखें, जबकि एक कुंद पेट की दीवार में कैंची इत्तला दे दी फिसलने ।
    3. लीनिया अल्बा का चीरा पूरा करने के लिए कैंची का प्रयोग करें ।
  3. पेट से गर्भाशय के भीतर भ्रूण सिर का पता लगाएँ और exteriorize.
    1. एक हाथ से भ्रूण सिर पकड़ो और दाग़ना का उपयोग करने के लिए गर्भाशय की दीवार के माध्यम से एक 10 सेमी चीरा (मेमने के माथे पर) बनाने के लिए । किसी भी cotyledons से बचना सुनिश्चित करें ।
    2. चार विरोधी कोनों पर एक साथ गर्भाशय और अपरा की परतों को दबाना करने के लिए Babcock संदंश का प्रयोग करें ।
    3. मेमने के सिर को गर्भाशय और बाहर बिखेरते हुए पेट के बाहर के माध्यम से बेनकाब करें ।
    4. भ्रूण की सर्जरी के दौरान पेट के बाहर बिछाने Babcock संदंश को छोड़ दें ।

5. भ्रूण Airway

  1. Intubate आंशिक रूप से उजागर भ्रूण भेड़ के साथ एक 3.5 – 4.5 मिमी ईटीटी कफ के साथ । मुखर डोरियों के माध्यम से ईटीटी अग्रिम कफ से परे 1 सेमी ।
    1. कफ फुलाना और ईटीटी ट्यूब के आसपास एक नाल टेप बांधने और फिर सिर के चारों ओर से सुरक्षित ।
    2. ईटीटी में अतिरिक्त भ्रूण फेफड़ों के तरल पदार्थ को सिर झुकाकर निष्क्रिय कर देते हैं । यह परिश्रम के दौरान फेफड़ों के तरल के निकास simulates ।
    3. asphyxial पीरियड में हांफने के दौरान गैस एक्सचेंज को रोकने के लिए ईटीटी को बंद करना ।

6. नैक पोत इंस्ट्रूमेंटेशन

  1. ऊन दाढ़ी और घुसपैठ 1-चमड़े के नीचे bupivacaine हाइडरोक्लॉराइड के 2 मिलीलीटर (सभी चीरा साइटों पर ०.२५%) ।
    1. गर्दन के प्रत्येक पक्ष पर दो 3 सेमी त्वचा चीरा (लगभग 6 सिर के लिए बाहर सेमी) श्वासनली से सटे । चीरा लगाकर गर्दन को अनुप्रस्थ चाहिए ।
    2. दाग़ना का उपयोग करते हुए चीरा प्रदर्शन, जबकि त्वचा तंबू, गहरी ऊतक lacerating से बचने के लिए ।
  2. प्रावरणी घुमावदार केली या मच्छर संदंश का उपयोग कर अलग ।
  3. सही आंतरिक jugular नस और सही आम मन्या धमनी को अलग करें ।
    1. दोनों जहाजों के नीचे २ २० सेमी, 0 रेशम टांके रखें ।
    2. रेशमी टांकों के बीच 1 सेमी के (समीपस्थ से बाहर) स्थान की अनुमति दें ।
    3. धीरे प्रत्येक टांका है कि पोत के आसपास है उठा, सतही, रक्त के प्रवाह को प्रतिबंधित करने और एक 1-2 mm अनुप्रस्थ आइरिस सर्जिकल कैंची का उपयोग पोत में कटौती कर ।
  4. मन्या धमनी के लिए, एक पूर्व फ्लश कैथेटर (15 – 17 ग्राम) सही मन्या धमनी caudally में रक्तचाप की निगरानी और रक्त नमूना लेने के लिए महाधमनी आर्क की ओर डालें.
    1. धमनी को पूरी तरह ligate करने के लिए समीपस्थ बाँध का उपयोग करें.
    2. दोहराएँ चरण 6.3.2-6.3.3.
    3. पूर्व फ्लश मन्या धमनी कैथेटर डालें और 3 समुद्री मील के साथ दोनों धमनी और कैथेटर के आसपास टाई करने के लिए बाहर का रेशम सीवन का उपयोग करें ।
  5. एक समान तकनीक का प्रयोग करें, jugular नस में एक पूर्व फ्लश कैथेटर (14-16 ग्राम) डालने के लिए, दोहराएँ कदम 6.3.2 – 6.3.3, एडवांस 7 – 10 सेमी caudally वक्ष प्रवेश के भीतर आराम करने के लिए (सही atrium की ओर). यह तरल पदार्थ और दवा प्रशासन के साथ ही शिरापरक दबाव माप के लिए प्रयोग किया जाता है ।
    1. heparinized खारा के साथ प्रत्यक्षता के लिए कैथेटर की जाँच करें और फिर पोत और कैथेटर के आसपास सीवन टाई पूरा (केवल समीपस्थ सीवन के साथ) 2-3 समुद्री मील का उपयोग कर ।
    2. दूसरा कैथेटर (14-16 ग्राम) लगभग 5 सेमी rostrally मस्तिष्क परिसंचरण से रक्त इकट्ठा करने के लिए डालें । दोनों कैथेटर के प्लेसमेंट के लिए एक ही कट का प्रयोग करें ।
    3. दोहराएँ कदम 6.5.1 के रूप में यह बाहर सीवन और कैथेटर से संबंधित है और फिर उन्हें जगह में घुमा को रोकने के लिए सुरक्षित करने के लिए विरोध कैथेटर लाइनों के आसपास रेशम टांके टाई ।
  6. बाईं ओर एक टी आकार (1-2 सेमी) में पहले से बनाया चीरा का विस्तार ।
    1. बाईं मन्या धमनी का उपयोग कर खोला घुमावदार hemostats तरक्की.
    2. रक्त प्रवाह को मापने के लिए पोत के चारों ओर एक 2 मिमी perivascular प्रवाह-जांच रखें ।
    3. कवर प्रवाह-एक 1 सेमी लचीला बहुलक आस्तीन के साथ जांच की स्थिति में जांच को स्थिर करने के लिए ।
    4. टी के आकार का चीरा में प्रवाह की जांच केबल लाइन प्लेस, केबल पोत के साथ समानांतर चलाने के लिए अनुमति देता है ।
    5. त्वचा चीरा बंद करें । केबल के आसपास टाई, और केबल के एक पाश के आसपास, प्रवाह को प्रतिबंधित करने से बचने के लिए अगर खींच लिया.

7. महान पोत इंस्ट्रूमेंटेशन

  1. भ्रूण भेड़ के सीने को बेनकाब करने के लिए निकालें, और पॉलीथीन लपेटो के साथ उजागर त्वचा कवर गर्मी नुकसान को रोकने के लिए ।
  2. मेमने को दाएं पार्श्व recumbency में रखें ।
  3. गर्दन के चारों ओर बाएं forelimb स्थिति शल्य साइट का पर्दाफाश करने के लिए ।
  4. 4वें पसलियों के बीच अंतरिक्ष के साथ bupivacaine हाइडरोक्लॉराइड (०.२५%) के 3 मिलीलीटर घुसपैठ और एक 6 सेमी त्वचा दाग़ना का उपयोग चीरा बनाते हैं ।
    1. ध्यान से, 3rd पसली के नीचे कुंद घुमावदार संदंश, सर्कल के साथ पसलियों के बीच मांसपेशियों पियर्स, और अगले पसलियों के बीच अंतरिक्ष के बीच बाहर आते हैं । सुनिश्चित करें कि फेफड़ों या दिल घायल करने के लिए नहीं है ।
    2. एक पूर्व 0 रेशम की काट टुकड़ा के लिए दबाना खोलें और इसे लाने के माध्यम से रिब घेरना ।
    3. दोहराएँ कदम 7.4.1 – 7.4.2 4वीं पसली के तहत सीवन सुरक्षित करने के लिए.
    4. प्रत्येक पसली के आसपास संबंधों को दबाना । धीरे ऊपर खींच और एक कपास डालने के 4वें पसलियों के बीच अंतरिक्ष के तहत छाती में applicator इत्तला दे दी ।
    5. दाग़ना का उपयोग करते हुए छाती की सामग्री की रक्षा के लिए applicator छड़ी का प्रयोग करें 6-8 सेमी की एक अंतिम खोलने के लिए 1 सेमी में पसलियों के बीच अंतरिक्ष खोलने के लिए । सुनिश्चित करें कि फेफड़ों रिब संबंधों में पकड़ा नहीं है ।
    6. छाती खोलने में एक रिब स्प्रर रखें । छाती खोलने फेफड़ों की बाईं ऊपरी पालियों, मुख्य फुफ्फुसीय धमनी (फिलीस्तीनी अथॉरिटी) और डक्टस वाहीनी प्रकट होगा ।
  5. 2 x 2 इंच की जाली का उपयोग करने के लिए फेफड़ों को ढंक और धीरे से किसी भी उजागर ऊतक दूर शल्य क्षेत्र से धक्का ।
    1. देखने के क्षेत्र में सुधार करने के लिए एक छोटे से मैनुअल रिट्रेक्टर का प्रयोग करें (यदि आवश्यक हो) ।
    2. एक नाल टेप प्लेस (1/4 इंच चौड़ाई, 6 इंच लंबाई) पूर्व महान जहाजों के आसपास amnion में लथपथ । नाल टेप भिगोने पोत दीवारों पर घर्षण (और चोट) कम हो जाती है ।
  6. संदंश का प्रयोग, पेरीकार्डियम उठा और मुख्य फुफ्फुसीय धमनी के साथ कटौती, देखभाल करने के लिए नहीं वागल तंत्रिका कटौती । वागल तंत्रिका साथ पेरीकार्डियम के एक पार्श्व कटौती के साथ हस्तक्षेप से सही atrium रखने के लिए एक applicator छड़ी का प्रयोग करें ।
  7. मिथुन संदंश का प्रयोग, संदंश धीरे से ले जाने के आसपास वाहिनी/पीए पायदान से और छोड़ दिया फिलीस्तीनी अथॉरिटी के पीछे "को घेर" और बाएं फिलीस्तीनी अथॉरिटी के दूसरे पक्ष पर उभरने । कई नाजुक ऊतकों इस क्षेत्र के तहत चलाने के लिए और आगे बढ़ना ही अगर कोई प्रतिरोध है ।
    1. जब संदंश की नोक मनाया जाता है, खुले ही काफी दूर पूर्व के एक छोर गीला गर्भनाल टेप हड़पने के लिए । केवल 1 स्थान पर क्लिक किया स्थिति के साथ दबाना । यह संभव है कि आसपास के ऊतकों संदंश में भी पकड़ा जा सकता है, और अगर कसकर clamped कि ऊतक गर्भनाल चोट में जिसके परिणामस्वरूप टेप के साथ पकड़ा जा सकता है ।
    2. धीरे से वापस बाहर संदंश स्थिति में टेप खींचने के लिए । यह प्रवाह जांच के लिए एक जगह खोलने के लिए कार्य करता है और प्रवाह जांच (चित्रा 2) की प्रविष्टि प्रत्यक्ष में मदद मिलती है । देखभाल के लिए किसी भी पोत के पायदान भाग की रक्षा के रूप में यह ऊतक के सबसे नाजुक हिस्सा है जरूरी है ।
  8. धीरे नाल टेप उठाने और (एल-ब्रैकेट) की स्थापना के साथ पोत के आसपास की जांच की धातु भाग मार्गदर्शक द्वारा एक 4-6 मिमी perivascular प्रवाह-जांच जगह खोलने ।
    1. जांच की पीठ की ओर टेप प्रत्यक्ष मदद करने के लिए जगह में पोत जहाज और एल के अंत कल्पना कोष्ठक इस प्रकार फिसलने बंद करने के लिए सुरक्षित होने की अनुमति ।
    2. सुनिश्चित करें कि पोत है > ७५% जांच आकार के एक तंग फिट और सटीक प्रवाह माप सुनिश्चित करने के लिए ।
    3. ध्यान से नाल टेप के अंत में कटौती की जांच करने के लिए बंद है और धीरे से दूसरे छोर खींचने के लिए पोत से टेप हटा दें । टेप माप के साथ हस्तक्षेप अगर नहीं हटाया जाएगा ।
    4. अल्ट्रासाउंड जेल लागू करें और संकेत तीव्रता और गुणवत्ता में सुधार करने के लिए जांच और केबल की स्थिति को समायोजित ।
  9. दोहराएं चरण 7.6 – 7.7.4 के रूप में यह एक 6-8 mm perivascular फ्लो-डक्टस वाहीनी चारों ओर जांच के स्थान से संबंधित है ।
  10. छाती से किसी भी सुरक्षात्मक 2 एक्स 2 धुंध निकालें और फेफड़ों को फिर से स्थिति की अनुमति दें ।
  11. फेफड़ों की रक्षा के लिए प्रवाह जांच के प्रत्येक धातु ब्रैकेट के आसपास एक नया 2 एक्स 2 धुंध प्लेस ।
  12. एक पतला सुई और २.० सिंथेटिक monofilament सीवन का उपयोग परतों में छाती बंद करो । एक काटने सुई और २.० रेशम सीवन का उपयोग कर एक पाश के साथ बाहरी त्वचा के लिए प्रवाह-जांच की केबल सुरक्षित ।

8. गैर इनवेसिव माप

  1. ईकेजी दाईं axilla, बाएँ axilla, और दाएँ वंक्षण क्षेत्र (तीन नेतृत्व ईकेजी) पर सुराग देते हैं. पूर्व और बाद वाहिनी धमनी oxyhemoglobin संतृप्ति (एसपीओ2) एक पल्स oximeter सही forelimb और या तो hindlimb, क्रमशः पर रखा के साथ नजर रखी है । एक निकट अवरक्त स्पेक्ट्रोस्कोप (NIRS) टांके और एक अपारदर्शी ड्रेसिंग के साथ माथे पर निगरानी सुरक्षित ।

9. डेटा संग्रह

  1. डेटा प्राप्ति सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके डेटा एकत्र और रिकॉर्ड करें. चित्रा 1 सहित आक्रामक और गैर इनवेसिव मापदंडों दिखाता है: धमनी और केंद्रीय शिरापरक रक्तचाप, वाम आम मन्या, वाम फेफड़े और वाहिनी धमनी रक्त प्रवाह, ईकेजी, एसपीओ2, NIRS, ETCO2.
    नोट: डेटा संग्रह के लिए सॉफ़्टवेयर और उपकरण सेट-अप भिंन हो सकते है और इस आलेख के दायरे से बाहर हैं ।

10. प्रायोगिक प्रोटोकॉल

  1. बंद करना और गर्भनाल काट, और मातृ पेट से मेमने को एक उज्ज्वल गर्म करने के लिए कदम ।
  2. asphyxial अवधि के दौरान, एड्रेनालाईन प्रशासन के लिए एक नाल शिरापरक कैथेटर डालें (0.01 – 0.03 मिलीग्राम/किग्रा IV, NRP सिफारिशों के अनुसार) ।
  3. एक नाल धमनी कैथेटर डालें के बाद वाहिनी धमनी रक्त गैसों को इकट्ठा ।
  4. आसंन asystole के लिए भेड़ की निगरानी, जो पता चला मन्या प्रवाह और दबाव के अभाव के रूप में परिभाषित किया जा सकता है ।
  5. सुनिश्चित करें कि पर्याप्त कर्मियों को उपलब्ध है और निंनलिखित कार्यों के लिए प्रत्येक व्यक्ति को समर्पित है: (1) वेंटिलेशन और airway का प्रबंधन, (2) छाती संपीड़न प्रदर्शन, (3) दवा प्रशासन, (4) रक्त के नमूने ड्रा, (5) कोड का नेतृत्व ।
  6. सकारात्मक दबाव वेंटिलेशन (PPV) 35/5 cm एच2ओ के दबाव में एक टी टुकड़ा resuscitator के साथ प्रदान करके पुनर्जीवन शुरू. प्रायोगिक पुनर्जीवन प्रोटोकॉल के लिए 20 मिनट टाइमर आरंभ करें ।
  7. वेंटिलेशन के 30 एस के बाद, अंगूठे और छाती के विपरीत पक्षों पर एक हाथ की उंगलियां रखकर छाती संपीड़न शुरू करते हैं ।
    1. उंगलियों और अंगूठे लगभग 1/3 की एक गहराई के लिए एक साथ निचोड़ द्वारा छाती संपीड़न प्रदान करें ।
  8. 3-ंयूनतम अंतराल पर एड्रेनालाईन व्यवस्थापन ।
  9. सहज संचलन या 20 मिनट तक की वापसी तक पुनर्जीवन प्रयास जारी रखें ।
  10. सहज परिसंचरण, निरंतर चतुर्थ तरल पदार्थ (5 सीसी/kg/hr) और fentanyl (0.5-2.0 मिलीग्राम/kg/hr; titrated), पहले से स्थापित jugular शिरापरक कैथेटर के माध्यम से दिया जाता है की वापसी पर । 20 मिनट पुनर्जीवन अवधि के बाद, पशु euthanized है । अगर मेमने 20 मिनट तक ROSC हासिल नहीं करते हैं, तो इच्छामृत्यु के साथ आगे बढ़ें ।

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Representative Results

भ्रूण भेड़ियों की इंस्ट्रूमेंटेशन के बाद, hemodynamic चर दर्ज किया जा सकता है (चित्रा 3 और चित्रा 4), तो विश्लेषण और व्याख्या (चित्रा 5) । अक्सर रक्त के नमूने एकत्र किया जा सकता है, और चित्रा 6 से पता चलता है पीएच और प्रयोगों में से एक से2 डेटा पैको । कभी-कभार, कैथेटर या प्रवाह जांच खराब हो सकती है या निकाली जाती है और डेटा कर सकते हैं, इसलिए एकत्र नहीं किया जा सकता है और विश्लेषण के लिए उपयोग किया जाता है, जैसा चित्र 7में दिखाया गया है ।

Figure 1
चित्रा 1 : एक भेड़ का मॉडल में आक्रामक और गैर इनवेसिव इंस्ट्रूमेंटेशन । उदाहरण के लिए रक्त का प्रवाह माप के लिए इनवेसिव इंस्ट्रूमेंटेशन (शिरापरक और धमनी कैथेटर प्रविष्टि के साथ ही खून का नमूना और दबाव की निगरानी के लिए पोत प्रवाह जांच प्लेसमेंट), और गैर इनवेसिव उपकरण के स्थान (पल्स oximeter, ईसीजी सुराग, निकट अवरक्त स्पेक्ट्रोस्कोपी, capnography) । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 2
चित्रा 2 : महान पोत अलगाव । संयोजी ऊतक के कोमल जुदाई गीला नाल टेप के लिए एक जगह बनाता है वाहिकाओं के आसपास रखा जा करने के लिए (एक) प्रत्येक पोत (ख) के अंदर रक्त के प्रवाह की अल्ट्रासाउंड माप के लिए प्रवाह जांच के बाद के स्थान के साथ । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 3
चित्रा 3 : अधिग्रहण सॉफ्टवेयर स्नैपशॉट एक प्रसवकालीन asphyxiated मेमने की hemodynamics पर कब्जा सफलतापूर्वक पुनर्जीवित । ए ओ प्रेस: सही मन्या रक्तचाप; CA प्रवाह: वाम मन्या रक्त प्रवाह; LPA फ्लो: वाम फेफड़े धमनी रक्त प्रवाह । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 4
चित्र 4 : अधिग्रहण सॉफ्टवेयर आक्रामक और गैर इनवेसिव शारीरिक माप चित्रण स्नैपशॉट । ए ओ: सही मन्या रक्तचाप; CVP: केंद्रीय शिरापरक दबाव; सीएएफ: वाम मन्या रक्त प्रवाह; कोरोनरी: बाएं उतरते कोरोनरी रक्त प्रवाह; PaF: वाम फुफ्फुसीय धमनी रक्त प्रवाह; DuF: डक्टस वाहीनी रक्त प्रवाह; ETCO2: अंत ज्वार सह2; लीड 2: ईकेजी लीड 2 रिकॉर्डिंग । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 5
चित्रा 5 : एक प्रसवकालीन asphyxiated मेमन की Hemodynamics सफलतापूर्वक पुनर्जीवित. रक्तचाप में परिवर्तन, वाम मन्या रक्त प्रवाह, और वाम फेफड़े के रक्त का प्रवाह छाती संपीड़न (A) और हटना चरण (B) के दौरान संपीड़न चरण के दौरान दिखाए जाते हैं । बाएं फेफड़े और मन्या रक्त के प्रवाह में द्वितीयक अक्ष पर प्लॉट किए गए हैं । CC: चेस्ट संपीड़न; महामारी: एड्रेनालाईन; पीए: फेफड़े की धमनी; ROSC: सहज संचलन की वापसी । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 6
चित्रा 6 : एक प्रायोगिक अध्ययन के दौरान रक्त गैस विश्लेषण । डैश्ड रेखा सहज संचलन की वापसी के समय का प्रतिनिधित्व करती है । पैको2 द्वितीयक अक्ष पर प्लॉट की गई है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 7
चित्र 7 : अधिग्रहण सॉफ्टवेयर खराब प्रवाह जांच दिखा तस्वीर । मन्या रक्त प्रवाह (ग्रीन अनुरेखण) रिकॉर्डिंग पर्याप्त रक्तचाप (लाल अनुरेखण) के बावजूद खो दिया है और फेफड़े के धमनी रक्त प्रवाह (बैंगनी अनुरेखण) छोड़ दिया है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

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Discussion

मेमने मॉडल मानव नवजात शिशुओं के आकार में तुलनीय है और आसान इंस्ट्रूमेंटेशन इनवेसिव hemodynamic चर को मापने के लिए अनुमति देता है । भ्रूण/नवजात मेमना मॉडल एक अमूल्य अनुसंधान उपकरण है कि बड़े पैमाने पर संक्रमण संचलन को समझने के लिए योगदान दिया गया है, साथ ही नवजात की फुफ्फुसीय और हृदय शरीर क्रिया विज्ञान । कई प्रयोगात्मक भेड़ के मॉडल वर्षों में स्थापित किया गया है अपरिपक्व भेड़ के साथ13,14,21, फेफड़े के hemodynamics में इष्टतम वेंटिलेशन रणनीतियों का अध्ययन एक लगातार फेफड़े के उच्च रक्तचाप में डक्टर बंधाव मॉडल22,23,24, एक जातविष्ठा आकांक्षा मॉडल25,26,27, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से भ्रूण की शल्य चिकित्सा मॉडल में फुफ्फुसीय संवहनी जेट myelomeningocele28,29, जन्मजात मध्यपटीय हर्निया30,31, और जंमजात हृदय दोष३२,३३, जो सभी पर एक काफी प्रभाव पड़ा है नैदानिक प्रबंधन ।

भ्रूण इंस्ट्रूमेंटेशन के दौरान, देखभाल के लिए गर्भनाल पर किसी भी दबाव से बचने के लिए लिया जाना चाहिए, क्योंकि यह भेड़ के अनुचित पर तनाव पैदा कर सकता है और मेमने को संज्ञाहरण के वितरण को प्रभावित कर सकता है । अनजाने कर्षण कैथेटर पर रखा जाता है, तो प्रवाह जांच और कैथेटर को ध्यान से चोट से जहाजों की रक्षा के लिए भेड़ के बरतन की त्वचा के लिए सिलाई की जरूरत है । भ्रूण दिल के सर्जिकल इंस्ट्रूमेंटेशन विनाशकारी जटिलताओं के लिए एक बढ़ा खतरा बन गया है (exsanguination से मौत) जब तक सावधानी से प्रदर्शन किया । thoracotomy पूरी तरह से परतों में सिलाई की जरूरत है क्योंकि एक अधूरी मुहर छाती संपीड़न दक्षता को प्रभावित कर सकते हैं । भेड़ के इंटुबैषेण के बाद, फेफड़े के तरल निष्क्रिय पक्ष के लिए भ्रूण सिर झुकाव द्वारा सूखा होना चाहिए । औसतन, 15-20 मिलीलीटर/फेफड़े के तरल का किलो निष्क्रिय सूखा हो सकता है । भ्रूण भेड़ के बच्चे में शेष फेफड़ों तरल, फिर, अनुमानित मानव नवजात शिशुओं में फेफड़ों के तरल । ईटीटी के लिए हांफना के दौरान गैस एक्सचेंज को रोकने के लिए गर्भनाल द्वारा asphyxiation से पहले occluded की जरूरत है । कार्डियक गिरफ्तारी की एक 5-ंयूनतम अवधि के बाद pulselessness मनाया जाता है, सहज संचलन की वापसी के रूप में, अंयथा, तेजी से सकारात्मक दबाव वेंटिलेशन निंनलिखित होता है । कारण है कि भ्रूण आधार रेखा धमनी गैसों महत्वपूर्ण दाखवते प्रदर्शित नहीं करते, भ्रूण इंस्ट्रूमेंटेशन बस प्रयोगों से पहले के लिए मेमने पर काफी तनाव का कारण प्रकट नहीं होता. गर्भावधि आमतौर पर अल्ट्रासाउंड पुष्टिकरण द्वारा प्रयोगों से पहले निर्धारित किया जाता है, लेकिन यह भी अनुभवी हाथों में बिखेरते की सावधानी से परीक्षा का मूल्यांकन कर सकते हैं । एकाधिक भ्रूण की स्थिति में, प्रत्येक भेड़ के साथ क्रमिक रूप से लिखती है । मेमने प्रयोगों के संचालन में एक महत्वपूर्ण विचार काफी अधिक लागत है ।

हाल ही तक मेमन मॉडल को नवजात पुनर्जीवन की पढ़ाई के लिए इस्तेमाल नहीं किया गया है । चूंकि वर्तमान NRP सिफारिशें मुख्यतः वयस्क साहित्य से या पुतला३४,३५ और प्रसव के बाद पशु मॉडल३६ है कि पर्याप्त रूप से प्रसव के कमरे में नवजात शरीर क्रिया विज्ञान का चित्रण नहीं है से extrapolated हैं, इस लेख में वर्णित प्रोटोकॉल होनहार योगदान है कि प्रसवकालीन asphyxiated भेड़ का बच्चा मॉडल है कि extrauterine पर्यावरण के लिए पर्याप्त रूप से संक्रमण करने में विफल के resuscitative प्रयासों में सुधार प्रदान कर सकते है दर्शाता है । चित्रा 5 एक नवजात मेमने कि सफलतापूर्वक पुनर्जीवित गया है में रक्तचाप और बहती है दिखाता है । रक्त दबाव और प्रवाह की तुलना (इस मॉडल में डक्टस वाहीनी प्रवाह को मापने के लिए लाभ के साथ) में संक्रमण संचलन के साथ एक मॉडल में अलग संपीड़न के लिए वेंटिलेशन अनुपात और/या vasoactive दवाओं का आकलन प्रदान करेगा पुनर्जीवन के दौरान नवजात hemodynamics की एक बेहतर समझ । इस मॉडल पर प्रयोगों इष्टतम छाती संपीड़न अनुपात की समझ में सुधार होगा, समय और प्रशासित दवाओं की खुराक, नवजात पुनर्जीवन के दौरान प्रेरित ऑक्सीजन के प्रभाव, साथ ही कई अन्य परिकल्पनाओं का पता.

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Disclosures

लेखकों के हित का कोई टकराव नहीं है एलान

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Babcock forceps Miltex 16-44
Blood pressure transducer Becton Dickinson P23XL-1 Used with saline filled diaphragm domes
Blunt tipped scissors Miltex 98SCS50-56
Capnograph Philips 7900 Used with Neonatal Flow Sensors
Cautery pencil Valley Lab 287879
Cautery unit Valley Lab SSE2K
Curved Forceps Everost 711714
Data acquisition software Biopac Systems Inc. ACK100W
EKG Biopac Systems Inc. ECG100C
Endotracheal tube -cuffed Rusch 111780035
Flow modulator Transonic Systems Inc.  T403
Flow-probe Transonic Systems Inc.  MC4PSS-LS-WC100-CM4B-GA
Gastric tube Jorgensen Labs Inc. J0106LE To decompress and drain ewe stomach
Hair clipper Andis Company 65340  # 40 Clipper Blade
Infant radiant warmer GE healthcare 7810
Intravenous catheters Becton Dickinson 381234
Iris surgical scissors Patterson 510585
Kelly Foreceps Patterson 510535
Mosquito Forceps RICA Surgical Products INC 1-74
Near-infrared spectroscopy Nonin Medical Inc.  X-100M Sensmart Equanox & PureSAT
RSO2 Sensor Nonin Medical Inc.  8004CB-NA Neonatal 
Scalpel handle and blade Everost 707203
Sutures -silk 2-0 Covidien SS-695 Used for tying catheters to vessels
Sutures -vicryl  2-0 Ethicon J269H Used for closing thoracotomy 
T-piece resuscitator Neo-Tee MCM1050812
Umbilical ties Jorgensen Labs Inc. J0025UA
Weitlander Retractor Miltex 11-625

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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चिकित्सा अंक १३८ भेड़ का बच्चा मॉडल नवजात श्वासावरोध इंस्ट्रूमेंटेशन फिजियोलॉजी पुनर्जीवन hemodynamics शोधों के अनुसंधान
प्रसवकालीन Asphyxiated भेड़ का बच्चा मॉडल: नवजात पुनर्जीवन के लिए एक मॉडल
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Vali, P., Gugino, S., Koenigsknecht, … More

Vali, P., Gugino, S., Koenigsknecht, C., Helman, J., Chandrasekharan, P., Rawat, M., Lakshminrusimha, S., Nair, J. The Perinatal Asphyxiated Lamb Model: A Model for Newborn Resuscitation. J. Vis. Exp. (138), e57553, doi:10.3791/57553 (2018).

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