Summary
췌 장 섬 이식 타입-1 당뇨병에 normoglycemia를 달성 하는 방법입니다. 이 문서는 당뇨병 쥐의 정상적인 포도 당 수준을 유지 하는 intraportal 경로 통해 이식 기술에 초점을 맞추고.
Abstract
췌 장 섬 이식 혈당을 줄이기 위해 화학적으로 유도 된 당뇨병 설치류에서 매우 성공적 이다. 실험적인 섬 이식에 가장 일반적인 이식 사이트 신장 캡슐 이다. 그러나,로 적은 혈액 성분과 췌 장 독도의 상호 작용에 대 한 알려져 있다, 그것은 또한 의미가 실험 섬 이식에서 문맥 접근 방식을 활용 하 있습니다.
이 프로토콜에서는 NMRI 누드 마우스에는 intraportal 섬 이식 기법을 보여 줍니다. Streptozotocin (180 mg/kg)은 받는 사람 쥐에서 혈당을 유도 하기 위해 intraperitoneally 주입 하 고 있다. 그들은 20 mmol/l. 보다 큰 비 단식 혈액 포도 당 수준에서 당뇨병 환자로 간주 됩니다. 1 일 이전에 이식, 마우스 췌 장 독도 콜라 소화;에 의해 기증자 췌 격리 최소 350 독도 당뇨병 받는 당 활용 됩니다. 섬 격리 수율에 따라, 두 개 이상의 기증자 마우스 받는 사람 마다 활용 됩니다. 37 ° C에서 야간 문화, 후 독도 문맥을 통해 받는 사람 간으로 관리 됩니다. 수술 후, 쥐 빨간색 Makrolon 주택에 보호 및 관찰까지 깨어 있다. 이 프로토콜 syngeneic 마우스에 120 일 및 15 일 수용자 쥐에 glycemic 통제를 유지 한다.
Introduction
섬 이식1타입-1 당뇨병 치료 하는 유망한 접근 이다. 당뇨병 환자로 양 췌 장 부분을 전송 하는 첫 번째 시도 1893 년에 왓슨 윌리엄스에 의해 수행 되었다. 그러나, 임상 작은 섬 이식에 중요 한 돌파구에 드 몬 튼 프로토콜 달성 했으며 이후, 국가 프로그램의 일련의 개발된2. 과거에는, 골 수, omental 주머니, 근육 지역, 위 점 막 표면, 비장, 신장 캡슐 등 여러 사이트 전 임상 모델에서 탐구 했다 하지만 포털 정 맥 시스템은 적합 하 고 효과적인 사이트 중 하나로 간주 됩니다. 대 한 임상 프로그램3,4,,56.
인슐린의 외 인 관리 섬 포털 정 맥으로 주입 하 여 교체하실 수 있습니다. 산소 공급은 하류 위치 네이티브 췌에 포털 동맥과 정 맥의 합류에의 하기 때문에 선호 하는 사이트는 것입니다. 또한, 거기는 큰 표면적은 독도의 3 차원 구조를 유지 수 있습니다, 그리고 vascularization 촉진된5수 있습니다. 받는 사람 당뇨병 마우스, 2000 또는 돼지 섬 등가물 또는 350 마우스에서 독도 hyperglycemic 국가7,8반대로 적절 한 있습니다. Euglycemic 레벨 syngeneic 마우스 대 마우스 이식에서 120 일 이상 xenogeneic 독도 수용자 마우스 마우스 모델에서 마우스 받는 모델에 15 일 동안 보고 했다.
문맥을 통해 섬 이식의 효능 관련 요소는 적절 한 마 취, 펑크, 그리고 hemostasis9의 방법. 마 취는 흡입 (5 %isoflurane) 또는 주입 (마 취 제, xylazine, 또는 pentobarbital)에 의해 유도 될 수 있다 그리고 물질 자주 결합. 깊이의 제어 및 마 취의 시간에 대 한 마우스, 점 막, 눈 뚜껑, 각 막 반사, 호흡 속도, 그리고 체온의 색 등의 상태에 관심을 지불 합니다. 그것은 동물 고군분투 하지 하 고 그것은 작동 살아 난다는 것이 중요입니다. 온도 유지 될 수 있다 난방 패드, 등 다른 난방 장치에 의해 레드 전구, 등 A 따뜻한 열 플레이트 마우스와의 발생을 방지 하는 작업 테이블을 25-30 ° C의 온도 유지 하는 데 사용 되었습니다. 저체온증입니다. 마 취약의 복용량은 중요 하다, 그들 모두는 간장에 의해 대사는 하 고 간 기능을 뚜렷이 섬 서 스 펜 션. 의 주입에 의해 무질서 수 있습니다. 문맥에 대 한 이상적인 펑크 점은 첫 번째 및 두 번째 지류 정 맥 사이 위치입니다.
독도 의도 주입 볼륨의 수 또한 영향을 미칠는 이식의 결과 과도 한 볼륨 전단 응력을 증가 수 있습니다. 0.2 mL 볼륨 포털 정 맥으로 작은 섬 이식에 대 한 적절 한 간주 됩니다. 찌른 상처 (26-게이지 바늘) 신속 하 고 효과적인 방식으로 중지 하는 문맥에서 출혈을 유도 합니다. 멸 균 거 즈 나 손가락은 출혈을 멈추게 하는 약 6 분 빵 꾸의 사이트에 최소한의 압력으로 적용할 수 있습니다. 찍은 함께, 포털 섬 주입 효과적 이며 화학적으로 유도 된 당뇨병 마우스 모델에서 혈액 포도 당 수준 이상의 레 귤 레이 션을 제공 합니다.
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Protocol
이 프로토콜의 모든 절차는 독일 동물 복지 법률과 지침에 의해 승인 되었습니다. 10 월에 12 주 된 NMRI 누드 마우스 C57Bl/6 마우스를 사용 하 여 고려 (기증자: 오래 된 여성, 받는 사람: 남성) 실험을 통해. 섬 격리 NMRI 누드 마우스를 사용 합니다. 로컬 동물 시설 규정에 따라 정의 된 조건 하에서 생쥐를 유지 합니다.
1입니다. 당뇨병 Streptozotocin으로 유도
- -4 일에 10 ~ 12 주 된 NMRI 누드 마우스 및 무게 기계를 사용 하 여 C57Bl/6 쥐의 몸 무게를 측정 합니다.
- 측정 된 몸 무게에 따라 마우스 당 염 분의 0.1 ml에서 streptozotocin의 180 mg/kg의 복용량을 준비 합니다.
참고: Streptozotocin 해야 갓 사용 하기 전에 준비 되며, 그것은 빛에 민감한 알루미늄 호 일로 덮여. - Syngeneic 및 수용자 마우스 각각 streptozotocin (180 mg/kg)의 0.1 mL의 단 하나의 복용량 intraperitoneally 26 G 바늘을 사용 하 여 주사.
- 날-3,-2와-1 비 단식 쥐의 꼬리 정 맥을 puncturing 의해 2-4 µ L의 혈액을 수집 합니다.
- 테스트 스트립 당 혈액 샘플의 2-4 µ L를 사용 하 여 NMRI 누드 마우스 C57Bl/6 쥐에서 혈당을 측정
참고:이 시점에서 쥐의 80% 해야 될 당뇨병 (20 mmol/L).- 그들의 혈액 포도 당 수준을 20 mmol/l.에 도달 작은 섬이 식을 위한 마우스를 사용
2입니다. 쥐에서 췌 장 독도의 격리
- 26-G 바늘으로 복 주입에 의해 케 타 민 (100mg/kg 몸 무게)와 xylazine (20 mg/kg 체중) 마우스를 anesthetize.
참고: 마 취 제 및 xylazine의 볼륨 (0.10 mL/10 g) 동물의 몸 무게에 따라 결정 됩니다. - 부정사 위치에 쥐를 유지 하 고 소독 povidone-요오드 솔루션. 페달 반사를 확인 하 여 적절 한 안락사를 확인 합니다.
참고: C57Bl/6의 경우 복 부 지구를 면도. - 피부 미세 집게로 잡고 고 중간 절 개를가 위로 복 부 구멍을 폭로. 멸 균 거 즈 압축에 내장 사이트 왼쪽 및 복 부 구멍의 외부를 배치 합니다.
- 췌 장 및 다른 관련 된 위치를 다른 방향으로 위 조정 조직.
- 대동맥에 도달 하 고 혈액을 배수 하기 위하여 작은 상처를. 멸 균 거 즈를 사용 하 여 혈액 흡수에 대 한.
- 조심 스럽게 소장 제거. 위장과 비장 췌를 구분 합니다.
- 삭제할 췌 하 고 신선한 페 트리 접시에 두십시오. 지방, 집게를 사용 하 여 같은 모든 원치 않는 자료를 제거 합니다.
- 콜라의 4 mL와 5 mL 주사기를 췌 26 G 바늘으로 주입 (재고 솔루션: 행 크의 솔루션의 12 mL에서 콜라의 30 밀리 그램).
- 향상 된 소화와 12 mL 빨간 모자 튜브에 대 한 표면적 증가 위 췌를 말하다.
참고: 행 크의 균형 소금 솔루션: HBSS 10 배 (100 mL), 페니실린-스 (10 mL), Gentamycin (1 mL), Ciprofloxacin (10 mL), HEPES (35 mL), 소 주 H2O (900 mL) - 떨고 물 욕조에 37 ° C에서 10 분을 소화를 수행 합니다. 와 15에 대 한 일정 한 간격에 몇 번이 고 샘플 동 s.
- 3 분 동안 손으로 소화 췌를 적극적으로 혼합 하 고 10 얼음에 s.
- 소화 반응 및 실 온에서 3 분 560 x g에서 원심 분리기를 막으려고 찬 행 크의 솔루션의 6 mL를 추가 합니다.
- 상쾌한을 제거 하 고 실 온에서 파커/태아 종 아리 혈 청 (P/FCS) 중간의 10 mL에 펠 릿을 디졸브.
참고: P/FCS 매체: TCM-199 10 배 (100 mL), FCS (50 mL), 페니실린-스 (10 mL), HEPES (20 mL), 소 주 H2O (900 mL) - 가벼운 현미경 (회전 타원 체, 골든-브라운 색) 그들의 형태에 따라 독도 식별 합니다. 어두운 센터와 함께 독도를 하지 마십시오. 순도 생존에 대 한 가벼운 현미경 얼룩 dithizone 수행 하 여 확인 하십시오.
참고: Dithizone 아연 이온을 하 고는 독도에 붉은 색 얼룩을 제공 합니다. - 1 mL 피 펫을 사용 하 여 계산 하 고 가벼운 현미경 독도 따 고 P/FCS 매체의 4 mL를 포함 하는 신선한 페 트리 접시 (60 m m x 15 m m)에 그들을 전송.
참고: 볼륨의 P /페 트리 접시에 FCS 매체 산소 가용성을 보장 하기 위해 4 mL를 초과 해서는 안됩니다. - 인큐베이터에서 37 ° C에서 P/FCS 매체 하룻밤 4 mL에 격리 된 독도 유지.
3입니다. 섬 이식에 대 한 동물의 준비
- 37 ° C 배양 기에서 격리 된 독도 제거 하 고 흐름 벤치에서 그들을 배치. 페 트리 접시의 원형 스윙 모션 독도 센터.
- P/FCS 매체의 0.1 mL에 1 mL 주사기 (블루 23 G 바늘)를 채우십시오. 그런 다음, 행 크의 솔루션의 0.3 ml에서 350 독도 추가 합니다. 정착 독도 수 있도록 수직 위치에 주사기를 유지.
- 0.05 mL를 볼륨을 감소 하 고 갈색 26 G 바늘으로 블루 23 G 바늘을 바꿉니다. 같은 주사기를 주사기에 0.2 mL의 최종 볼륨에 도달 가기 Ficoll (밀도 그라데이션 중간)의 0.15 mL를 추가 합니다. 공기 방울을 피하십시오.
- 수직 위치에서 주사기를 유지 하 고 독도의 응집을 피하기 위해 약간 그것을 회전. 독도 2-3 분 이내 주사기에 정착 됩니다.
- 받는 사람 마우스;의 몸 무게와 혈액 포도 당 수준을 측정합니다 혈액 포도 당 수준이 약 20 mmol/l. 해야 합니다.
- 26-G 바늘으로 복 주입에 의해 케 타 민 (100mg/kg 몸 무게)와 xylazine (20 mg/kg 체중) 마우스를 anesthetize.
- 따뜻한 열 플레이트 (37 ° C)에서 부정사 위치에 마우스를 놓습니다. 발가락을 곤란 하 게 하 여 마 취의 깊이 확인 합니다.
- Povidone-요오드 솔루션 (피부 살 균 제)와 복 부 지역 청소. 눈이 건조 하지 않도록 유지 그들 눈 연 고와 촉촉한.
참고: C57Bl/6의 경우 복 부 지구를 면도.
4. 섬 이식 Intraportal 경로 통해
- 0 일에는 개복 술과 집게와 피부를 유지 하 고 2-3 cm에 의해 시작-한가 위 절 개 긴 중간. 장소는 메 마른 젖은 거 즈 촉촉한 유지 하 상처 가장자리 압축.
- 멸 균 거 즈 압축에 왼쪽 및 복 부 구멍 밖에 내장 사이트를 놓습니다.
참고: 내장 프로시저 미리 따뜻하게 0.9 %NaCl 용액 또는 일반 식 염 수에 담근 멸 균 거 즈를 통해 촉촉한 유지. - 십이지 장 이동한 췌를 찾습니다. 문맥 췌를 위로 밀어 복 부 사이트에서 위치를 찾습니다. 손가락 및 엄지를 사용 하 여 포털 정 맥 노출, 노출, 일단 간 가까이 펑크.
- 1 분 이내 천천히 그리고 꾸준히 독도의 어떤 누설을 피하기 위해 돋보기의 검사에서 문맥에 독도 (0.2 mL 3.4 단계에서)을 주사.
참고: 후 주입, 항상 확인 주사기에 남아 있는 독도 대 한. 받아 P/FCS 미디어의 1 mL 주사기, 신선한 페 트리 접시를 현미경 하에서 계산으로 플러시. - 펑크 사이트에서 살 균 계기를 배치 하 고 검지 손가락으로 압력을 적용 (침투 깊이: 0.5-1 c m) 6 분 출혈을 멈추게.
참고: 주입 볼륨 0.2 mL를 초과 하지 않아야 합니다. 과도 한 볼륨 및 압력 전단 응력으로 인해 독도 손상 수 있습니다. - 조심 스럽게 내장 사이트, 복 막, 복 부 근육 층과 근 막에 다시.
- 집게를 사용 하 여, 피부, 근육 절 개 흡수 실크 봉합, 그리고 2-3 클립 위쪽 피부 레이어를 닫습니다.
- 피부 소독 제와 표면 청소, 상처 치유, 적용 하 고 개별 장에 쥐를 놓습니다. 상처 치유 및 단식 및 이차 감염에서 보호 방수 아크릴 레이어를 제공 합니다.
참고: 때까지 그들은 충분 한 의식 회복가지고 쥐를 관찰, 체액 함께 tramadol (마우스 당 0.2 mg)을 제공 합니다. 이 프로토콜에서 마우스 마 취에서 빠르게 회복 하 고 tramadol 관리 고통을 감소. 7 일 후 상처를 치유 한다. - 일반 음식과 물 쥐 먹이. 음식과 물 소비 및 소변 배설 streptozotocin 주입 후 증가할 것 이다.
- 첫 주 한 주 syngeneic 마우스에 다음 번에 대 한 매일 혈액 포도 당 수치를 측정 합니다. 수용자 마우스에서 최대 15 일 동안 일주일에 세 번 혈액 포도 당 수준을 측정 합니다.
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Representative Results
이식된 독도의 역량은 화학적으로 유발 된 당뇨 쥐에서 연구 했다. 독도 당뇨병 쥐 모델에서 포털 정 맥 시스템을 통해 이식 했다. 기증 받는 사람 비율 2:1 이었다. Syngeneic 마우스 모델에서 두 기증자 쥐 350 독도를 활용 했다. 독도 다음 당뇨병 쥐에 이식 했다. 혈액 포도 당 수준에 있는 감소는 이식, 이식된 췌 장 독도 혈액 포도 당 수준을 감소에서 역할을 제안 후 1 일에 관찰 되었다. Streptozotocin 증가 혈액 포도 당 수준을 약 22 m m o l/l. 4.6 mmol/l (1 일) 혈액 포도 당 수준에 있는 하락 후에 작은 섬 이식 (그림 1A) 관찰 되었다. 그림 1A와 같이 Normoglycemia 최대 121 일 동안 유지 되었다. 몸 무게와 혈액 포도 당 수준 대략 동일한 패턴을 따 랐 다. Streptozotocin 주입 및 수술 후 체중 감소. 앞으로 하루 2에서 그것은 그림 1B와같이 25.3 g (주 4) 29.7 g (121 일)에서 정상을 향해 상승 경향이 있었다.
중요 한 조직 적합성 (MHC)의 경우 일치 하지 않는 쥐, 두 C57Bl/6 (h 2d) 마우스에서 350 독도 BALB/c (h 2b) 당뇨병 쥐에 이식 했다. 후에 streptozotocin 주입, 혈액 포도 당 증가 최대 26.6 m m o l/l. 섬 이식 후 혈액 포도 당 수준이 떨어졌다 4.4 mmol/L (하루 1; 그림 2A)입니다. Normoglycemia (4.44 7.2 mmol/l)는 최대 10 일 동안 하지만 15 일 (20.1 mmol/L) 후 관찰 되었다. 당뇨병 쥐의 몸 무게 23 g (매일 0)과 21.5 g (주 1) 추가 26 g (하루-3)에서 떨어졌다. 이식 후 몸 무게 점차적으로 복구 23 g (주 2)에서 25 g (10 일). MHC-일치 하지 않아, 혈액 포도 당 수준을 증가 하 고 체중 감소 작은 섬 이식 (그림 2B) 후 10 일.
그림 1 : Syngeneic 섬 이식의 효과. (A) 혈액 포도 당 수준 streptozotocin 유도 당뇨 마우스에서 다른 시간 지점에서 측정 되었다 (n = 3). Streptozotocin (180 mg/kg)의 단 하나의 복용량 (0 일) 각 받는 사람에 게 350 독도의 이식 하기 전에 주입 했다. 혈액 포도 당 수준 (mmol/L) 최대 121 일 동안 측정 되었다 (일-3: 17 ± 2.3; 0: 22.6 ± 1, 하루 1: 4.6 ± 0.3; 하루 5: 7.5 ± 0.4; 및 하루 121: 5.3 ± 0.09). (B) 섬 이식 후 체중 증가. 위의 데이터는 평균 ±를 표준 편차를 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2 : 수용자 섬 이식의 효과. (A) 혈액 포도 당 수준 streptozotocin 유도 당뇨 마우스에서 다른 시간 지점에서 측정 되었다 (n = 2). Streptozotocin (180 mg/kg)의 단 하나의 복용량 350 췌 장 독도 (0 일)의 이식 하기 전에 주입 했다. 혈액 포도 당 수준 (mmol/L)까지 15 일 동안 측정 되었다 (주-1: 25.5 ± 5.3; 0: 26.6 ± 1.4; 하루 2: 8 ± 0.9, 하루 10: 6.2 ± 0.08; 및 하루 15: 20.1 ± 1.6). Normoglycemic 상태 최대 10 일 동안 그리고 그 후, 혈액 포도 당 농도 증가 유지 했다. (B) 섬 이식 전후 몸 무게의 속 행. 데이터는 평균 ±를 표준 편차를 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3 : 간으로 이식된 췌 장 독도의 대표 immunostaining 그림: PBS, 10% 당나귀 혈 청 인슐린 1 차적인 항 체 (1: 500)와 혈소판 4 ° C에서 하룻밤 부 화 뒤 블록 간 섹션 (5 µ m) 세척 내 피 세포 접착 분자 PECAM-1 1 차적인 항 체 (1: 100). 다음 날, 1 시간에 대 한 2 차 항 체로 얼룩 PBS, Hoechst와 카운터 얼룩을 세척 하 고 Leica 형광 현미경 이미지를 캡처. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
본이 연구에서는 섬 이식의 intraportal 경로 탐구 된다. 이 프로토콜 당뇨 스트레스 완화에 매우 효율적 이며 섬 이식 연구를 탐구 하는 깊이 있는 기회를 제공 합니다. 이 프로토콜은 약 350 murine 독도 hyperglycemic 상태를 역전 할 수 있다 확인 한다. 또한, 쥐의 절차 동안, 죽 었 고 glycemic 제어 모든 받는 사람에 달성 했다. 몸 무게와 혈액 포도 당 수준의 능력, 표준, 및 반대로 혈당에 이식된 독도의 기능을 반영 하기 위해 정기적으로 기록 되었다. Syngeneically 이식된 생쥐에서 혈액 포도 당 수준은 첫 번째 주를 일주일에 한 번 그 후 매일 측정 했다. 독도 이식, hypoxic 조건 등 후 요인 14 일 후 신생 프로 요인 VEGF 등을 분 비 하 고 그림 3에서처럼 간에서 혈관 engraftment 증가를 내 피 세포를 트리거합니다. 수용자 쥐에서 혈액 포도 당 수준 까지의 15 일 동안 일주일에 세 번을 측정 했다. 15 일 후 이식된 독도 거절 되었다 면역 공격으로 인해 수용자 모델에서 면역 억제 약은 관리 하지 않는 한
문학10,11에 게시 하는 여러 섬 격리 프로토콜을 확인 하 고 있습니다. 가장 간단한 콜라 소화 후 수동으로 그들의 크기와 형태에 근거 하 여 독도 선택 하는 것입니다. 독도을 선택 하는 가장 중요 한 단계 중 하나 이며 외 분 비 세포, 파편, 등 선택한 독도 피하기 위해 밤새 소화 하는 동안 발생 하는 기계적 스트레스 로부터 복구할 수 있도록 인큐베이터에서에서 37 ° C에서 유지 되어야 한다 절차입니다. Streptozotocin 투여 및 intraportal 섬 이식의 선택이이 프로토콜에 키도 있습니다. 체온 통제 되어야 하 고 수술에 걸쳐 열 플레이트를 사용 하 여 유지. 멸 균 거 즈를 출혈을 피하기 위해 펑크의 사이트에서 6 분에 대 한 최소한의 압력으로 적용 되어야 한다. 그들은 충분 한의 식이 되 찾을 때까지 마우스 움직임만 유지 되어야 한다.
이 프로토콜의 특정 단계를 수정할 수 있습니다. 예를 들어 소화 시간의 최적화와 콜라의 볼륨 다른 쥐 긴장에 독도의 수율을 증가할 수 있습니다. 당뇨병 (streptozotocin 180 mg/kg)의 급속 한 유도, 대신 천천히 혈당을 증가 유도 될 수 있는 시간의 연장된 기간 동안 낮은 복용량을 사용 하 여 (예를 들어, 40 mg/kg/5 일 연속 하루 streptozotocin). 이 이식된 독도의 더 나은 engraftment를 제공할 수 있습니다. Intraportal 정 맥을 대신 골, omental 주머니, 근육 지역, 위 점 막 표면, 비장, 신장 등 다른 사이트를 탐험 수 있습니다.
이식된 독도의 가난한 engraftment 아직도 임상 시험에서 주요 관심사입니다. 기타 기증자, 이식, 면역 억제, 및 혈액 중재 반응12,13후 혈액 포도 당 수치를 유지 하는 불일치의 부족을 포함. 적절 한 engraftment를 평가 하는 방법의 부족은 또 다른 장애물입니다. 자기 공명 또는 생물 발광 영상 이식된 독도 추적 가능 하 게 포도 당 내성 검사 등 c-펩 티 드 클래식 메서드를 대체할 수 있다. 미래에 독도 함께 이식 하는 줄기 세포 영양 제공 그리고 면역 조정 지원14.
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Disclosures
모든 저자 들은 관심의 충돌을 선언 합니다.
Acknowledgments
우리는 그녀의 지원에 대 한 Gundula Hertl를 인정 하 고 싶습니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| C57Bl/6 mice | Charles River (Sulzfeld, Germany) | (10-12 weeks) | |
| BALB/c mice | Charles River (Sulzfeld, Germany) | (10-12 weeks) | |
| NMRI nude mice | Charles River (Sulzfeld, Germany) | (10-12 weeks) | |
| Ketamine | Bela-pharm | ||
| Xylazine | CEVA TIERGESUNDHEIT GmbH | ||
| Syringe, 23G and 26G needle | BD | ||
| Petri Dish | Falcon | 303800 | |
| NaCl | Carl Roth | 351007 | |
| Sterile Gauze | Fuhrmann | 7647-14-5 | |
| Shaking Water bath | Kotterman | 1501 | |
| Scissors | Braun | 1501 | |
| Glucose Meter | One Touch | ||
| Warm Thermal Plate | Thermo Fisher | ||
| Braunol (povidone-iodide solution) | B.Braun Melsungen AG | 3864154 | |
| Liposic Edo - Sprinkled Ointment (eye ointment) | Dr. G Mann Chem.-Pharm. GmbH | ||
| Incubator | Fa. Roth | ||
| Flow Bench | Herdus | ||
| Ficoll | Sigma-Aldrich | 10771 | |
| 5-0 Silk Suture Vicryl | Braun | (7.5 *1.75mm) | |
| Michel Clamps (clips) | Aesculap | BN507R | |
| P/FCS Solution | Gibco | 21180-021 | |
| TCM-199 (10x) | Gibco | 21180-021 | |
| FCS | Biowest | S1810-500 | |
| Penicillin-streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| HEPES (1 M) | Biochrom | L 1613 | |
| Gentamycin | Ratiopharm | ||
| Ciprofloxacin | Fresenius Kabi | ||
| Hank's Solution | Gibco | 14060-040 | |
| Collagenase | Roche | 11213865001 | |
| Streptozotocin | Calbiochem | 572204 | |
| OPSITE-spray (wound healer) | Smith and nephew | 66004978 | |
| Reugular food | Altromin | ||
| Head light LED 16042 (magnifying glass) | Eschenbach | 16042 | |
| Rat anti-mouse PECAM-1(CD31) monoclonal primary antibody | Millipore, Chemicon | CBL1337 | Dilution (1:100) |
| Donkey anti-rat secondary antibody | Dianova | 712095153 | Dilution (1:400) |
| Polyclonal guinea pig anti-insulin primay antibody | Dako | A0564 | Dilution (1:500) |
| Donkey anti-guinea pig secondary antibody | Dianova | 706-259-148 | Dilution (1:400) |
References
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