Summary
Трансплантация поджелудочной островок является способом достижения нормогликемия в диабет типа 1. Эта статья посвящена трансплантации технику через intraportal маршрут для поддержания нормальной глюкозы в диабетических мышей.
Abstract
Трансплантация поджелудочной островок для снижения гипергликемии весьма успешным в грызунов с химически индуцированной сахарным диабетом. Наиболее распространенным сайт трансплантации в экспериментальной островок трансплантации является капсулу почки. Однако поскольку меньше известно о взаимодействии панкреатических островков с составляющих крови, также имеет смысл использовать подход воротной вены в экспериментальной островок пересадке.
Этот протокол демонстрирует метод трансплантации intraportal островок в ВММНИИ обнаженной мышей. Стрептозотоцин (180 мг/кг) вводят внутрибрюшинно побудить гипергликемии у получателей мышей. Они рассматриваются как диабетическая в пост-уровень глюкозы крови больше, чем 20 ммоль/л Один день до трансплантации, мыши панкреатических островков изолированы от доноров поджелудочной железы, коллагеназа пищеварения; как минимум 350 островков используются каждого диабетическая получателя. В зависимости от урожайности изоляции островок, два или более доноров мышей используются для каждого получателя. После ночи культуры при 37 ° C островки вводят в получателей печени через воротной вены. После операции, мышей были защищены в красных домов Makrolon и наблюдается до просыпаются. Этот протокол поддерживает гликемического контроля для 120 дней в сингенных мышей и 15 дней в аллогенной мышей.
Introduction
Островок трансплантация это перспективный подход для лечения 1 сахарный диабет типа1. В 1893 году Уотсон Уильямс была выполнена первая попытка перевести фрагмент поджелудочной железы овец в диабетических пациентов. Однако был достигнут крупный прорыв в клинической островок пересадке с протоколом Эдмонтон, и впоследствии ряд национальных программ были развитые2. В прошлом несколько сайтов, таких как костного мозга, Сальниковая сумка, внутримышечные региона, желудка слизистой поверхности, селезенки и капсула почек, были изучены в доклинических моделях, но Портал венозной системы рассматривается как одна из подходящие и эффективного сайта для клинических программ3,4,5,6.
Экзогенные администрации инсулина могут быть заменены островок вливания в воротной вены. Это считается предпочтительным местом, поскольку поступление кислорода сопоставима с родной поджелудочной железы из-за расположения ниже по течению впадения портала артерии и Вены. Кроме того существует большой площадью поверхности, так что трехмерной структуры островки могут быть сохранены, и васкуляризация может быть облегченной5. В получателей Диабетическая мышь, 2000 человека или свиных островковых эквиваленты или 350 мыши островков адекватны вспять гипергликемической государственная7,8. Euglycemic уровнях сообщалось на 15 дней в модели мыши получателя культивированная островков и аллогенной модели мышь и более чем 120 дней в сингенных мышь для трансплантации.
Факторы, касающиеся эффективности трансплантации островковых через воротной вены являются соответствующие анестезии, методом прокола и гемостаз9. Анестезии может быть вызвана ингаляции (5% изофлюрановая) или инъекции (кетамин, Ксилазина или Пентобарбитал), и вещества, часто сочетаются. Для контроля глубины и времени анестезии внимание следует уделять состояние мыши, такие как цвет слизистой, глаз крышкой, роговицы рефлекс, частота дыхания и температуру тела. Важно обеспечить что животное не борется и что он выживает операции. Температура может управляться различными нагревательными приборами, например, грелки, красный свет ламп, теплые термальные пластины и т.д. А был использован для поддержания температуры 25-30 ° c между мышью и таблицу операции, которая предотвращает возникновение гипотермии. Дозы обезболивающих средств важное значение, поскольку все они метаболизируются в печени, и функции печени может быть временно неупорядоченных инфузии островок подвеска. Точкой идеальный пункции воротной вены является позиция между первой и второй приток вен.
Количество островков и объем предполагаемых инъекций также повлиять на результаты трансплантации, как чрезмерный объем может увеличить напряжение сдвига. Объем 0,2 мл считаются подходящими для трансплантации островковых в воротной вены. Puncturing раны (26-иглы) вызывает кровотечение из воротной вены, который должен быть остановлен в своевременным и эффективным образом. Стерильные марлевые или палец может применяться с минимальным давлением в месте пункции для около 6 минут, чтобы остановить кровотечение. Взятых вместе, портал островок инъекции является эффективным и обеспечивает регулирование уровня глюкозы в крови в химически индуцированных диабетической мыши модели.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Все процедуры в этом протоколе были одобрены немецкого животного благосостояния закон и руководящие принципы. Рассмотрите возможность использования 10 - до 12-недельных ВММНИИ обнаженной мышей и мышей C57Bl/6 (доноров: старая самка; получателя: мужской) на протяжении экспериментов. Используйте ВММНИИ обнаженной мышей для изоляции островок. Держите мышей при определенных условиях согласно правилам Фонд местных животных.
1. индукция диабета, Стрептозотоцин
- В день -4 измерения веса от 10 до 12 недельных ВММНИИ обнаженной мышей и мышей C57Bl/6, с помощью весом машины.
- Зависимости от измеренного веса Подготовьте дозе 180 мг/кг Стрептозотоцин в 0,1 мл физиологического раствора на мышь.
Примечание: Стрептозотоцин следует свежезаваренным подготовлен перед использованием и покрытые алюминиевой фольги, ведь светочувствительные. - Вводить мышь сингенных и аллогенной друг с однократной дозе 0,1 мл Стрептозотоцин (180 мг/кг) внутрибрюшинно с помощью иглы 26-G.
- В день -3 -2 и -1 собирать 2-4 мкл крови путем прокола Вены хвост не постился мышей.
- Использовать 2-4 мкл крови на тест-полоски для измерения глюкозы в крови в ВММНИИ обнаженной мышей и мышей C57Bl/6
Примечание: В этой точке, 80% мышей должна стать диабетическая (20 ммоль/Л).- Используйте мышь для трансплантации островковых, когда их уровень глюкозы в крови достигает 20 ммоль/л
2. изоляция панкреатических островков от мышей
- Анестезировать мышей с кетамин (100 мг/кг массы тела) и ксилазина (20 мг/кг массы тела) внутрибрюшинной инъекции иглой 26-G.
Примечание: Объемы кетамина и ксилазина были определены согласно веса животных (0,10 мл/10 g). - Держите мышей в лежачем положении и лечить с повидон йод раствор. Подтверждение правильного эвтаназии, установив педаль рефлекс.
Примечание: В случае C57Bl/6 бреют области живота. - Придерживайте кожу с тонкой щипцами и сделать срединной линии разреза с помощью ножниц выставить брюшной полости. Место кишечника situs слева и вне брюшной полости на стерильные марлевые компрессы.
- Отрегулируйте желудка в другом направлении, чтобы найти поджелудочной железы и других связанных тканей.
- Достичь аорты и сделать небольшой надрез для стока крови. Используйте стерильные марлевые для крови поглощения.
- Осторожно удалите кишечника. Отделите поджелудочной железы от желудка и селезенки.
- Акцизный поджелудочной железы и поместите его в свежие чашку Петри. Удалите все нежелательные материалы, такие как жир, используя пинцет.
- Заполните шприц 5 мл с 4 мл коллагеназы и вставляют поджелудочной железы с иглой 26-G (stock решение: 30 мг коллагеназы 12 мл раствора Хэнка).
- Фарш поджелудочной железы с ножницами, чтобы увеличить площадь поверхности для лучшего пищеварения и передачи 12 мл Красная шапочка.
Примечание: Хэнк сбалансированного солевого раствора: HBSS 10 x (100 мл), пенициллин-стрептомицином (10 мл), гентамицин (1 мл), Ципрофлоксацин (10 мл), HEPES (35 мл), дистиллированная H2O (900 мл) - Выполните пищеварение 10 минут при 37 ° C в тряску водяной бане. Вихревой образца трижды в регулярном интервале 15 s.
- Смешать переваривается поджелудочной железы энергично руку на 3 мин и поместите его на льду для 10 s.
- Добавьте 6 мл холодного Хэнк решение, чтобы остановить пищеварение реакции и центрифуги на 560 x g 3 мин при комнатной температуре.
- Удалить супернатант и растворяют гранулы в 10 мл Паркер/плода телячьей сыворотки (P/FCS) среды при комнатной температуре.
Примечание: P/FCS средний: TCM-199 10 x (100 мл), FCS (50 мл), пенициллин-стрептомицином (10 мл), HEPES (20 мл), дистиллированная H2O (900 мл) - Идентифицировать островков, основанный на их морфологии (сфероида, золотисто коричневого цвета) под микроскопом света. Избегайте островков с темной центрами. Проверка чистоты и жизнеспособности, выполняя Дитизон окрашивание под микроскопом света.
Примечание: Дитизон связывается иона цинка и обеспечивает пятно красного цвета к островкам. - Использование пипетки 1 мл рассчитывать и handpick островков под микроскопом света и передавать их на свежий Петри (60 x 15 мм) содержащий 4 мл среды P/FCS.
Примечание: Объем P /среднего FCS в чашке Петри не должен превышать 4 мл с целью обеспечения наличия кислорода. - Держите изолированных островков в 4 мл P/FCS среднего ночь при 37 ° C в инкубаторе.
3. Подготовка животных для трансплантации островковых
- Удаление изолированных островков из инкубатора 37 ° C и разместите их под скамейке потока. Центр островков с круговой качание Петри.
- Заполните шприц 1 мл (синяя игла 23-G) с 0,1 мл среды P/FCS. Затем добавьте 350 островков в 0,3 мл раствора Хэнка. Держите шприц в вертикальном положении, чтобы позволить островков урегулировать.
- Уменьшить громкость до 0,05 мл и заменить синий иглой 23 G с иглой коричневый 26-G. Же шприц добавьте 0,15 мл Ficoll (градиент средней плотности) вверх, чтобы достичь окончательного объема 0,2 мл в шприц. Избегайте воздушных пузырей.
- Держите шприц в вертикальном положении и поверните его немного, чтобы избежать слипания островков. Островки осядет на конус шприца в течение 2-3 мин.
- Измерить тела вес и крови глюкозы получателя мышей; уровень глюкозы в крови должна быть около 20 ммоль/л
- Анестезировать мышей с кетамин (100 мг/кг массы тела) и ксилазина (20 мг/кг массы тела) внутрибрюшинной инъекции иглой 26-G.
- Место мыши в лежачем положении на теплый экзотермической пластины (37 ° C). Проверка глубины анестезии путем защемления ног.
- Чистота области живота с повидон йод раствор (кожу дезинфицирующее). Чтобы предотвратить высыхание глаза, держите их влажными с глазную мазь.
Примечание: В случае C57Bl/6 бреют области живота.
4. островок пересадке через Intraportal маршрут
- В день 0, начните с лапаротомия, удерживая кожи пинцетом и сделать 2-3 см-разрез длиной срединной линии с ножницами. Место, Влажные Салфетки марлевые сжать вокруг края раны, чтобы держать его влажным.
- Место кишечника situs слева и за ее пределами брюшной полости на стерильные марлевые компрессы.
Примечание: Держите кишечник влажной на протяжении всей процедуры с подогретым 0,9% раствор NaCl или стерильной марли, смоченной в нормальное saline. - Переместить двенадцатиперстную кишку и найдите поджелудочной железы. Найдите воротной вены, расположенный в вентральной сайт, нажав поджелудочной железы вверх. Использовать палец и большой палец подвергать воротной вены и, после пункции недалеко от печени.
- В течение 1 мин медленно и неуклонно inject островков (0,2 мл из шага 3.4) в портальной Вене под инспекции увеличительное стекло, чтобы избежать утечки островков.
Примечание: После инъекций, всегда проверяйте оставшиеся островки в шприц. Возьмите 1 мл P/FCS СМИ в шприц, скрытой в свежие чашку Петри и игр под микроскопом. - Поместите стерильные датчика на сайте проколам и приложите давление с указательный палец (глубина проникновения: 0,5-1 см) на 6 минут, чтобы остановить кровотечение.
Примечание: Объем инъекции не должен превышать 0,2 мл. Чрезмерный объем и давление может повредить островков из-за напряжения сдвига. - Осторожно поместите обратно в положение кишечника situs, брюшины, слой мышц живота и фасции.
- С помощью щипцов, снять кожу, закрыть разрез мышц с рассасывающиеся шовные шелка и верхний слой кожи с 2-3 клипы.
- Очистить поверхность дезинфицирующим кожи, применять рана целителя и место мышей в индивидуальных клетках. Рана целителя обеспечивает слой водонепроницаемый акрилата и защитить от мацерации и вторичной инфекции.
Примечание: Наблюдать мышей до тех пор, пока они достаточно сознание, обеспечивают трамадола (0,2 мг / мышь) наряду с жидкостями. В этом протоколе мышей быстро оправился от анестезии и трамадол администрации уменьшить боль. После 7 дней должны залечить раны. - Кормить мышей с регулярной еды и воды. Пищи и воды потребления и моча мочой будет увеличиваться после инъекции Стрептозотоцин.
- Измерение уровня глюкозы в крови каждый день в течение первой недели, а затем один раз в неделю в сингенных мышей. Аллогенная мышей измерьте уровень глюкозы в крови трижды в неделю на срок до 15 дней.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Компетентности пересаженные островки был изучен в химически индуцированных диабетических мышей. Через портал венозной системы в модели диабетических мышей были пересаженные островки. Донор реципиент составляло 2:1. В сингенных мыши модели двух мышей доноров использовались для получения 350 островков. Островки затем были пересажены в диабетических мышей. На 1 день после трансплантации, предлагая роль пересаженных панкреатических островков в снижении уровня глюкозы в крови наблюдалось снижение уровня глюкозы в крови. Стрептозотоцин увеличился уровень глюкозы в крови до около 22 ммоль/л После трансплантации островковых (рис. 1A) было отмечено снижение уровня глюкозы в крови до 4,6 ммоль/Л (1 день). Нормогликемия сохранялся до 121 дней, как показано на рисунке 1A. Уровень глюкозы крови и вес тела примерно следуют той же схеме. После инъекции Стрептозотоцин и хирургии снизился вес тела. День 2 он, как правило, поднимаются к нормальной, от 25,3 г (4 день) до 29,7 г (день 121), как показано на Рисунок 1B.
В случае гистосовместимости (MHC) несоответствие мышей, 350 островков из двух мышей C57Bl/6 (dH2) были пересажены в диабетических мышей BALB/c (H2b). После инъекции Стрептозотоцин глюкозы в крови увеличено до 26,6 ммоль/л После трансплантации островковых уровень глюкозы в крови упала до 4,4 ммоль/Л (день 1; Рисунок 2A). Нормогликемия (4.44 до 7,2 ммоль/Л) было отмечено, на срок до 10 дней, но не после 15 дней (20.1 ммоль/Л). Вес тела диабетических мышей снизилась с 26 g (день -3) в 23 g (день 0) и далее 21.5 g (1 день). После пересадки масса тела постепенно восстановился от 23 g (день 2) до 25 г (10-й день). Благодаря MHC-несоответствие повышение уровня глюкозы крови и веса тела снизилась через 10 дней после трансплантации островковых (рис. 2B).
Рисунок 1 : Влияние трансплантации островковых сингенных. (A) уровень глюкозы в крови измерялось в разное время точках Стрептозотоцин индуцированной сахарным диабетом мышах (n = 3). Разовая доза Стрептозотоцин (180 мг/кг) был введен до пересадки 350 островков для каждого получателя (день 0). Уровень глюкозы в крови (ммоль/Л) был измерен до 121 дней (день -3: 17 ± 2.3; день 0: 22.6 ± 1; день 1: 4.6 ± 0,3; день 5: 7.5 ± 0,4; и день 121: 5,3 ± 0,09). (Б) увеличение массы тела после трансплантации островковых. Данные выше представляет среднее ± стандартное отклонение. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2 : Влияние трансплантации аллогенных островок. (A) уровень глюкозы в крови измерялось в разное время точках Стрептозотоцин индуцированной сахарным диабетом мышах (n = 2). Разовая доза Стрептозотоцин (180 мг/кг) был введен до пересадки 350 панкреатических островков (день 0). Уровень глюкозы в крови (ммоль/Л) был измерен на срок до 15 дней (день -1: 25.5 ± 5,3; день 0: 26.6 ± 1.4; день 2:8 ± 0,9; день 10: 6,2 ± 0,08; и день 15: 20,1 ± 1,6). Normoglycemic состояние сохранялся на срок до 10 дней и впоследствии, увеличение концентрации глюкозы в крови. (B) последующие меры веса тела до и после трансплантации островковых. Данные представляют собой среднее ± стандартное отклонение. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3 : Представитель иммуноокрашивания картину пересаженных панкреатических островков в печени: промойте разделе печени (5 мкм) с PBS, блок с осла 10% сыворотки после инкубации на ночь при 4 ° C с инсулина основное антитело (1: 500) и тромбоцитов эндотелиальные клетки адгезии молекулы PECAM-1 основное антитело (1: 100). Следующий день, пятно с вторичные антитела за 1 ч, мыть с PBS, счетчик пятно с Hoechst и захвата изображения с флуоресцентный микроскоп Leica. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
В этом исследовании intraportal маршрут трансплантации островковых изучается. Этот протокол является высокоэффективным в освобождении диабетической стресс и дает возможность углубленного изучения исследований трансплантации островковых. Этот протокол подтверждает, что около 350 мышиных островков способны обратить вспять гипергликемической государства. Кроме того ни одна из мышей умер во время процедуры, и гликемического контроля был достигнут в всех получателей. Тело вес и крови глюкозы регулярно были записаны с учетом компетентности, стандарт и функциональность пересаженные островки в обращении вспять гипергликемии. В syngeneically пересаженных мышей уровень глюкозы в крови были измерены каждый день в течение первой недели и один раз в неделю после этого. После трансплантации островков, гипоксических состояние и другие факторы вызывают эндотелиальные клетки секретируют pro ангиогенных факторов таких как VEGF после 14 дней и тем самым увеличить сосудистой приживления в печени, как показано на рисунке 3. Аллогенная мышей уровень глюкозы в крови были измерены трижды в неделю на срок до 15 дней. После 15 дней пересаженные островки были отклонены в аллогенной модели благодаря иммунной атаки, если только иммуносупрессивных препаратов осуществляется
Существует несколько протоколов изоляции островок, опубликован в литературе10,11. Наиболее простым является подобрать островков вручную на основе их размер и морфология после переваривания коллагеназы. Это один из наиболее важных шагов для выбора только островков и избежать экзокринной клетки, мусора, и т.д. выбранные островки следует сохранить при 37 ° C ночь в инкубатор, чтобы дать им возможность оправиться от механических напряжений, возникающих во время пищеварения процедура. Выбор дозы Стрептозотоцин и intraportal островок пересадке также являются ключом к настоящему Протоколу. Температура тела должны быть регламентированы и поддерживается с помощью экзотермической пластины на протяжении хирургической процедуры. Стерильные марлевые должны применяться с минимальным давлением на 6 мин на месте прокола чтобы избежать кровотечения. Мышей должны находиться под наблюдением, до тех пор, пока они восстановить достаточно сознания.
Определенные шаги в этом протоколе может быть изменен. Например оптимизация времени пищеварение и объем коллагеназы может увеличить доходность островков в разных мышей штаммов. Вместо того чтобы быстрой индукции диабета (Стрептозотоцин 180 мг/кг), постепенно увеличивая гипергликемия может быть наведено с использованием более низкой дозе в течение длительного периода времени (например, 40 мг/кг/день Стрептозотоцин 5 дней подряд). Это может обеспечить лучшую приживления пересаженных островков. Другие сайты, такие как костного, Сальниковая сумка, внутримышечные региона, слизистой поверхности желудка, селезенки и почки могут быть изучены в качестве альтернатив intraportal Вену.
Бедные приживления пересаженных островков по-прежнему является серьезной проблемой в клинических испытаниях. Другие включают в себя нехватку доноров, несоответствия в поддержании уровня глюкозы в крови после трансплантации, иммуносупрессия и кровь опосредованной реакции12,13. Еще одним препятствием является отсутствие методов для оценки надлежащего приживления. Отслеживание пересаженные островки магнитного резонанса или биолюминесценции изображений может возможно заменить классические методы, такие как тест на переносимость глюкозы или c пептида. В будущем стволовые клетки пересадили вместе с островами могут обеспечить питанием и иммуномодулирующие поддержки14.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Все авторы заявляют, что они имеют никакого конфликта интересов.
Acknowledgments
Мы хотели бы признать Гундула Hertl для ее поддержки.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| C57Bl/6 mice | Charles River (Sulzfeld, Germany) | (10-12 weeks) | |
| BALB/c mice | Charles River (Sulzfeld, Germany) | (10-12 weeks) | |
| NMRI nude mice | Charles River (Sulzfeld, Germany) | (10-12 weeks) | |
| Ketamine | Bela-pharm | ||
| Xylazine | CEVA TIERGESUNDHEIT GmbH | ||
| Syringe, 23G and 26G needle | BD | ||
| Petri Dish | Falcon | 303800 | |
| NaCl | Carl Roth | 351007 | |
| Sterile Gauze | Fuhrmann | 7647-14-5 | |
| Shaking Water bath | Kotterman | 1501 | |
| Scissors | Braun | 1501 | |
| Glucose Meter | One Touch | ||
| Warm Thermal Plate | Thermo Fisher | ||
| Braunol (povidone-iodide solution) | B.Braun Melsungen AG | 3864154 | |
| Liposic Edo - Sprinkled Ointment (eye ointment) | Dr. G Mann Chem.-Pharm. GmbH | ||
| Incubator | Fa. Roth | ||
| Flow Bench | Herdus | ||
| Ficoll | Sigma-Aldrich | 10771 | |
| 5-0 Silk Suture Vicryl | Braun | (7.5 *1.75mm) | |
| Michel Clamps (clips) | Aesculap | BN507R | |
| P/FCS Solution | Gibco | 21180-021 | |
| TCM-199 (10x) | Gibco | 21180-021 | |
| FCS | Biowest | S1810-500 | |
| Penicillin-streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| HEPES (1 M) | Biochrom | L 1613 | |
| Gentamycin | Ratiopharm | ||
| Ciprofloxacin | Fresenius Kabi | ||
| Hank's Solution | Gibco | 14060-040 | |
| Collagenase | Roche | 11213865001 | |
| Streptozotocin | Calbiochem | 572204 | |
| OPSITE-spray (wound healer) | Smith and nephew | 66004978 | |
| Reugular food | Altromin | ||
| Head light LED 16042 (magnifying glass) | Eschenbach | 16042 | |
| Rat anti-mouse PECAM-1(CD31) monoclonal primary antibody | Millipore, Chemicon | CBL1337 | Dilution (1:100) |
| Donkey anti-rat secondary antibody | Dianova | 712095153 | Dilution (1:400) |
| Polyclonal guinea pig anti-insulin primay antibody | Dako | A0564 | Dilution (1:500) |
| Donkey anti-guinea pig secondary antibody | Dianova | 706-259-148 | Dilution (1:400) |
References
- McCall, M., Shapiro, A. M. Update on islet transplantation. Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2 (7), a007823 (2012).
- Shapiro, A. M., et al. Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen. New England Journal of Medicine. 343 (4), 230-238 (2000).
- Cantarelli, E., et al. Bone marrow as an alternative site for islet transplantation. Blood. 114 (20), 4566-4574 (2009).
- Echeverri, G. J., et al. Endoscopic gastric submucosal transplantation of islets (ENDO-STI): technique and initial results in diabetic pigs. American Journal of Transplantation. 9 (11), 2485-2496 (2009).
- Korsgren, O., et al. Optimising islet engraftment is critical for successful clinical islet transplantation. Diabetologia. 51 (2), 227-232 (2008).
- Merani, S., Toso, C., Emamaullee, J., Shapiro, A. M. Optimal implantation site for pancreatic islet transplantation. British Journal of Surgery. 95 (12), 1449-1461 (2008).
- Lingwal, N., et al. Inhibition of gelatinase B (matrix metalloprotease-9) activity reduces cellular inflammation and restores function of transplanted pancreatic islets. Diabetes. 61 (8), 2045-2053 (2012).
- Chen, C., et al. Improved intraportal islet transplantation outcome by systemic IKK-beta inhibition: NF-kappaB activity in pancreatic islets depends on oxygen availability. American Journal of Transplantation. 11 (2), 215-224 (2011).
- Wang, Y., Wang, T., Zhang, L. Three aspects are critical for carrying out intraportal islet transplants successfully in a diabetes mouse model. Experimental and Clinical Transplantation. 10 (3), 302-304 (2012).
- Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination. Journal of Visualized Experiments. (88), e50374 (2014).
- Zmuda, E. J., Powell, C. A., Hai, T. A method for murine islet isolation and subcapsular kidney transplantation. Journal of Visualized Experiments. (50), (2011).
- Rother, K. I., Harlan, D. M. Challenges facing islet transplantation for the treatment of type 1 diabetes mellitus. Journal of Clinical Investigation. 114 (7), 877-883 (2004).
- Su, Z., et al. Small islets are essential for successful intraportal transplantation in a diabetes mouse model. Scandinavian Journal of Immunology. 72 (6), 504-510 (2010).
- Rekittke, N. E., Ang, M., Rawat, D., Khatri, R., Linn, T. Regenerative Therapy of Type 1 Diabetes Mellitus: From Pancreatic Islet Transplantation to Mesenchymal Stem Cells. Stem Cells International. 2016, 22 (2016).
