Summary
Bukspottskörteln ötransplantation är ett sätt att uppnå normoglycemia i typ 1-diabetes. Denna artikel fokuserar på transplantation teknik genom intraportal rutten att bibehålla normala blodsockernivåer hos diabetiska möss.
Abstract
Bukspottskörteln ötransplantation att minska hyperglykemi är mycket framgångsrika i gnagare med kemiskt inducerad diabetes. Den vanligaste transplantation platsen i experimentell ötransplantation är njure kapseln. Dock som mindre är känt om samspelet mellan Langerhanska med blodkomponenter, klokt det också att utnyttja metoden portalen ven i experimentell ötransplantation.
Detta protokoll visar en intraportal holme transplantation teknik i NMRI naken möss. Streptozotocin (180 mg/kg) injiceras intraperitonealt inducera hyperglykemi i mottagarens möss. De är ansedda som diabetiker på en icke-fastande blodsockernivå högre än 20 mmol/L. En dag före transplantation, är mus Langerhanska isolerade från givare bukspottkörteln av kollagenas matsmältningen; minst 350 holmar utnyttjas per diabetiker mottagare. Beroende på islet isolation avkastningen, utnyttjas två eller flera givare möss per mottagare. Efter övernattning kultur vid 37 ° C administreras holmar in i mottagarens levern via portalen ven. Efter operation, mössen skyddas i röda Makrolon hus och observeras tills är vaken. Detta protokoll underhåller glykemisk kontroll för 120 dagar i syngena möss och 15 dagar i allogen möss.
Introduction
Ö-transplantation är en lovande metod att behandla typ 1 diabetes mellitus1. Det första försöket att överföra ett fåren bukspottskörteln fragment till en diabetiker patient framfördes av Watson Williams 1893. Dock ett stort genombrott i klinisk ö-transplantation uppnåddes med protokollet Edmonton, och därefter en rad nationella program var utvecklade2. Tidigare har flera platser, såsom benmärg, omental påse, intramuskulär regionen, gastric slemhinneepitel, mjälte och njure kapsel, utforskades i prekliniska modeller, men portalen venösa systemet är ansedd som en av de lämpliga och effektiva platsen för kliniska program3,4,5,6.
EXOGEN tillförsel av insulin kan ersättas av holme infusion i portalen ven. Detta anses en rekommenderad plats eftersom syretillförseln är jämförbar med den hos infödda bukspottkörteln på grund av platsen nedströms från sammanflödet av den portal artär och ven. Dessutom finns det en stor yta, så att den tredimensionella strukturen av holmarna kan bevaras och vaskularisering kunde vara underlättas5. I mottagarens diabetiker mus, 2 000 mänskliga eller svin holme medel eller 350 mus är holmar tillräckliga för att vända den hyperglykemiska tillstånd7,8. Euglycemic nivåer rapporterades under 15 dagar i mottagarens musmodell av xenogena holmar och allogen mus-till-musmodell, och mer än 120 dagar i syngena mus-till-mouse transplantation.
Faktorer som är relevanta för effekten av ötransplantation via portalen ven är lämplig anestesi, punktering och hemostas9metoder. Anestesi kan induceras genom inandning (5% isofluran) eller injektion (ketamin, xylazin eller pentobarbital), och ämnen kombineras ofta. För kontroll av djupet och tid av anestesi, bör vara uppmärksamma tillståndet i musen, såsom färg på den slemhinnan, ögonlocket, korneal reflex, andningsfrekvens och kroppstemperatur. Det är viktigt att se till att djuret inte kämpar och att det överlever operationen. Temperaturen kan upprätthållas av olika uppvärmning enheter, såsom värmedynor, röd glödlampor, etc. A varma termiska plattan har använts för att hålla en temperatur på 25-30 ° C mellan musen och tabellen drift, som förhindrar förekomsten av hypotermi. Doserna av bedövningsmedel är viktiga, eftersom alla av dem är metaboliseras i levern och nedsatt leverfunktion kan vara övergående störda av infusionen av holme suspensionen. Den idealiska punktering punkten för portalen ven är positionen mellan första och andra skattskyldigt venen.
Antal holmar och avsedda injektionsvolymen också påverka utfallet av transplantatet, eftersom en överdriven volym kan öka skjuvspänningen. En 0,2 mL volym anses lämpligt för ö-transplantation i portalen ven. Puncturing såret (26-gauge nål) inducerar blödning från portalen ven, som måste stoppas på ett snabbt och effektivt sätt. Steril kompress eller ett finger kan appliceras med minimalt tryck på platsen för att punktera för ca 6 min att stoppa blödningen. Tas tillsammans, portal holme injektion är effektiv och ger förordningen över blodsockernivåer i kemiskt inducerad diabetes musmodeller.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla förfaranden i detta protokoll har godkänts av tyska djur välfärd lagstiftning och riktlinjer. Överväg att använda 10 - till 12-vecka-gammal NMRI naken möss och C57Bl/6 möss (givare: gammal kvinna; mottagaren: manliga) under experimenten. Använda NMRI naken möss för ö-isolering. Hålla möss under definierade förhållanden enligt lokala djuranläggningen föreskrifter.
1. induktion av Diabetes av Streptozotocin
- Dag -4, mäta kroppsvikter på 10 till 12 veckor gamla NMRI naken möss och C57Bl/6 möss använder en vägning maskin.
- Enligt uppmätta kroppsvikten, Förbered en 180 mg/kg dos av streptozotocin i 0,1 mL koksaltlösning per mus.
Obs: Streptozotocin bör nymalen förberedas före användning och täckt med aluminiumfolie, eftersom det är ljuskänsliga. - Injicera syngena och allogen möss varje med en engångsdos på 0,1 mL av streptozotocin (180 mg/kg) intraperitonealt med en 26-G nål.
- Dag -3 samla -2 och -1 2-4 µL blod genom att punktera svans venerna av icke-fastande möss.
- Använd 2-4 µL av blodprovet per testremsa för att mäta blodsockret i NMRI naken möss och C57Bl/6 möss
Obs: Vid denna punkt, 80% av mössen bör bli diabetiker (20 mmol/L).- Använda möss för ö-transplantation när sina blodsockernivåer når 20 mmol/L.
2. isolering av Langerhanska från möss
- Söva möss med ketamin (100 mg/kg kroppsvikt) och xylazin (20 mg/kg kroppsvikt) av intraperitoneal injektion med en 26-G nål.
Obs: Volymerna av ketamin och xylazin bestämdes enligt kroppsvikter av djuren (0,10 mL/10 g). - Hålla mössen i ryggläge och desinficera med povidon-jodlösning. Bekräfta rätt dödshjälp genom att kontrollera pedal reflexen.
Obs: Vid C57Bl/6 raka bukhålan. - Håll huden med fin pincett och göra ett mittlinjen snitt med sax för att exponera bukhålan. Placera den tarmen situs till vänster och utanför bukhålan på en steril gasbinda komprimera.
- Justera magen i en annan riktning att lokalisera bukspottkörteln och andra associerade vävnader.
- Nå aorta och göra ett litet snitt rinna blod. Använd steril kompress för blod absorption.
- Ta försiktigt bort tarmen. Separata bukspottkörteln från magen och mjälten.
- Punktskatt bukspottkörteln och placera det i en färsk petriskål. Ta bort alla oönskade material, såsom fett, med hjälp av tången.
- Fyll en 5 mL sprutan med 4 mL kollagenas och injicera i bukspottkörteln med en 26-G nål (stamlösning: 30 mg kollagenas i 12 mL Hanks lösning).
- Finhacka bukspottkörteln med sax för att öka yta för en förbättrad matsmältning och överföring till en 12 mL röd mössa tub.
Obs: Hanks balanserad saltlösning: HBSS 10 x (100 mL), Penicillin-Streptomycin (10 mL), Gentamycin (1 mL), Ciprofloxacin (10 mL), HEPES (35 mL), destillerat H2O (900 mL) - Utföra en matsmältningen under 10 minuter vid 37 ° C i en skakande vattenbad. Vortex provet tre gånger med regelbundna mellanrum för 15 s.
- Blanda smält bukspottkörteln kraftigt för hand för 3 min och placera den på is för 10 s.
- Lägga till 6 mL kall Hanks lösning att stoppa matsmältningen reaktion och centrifugera vid 560 x g under 3 minuter vid rumstemperatur.
- Avlägsna supernatanten och lös pelleten i 10 mL av Parker/fostrets kalv serum (P/FCS) medium vid rumstemperatur.
Obs: P/FCS medium: TCM-199 10 x (100 mL), FCS (50 mL), Penicillin-Streptomycin (10 mL), HEPES (20 mL), destillerat H2O (900 mL) - Identifiera de holmar baserat på deras morfologi (sfäroid, gyllenbrun färg) under ett ljusmikroskop. Undvika holmar med mörka centra. Kontrollera om renhet och livskraft genom att utföra dithizone färgning under ett ljusmikroskop.
Obs: Dithizone binder till zink ion och ger röd-färgade fläcken till holmar. - Använd 1 mL pipett för att räkna och handplockar holmar under ett ljusmikroskop och överföra dem till en färsk petriskål (60 x 15 mm) innehållande 4 mL P/FCS medium.
Obs: Volymen av P /FCS medium i petriskål bör inte överstiga 4 mL för att säkerställa syre tillgänglighet. - Hålla de isolera öarna i 4 mL P/FCS medium över natten vid 37 ° C i en inkubator.
3. förberedelse av djur för ö-Transplantation
- Ta bort de isolera öarna från 37 ° C inkubatorn och placera dem under en flow bänk. Centrera kobbar och skär med en svängig cirkelrörelse av petriskål.
- Fyll en 1 mL spruta (blå 23-G nål) med 0,1 mL av P/FCS medium. Lägg sedan till 350 holmar i 0,3 mL Hanks lösning. Förvara sprutan i vertikal position så att holmarna sedimentera.
- Sänka volymen till 0,05 mL och ersätta den blå 23-G nål med en brun 26-G nål. Till samma spruta, tillsätt 0,15 mL Ficoll (täthet lutning medium) upp för att nå en slutlig volym av 0,2 mL i spruta. Undvika luftbubblor.
- Förvara sprutan i vertikal position och vrid den något för att undvika klumpar av holmar. Holmarna kvittar på konen av sprutan inom 2-3 min.
- Mäta kropp vikt och blod glukosnivåerna av mottagarens möss; blodglukosnivån bör vara cirka 20 mmol/L.
- Söva möss med ketamin (100 mg/kg kroppsvikt) och xylazin (20 mg/kg kroppsvikt) av intraperitoneal injektion med 26-G nål.
- Placera möss i ryggläge på en varm termisk tallrik (37 ° C). Kolla djupet av anestesi genom att nypa tån.
- Ren bukhålan med povidon-jodlösning (huden desinfektionsmedel). För att förhindra ögonen torkar, hålla dem fuktiga med ögonsalva.
Obs: Vid C57Bl/6 raka bukhålan.
4. ö-Transplantation via Intraportal rutten
- Dag 0, börja med en laparotomi genom att hålla huden med pincett och att göra en 2-3 cm-långa mittlinjen snitt med en sax. Plats en steril våta gasbinda komprimera runt såret kanterna för att hålla den fuktig.
- Placera den tarmen situs till vänster och utanför bukhålan på den steril gasbinda komprimera.
Obs: Hålla tarmen fuktig under hela förfarandet med pre värmde 0,9% NaCl-lösning eller steril kompress doppad i fysiologisk koksaltlösning. - Flytta tolvfingertarmen och lokalisera bukspottkörteln. Leta upp portalen ven ligger på ventrala platsen genom att trycka bukspottkörteln uppåt. Använda en tummen och pekfingret för att exponera portalen ven och, när utsatt, punktera det nära levern.
- Inom 1 min, injicera långsamt och stadigt holmarna (0,2 mL från steg 3,4) i portalen ven under inspektion av förstoringsglas för att undvika läckage av holmar.
Obs: Efter injektion, Kontrollera alltid för återstående holmar i sprutan. Ta 1 mL av P/FCS media i en spruta, infälld i en färsk petriskål och räkna under ett mikroskop. - Placera en steril mätare på injektionsstället och tryck med pekfingret (genomträngningsdjupet: 0,5-1 cm) i 6 min att stoppa blödningen.
Obs: Volymen injiceras bör inte överstiga 0,2 mL. Överdriven volym och trycket kan skada kobbar och skär på grund av shear stress. - Noggrant placera inälvan situs, bukhinnan, magmuskelstation lagret och fascia tillbaka.
- Med pincett, lyfta huden, nära muskel snitt med resorberbara silk suturen och övre hudlagret med 2-3 klipp.
- Rengör ytan med huden desinfektionsmedel, tillämpa en sår helare och placera möss i enskilda burar. Såret healer ger en vattenavvisande akrylat lager och skydda från maceration och sekundär infektion.
Obs: Observera möss tills de har återfått tillräcklig medvetande, ger tramadol (0,2 mg per mus) tillsammans med vätska. I detta protokoll, möss återhämtade sig från anestesi snabbt och tramadol administrering minskade smärtan. Efter 7 dagar, ska såret läka. - Mata möss med vanlig mat och vatten. Mat och vatten förbrukning och urin utsöndring kommer att öka efter streptozotocin injektionen.
- Mäta blodglukosnivån varje dag under den första veckan och sedan en gång i veckan i syngena möss. I allogen möss, mäta blodglukosnivån tre gånger i veckan i upp till 15 dagar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Kompetensen för transplanterade holmar studerades i kemiskt inducerad diabetes möss. Holmarna transplanterades via portalen venösa systemet i diabetiska möss modell. Givare-mottagare var 2:1. I syngena musmodell utnyttjades två givare möss för att få 350 holmar. Holmarna var sedan transplanteras i diabetiska möss. En minskning av blodsockernivå observerades dag 1 efter transplantation, vilket tyder på en roll av transplanterade Langerhanska att minska nivån av glukos i blodet. Streptozotocin ökade nivån av glukos i blodet upp till ca 22 mmol/L. En nedgång i nivån av glukos i blodet till 4,6 mmol/L (dag 1) observerades efter ö-transplantation (figur 1A). Normoglycemia bibehölls för upp till 121 dagar, som visas i figur 1A. Kropp vikt och blod glukosnivån följde ungefär samma mönster. Efter streptozotocin injektion och kirurgi minskade kroppsvikten. Från dag 2 framåt tenderade det att stiga mot normala, från 25,3 g (dag 4) till 29,7 g (dag 121), som visas i figur 1B.
Vid större histocompatibility (MHC) transplanterade inkompatibla möss, 350 holmar från två C57Bl/6 (H2d) möss i diabetiker BALB/c (H2b) möss. Efter streptozotocin injektion ökat blodsockret upp till 26,6 mmol/L. Efter ö-transplantation, blodglukosnivån sjunkit till 4,4 mmol/L (dag 1; Figur 2A). Normoglycemia (4.44 till 7,2 mmol/L) observerades för upp till 10 dagar, men inte efter 15 dagar (20,1 mmol/L). Kroppsvikt hos diabetiska möss minskade från 26 g (dag -3) till 23 g (dag 0) och vidare 21,5 g (dag 1). Efter transplantation, återhämtat sig kroppsvikt gradvis från 23 g (dag 2) 25 g (dag 10). På grund av MHC-mismatch, blodglukosnivån ökat och kroppsvikten minskade 10 dagar efter ö-transplantation (figur 2B).
Figur 1 : Effekt av syngena ötransplantation. (A), blodglukosnivån mättes vid olika tidpunkter i streptozotocin-inducerad diabetes möss (n = 3). En engångsdos av streptozotocin (180 mg/kg) injicerades före transplantation av 350 holmar varje mottagare (dag 0). Nivån av glukos i blodet (mmol/L) mättes upp till 121 dagar (dag -3: 17 ± 2.3; dag 0: 22,6 ± 1; dag 1: 4,6 ± 0,3; dag 5: 7,5 ± 0,4; och dag 121: 5.3 ± 0,09). (B) ökning i kroppsvikt efter ö-transplantation. Ovanstående data representerar det medelvärde ± standardavvikelsen. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2 : Effekt av allogena ö-transplantation. (A), blodglukosnivån mättes vid olika tidpunkter i streptozotocin-inducerad diabetes möss (n = 2). En engångsdos av streptozotocin (180 mg/kg) injicerades före transplantation av Langerhanska 350 (dag 0). Nivån av glukos i blodet (mmol/L) mättes upp till 15 dagar (dag -1: 25,5 ± 5.3; dag 0: 26,6 ± 1,4; dag 2:8 ± 0,9; dag 10: 6,2 ± 0,08; och dag 15: 20,1 ± 1,6). Normoglycemic staten upprätthölls för upp till 10 dagar och därefter blodglukosvärden ökade. (B) uppföljning av kroppsvikt före och efter ö-transplantation. Uppgifterna representerar det medelvärde ± standardavvikelsen. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3 : Representant immunfärgning bild av transplanterade Langerhanska in levern: tvätta avsnittet lever (5 µm) med PBS, block med 10% åsna serum följt av natten inkubation vid 4 ° C med insulin primär antikropp (1: 500) och trombocyter endotelcell vidhäftning molekyl PECAM-1 primär antikropp (1: 100). Nästa dag, fläcken med sekundära antikroppar för 1 h, tvätta med PBS, counter fläcken med Hoechst och fånga bilderna med Leica fluorescerande Mikroskop. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I denna studie är intraportal rutten av ötransplantation utforskas. Detta protokoll är mycket effektiva i att lindra diabetes stress och ger en fördjupad möjlighet att utforska holme transplantation studier. Detta protokoll bekräftar att ca 350 murina holmar är kapabelt att ångra det hyperglykemiska tillståndet. Dessutom ingen av möss dog under förfarandet, och glykemisk kontroll uppnåddes hos alla mottagare. Kroppen vikt och blod glukosnivåer registrerades regelbundet för att återspegla den kompetens, standard och funktionalitet av transplanterade holmar i backning hyperglykemi. I syngeneically transplanterade möss mättes blodsockernivåerna varje dag under den första veckan och därefter en gång i veckan. Efter holmar transplantation, hypoxisk skick och andra utlösa faktorer de endothelial cellerna utsöndrar proangiogena faktorer såsom VEGF efter 14 dagar och därmed öka den vaskulära engraftment i levern som visas i figur 3. I allogen möss mättes blodsockernivåerna tre gånger i veckan i upp till 15 dagar. Efter 15 dagar avvisades transplanterade holmar i allogen modellen på grund av en immun attack, såvida Immunosuppressiva läkemedel administreras
I området i närheten finns det flera holme isolering protokoll publicerad litteratur10,11. Det enklaste är att välja holmar manuellt på grundval av deras storlek och morfologi efter kollagenas matsmältningen. Detta är en av de mest avgörande steg för att markera endast holmar och Undvik exokrina celler, skräp, etc. valda holmar bör bibehållas vid 37 ° C över natten i en inkubator för att kunna återhämta sig från mekanisk stress påträffades under matsmältningen förfarandet. Valet av streptozotocin dosen och den intraportal ötransplantation är också nyckeln till detta protokoll. Kroppstemperaturen regleras och upprätthålls med hjälp av en termisk platta under hela ingreppet. Steril kompress bör tillämpas med minimalt tryck för 6 min vid platsen för punktering att undvika blödning. Möss bör hållas under uppsikt tills de återfår tillräcklig medvetandet.
Vissa steg i detta protokoll kan ändras. Till exempel kan optimering av koktiden och volymen av kollagenas öka avkastningen av holmarna i olika möss stammar. I stället för snabb induktion av diabetes (180 mg/kg streptozotocin), långsamt ökande hyperglykemi kan induceras med en lägre dos under en längre tidsperiod (t.ex. 40 mg/kg/dag streptozotocin 5 dagar). Detta kunde ge bättre engraftment av transplanterade holmar. Andra platser, såsom benmärg, omental påse, intramuskulär regionen, gastric slemhinneepitel, mjälte och njure kan utforskas som alternativ till intraportal venen.
Stackars engraftment av transplanterade öar är fortfarande ett stort problem i kliniska prövningar. Andra inkluderar brist på donatorer, inkonsekvenser i att bibehålla blodsockernivåerna efter transplantation, immunsuppression och blod-medierade reaktioner12,13. Brist på metoder för att utvärdera korrekt engraftment är ett annat hinder. Spåra transplanterade holmar av magnetisk resonans eller Mareld imaging kan eventuellt ersätta klassiska metoder såsom glukostoleranstest eller c-peptid. I framtiden, stamceller transplanterade tillsammans med kobbar kan ge näringsmässiga och immunmodulerande stöd14.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Alla författarna förklarar att de har någon intressekonflikt.
Acknowledgments
Vi skulle vilja erkänna Gundula Hertl för hennes stöd.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| C57Bl/6 mice | Charles River (Sulzfeld, Germany) | (10-12 weeks) | |
| BALB/c mice | Charles River (Sulzfeld, Germany) | (10-12 weeks) | |
| NMRI nude mice | Charles River (Sulzfeld, Germany) | (10-12 weeks) | |
| Ketamine | Bela-pharm | ||
| Xylazine | CEVA TIERGESUNDHEIT GmbH | ||
| Syringe, 23G and 26G needle | BD | ||
| Petri Dish | Falcon | 303800 | |
| NaCl | Carl Roth | 351007 | |
| Sterile Gauze | Fuhrmann | 7647-14-5 | |
| Shaking Water bath | Kotterman | 1501 | |
| Scissors | Braun | 1501 | |
| Glucose Meter | One Touch | ||
| Warm Thermal Plate | Thermo Fisher | ||
| Braunol (povidone-iodide solution) | B.Braun Melsungen AG | 3864154 | |
| Liposic Edo - Sprinkled Ointment (eye ointment) | Dr. G Mann Chem.-Pharm. GmbH | ||
| Incubator | Fa. Roth | ||
| Flow Bench | Herdus | ||
| Ficoll | Sigma-Aldrich | 10771 | |
| 5-0 Silk Suture Vicryl | Braun | (7.5 *1.75mm) | |
| Michel Clamps (clips) | Aesculap | BN507R | |
| P/FCS Solution | Gibco | 21180-021 | |
| TCM-199 (10x) | Gibco | 21180-021 | |
| FCS | Biowest | S1810-500 | |
| Penicillin-streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| HEPES (1 M) | Biochrom | L 1613 | |
| Gentamycin | Ratiopharm | ||
| Ciprofloxacin | Fresenius Kabi | ||
| Hank's Solution | Gibco | 14060-040 | |
| Collagenase | Roche | 11213865001 | |
| Streptozotocin | Calbiochem | 572204 | |
| OPSITE-spray (wound healer) | Smith and nephew | 66004978 | |
| Reugular food | Altromin | ||
| Head light LED 16042 (magnifying glass) | Eschenbach | 16042 | |
| Rat anti-mouse PECAM-1(CD31) monoclonal primary antibody | Millipore, Chemicon | CBL1337 | Dilution (1:100) |
| Donkey anti-rat secondary antibody | Dianova | 712095153 | Dilution (1:400) |
| Polyclonal guinea pig anti-insulin primay antibody | Dako | A0564 | Dilution (1:500) |
| Donkey anti-guinea pig secondary antibody | Dianova | 706-259-148 | Dilution (1:400) |
References
- McCall, M., Shapiro, A. M. Update on islet transplantation. Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2 (7), a007823 (2012).
- Shapiro, A. M., et al. Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen. New England Journal of Medicine. 343 (4), 230-238 (2000).
- Cantarelli, E., et al. Bone marrow as an alternative site for islet transplantation. Blood. 114 (20), 4566-4574 (2009).
- Echeverri, G. J., et al. Endoscopic gastric submucosal transplantation of islets (ENDO-STI): technique and initial results in diabetic pigs. American Journal of Transplantation. 9 (11), 2485-2496 (2009).
- Korsgren, O., et al. Optimising islet engraftment is critical for successful clinical islet transplantation. Diabetologia. 51 (2), 227-232 (2008).
- Merani, S., Toso, C., Emamaullee, J., Shapiro, A. M. Optimal implantation site for pancreatic islet transplantation. British Journal of Surgery. 95 (12), 1449-1461 (2008).
- Lingwal, N., et al. Inhibition of gelatinase B (matrix metalloprotease-9) activity reduces cellular inflammation and restores function of transplanted pancreatic islets. Diabetes. 61 (8), 2045-2053 (2012).
- Chen, C., et al. Improved intraportal islet transplantation outcome by systemic IKK-beta inhibition: NF-kappaB activity in pancreatic islets depends on oxygen availability. American Journal of Transplantation. 11 (2), 215-224 (2011).
- Wang, Y., Wang, T., Zhang, L. Three aspects are critical for carrying out intraportal islet transplants successfully in a diabetes mouse model. Experimental and Clinical Transplantation. 10 (3), 302-304 (2012).
- Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination. Journal of Visualized Experiments. (88), e50374 (2014).
- Zmuda, E. J., Powell, C. A., Hai, T. A method for murine islet isolation and subcapsular kidney transplantation. Journal of Visualized Experiments. (50), (2011).
- Rother, K. I., Harlan, D. M. Challenges facing islet transplantation for the treatment of type 1 diabetes mellitus. Journal of Clinical Investigation. 114 (7), 877-883 (2004).
- Su, Z., et al. Small islets are essential for successful intraportal transplantation in a diabetes mouse model. Scandinavian Journal of Immunology. 72 (6), 504-510 (2010).
- Rekittke, N. E., Ang, M., Rawat, D., Khatri, R., Linn, T. Regenerative Therapy of Type 1 Diabetes Mellitus: From Pancreatic Islet Transplantation to Mesenchymal Stem Cells. Stem Cells International. 2016, 22 (2016).
