Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Developmental Biology

أسلوب الثقافة أورجانوتيبيك لدراسة تطوير الأنسجة الجنينية الدجاج

doi: 10.3791/57619 Published: August 25, 2018

Summary

نقدم هنا، أورجانوتيبيك استزراع البروتوكول لتنمو الأجهزة الدجاج الجنينية في المختبر. باستخدام هذا الأسلوب، تنمية الأنسجة الجنينية الدجاج يمكن دراستها، مع الحفاظ على درجة عالية من السيطرة على البيئة الثقافة.

Abstract

الدجاج الجنينية يستخدم عادة ككائن نموذج موثوق بها للتنمية الفقاريات. إمكانية الوصول وحضانة قصيرة الفترة يجعلها مثالية للتجريب. حاليا، تجري دراسة هذه المسارات الإنمائية في الجنين الدجاج بتطبيق مثبطات والمخدرات في مواقع محلية وتركيزات منخفضة باستخدام مجموعة متنوعة من الأساليب. استزراع الأنسجة في المختبر هو أسلوب الذي يتيح دراسة الأنسجة فصلها عن الكائن الحي المضيف، بينما في الوقت نفسه تجاوز العديد من القيود المادية الحالية عند العمل مع الأجنة كله، مثل قابلية الأجنة إلى جرعات عالية من المواد الكيميائية يمكن أن تكون مميتة. نقدم هنا، أورجانوتيبيك استزراع البروتوكول لاستزراع الدجاج الجنينية نصف الرأس في المختبر، مما يتيح فرصاً جديدة للنظر في العمليات الإنمائية وراء الأساليب المتبعة حاليا.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

الدجاج الجنينية (Gallus gallus) كائن حي نموذجية ممتازة استخداماً في مجال البيولوجيا. فترة حضانة المرض ما يقرب من 21 يوما، ويمكن المحتضنة الكثير من البيض في وقت واحد، مما يجعل تجربة سريعة وفعالة. ولعل الأهم من ذلك، الجنين هو أيضا بسهولة التلاعب بها، تمكن الدراسة المستفيضة للعمليات الإنمائية الرئيسية والجينات والبروتينات التي تدفع هذه العمليات.

العين الدجاج الجنينية هو جهاز معقدة التي تنشأ عن طريق التفاعل بين عدد من أنسجة مختلفة مشابهة للعديد من أجهزة الجسم الأخرى. هذا الأسلوب يتيح لدراسة وضع هذه الأنسجة، ولا سيما في مراحل متقدمة من التنمية. على سبيل المثال، قد تكون الشبكية متعددة الطبقات ذات أهمية خاصة لأولئك الذين يدرسون تطوير النظام العصبي. الأساليب البديلة التي تمكن من دراسة أنسجة العين الأخرى كالقرنية والجسم فيتريل، العدسة، والصلبة العينية والجفون ذات فائدة للباحثين. العين الدجاج الجنينية يحتوي أيضا على سلسلة من العظام المسطحة، والعظيمات scleral، التي يمكن استخدامها كنموذج لدراسة تعريفية العظام إينتراميمبرانوس والتحجر في الفقاريات1.

حاليا، هناك عدد من الأساليب المستخدمة لدراسة التطور الجنيني. ميكروينجيكشنز الأجسام المضادة المثبطة أو غيرها الجزيئات المثبطة2،3، مزروع جراحيا ميكروبيدس غارقة في المانع4، وهي انهانسر5 كافة الأساليب التي يمكن استخدامها للجينات دوونريجولاتي أو البروتينات للاهتمام بجنين. وتستخدم أساليب مماثلة للبروتينات أوبريجولاتي. هذه الطرق لا تخلو من أوجه القصور. على سبيل المثال، عند استخدام المواد الكيميائية لتغيير وضع الجنين، يجب تقييم آثار قاتلة على الجنين، وهذا يحد من استخدام الأساليب المذكورة أعلاه للمواقع المترجمة للتطبيق عند التعرض لجرعات منخفضة بما يكفي لضمان استمرارية الجنين.

في المختبر استزراع الأنسجة قد استخدمت في طائفة واسعة من الكائنات الحية لدراسة التنمية ويمكن استخدامها لتجاوز بعض القيود المذكورة أعلاه. على سبيل المثال، فيمورى6وريشة براعم7،8، و أطرافه9 من الدجاج كل درست باستخدام أساليب، استزراع الأنسجة الخصيتين الماوس10 والجذور وينبع من النباتات11. تمنح هذه الأساليب العلماء بدرجة عالية من التحكم في تنمية الأنسجة، مثل القدرة على التقلب في درجة الحرارة وتغير توافر المغذيات. عزل الأنسجة من الجنين كله أيضا يجعلها أقل عرضه للآثار المميتة للمواد الكيميائية، مما يمكن التلاعب بدراسات على نطاق عالمي في تركيزات أعلى. هناك ميزة أخرى بارزة في المختبر استزراع هو الحفاظ على البيئة في الأنسجة الخلوية؛ ترتيب الأنسجة يظل دون تغيير نسبيا، مما يجعل من الممكن دراسة التفاعلات بين أنواع مختلفة من الأنسجة9. وهكذا، في المختبر استزراع يفتح الأبواب أمام إضافية تجريبية النهج غير متوفرة في النماذج في فيفو أو في ovo .

دراسة تطوير العين الدجاج الجنينية باستخدام المواد الكيميائية حاليا تحديا كبيرا. تغطية عدد من الأغشية اكسترامبريونيك الجنين، مما يجعل من الصعب على تطبيق ميكروبيدس أو المواد الكيميائية؛ الجنين أيضا جداً نشطة داخل البيضة كما يحصل كبار السن، مما زاد من تعقيد أسلوب صعبة بالفعل. هذا البروتوكول يتيح سهولة الوصول إلى العين والأنسجة المحيطة بها، إزالة هذه الحواجز، بينما توفر أيضا فرصاً جديدة دراسة العمليات الإنمائية داخل العين. تم إنشاء هذا البروتوكول لدراسة تنظيم دورات تعريفية العظيمات scleral داخل العين الجنينية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

ملاحظة: لمراحل الجنين، والاستفادة من همبرغر وهاملتون12 (ح ح) تنظيم الجدول.

1-الجنين الحضانة

  1. احتضان بيض الدجاج المخصب في حاضنة العقيمة، ودرجة الحرارة التي تسيطر على 37 درجة مئوية ± 1 درجة مئوية و ~ 40% رطوبة.
  2. تشغيل البيض 1 x يوميا والسماح لهم باحتضانها ل HH34 (التسميد بعد 8 أيام).

2-الإعداد والتعقيم المواد

  1. للأجنة 12، اﻷوتوكﻻف 2 لتر ماء المقطر، L 1 الملحية الفرخ 0.85 في المائة، 12 الزجاج الماصات، مربع 1 ورقة والأنسجة والساحات 24 سم 2.5 x 2.5 سم من ورق الترشيح شبه مسامية والساحات 24 سم 2.5 x 2.5 سم من أسلاك الفولاذ مش مع حواف منحنية إلى أسفل. لتعقيم المواد، اﻷوتوكﻻف لهم في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة على الأقل.
    ملاحظة: يمكن أن يتم التعقيم المواد في وقت مبكر.
  2. تعقيم الحاضنة مع الإيثانول 70% بالمسح الجانبين ورفوف وباب. 2 مكان حاويات بلاستيكية تحتوي على يعقم المقطر المياه داخل الحاضنة للحفاظ على رطوبة. بريوارم حاضنة الثقافة إلى 37 درجة مئوية ± 1 درجة مئوية و ~ 40% رطوبة. ضمان الحاضنة مظلمة تماما؛ إذا كان الباب شفاف، تغطي بورق ألمونيوم.
  3. بريوارم 100 مل من المغذيات المتوسطة و 1 مل من البنسلين بوضعها في حاضنة الثقافة.
  4. وتغطي مساحة العمل مع منشفة ورقية وتعقيم على مقاعد البدلاء برش عليه مع الإيثانول 70%. تعقيم 2 زوجاً من ملقط ومقص التشريح وشفرة حلاقة وملعقة بلاستيكية مع الإيثانول 70% بطريقة مماثلة.
  5. أطباق بتري معقمة 100 مم 12 مكان وأطباق بيتري معقمة 35 ملم 24 على مقاعد البدلاء للاستخدام. ضمان الأطباق تظل في كيس معقم حتى الاستخدام.

3-الجنين إعداد

ملاحظة: من هذه النقطة فصاعدا، ارتداء قناع لوجه غبار واقية لتجنب تلويث الثقافات. سوف تدمر عدوى البكتيرية أو الفطرية الثقافة، وهناك خطر لأنه ينتشر بسرعة إلى جميع الثقافات في الحاضنة.

  1. الكراك فتح البيضة ونقل الجنين إلى طبق بتري 100 ملم التي تحتوي على المحلول الملحي الفرخ 0.85 في المائة. مرحلة الجنين وفقا للميزات التشريحية الموصوف في همبرغر وهاملتون التدريج المبادئ التوجيهية12 والتأكد من الجنين في HH34.
  2. قطع الرقبة وثم تقسم رأس الجنين في خط الوسط باستخدام شفرة حلاقة معقم. استخدام الملقط العقيمة، إزالة الدماغ. ترك المنقار سليمة.

4-الثقافة الإعداد

  1. 2 مكان من أطباق بتري 35 مم داخل طبق بيتري 100 مليمتر واحد.
  2. وضع شبكة أسلاك الفولاذ داخل كل طبق بتري 35 ملم.
  3. استخدام الملقط، نقل 1 الرؤساء منطقتي بقطعة من ورق الترشيح شبه مسامية 2.5 × 2.5 سم بالعين مواجهة. ضمان الأنسجة آمنة ولا تنزلق قبالة عن إمالة فإنه قليلاً.
  4. استخدام الملقط، بعناية وضع نسيج العين وورق الترشيح على رأس شبكة أسلاك الفولاذ في 1 أطباق بتري 35 مم، خلق مرحلة أثيرت مع نسيج العين على أعلى.
  5. كرر الخطوات من 4، 3 و 4-4 مع نصف الرأس الأخرى.
  6. استخدام ماصة زجاجية معقمة، بعناية إضافة المتوسطة المغذيات مباشرة في كل طبق بتري 35 مم حتى يصل إلى مستوى الورقة عامل التصفية. لا تغرق نصف رأس في الأجلين المتوسط والمغذيات.
  7. إضافة 50 ميليلتر من 10,000 يو/مليلتر البنسلين-ستربتوميسين المتوسطة المغذيات في كل طبق بيتري.
  8. اطوِ قطعة من المناديل الورقية في مربع صغير ووضعه داخل مم 100 طبق بيتري. ترطيب أنه مع الماء المقطر يعقم.
  9. ضع الطبق الثقافة إلى حاضنة العقيمة، والظلام في 37 درجة مئوية ± 1 درجة مئوية و ~ 40% رطوبة لمدة تصل إلى 4 أيام.
  10. كرر الخطوتين 3 و 4 لكل جنين.
    ملاحظة: عدد الأجنة اللازمة سوف تعتمد على التجربة محددة؛ هنا، يمكننا وصف البروتوكول للأجنة 12.

5-ثقافة الصيانة

  1. مرة واحدة يوميا، أعلى في حاويات بلاستيكية في الحاضنة مع الماء المقطر الطازجة، ويعقم.
  2. يوميا تحقق جميع الثقافات للعدوى البكتيرية أو الفطرية. الثقافات التي قد تفككت أو التي تغيرت المتوسط لون مصابون. تجاهل جميع الثقافات التي هي المصابة.

6-التثبيت

  1. بعد استزراع، إزالة جميع الأطباق من الحاضنة.
  2. برفق باستخدام زوج من الملقط، إزالة العين من ورق الترشيح، مع الحرص على عدم تمزيق النسيج.
  3. إصلاح نسيج العين في بارافورمالدهيد 4% 1 × مخزنة الفوسفات المالحة بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية أو الفورمالين 10% مخزنة محايدة بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة.
  4. تخزين الأنسجة في 4 درجات مئوية في 1 × مخزنة الفوسفات المالحة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

باستخدام هذا الأسلوب، يمكن مثقف عين دجاج جنينية من يوم 8 من تطورها (HH34) في المختبر لمدة 4 أيام. أربعة أيام في ovo التنمية يناظر HH38.

ويدعم هذا الأسلوب تثقيف وضع براعم ريشة المحيطة بالعين والجفون (الشكل 1B). لا تكون هذه البراعم ريشة الحالية في ovo في HH34 قبل استزراع (الشكل 1A)، مما يشير إلى أن تبدأ التنمية برعم ريشة أثناء فترة تثقيف، كما هو في ovo13 (الشكل 1). تنمو على الجفون وغشاء نيكتيتاتينج لتغطية العين خلال تثقيف (الشكل 1B). تظهر الجفون أكثر نضجاً بعد في المختبر استزراع من بداية استزراع في HH34 (الشكل 1A) لكنها أقل تطورا من HH38 (الشكل 1). وتبين هذه البيانات أن يتم دعم الجوانب الرئيسية من التنمية الجنينية، لكن مع بعض التأخير الصغيرة.

بعد استزراع، نحن تشريح الجزء الأمامي من العين لإظهار نتوءات مايوجد (عصابة عابرة لنتوءات الظهارية 13-14)، الذي يعمل معلما آخر حتى الآن تشير إلى أن الأحداث التنموية معتمدة في الثقافة. عادة، يتم تشكيلها هذه الحليمات تماما من قبل HH34 (الشكل 1)، وتتدهور مع مرور الوقت كما أنها تحفز كوندينسيشنز سكيليتوجينيك في ميسينتشيمي الأساسية؛ أنها تختفي من HH381 (الشكل 1F). البيانات المتوفرة لدينا تظهر أن هذا الانحطاط يحدث في المختبر (الشكل 1E) مسبوقة تسطيح الحليمات اتباع نمط التنمية في ovo . أونستينيد كوندينسيشنز، ومع ذلك، لا تظهر في العينات في المختبر ، على خلاف في HH38 (الشكل 1F). كنا الفوسفاتيز القلوية تلطيخ، الذي يكشف عن النشاط osteoblast المبكر مواصلة تقييم التعريفي لهذه كوندينسيشنز14؛ تحدث هذه العملية جنبا إلى جنب مع انحطاط الحليمات مايوجد في ovo. تنصيب كوندينسيشنز سكيليتوجينيك، الذي يبدأ في HH34 (الشكل 1)، الشروع في المختبر كما يتضح من الفوسفاتيز القلوية تلطيخ (ح الشكل 1). هذه كوندينساتيونس، ومع ذلك، ليس بوصفه كبير كما في HH3814 (الرقم 1I)، مرة أخرى تشير إلى أن هناك تأخير صغير في التنمية. أننا نقدر أن 4 أيام لاستزراع تمثل حوالي 2 يوما تنمية الجنينية؛ ومن ثم تأخير من حوالي 50%. تظهر هذه النتائج أن الاستقراء وتنمية العظام إينتراميمبرانوس، كوندينسيشنز سكليرال، هو جماعياً، معتمدة في المختبر ، وأن العمليات الإنمائية مثل النمو جفن وتشكيل برعم الريش المضي قدما في المختبر.

Figure 1
الشكل 1 . الخصائص المورفولوجية ل في المختبر مثقف عيون وعيون HH34 عيون HH38- أ - و أونستينيد G -- أنا ملطخة لأنزيم الفوسفاتيز القلوي (AP) لتمييز خلايا الاوستيوبلاستس النشطة داخل كوندينسيشنز سكليرال. أ ود وز إظهار العينين في بداية فترة تثقيف في HH34. بو Eو H إظهار العينين بعد 4 أيام من استزراع في المختبر . ج، و، و إظهار العينين بعد 4 أيام في ovo استزراع، في HH38. وينظر إلى كل العيون أفقياً. الحليمات (A) مايوجد مرئية في عصابة المحيطة بالقرنية. تشير العلامة نجمية إلى الحليمة #12، أول واحد إلى النموذج. يشير السهم إلى حافة الجفن في منطقة الآنف للعين. (ب) قد سويت بالأرض الحليمات مايوجد وبدأت تتدهور. يشير السهم إلى برعم ريشة متنامية. (ج) مايوجد الحليمات قد تحولت تماما ومشمولة بالجفون وغشاء نيكتيتاتينج. يشير السهم مفتوحة إلى حافة الجفن في منطقة الآنف للعين. يشير السهم الصلبة إلى برعم ريشة متنامية. (د) تشريح الجزء الأمامي من العين HH34. تشير العلامة النجمية إلى الحليمة #12. () تشريح الجزء الأمامي من HH34 + 4 في المختبر العين تظهر نتوءات الأرض. نتوءات في المنطقة الزمنية (سهم خالص) وبدأت تتدهور؛ هذه هي نتوءات أقدم في الحلقة. (و) جزء الأمامي تشريح العين HH38 مع الجفون والأغشية نيكتيتاتينج إزالتها، تبين أن جميع نتوءات قد تدهورت. خطوط متقطعة مخطط موقف اثنين كوندينسيشنز أونستينيد المجاورة. HH34 A (ز) العين الملون لوكالة اسوشييتد برس عرض كوندينساتيونس سكيليتوجينيك صغيرة جداً يدل على بدء التعريفي. (ح) HH34 A + 4 العين الملون لوكالة اسوشييتد برس عرض الموسع، ينمو كوندينسيشنز سكيليتوجينيك. (أنا) HH38 بالعين الملون لوكالة اسوشييتد برس عرض كوندينسيشنز سكيليتوجينيك كبيرة. هي كافة أشرطة مقياس 1 مم. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

هذا البروتوكول يجعل استخدام أنسجة المنشأة استزراع تقنيات لتحقيق نمو العين الدجاج من الجنينية يوم 8 (HH34) في المختبر لمدة 4 أيام. ووصف هذا الأسلوب استزراع الشبكة أصلاً تروويل15. نحن الأمثل بروتوكولا من بينتو وقاعة لعام 1991 دراسة16 استخدام غشاء شبه مسامية مع الشبكة لدراسة الإشارات الاستقرائي بين طبقات الأنسجة المنفصلة من العين الدجاج الجنينية15. باستخدام هذا الأسلوب، صرصور مثقف عظم الدجاج 14-القديمة يوم6. كما أثبت هذا الأسلوب الفعال في استزراع الأنسجة الماوس6،17. استخدام ورق الترشيح أمر حاسم لنجاح البروتوكول أنها تساعد الأنسجة تناول المغذيات من المتوسطة فعالية دون تشبع أو سوبميرسينج الأنسجة.

المتوسطة المغذيات في الرقم الهيدروجيني سليم أمر بالغ الأهمية للنمو الأمثل. ينبغي أن يكون المتوسط في أو بالقرب من الرقم الهيدروجيني الفسيولوجي، واستخدام الفينول الحمراء في المتوسط مؤشرا على توفر ميزة في أن التغييرات الأس الهيدروجيني يمكن الكشف عنها بسهولة. يمكن استخدام وسائل الإعلام الحرة المصل، وتغيير وسائل الإعلام يوميا ليس ضروريا ولا يؤثر على النتائج. البروتوكول تم تطويرها باستخدام وسيلة متاحة تجارياً (انظر الجدول للمواد)، الذي يحتوي على مستويات عالية من الأحماض الأمينية والجلوكوز؛ هناك حاجة إلى لا مكملات أخرى من وسائل الإعلام. معظم الحوادث لنمو الأنسجة سوء استخدام هذا البروتوكول وقع عندما وسائط الإعلام المغذيات أما على درجة حموضة غير لائق أو الملوثة.

العين يمكن البقاء على قيد الحياة وتنمو لتصل إلى 4 أيام في المختبر، بدءاً من اليوم الجنينية 8, عندما يتم تنفيذ البروتوكول تحت الظروف المثلى. واحد الحد من هذا البروتوكول أنه تأثر البقاء على قيد الحياة بعد 4 أيام من استزراع. وهكذا، سوف تتطلب العمليات التنموية التي تمتد على فترة زمنية أطول التعديلات على البروتوكول. قيد آخر من البروتوكول هو عدم وجود تدفق الدم النشطة، والأوعية الدموية. الأوعية الدموية هامة لكثير من العمليات التنموية، ليس فقط لإيصال المواد الغذائية إلى أنسجة9، وهو يتحقق في المختبر عن طريق عمل الشعرية عن طريق تصفية الورق التي يرتكز عليها الأنسجة.

يمكن استخدام هذا البروتوكول لدراسة تطوير الأجهزة كلها أو أجزاء كبيرة من الأنسجة في المختبر. فقاريات أجهزة معقدة للغاية، وتنميتها وينظم العديد من الأنماط الزمانية المكانية المتميزة. دراسة هذه المسارات الإنمائية يعتمد على القدرة على التعامل مع الإشارات التي تنظم لهم. الأساليب الحالية تحد من هذا التلاعب على مناطق صغيرة نسبيا، والمترجمة، وتركيزات منخفضة بما يكفي لتجنب فتك جنينية. على سبيل المثال، تقتصر الطريقة ex ovo استزراع الجنين الدجاج كامل في الثقافة18 أو الأسلوب إلى نافذة البيض19 القيام بالتلاعب في ذلك أما الجنين أكمله يجب أن يعامل، الذي يمكن أن يسبب الفتك، أو فقط يتم التعامل مع منطقة محلية صغيرة. وميزة البروتوكول المعروضة هنا أنه يمكن دراسة أثر هذه الإشارات على الأجهزة كلها أو كميات كبيرة من الأنسجة، دون التأثير على استمرارية الجنينية. لا يتطلب هذا البروتوكول أي مكملات مع ثاني أكسيد الكربون كما هو الحال في وقت سابق البروتوكولات15. التأخير في التنمية التي يمكننا ملاحظتها ميزة في أنه يمكن دراسة عمليات التنمية السريعة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgments

الكتاب يود أن يشكر غريغوري هالر (جبل سانت فنسنت جامعة) لعمله الأولى في تطوير البروتوكول. أيضا يود المؤلفون أن يشكر نيكولاس جونز (جبل جامعة سانت فنسنت) للخبرة الفنية والمساعدة بتصوير وإنتاج الجزء السمعية والبصرية من المخطوطة. دانيال أندروز كانت مدعومة بتمويل من مسفو والعلوم الطبيعية والهندسة بحوث المجلس من كندا (مقدمة) عبر "تحكيم البحوث الطلابية الجامعية". تمارا ألف فرانز-أوديندال معتمد من قبل "منحة اكتشاف الأموال".

Materials

Name Company Catalog Number Comments
35 mm cell culture petri dishes Corning 353001 easy grip tissue culture dish, polystyrene, non-pyrogenic
100 mm cell culture petri dishes Corning 353003 tissue culture dish, polystyrene, non-pyrogenic
paper tissue Kimtech 34155 Kimtech Science Brand Task Wipers, 280 per carton
wire mesh n/a n/a stainless steel wire mesh (grid size 0.7 mm)
disposable glass pipettes VWR 14673-010 Borosilicate glass disposable 5 3/4"
nutrient medium Gibco 12591-038 Fitton-Jackson Modification, [+] L-glutamine with phenol red (BGJB)
penicillin-streptomycin Sigma-Aldrich P4458 10000 units/mL penicillin streptomycin solution stabilised
filter paper Whatman 1454 090 semi-porous filter paper 90mm
fertilized chicken eggs Dalhousie University Agricultural College n/a can be obtained from local farms
sodium chloride (NaCl) EMD SX0420-3 sodium chloride crystals, reagent grade
1 L glass bottle VWR 89000-240 1 L pyrex autoclavable glass bottle
ethanol Fisher Scientific BP82011 70% molecular biology grade
tupperware containers n/a n/a store-bought and sterilized with EtOH
disposable razor blades VWR 55411-050 single edge industrial razor blades (surgical carbon steel)
plastic spoons n/a n/a store-bought and sterilized with EtOH
dust mask 3M n/a 3M 8500 Comfort Mask
paraformaldehyde Sigma-Aldrich P6148 paraformaldehyde, reagent grade, crystalline
neutral-buffered formalin Fisher Scientific 72210 10% neutral buffered formalin
phosphate buffered saline (PBS) n/a n/a 10X phosphate buffered saline pH 7.4 (137mM NaCl, 2.5mM KCl, 4.3mM Na2HPO4, 1.4mM KH2PO4)
15 ml falcon tubes VWR 21008-216 presterilized centrifuge tubes
forceps FST n/a fine forceps
chick saline  n/a n/a  0.85% NaCl
tinfoil n/a n/a store-bought
paper towel n/a n/a store-bought

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Franz-Odendaal, T. A. Towards understanding the development of scleral ossicles in the chicken, Gallus gallus. Developmental Dynamics. 237, (11), 3240-3251 (2008).
  2. Scholey, J. M. Functions of motor proteins in echinoderm embryos: an argument in support of antibody inhibition experiments. Cell Motility and the Cytoskeleton. 39, (4), 257-260 (1998).
  3. Horakova, D., et al. Effect of FGFR inhibitors on chicken limb development. Development, Growth & Differentiation. 56, (8), 555-572 (2014).
  4. Gerlach, G. F., Morales, E. E., Wingert, R. A. Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo. Journal of Visualized Experiments. (101), e52943 (2015).
  5. Luz-Madrigal, A., Grajales-Esquivel, E., Del Rio-Tsonis, K. Electroporation of Embryonic Chick Eyes. Bio-protocol. 5, (12), e1498 (2015).
  6. Roach, H. I. Long-term organ culture of embryonic chick femora: a system for investigating bone and cartilage formation at an intermediate level of organization. Journal of Bone and Mineral Research. 5, (1), 85-100 (1990).
  7. Jung, H. S., et al. Local inhibitory action of BMPs and their relationships with activators in feather formation: implications for periodic patterning. Developmental Biology. 196, (1), 11-23 (1998).
  8. McKinnell, I. W., Turmaine, M., Patel, K. Sonic Hedgehog functions by localizing the region of proliferation in early developing feather buds. Developmental Biology. 272, (1), 76-88 (2004).
  9. Smith, E. L., Kanczler, J. M., Oreffo, R. O. A new take on an old story: chick limb organ culture for skeletal niche development and regenerative medicine evaluation. European Cells & Materials. 26, 91-106 (2013).
  10. Sato, T., et al. In Vitro Spermatogenesis in Explanted Adult Mouse Testis Tissues. PLoS One. 10, (6), e0130171 (2015).
  11. Ochoa-Villarreal, M., et al. Plant cell culture strategies for the production of natural products. BMB Reports. 49, (3), 149-158 (2016).
  12. Hamburger, V., Hamilton, H. L. A series of normal stages in the development of the chick embryo. Journal of Morphology. 88, (1), 49-92 (1951).
  13. Yu, M., et al. The developmental biology of feather follicles. The International Journal of Developmental Biology. 48, (0), 181-191 (2004).
  14. Jabalee, J., Hillier, S., Franz-Odendaal, T. A. An investigation of cellular dynamics during the development of intramembranous bones: the scleral ossicles. Journal of Anatomy. 223, (4), 311-320 (2013).
  15. Trowell, O. A. The culture of mature organs in a synthetic medium. Experimental Cell Research. 16, (1), 118-147 (1959).
  16. Pinto, C. B., Hall, B. K. Toward an understanding of the epithelial requirement for osteogenesis in scleral mesenchyme of the embryonic chick. Journal of Experimental Zoology. 259, (1), 92-108 (1991).
  17. Mbiene, J. P., MacCallum, D. K., Mistretta, C. M. Organ cultures of embryonic rat tongue support tongue and gustatory papilla morphogenesis in vitro without intact sensory ganglia. Journal of Comparative Neurology. 377, (3), 324-340 (1997).
  18. Cloney, K., Franz-Odendaal, T. A. Optimized ex-ovo culturing of chick embryos to advanced stages of development. Journal of Visualized Experiments. (95), e52129 (2015).
  19. Korn, M. J., Cramer, K. S. Windowing chicken eggs for developmental studies. Journal of Visualized Experiments. (8), e306 (2007).
أسلوب الثقافة أورجانوتيبيك لدراسة تطوير الأنسجة الجنينية الدجاج
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Andrews, D. D. T., Franz-Odendaal, T. A. Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues. J. Vis. Exp. (138), e57619, doi:10.3791/57619 (2018).More

Andrews, D. D. T., Franz-Odendaal, T. A. Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues. J. Vis. Exp. (138), e57619, doi:10.3791/57619 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter