Summary
Здесь мы опишем процедуру тест ячейка миграции в пробирке с автоматической оптической камеры микроскопа. Царапинам assay широко используется где закрытие нуля следуют за определенный период. Оптический микроскоп обеспечивает надежный и дешевый обнаружение миграции клеток.
Abstract
Клетки миграция является важным процессом, который влияет на многие аспекты здоровья, таких как ранозаживляющее и рак, и он, таким образом, решающее значение для разработки методов для изучения миграции. Царапинам assay уже давно наиболее распространенных в vitro метод для проверки соединений с анти - и про migration свойства из-за его низкой стоимости и простая процедура. Однако часто сообщили проблема анализа — это совокупность клеток по всему краю нуля. Кроме того для получения данных от assay, изображения различных воздействий необходимо принять в течение времени в точно то же место для сравнения движения миграции. Различные анализа программы могут использоваться для описания скретч закрытия, но они являются трудоемким, неточной и силы циклам изменений температуры. В этом исследовании мы демонстрируем оптимизированный метод для тестирования миграции эффект, например с естественным белки лактоферрина человека и говядину и их N-терминальный пептидные Lactoferricin на линии эпителиальных клеток HaCaT. Решающее значение оптимизация является мыть и нуля в PBS, который устраняет вышеупомянутых накопления клеток вдоль края. Это можно объяснить путем удаления катионы, которые показали, чтобы иметь влияние на связи клеток кератиноцитов. Чтобы верно обнаружения миграции, предварительной обработки с митомицин C, ингибитор синтеза ДНК, был добавлен к протоколу. Наконец мы демонстрируем автоматизированных оптической камеры, которая исключает чрезмерное температурных циклов, ручной труд с нуля закрытия анализа, улучшения на воспроизводимость и обеспечивая анализ идентичных секций нуля с течением времени.
Introduction
Миграция является важным процессом, который влияет на некоторые физиологические аспекты. В заживлении ран, миграции облегчает повторное эпителизации кожи. В незаживающие раны, таких как хронические раны оппортунистических бактерии вызывают инфекции раны, и открытые раны идеальны для роста бактерий и образование биопленки1,2. Биопленки является одной из причин развития резистентных бактерий, который является одним из самых серьезных угроз для нашего современного общества3. В заживлении ран, иммунные клетки не могут проникнуть биопленки. В рак миграция раковых клеток является ключевой шаг метастазов, который является основной причиной смерти больных с солидными опухолями4,5. Таким образом важно иметь возможность изучения миграции.
Царапинам assay часто используется для тестирования миграции клеток, потому что это дешево и легко выполнять на линиях адэрентных клеток, фибробластов, эндотелия сосудов, и эпителиальных клеток линии6,7. Сегодня существует несколько методов для выполнения царапин8, и различные материалы были зарегистрированы для использования, включая зубочистки9, клетки скребки10, лазеры11и электрические токи12. Все методы имеют различные плюсы и минусы, и метод должно быть принято в соответствии с ячейки типа, бюджета и анализа инструмент. Например если тип используемой ячейки требует покрытия, удаление ручного давления, например с концом toothpick или пипетки, будет влиять на миграцию в пределах области, следует использовать другой метод. В этом исследовании мы сосредоточимся на ручное выскабливание.
Для ручной соскоб оборотная изменения размера, формы царапины и накопления клеток на краях нуля. Многие протоколы существуют, и высоко цитируется документ советует увеличена скорость и/или тщательного мытья после царапин13. Кроме того некоторые методы были использованы для сведения к минимуму распространения, поскольку распространение клетки не могут быть отделены от миграции и поэтому может дать ложно положительных результатов миграции. Некоторые сообщили, что методы являются сыворотки голода предшествующего нуля14 и уменьшается количество сыворотки15. Однако ни один из этих методов можно обеспечить, что нет никакого распространения. Таким образом мы приводим предварительной обработки клеток с митомицин C обеспечить реальные результаты миграции. Митомицин C — антибиотик, который подавляет синтез ДНК, формируя ковалентной связи с ДНК, которая предотвращает разделение16ДНК. Путем предварительной обработки с митомицин C и мойки с PBS до царапин, обнаруженных закрытия разрыва демонстрирует истинный миграции клеток (рис. 1).
Характерной особенностью всех методов является необходимость создания системы для анализа процесса миграции17. Общей и недорогой метод для анализа прогресса заключается в использовании микроскопом свет поле принять изображения нуля в предопределенное время точках, следуют анализ закрытия разрыва в образ программного обеспечения18,19. Этот метод является длительным, ненадежные отношении фотографировать на том же месте и фокус, и движение от инкубатора для камеры сил циклы изменения температуры во время съемки. Были разработаны другие методы для обнаружения миграции путем измерения тока. Текущие изменения, как клетки охватывают больше места на табличке, который читается как увеличение импеданса20. Путем измерения импеданса, средой клеток не влияет, и поэтому считается неинвазивный метод. Этот метод полагается на специализированных пластины с золотых электродов, которые являются дорогими, но они включить обнаружение многих процессов, таких как сотовый присоединению, распространения, миграции и гибели клеток. Большим недостатком этого метода является измерение импеданса не указывать непосредственно миграции, поскольку такие факторы, как температура имеют большое влияние на сопротивление. Изменения в сопротивление может быть вызвана несколько факторов, которые не проверены программного обеспечения, затрудняет анализ данных. Таким образом отсутствие визуализация требует обычных световой микроскоп для проверки миграции.
Чтобы преодолеть многие из недостатков имеющихся методов, мы используем реального времени автоматизированных оптической камеры. Оптическая камера является системой обнаружения с микроскопом высокой пропускной способности в небольшой платформе с объективом, блок подсветки и цифровой фотоаппарат. Она имеет встроенный программного обеспечения, которое можно проверить, миграции и распространения среди других вещей. Чтобы обнаружить миграции, два алгоритмы используются для анализа роста и кинетика миграции клеток, которые называются распространения и ранозаживляющее анализа, соответственно. Анализ распространения основе алгоритма сегментации изображения двухэтапный, которая применяет текстуру анализ различий между районами охватывает ячейки (показано желтым цветом) и пустой фон области путем анализа передовых гистограммы. Ранозаживляющее анализ основан на три шага алгоритма, который обнаруживает монослое клеток, находит разрыва раны и определяет ширина зазора. Эти действия проводятся в моменты времени, определяемые пользователем, и данные представлены как крытой площади, ширина зазора и разрыв области. Одним из главных преимуществ этой машины является, что он позволяет изображений адэрентных клеток через жидкости из-за угла камеры21. Изображения камеры lenstakes наклонена, которые, согласно прогнозам, z стек одной плоскости z генерировать для обеспечения того, чтобы фотографии в фокусе (рис. 2). z стеки создаются путем слияния серии фотографий (например 40) перпендикулярно к краю рану и через всю рану. Z стеки позволяет захвата глубины слоя клеток, а также в фокальной плоскости через рану. Кроме того серии изображений могут быть объединены в коллекцию видео изображения, с одним нажатием кнопки.
Мы демонстрируем оптимизированный протокол для обнаружения миграции в линии клеток кератиноцитов HaCaT. Мы проверили, лактоферрин и его N-терминальный пептида, Lactoferricin, от людей и коров, чтобы анализировать их влияние на миграцию, как было продемонстрировано, что эти молекулы имеют многочисленные приложения как антимикробное и иммунной, модулирует молекулы22 , 23. четыре соединения были по сравнению с необработанными HaCaT клеток и эпидермального фактора роста (EGF) был использован в качестве позитивного элемента управления.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Экспериментальной установки не имеет этических и правовых ограничений и было проведено по согласованию с университет Роскилле. Обзор экспериментальной установки можно увидеть на рисунке 1 и механизмами оптической камеры на рисунке 2.
1. Подготовка
- Выполните все шаги в лавочке стерильных ламинарного потока путем очистки скамейке и все оборудование с 70% этанол до начала эксперимента.
- Место оптическую камеру в обычных инкубатора при 37 ° C с 5% CO2 для обеспечения оптимальных условий для клеток.
- Растут HaCaT клеток в среде DMEM СМИ с 10% FBS и 1 x антибиотики (пенициллин и стрептомицин) в колбе T75.
- Используйте 1 мл 1 x трипсина отсоединить клетки и югу культивировать их каждые 3-4 дня, путем диспергирования сотовой слоя. Нагреть до комнатной температуры перед использованием.
2. формирование монослоя HaCaT клеток в плите микротитровальных 48-Уэллс
- Удалите носитель из T75 колбу с пипетка Пастера.
- Вымойте адэрентных клеток в колбу, добавив 5 мл стерильной ПБС T75 колбу.
Примечание: Убедитесь, что PBS свободного кальция и магния. - Распространить PBS и удалить его с пипетка Пастера.
- Повторите шаг 2.2-2.3.
- Добавить 1 мл 1 x трипсина в колбу и разогнать его через слоя клеток.
- Инкубировать настой при 37 ° C в обычных инкубатор, до тех пор, пока отдельные клетки (5-8 мин является достаточным для большинства клеточных линий).
- Смотреть под микроскопом, если отдельные клетки. После того, как отдельные клетки, добавить 9 мл регулярные СМИ культуры с 10% FBS для инактивации 1 x трипсина.
- Подсчитать ячейки с либо Горяева Коултер счетчик или аналогичный.
Примечание: Трипановый синий может использоваться для просмотра мертвые клетки. Однако в 1 x трипсина HaCaT клетки являются идеально круглой когда жив. - 7.5 x 104 клетки/колодец в средствах массовой информации FBS 10% 250 мкл передать круглодонные 48-ну тканевые культуры плиты (стандартная пластина).
Примечание: Assay можно также настроить в 6-, 12-, 24- или 96-луночных пластины, которые могут быть assayed под оптический микроскоп. - Осторожно двигаться пластину из стороны в сторону, чтобы убедиться, что клетки одинаково распределены в скважинах, или клетки соберутся в центре скважин. Проверить под микроскопом света, чтобы убедиться, что ячейки равномерно распределяется в средствах массовой информации
- Установите пластину в обычных инкубатор CO2 при 37 ° C, на ночь, или до тех пор, пока клетки присоединились к нижней части скважины.
3. Добавление стимулы для миграции эффекты
- Проверьте, если скважины 90-95% притока под микроскопом света.
- Подготовка 10 мкг/мл митомицин C в соответствующее количество среды.
Примечание: В этом исследовании митомицин C хранится при температуре 4 ° C в раствор на 1 мг/мл. Митомицин C в растворе может храниться до одной недели в темноте при температуре 2-8 ° C. - Удаление отработанного СМИ с пипетка Пастера из каждой скважины.
- Добавьте 250 мкл 5 мкг/мл митомицин C в каждой скважине.
- Инкубируйте пластину для 2 ч при 37 ° C и 5% CO2.
- Подготовьте раздражители пептидов путем разбавления их в соответствующее количество среды.
Примечание: В этом исследовании как человека и говядину лактоферрин и Lactoferricin были протестированы на 25 мкг/мл в объеме 250 мкл - Удалите носитель с митомицин C с пипетка Пастера.
- Промойте скважин, Пипетка 1 x с 250 мкл 1 x PBS (комнатной температуры) и удалить моют Пастер.
- 250 мкл ПБС и вручную поцарапать скважин вертикально с 200 мкл кончиком пипетки. Используйте новый наконечник пипетки для каждой скважины.
- Удалите PBS и добавьте 250 мкл пептид раздражителей.
- Установите крепежную пластину в оптической камеры системы, регулируя винты с обеих сторон плиты. Оставьте крышку на микротитровальных табличке.
Примечание: Камера может работать с открытой при необходимости крышкой.
4. Настройка программы для оптической камеры на компьютер
- Нажмите кнопку получить в панели слева.
- Выберите функцию, заживление ран в панели слева.
- Выберите тип пластины, нажав ниже иллюстрации пластины.
- Отменить выбор скважин, не в использовании, помечая их и нажмите кнопку включить в верхнем левом углу на экране.
Примечание: По умолчанию выбраны все скважины. - Отрегулируйте фокус объектива на скважинах, чтобы соответствовать позиции ячейки правой кнопкой мыши на одной из скважин.
Примечание: Автофокусировки также может регулироваться вручную путем перемещения панели справа на рисунке пластины. - Задайте период времени для изображений под Картину интервал (например (00: 30:00)).
- Задайте количество повторов подогнать нужный период (например 97 повторений).
- Запустите запустить, нажав кнопку « Пуск » в правом нижнем углу.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
HaCaT — линия клеток кератиноцитов, один из самых распространенных типов клеток в коже. Когда происходит рану, клетки кожи начинают размножаться и мигрируют через рану спать, чтобы закрыть рану (рис. 3). Оба процесса являются, таким образом, первостепенное значение для надлежащего лечения.
Оптическая камера может следовать обоих процессов в режиме реального времени. Для миграции, система дает три набора данных: клетки покрыты области, ширина зазора и разрыв области. Когда мониторинг царапин лечение лактоферрин, Lactoferricin или EGF, оптический микроскоп позволяет нам контролировать эти три параметра с течением времени. После 48 ч инкубации мы отмечаем, что EGF привела к 95% закрытие раны, по сравнению с 38% закрытия необработанных элемента управления (Рисунок 3А). Различные версии, лактоферрин и Lactoferricin находятся между 33% и 62% рану закрытия с пептидами, будучи более мощным, чем неращепленными белками. Процент закрытия РАН, определяется от изменения ширины щели от начального нуля, также могут быть нанесены (рис. 3B).
HaCaT клетки имеют сильный ячеек взаимодействия и когда клетки мигрируют, серии шагов требуется24. Вскоре ведущих клетки нарушить их сайт адгезии, выступать и контракт цитоскелета двигаться25. Выступ ведущих клеток легко могут быть просмотрены с оптической камеры (рис. 4).
Рисунок 1 : Принципиальная схема скретч assay для тестирования миграции на оптической камеры. HaCaT клетки покрытием на тарелку, 48-а и позволено следовать за 24 ч. Клетки предварительно обработанных с митомицин C 2 h препятствовать распространению, и нуля выполняется и последующим добавлением пептид раздражителей. Пластину вставляется в устройство оптической камеры, и миграции следует за 48 ч.
Рисунок 2 : Технология сканирования оптической камеры. Оптически объектив автоматической оптической камеры под углом на 6,25 ° в горизонтальной плоскости, чтобы включить сканирование через различные решения, такие как бактериальный и Сотовые решения. Приобретенные серии изображений содержат стеки изображений из всех направлений, вне фокуса и в фокусе, для обеспечения изображений с клетки в фокус. Изменение от26.
Рисунок 3 : Миграция предварительно очищенной митомицин C HaCaT клетки более 48 часов. (A) миграции обнаружен на автоматизированный оптический камеры каждые полчаса в течение 48 часов. Клетки предварительно обработанных с митомицин C сдерживать распространение. Клетки лечат с 25 мкг/мл гуманного - или говядину лактоферрин (H-LF или B-LF) или - Lactoferricin (H-LFcin, B-LFcin). Эпителиального фактора роста (EGF) используется как положительный контроль на 500 нг/мл. Неочищенные клетки HaCaT используются в качестве элемента управления. (B) графические иллюстрации миграции лечения. Результаты являются представителями трех независимых бежит, и приведены результаты как процент закрытия начального нуля * p < 0,05, ** p < 0.01, *** p < 0,001.
Рисунок 4 : Выступающие lamellipodia из лечение клетки HaCaT. Lamellipodia HaCaT клеток характеризуется черные стрелки. Сильный ячеек взаимодействие HaCaT приводит в динамическое движение клеток как они мигрируют и легко может наблюдаться с течением времени.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
О важности миграции в исследованиях развития, заживление ран, иммунологии и рака привело к несколько различных методов для изучения миграции. Миграция может быть выражением расширения или закрытия разрыва клетками. Чаще всего закрытие нуля проверяется, как это легче расти клеток в монослое и затем сделать нуля чем клетки в определенной форме8. Наше исследование демонстрирует оптимизированный метод для ручной царапин, как техника легко освоить и низкой стоимости. Мы ввели митомицин ингибитор синтеза ДНК C, дополнительной стирки для оптимизации нуля, по сравнению с опубликованным методы18и использование оптической камеры, что позволяет высок объём исследований.
В vitro скретч пробирного требует адэрентных клеток линии, которая связывает правильно в нижней части скважины и обнаружить миграции более нуля, распространения необходимо быть тормозится. Эти две функции имеют важное значение для assay. Для обнаружения истинный миграции, снижение концентрации сыворотки, голодающие клеток до царапин14, ДМСО или различные ингибиторы 13,27были описаны несколько подходов. В общем, сыворотка свободных средств массовой информации могут быть использованы, однако, некоторые клетки линии, такие как начальных клеточных линий, необходимости сыворотка для движения и общей выживаемости. Таким образом выбор должен производиться согласно линии клеток. Клеточных линий, которые требуют покрытия может быть проблематичным в этот assay, как ручной царапины будут мешать покрытие также.
Различных типов клеток требует различное количество клеток сформировать вырожденная монослоя в зависимости от их размера и темпов роста. HaCaT клетки присоединиться после около 4-6 ч, но остается урегулировать всю ночь сделать стабильной монослоя. Один из основных недостатков скретч assay — нерегулярные царапины8. В этом исследовании мы показываем, что предварительной стирки с PBS и нуля в новой PBS уменьшить накопление раненых и поврежденных клеток по краям нуля. Это можно правдоподобно объяснить на стыке десмосомы, соединяющий клеток в коже. Узлы являются Ca2 +-зависимых24 и с помощью PBS, удаляются катионы, которые могут ослабить сильных клеток клеточной адгезии. Таким образом использование PBS может позволить лучшего удаления клеток индивидуально, приводит к менее накопления клеток вдоль края раны. Кроме того оптическую камеру меры большой частью скважин во всех размеров плиты и приспосабливается к наклонностями в нуля через свои три шага алгоритма. Таким образом, предварительная стирка с PBS и используя оптическую камеру, устраняются недостатки ручной царапин. Z штабелирование изображений делает упор на клетки более точным, но в зависимости от того, как различные типы клеток расти, фокус может быть проблемой. Если клетки растут слишком много, фокус камеры будет уделяться от фокус вне фокуса. Таким образом если митомицин C не используется, это может быть выгодно, чтобы установить фокус немного выше, если ваш экспериментальная установка будет работать более чем на 24 ч. Оптическая камера имеет легкую настройку, которая управляется через стандартный компьютер с интуитивное программное обеспечение, которое можно измерить пластины от 6 - 96-луночных микротитровальных пластины и таким образом позволяет различные испытания установок. При выборе количество изображений, которые необходимо принять, существует несколько ограничений. Если используется 96-луночных плита, количество снимков, которые можно получить является только ограниченное пространство на компьютере, как наборы данных может стать слишком большим и скорость камеры. Если требуется много снимков в быстрой последовательности, движение камеры может быть ограничивающим фактором, как это нужно время, чтобы проверять каждый хорошо.
Оптическая система позволяет простой, но мощный мониторинга. Фотографии нуля анализируются в связи с процессом закрытия разрыва, но также может использоваться для морфологических характеристик клеток. Программное обеспечение знаменует клетки желтого и оставляет фоновый цвет серый в качестве стандартной функции, лучше визуализировать края раны, хотя изображений raw очевидно доступны, необходимо для например публикаций. HaCaT клетки имеют сильные ячеек взаимодействия, которые делают миграции происходят в динамический лист28. Эта функция делает его легко увидеть lamellipodia мигрирующих клеток с течением времени (рис. 4).
Это исследование показывает эффект от белков лактоферрин и их производные N-терминальный пептидов, Lactoferricin и EGF как позитивный элемент управления, но может быть изменена для тестирования различных препаратов, пептидов/белков и комбинаций, как ингибиторы или стимуляторы заживления ран. Царапинам assay могут быть изменены и оптимизирован для fit различных клеточных линий и соединений, которые могут повлиять на миграцию. Вместе с его низкой стоимости и легкая управляемость, этот assay очень доступен для большинства лабораторий. Оптическая камера может использоваться для тестирования различных препаратов, ингибиторов или стимуляторы для миграции, но и распространения.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют ничего сообщать.
Acknowledgments
Датский Совет независимых исследований, технологии и производства, Грант #4005-00029
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| oCelloScope | BioSense Solution ApS | Optical camera | |
| UniExplorer software | BioSense Solution ApS | (8.0.0.7144 (RL3)) | |
| HaCaT cell | Donated from Bispebjerg Hospital | ||
| DMEM (1x) + GlutaMAX | Gibco | 31966-021 | Medium for HaCaT |
| FBS | Gibco | 10270 | Fetal bovine serum |
| PBS | Gibco | D837 | Without Mg+ and Ca2+ |
| Pencillin-Streptomycin | Sigma | P0781 | Antibiotics |
| Trypsin (10x) | Sigma | T3924 | |
| Mitomycin C | Tocris | 3258 | Inhibits proliferation |
| Microtiter plate | Greiner Bio-one | 677 180 | |
| Incubator | Panasonic | 37°C, 5% CO2 | |
| Hemocytometer | Assistent | Türk (0.1 mm) | |
| Pipet boy | Accu-Jet pro |
References
- Frykberg, R. G., Banks, J. Challenges in the Treatment of Chronic Wounds. Advances in wound care. 4 (9), 560-582 (2015).
- da Silva, L., Carvalho, E., Cruz, M. T. Role of neuropeptides in skin inflammation and its involvement in diabetic wound healing. Expert opinion on biological therapy. 10 (10), 1427-1439 (2010).
- Vyas, K. S., Wong, L. K. Detection of Biofilm in Wounds as an Early Indicator for Risk for Tissue Infection and Wound Chronicity. Annals of Plastic Surgery. 76 (1), 127-131 (2016).
- Paul, C. D., Mistriotis, P., Konstantopoulos, K. Cancer cell motility: lessons from migration in confined spaces. Nature Reviews Cancer. 17 (2), 131-140 (2016).
- Folkman, J. Angiogenesis. Annual review of medicine. 57, 1-18 (2006).
- Monsuur, H. N., et al. Methods to study differences in cell mobility during skin wound healing in vitro. Journal of Biomechanics. 49 (8), 1381-1387 (2016).
- Tang, L., et al. Human lactoferrin stimulates skin keratinocyte function and wound re-epithelialization. The British journal of dermatology. 163 (1), 38-47 (2010).
- Ashby, W. J., Zijlstra, A. Established and novel methods of interrogating two-dimensional cell migration. Integrative Biology. 4 (11), 1338-1350 (2012).
- Klettner, A., Tahmaz, N., Dithmer, M., Richert, E., Roider, J. Effects of aflibercept on primary RPE cells: toxicity, wound healing, uptake and phagocytosis. British Journal of Ophthalmology. 98 (10), 1448-1452 (2014).
- Doyle, W., Shide, E., Thapa, S., Chandrasekaran, V. The effects of energy beverages on cultured cells. Food and Chemical Toxicology. 50 (10), 3759-3768 (2012).
- Zordan, M. D., Mill, C. P., Riese, D. J., Leary, J. F. A high throughput, interactive imaging, bright-field wound healing assay. Cytometry Part A. 79 (3), 227-232 (2011).
- Keese, C. R., Wegener, J., Walker, S. R., Giaever, I. Electrical wound-healing assay for cells in vitro. Proceedings of the National Academy of Sciences. 101 (6), 1554-1559 (2004).
- Liang, C. C., Park, A. Y., Guan, J. L. In vitro scratch assay: a convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro. Nature Protocols. 2 (2), 329-333 (2007).
- Räsänen, K., Vaheri, A. TGF-beta1 causes epithelial-mesenchymal transition in HaCaT derivatives, but induces expression of COX-2 and migration only in benign, not in malignant keratinocytes. Journal of Dermatological Science. 58 (2), 97-104 (2010).
- Tochio, T., Tanaka, H., Nakata, S., Hosoya, H. Fructose-1,6-bisphosphate aldolase A is involved in HaCaT cell migration by inducing lamellipodia formation. Journal of Dermatological Science. 58 (2), 123-129 (2010).
- Tomasz, M. Mitomycin C: small, fast and deadly (but very selective). Chemistry and Biology. 2 (9), 575-579 (1995).
- Stamm, A., Reimers, K., Strauß, S., Vogt, P., Scheper, T., Pepelanova, I. In vitro wound healing assays - state of the art. BioNanoMaterials. 17 (1-2), 79-87 (2016).
- Justus, C. R., Leffler, N., Ruiz-Echevarria, M., Yang, L. V. In vitro Cell Migration and Invasion Assays. Journal of Visualized Experiments. (88), 1-8 (2014).
- Jonkman, J. E. N., et al. An introduction to the wound healing assay using live-cell microscopy. Cell Adhesion & Migration. 8 (5), 440-451 (2016).
- Hong, J., Kandasamy, K., Marimuthu, M., Choi, C. S., Kim, S. Electrical cell-substrate impedance sensing as a non-invasive tool for cancer cell study. The Analyst. 136 (2), 237-245 (2011).
- Fredborg, M., et al. Real-time optical antimicrobial susceptibility testing. Journal of Clinical Microbiology. 51 (7), 2047-2053 (2013).
- Jenssen, H. Anti herpes simplex virus activity of lactoferrin/lactoferricin - An example of antiviral activity of antimicrobial protein/peptide. Cellular and Molecular Life Sciences. 62 (24), 3002-3013 (2005).
- Jenssen, H., Hancock, R. E. W. Antimicrobial properties of lactoferrin. Biochimie. 91 (1), 19-29 (2009).
- Delva, E., Tucker, D. K., Kowalczyk, A. P. The desmosome. Cold Spring Harbor perspectives in biology. 1 (2), 1-17 (2009).
- Ponti, A. Two Distinct Actin Networks Drive the Protrusion of Migrating Cells. Science. 305 (5691), 1782-1786 (2004).
- Canali, C., Spillum, E., Valvik, M., Agersnap, N., Olesen, T. Whitepaper a Digital Time-Lapse Bright Field Technology To Drive Faster, Higher Throughput Bioanalysis. , (2016).
- Peplow, P. V., Chatterjee, M. P. A review of the influence of growth factors and cytokines in in vitro human keratinocyte migration. Cytokine. 62 (1), 1-21 (2013).
- Ilina, O., Friedl, P. Mechanisms of collective cell migration at a glance. Journal of Cell Science. 122 (18), 3203-3208 (2009).
