Summary
Гонартроз часто видели в отделе ортопедические. Мы представляем в деталях процесс лечения остеоартрита весь колена с впрыском тромбоцитов богатые плазмы, включая подготовку, процедур и оценки.
Abstract
Коленного остеоартрита (КОА) является одним из наиболее часто встречающихся заболеваний в отделе ортопедические. Существующих не хирургического лечения имеют ограниченное воздействие на восстановление хрящевой и костной регенерации. Тромбоциты богатые плазмы (PRP) является аутологичной биоактивное вещество, которое можно отремонтировать повреждения хряща и эффективно ускоряет регенерацию костной ткани. Однако отчетности ОТР подготовку протоколов в клинических исследованиях весьма непоследовательно, с большинством исследований, предоставление достаточной информации для того чтобы протокол быть воспроизведены. Мы описываем повторяемые метод подготовки PRP визуально, лечение Коа, используя PRP внутрисуставные инъекции и методов оценки результатов. ОТР был подготовлен с использованием ручной двойной центрифугирования. Слой ОТР был извлечены из периферической крови и используется для инъекций совместных полость коленного сустава. Оценки включали оценки концентрации крови тромбоцитов и клинические исходы. Подготовка PRP вручную центрифугированием требует меньше аппарат и является менее дорогостоящим, чем фильтрация плазмы или центрифугирования, с использованием оборудования. Время центрифугирования нашего метода двойной центрифугирования было 6 и 5 минут для соответствующих centrifugations сил 800 и 1400 x g, соответственно, чтобы обеспечить последовательную подготовку стандартизированных ОТР. Однако ручной метод подвержен ошибка оператора, и подготовка пакета ОТР не доступен. Внутрисуставные инъекции ОТР оказались эффективным средством лечения для коленного остеоартрита. Вся процедура занимает менее 30 минут, можно было бы стандартизировать тромбоцитов крови концентрацию ОТР, и лечение было доказано, чтобы быть эффективным при оценке последующих мер.
Introduction
Коленного остеоартрита (КОА) является одним из наиболее часто видели заболеваний в ортопедическое отделение; 30% - 50% людей в возрасте старше 65 лет опыт этой болезни1. В настоящее время консервативное управление KOA главным образом включает орального применения нестероидных противовоспалительных препаратов и хряща питательных препаратов, Внутрисуставных инъекций гиалуронат натрия и физиотерапии. Однако эти методы не могут остановить процесс колена совместного дегенерации2. Дефектов суставного хряща может вызвать суставной поверхности износа, совместной нестабильности и метаболические изменения, которые являются частью патогенеза KOA3. Однако из-за отсутствия кровеносных сосудов, нервов и лимфоидной ткани суставного хряща, восстановление после повреждения трудно. Эффективный метод восстановления хряща особенно важно для лечения KOA. Лечение osteoclasia также является одним из ключевых направлений в лечении KOA.
Тромбоциты богатые плазмы (PRP) является аутологичной биоактивные вещества, и применение PRP для костей и суставов проблемы изучается все более. Биологическое обоснование клинического применения ОТР включает в себя его влияние на местные поставки факторов роста и модификации воспалительной реакции и его позитивного воздействия на клетки пролиферации и дифференцировки4. После активации внутрисуставные инъекции, ОТР выпускает α-блок через дегрануляция и выделяет различные факторы роста, в том числе тромбоцитарный фактор роста, преобразовывая фактор роста β, инсулин подобный фактор роста, эпидермального фактора роста, Сосудистый эндотелиальный фактор роста и фактор роста фибробластов. Эти поощрять остеобластов и хондроцитов распространения, подавляют дегенерации хряща, укрепить стабильность хряща и субхондральной кости, регулировать ген выражение ткани ингибитор металлопротеиназ и поддерживать баланс синтеза и деградация протеогликаны5,6. Таким образом ОТР может восстанавливать хряща травму и ускоряет регенерацию костной ткани.
Итоги внедрения ОТР находится под влиянием различных факторов, включая сайт выборки7, тип центрифуги подготовка метод8и применение антикоагулянтов активаторы9 и10. Есть примерно 3 типа центробежные методы для подготовки ОТР. Ручной центрифугирования, на основе оборудования центрифугирования или методы фильтрации плазмы доступны, хотя наиболее часто используются методы ручной и на основе оборудования. Ручной метод требует наименее оборудования, удобно, является низкая стоимость и простой для выполнения (рис. 1). PRP подготовленный производительности ручного центрифугирования дважды. Смешанные периферической крови и антикоагулянта центрифугировали отделить hemocytes от плазмы и тромбоцитов. После отмены красные кровяные клетки на нижнем слое, супернатанта жидкость является центрифугировали для повторного разделения, разделив его на супернатанта тромбоцитов плохой плазмы, средней PRP и subnatant остаточной красных кровяных клеток. Средний слой используется для инъекций совместных полость коленного сустава (если количество является недостаточным, частью супернатант можно сделать). Оценки метода, включают в себя оценки концентрации крови тромбоцитов и клинические исходы.
Весьма несовместимо отчетности ОТР подготовку протоколов в клинических исследованиях, и большинство исследований не обеспечивают достаточной информации, чтобы разрешить протокол быть воспроизведены11. Здесь мы описываем воспроизводимый метод подготовки PRP и лечения KOA с ОТР Внутрисуставных инъекций, с оценкой результатов. Критерии включения были пациенты с коленного остеоартрита у бедных боли для простых болеутоляющие лекарства (например, парацетамол) и консервативного лечения. Критерии исключения были включены пациенты с расстройства венозного возврата или лимфатический дренаж; у больных с колена совместной инфекции; Пациенты с дерматозов или инфекции в области инъекций; у больных с лихорадкой; у больных с коагулянта функция аномалий; пациентам с серьезными сердечно-сосудистых заболеваний. Вся процедура занимает менее 30 минут, и тромбоцитов крови концентрацию ОТР доказано до стандартных измерений. Доказывается, что его эффективность оценки результатов во время непосредственной последующей деятельности.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Описанные методы были утверждены этики Комитет Гуандун больницы.
1. получить PRP вручную центрифугированием
- Подготовка пациента в лежачем положении в операционной комнате стерильной ламинарного потока с удобной комнатной температуры и влажности: комнатной температуре 22 ° C и влажности 60%.
- Используйте 1 мл шприц рисовать 0,2 мл гепарина натрия (2 мл = 12500 U), и затем смачивают 50 мл шприц.
Примечание: 3 мл раствора натрия цитрата также является типичным в этот шаг, чтобы заменить гепарина натрия. - Буровой установки жгут, стерилизовать локоть 2 - 3 раза и использовать влажные 50 мл шприц рисовать 30 мл периферической крови из вен локтевого.
- Выполните первый центрифугирования.
- Разделите периферической крови не менее двух 50 мл стерильного пробирок.
- Положите две трубы в горизонтальные роторы и затем в центрифуге, в асептических условиях.
- Центрифуги для 6 минут на 800 x g.
- Возьмите горизонтальные роторы, износ стерильные перчатки и вывезти пробирок.
- Наблюдать за наслоениями чтобы убедиться, что периферической крови разбиты на два слоя.
- Используйте чистый 10-мл шприц для сбора супернатанта жидкости от этих двух пробирок в чистых пластиковых пробирок.
- Выполните второй центрифугирования.
- Используйте чистый 10-мл шприц добавить эквивалентную сумму стерильной водой или физиологическим в другой чистых пластиковых пробирок для баланса. Положите трубы в горизонтальные роторы. Пометьте один с супернатанта слой жидкости, лейкопластырь.
- Центрифуги для 5 минут при 1400 x g.
- Возьмите горизонтальные роторы вне, и, наблюдая за наслоениями проверьте, что жидкость заметное трубки разделено на три слоя.
- Для рисования 4 мл жидкости из среднего гранулированных клетки слоя (лейкоцит богатых, ОТР) и нижний слой супернатант используйте шприц 10 мл. Если количество среднего слоя достаточно, просто нарисуйте 4 мл от этого.
- Положите 0,4 мл жидкости в стерильную пробирку Антисвертывающая (ЭДТА2K, 3,6 мг) для оценки, оставляя 3,6 мл жидкости, остающихся в шприц.
Примечание: Протокол может быть приостановлена здесь.
2. внутрисуставное администрация ОТР
- Пусть пациента лежа на операционном столе лежат и согнуть колено 90 градусов.
- Найдите на сайте проколов на нижний край надколенника и 1 см от боковых связок коленного. Используйте маркер ручка для обозначения сайта.
- Выполнения стерилизации кожи на месте прокола три раза с anerdian III, стерильные перчатки и накрыть асептических отверстие полотенце.
- Поместите шприц параллельно плато большеберцовой кости, а затем выполните пункция под углом 45 градусов. Полностью Вставьте иглу в кожу.
- Inject 3,6 мл ОТР из шприца в полости коленного сустава.
- Покрытия прокол позиции стерильной марлей и исправить ее с лейкопластырь.
- Давление в рану на 10 минут. Наблюдать за любые тяжелые неблагоприятные реакции на 30 минут.
- Администрирование в общей сложности три инъекции ежемесячной периодичностью.
Примечание: Протокол может быть приостановлена здесь.
3. послеоперационной оценки внедрения ОТР
- Оцените концентрацию крови тромбоцитов в НРП.
- Используйте 0,4 мл PRP от Антисвертывающая трубки (K2ЭДТА, 3,6 мг).
- Анализ крови тромбоцитов концентрация ОТР, используя анализатор автоматический клеток крови.
- Оцените итоги послеоперационного введения ОТР.
- С консультации за 1 день до каждого из трех видов лечения провести дальнейшие пациента последующей после каждого лечения, через 3 дня после каждого лечения, 1 неделю после каждого лечения, 1 месяц после третьего обращения, через 3 месяца после третьего обращения и 6 месяцев 1 день После третьего обращения.
- Используйте для оценки послеоперационный эффект визуального аналоговой шкале (VAS), Западного Онтарио и индекс артроз МакМастер университетов (WOMAC), Оценка общества колена (ВНК) и Lysholm колена функциональных масштаба.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
В результате тромбоцитов граф ОТР, достиг стандартной концентрации уровня µл 1121 x 103. Мы провели 15 последующие обследования, указанные в настоящем Протоколе на 55-летний мужчина пациента с раннего KOA. Было очевидно, что ранних клинических исходов было удовлетворительным после внутрисуставные введения ОТР (рис. 2). Однако эффективность средне-был немного уступает. Заметно значительное обезболивающий эффект было отмечено (рис. 2A). KSS колена оценка была выше, чем функция ВНК Оценка (рис. 2 C, Рисунок 2D), который означает, что эффект PRP на субъективных симптомов была лучше, чем на объективных симптомов. Lysholm колена функциональных шкала оценки указали, что наш метод доказательной эффект улучшения хряща травму и симптомы травмы мягких тканей (Рисунок 2E). В целом отличались терапевтический эффект нашей PRP протокола.
Рисунок 1 : Схема оформления протокола. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2 : Оценка итогов послеоперационного введения ОТР. Оценке клинических исходов VAS (A), (B) WOMAC, ВНК (C, D) и Lysholm колена функциональных масштаба (E). ВНК предусматривает колена Оценка (боль, мобильности и стабильности, C) и функции (ходьба способности и лестницы и деятельности, D) Оценка. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Концентрация тромбоцитов в нормальной человеческой крови между 150,000/мкл и 350 000/мкл, и широко распространено мнение, что концентрация тромбоцитов ОТР должен достичь 1,000,000/мкл, который является 3-5 раз нормальной концентрации9. Согласно системе иерархии ЛАПОЙ считается, что PRP имеет не очевидный эффект при концентрации тромбоцитов менее чем три раза нормальной концентрации, в то время как ОТР имеет тормозящее влияние, когда его концентрация в крови тромбоцитов более чем шести время нормальной концентрации12. Таким образом минимальное требование для этого протокола является концентрация тромбоцитов ОТР между этими уровнями.
Ручная подготовка ОТР может быть достигнуто центрифугированием одной или с двух раундов центрифугирования. Из-за параметров различных центрифуги качество полученных PRP отличается между двумя методами. Концентрации тромбоцитов, полученных одной центрифугированием являются низкими, но ОТР не содержат белых и красных кровяных клеток. Высокие концентрации крови тромбоцитов, полученных двойной центрифугированием, и PRP обычно содержит небольшое количество белых кровяных клеток и даже красные кровяные клетки13. Оспорено ли существование белых кровяных клеток в ОТР является полезным для результатов. Некоторые исследования показали, что белых кровяных клеток богатые PRP обладает сильной антибактериальной активностью, облегчает восстановления функций и меньше раздражитель, уменьшая необходимость анальгетиков14. Однако цитокины, металлопротеаз, интерлейкины и освобожден из белых кровяных клеток свободные радикалы кислорода может усугубить ущерб в острой стадии, препятствуя самостоятельного ремонта тканей и задержки исцеления процесса15. Чтобы получить тромбоцитов в более высоких концентрациях, мы использовали двойной центрифугирования.
Уровень тромбоцитов крови также связана с центробежной силы и время. Общепризнано, что концентрация тромбоцитов крови увеличивается как центробежная сила увеличивается. Однако чрезмерное центробежной силы повредит тромбоцитов крови, снижение темпов восстановления. Тромбоцитов концентрация также увеличивается с длиной центрифугирования. При менее чем за 5 минут, центрифугирование тромбоцитов крови являются низкими, и не значительный эффект будет получен; между 10 и 20 минут центрифугирования концентрация тромбоцитов крови постепенно и неуклонно увеличивается; После более чем 20 минут тромбоцитов крови концентрации изменения больше не очевидно16. Длительные центрифугирования может привести к чрезмерной тромбоцитов осаждения и уменьшить биологическую, поэтому оптимальное центрифугирование время от 5 до 10 минут. Мы создали оптимальное центрифугирование время для двойной центрифугирования 6 и 5 минут для первого и второго центрифуги на силы 800 и 1400 x g, соответственно, подготовить PRP.
Некоторые PRP собирают и непосредственно впрыскивается в области травмы, но другие формулировки добавить агент, активации тромбоцитов, например тромбиновое или CaCl2. В целом ОТР используется для облегчения хроническое воспаление или травмы «износ», такие как OA обычно вводится без активации агента17.
Для оценки результатов лечения мы использовали несколько шкал. VAS предоставил подробные боль измерения. Мы использовали WOMAC для оценки тяжести gonitis и эффект лечения согласно соответствующим симптомы и признаки. ВНК предусматривает колена Оценка боли, мобильность и стабильности и функции оценка для прогулок способности и лестницы и деятельности. Lysholm колена функциональных шкала оценки травмы связок и хрящей.
Там были некоторые ограничения для нашего метода. Во-первых, Ручная подготовка подвержен ошибка оператора, главным образом из субъективности в чертеже середины буферизации слой и часть супернатанта жидкости после второго центрифугирования. Однако после повторных экспериментов с различными операторами, мы, наконец, нашли эффективный тромбоцитов концентрации. Во-вторых подготовка пакета ОТР не доступен с помощью этого метода. PRP могут только подготовленный рисунок крови перед каждой инъекцией. Хранения образцов является сложным, он должен быть приемлемым для повторно подготовить ОТР каждый раз.
В целом Внутрисуставных инъекций ОТР является эффективным средством лечения для коленного остеоартрита. Это исследование отчет обеспечивает весь процедура в деталях, включая подготовку ОТР надежного качества, введение процедуры стандартного инъекции и план научной и практической оценки.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют ничего сообщать.
Acknowledgments
Это исследование было поддержано Фонд национального естественных наук Китая (81371991) и основная программа науки и технологии Гуандун (2015B020225007).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Centrifuge | Eppendorf | 5702 | |
| Centrifuge tube | CORNING | 430828 | |
| Horizontal rotor | Eppendorf | LL080 | |
| Anerdian III | Shanghai Likang Disinfectant HiTech Co., LTD | 310173 | Disinfect the skin |
| 1ml Syringe | KDL Medical Equipment Co., LTD | 0.4*13 RWLB | |
| 10ml Syringe | KDL Medical Equipment Co., LTD | 1.2*38 TWSB | |
| 50ml Syringe | KDL Medical Equipment Co., LTD | 0.7*32 TWLB | |
| Medical Tourniquet | Changzhou Jinli Latex Products Co., LTD | 0087-2011 | |
| Single-use sterile rubber surgical gloves | Shanghai jinxiang Latex Products Co., LTD | 17060 | |
| Disposable Draw Blood Needle | KDL Medical Equipment Co., LTD | 0.55*20 L(II) RWLB | |
| Heparin Sodium Injection | SPH No.1 Biochemical & Pharmaceutical Co., LTD | 1706101 | 2ml:12500U |
| Jifro Hand Antiseptic Rinse Free Gel | Shanghai Likang Disinfectant HiTech Co., LTD | 311793 | |
| Medical Cotton Swab | Foshan Kangzheng Medical Supplies Co., LTD | KZ3-12 | Disinfect the skin |
| 10ml Normal Saline | Jiangxi Shuangshi Pharmecutical Co., LTD | 140211458 | |
| Automatic Blood Cell Analyzer | Beckman Coulter | LH-750 | |
| Hole-towe | Sterile | ||
| Anticoagulation Tube(Blood Collection Tubes, K2E 3.6mg) | Becton, Dickinson and Company | CNL17-COO56 | Store in a cool dry place within 4 to 25 degrees Celcius |
| Tweezers | RWD LIFE SCIENCE | F12006-10 | |
| Sterile Gauze | Guangdong Ze Chang Trade Co., LTD | 170915 | |
| Adhesive Plaster | 3M Transpore | 1527C-0 | |
| Skin Marker Pen | Guangzhou Mingjia Medical Device Manufacturing Co., LTD | 10110 |
References
- Loeser, R. F. Age-related changes in the musculoskeletal system and the development of osteoarthritis. Clinics in Geriatric Medicine. 26 (3), 371-386 (2010).
- Bhatia, A., Peng, P., Cohen, S. P. Radiofrequency procedures to relieve chronic knee pain: an evidence-based narrative review. Reg Anesth Pain Med. 43 (1), 72 (2018).
- Sánchez, M., et al. A randomized clinical trial evaluating plasma rich in growth factors (PRGF-endoret) versus hyaluronic acid in the short-term treatment of symptomatic knee osteoarthritis. Arthroscopy the Journal of Arthroscopic & Related Surgery. 28 (8), 1070-1078 (2012).
- LaPrade, R. F., et al. Biologic treatments for sports injuries II think tank-current concepts, future research, and barriers to advancement, part 1: biologics overview, ligament injury, tendinopathy. Am J Sports Med. 44 (12), 3270-3283 (2016).
- Ornetti, P., et al. Does platelet-rich plasma have a role in the treatment of osteoarthritis? Joint Bone Spine. 83 (1), 31-36 (2016).
- Knop, E., Paula, L. E. D., Fuller, R. Platelet-rich plasma for osteoarthritis treatment. Revista Brasileira de Reumatologia (English Edition). 56 (2), 152-164 (2016).
- Weibrich, G., Kleis, W. K., Hafner, G., Hitzler, W. E. Growth factor levels in platelet-rich plasma and correlations with donor age, sex, and platelet count. J Craniomaxillofac Surg. 30 (2), 97-102 (2002).
- Landesberg, R., Roy, M., Glickman, R. S. Quantification of growth factor levels using a simplified method of platelet-rich plasma gel preparation. Journal of Oral & Maxillofacial Surgery. 58 (3), 297-300 (2000).
- Wasterlain, A. S., Braun, H. J., Dragoo, J. L. Contents and formulations of platelet-rich plasma. Operative Techniques in Orthopaedics. 22 (1), 33-42 (2012).
- Gobbi, G., Vitale, M. Platelet rich plasma for biological therapy: applications and limits. Operative Techniques in Orthopaedics. 22 (1), 10-15 (2012).
- Chahla, J., et al. A call for standardization in platelet-rich plasma preparation protocols and composition reporting: a systematic review of the clinical orthopaedic literature. Journal of Bone & Joint Surgery-american. 99 (20), 1769-1779 (2017).
- Delong, J. M., Russell, R. P., Mazzocca, A. D. Platelet-rich plasma: the PAW classification system. Arthroscopy the Journal of Arthroscopic & Related Surgery. 28 (7), 998-1009 (2012).
- Yazigi Junior, J. A., et al. Quantification of platelets obtained by different centrifugation protocols in SHR rats. Revista Brasileira de Ortopedia (English Edition). 50 (6), 729-738 (2015).
- Moojen, D. J. F., et al. Antimicrobial activity of platelet-leukocyte gel against Staphylococcus aureus. Journal of Orthopaedic Research. 26 (3), 404-410 (2008).
- Tinsley, B. A., Ferreira, J. V., Dukas, A. G., Mazzocca, A. D. Platelet-rich plasma nonoperative injection therapy-A review of indications and evidence. Operative Techniques in Sports Medicine. 20 (2), 192-200 (2012).
- Arora, S., Doda, V., Kotwal, U., Dogra, M. Quantification of platelets and platelet derived growth factors from platelet-rich-plasma (PRP) prepared at different centrifugal force (g) and time. Transfusion & Apheresis Science. 54 (1), 103-110 (2016).
- Cohn, C. S., Lockhart, E. Autologous platelet-rich plasma: evidence for clinical use. Current Opinion in Hematology. 22 (6), 527-532 (2015).
