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Medicine

Preparação, procedimentos e avaliação da injeção de Plasma rico em plaquetas no tratamento da osteoartrose do joelho

doi: 10.3791/57700 Published: January 4, 2019
* These authors contributed equally

Summary

Osteoartrose do joelho é frequentemente visto no departamento de Ortopedia. Apresentamos em detalhe o processo de tratamento de osteoartrite do joelho inteiro com injeção de plasma rico em plaquetas, incluindo preparação, procedimentos e avaliação.

Abstract

Osteoartrose do joelho (KOA) é uma das doenças mais frequentemente encontradas no departamento de Ortopedia. Tratamentos não-cirúrgicos existentes têm um efeito limitado sobre a reparação da cartilagem e regeneração óssea. Plasma rico em plaquetas (PRP) é uma substância autóloga Bioativo que pode reparar a lesão da cartilagem e acelerar a regeneração óssea efetivamente. No entanto, relatórios de protocolos de preparação PRP em estudos clínicos é altamente inconsistente, com a maioria dos estudos, fornecendo informações suficientes para permitir que o protocolo a ser reproduzida. Nós descrevemos um método reproduzível de preparação PRP visualmente, o tratamento de KOA usando injeção intra-articular de PRP e métodos de avaliação do resultado. PRP foi preparado usando manual dupla centrifugação. A camada PRP foi extraída do sangue periférico e usada para injeção de cavidade articular do joelho. Avaliações incluíram avaliações das concentrações de plaquetas do sangue e os resultados clínicos. Preparação do PRP por centrifugação manual requer menos aparelhos e é menos dispendiosa do que o plasma filtração ou centrifugação utilizando equipamentos. O tempo de centrifugação do nosso método de dupla centrifugação foi 6 e 5 minutos para os respectivos centrifugações às forças de 800 e 1400 x g, respectivamente permitir a elaboração consistente de PRP padronizado. No entanto, um método manual é suscetível a erros do operador, e preparação do lote PRP não está disponível. Injeção intra-articular de PRP provou para ser um tratamento eficaz para a osteoartrose do joelho. O procedimento de tratamento inteiro levou menos de 30 minutos, a concentração de sangue plaquetas de PRP pode ser padronizada e tratamento foi provado para ser eficaz quando avaliada pelo acompanhamento.

Introduction

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Osteoartrose do joelho (KOA) é uma das doenças mais frequentemente vistas no departamento de Ortopedia; 30% - 50% das pessoas com idade superior a 65 anos de experiência nesta doença1. Atualmente, o tratamento conservador de KOA inclui principalmente a administração oral de drogas antiinflamatórias não-esteroides e drogas nutrientes de cartilagem, a injeção intra-articular de hialuronato de sódio e fisioterapia. No entanto, esses métodos não podem parar o processo de degeneração articular de joelho2. Defeitos da cartilagem articular podem causar um desgaste da superfície articular, instabilidade articular e alterações metabólicas, que são parte da patogênese de KOA3. No entanto, devido à ausência de vasos sanguíneos, nervos e tecido linfoide na cartilagem articular, a recuperação após o dano é difícil. Um método eficaz de reparação da cartilagem é especialmente importante para o tratamento de KOA. O tratamento da osteoclasia também é um foco importante no tratamento de KOA.

Plasma rico em plaquetas (PRP) é uma substância Bioativo autóloga, e a aplicação de PRP para problemas de ossos e articulação está sendo cada vez mais estudada. A justificativa biológica para o uso clínico de PRP inclui seu efeito sobre a entrega local de fatores de crescimento e modificação da resposta inflamatória e seus efeitos positivos no4, de proliferação e diferenciação celular. Após a ativação após injeção intra-articular, PRP libera α-grânulo através da degranulação e segrega vários fatores de crescimento, incluindo o fator de crescimento derivado de plaquetas, o fator de crescimento transformador-β, o fator de crescimento semelhante à insulina, o fator de crescimento epidérmico, o fator de crescimento vascular endotelial e o fator de crescimento. Estas promover proliferação osteoblástica e condrócitos, inibir a degeneração da cartilagem, reforçar a estabilidade do osso da cartilagem e subcondral, regular o inibidor de tecido de expressão do gene da metaloproteinase e manter o equilíbrio entre a síntese e degradação de proteoglicanos5,6. Portanto, PRP pode reparar a lesão da cartilagem e acelerar a regeneração óssea.

O resultado da injeção de PRP é influenciado por vários fatores, incluindo o local de amostragem7, o tipo de centrífuga preparação método8e o uso de anticoagulantes9 e ativadores10. Há aproximadamente 3 tipos métodos centrífugas para preparar o PRP. Centrifugação manual, centrifugação com base em equipamentos ou técnicas de filtração do plasma estão disponíveis, embora métodos manuais e baseados em equipamentos são os mais comumente usados. O método manual requer menos equipamento, é conveniente, é de baixo custo e é simples de executar (Figura 1). PRP é preparado por desempenho de centrifugação manual duas vezes. Anticoagulante e sangue periférico misto são centrifugados para separar hemócitos de plasma e plaquetas sanguíneas. Depois de eliminar os glóbulos vermelhos na camada inferior, o líquido sobrenadante é centrifugado para re-separação, dividindo-a em sobrenadante plasma pobre em plaquetas PRP médio e residuais subnatant células vermelhas do sangue. A camada média é usada para a injeção da cavidade articular do joelho (se a quantidade é insuficiente, parte do sobrenadante pode ser desenhado). Avaliações do método incluem avaliações de concentração de plaquetas do sangue e os resultados clínicos.

O relato de protocolos de preparação PRP em estudos clínicos é altamente inconsistente, e a maioria dos estudos não fornecem informações suficientes para permitir que o protocolo para ser reproduzido11. Aqui, descrevemos um método reprodutível de preparação PRP e tratamento de KOA com injeção intra-articular do PRP, com avaliação do resultado. Critérios de inclusão foram pacientes com osteoartrose do joelho que têm alívio da dor pobre para medicamento analgésico simples (como o paracetamol) e tratamento conservador. Critérios de exclusão foram pacientes com distúrbio de drenagem linfática ou retorno venoso; pacientes com infecções de articulação de joelho; pacientes com Dermatose ou infecção na área da injeção; pacientes com febre; pacientes com anormalidade da função coagulante; pacientes com doença cardiovascular grave. O procedimento de tratamento todo leva menos de 30 minutos, e a concentração de sangue plaquetas de PRP é comprovada para alcançar uma medida padronizada. Sua eficácia é demonstrada através da avaliação dos resultados durante o seguimento de perto.

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Protocol

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Os métodos descritos foram aprovados pela Comissão ética do Hospital Geral de Guangdong.

1. obter PRP por centrifugação Manual

  1. Preparar o paciente em posição supina em uma sala de cirurgia estéril fluxo laminar com uma confortável sala de temperatura e umidade: temperatura é de 22 ° C e umidade do quarto é de 60%.
  2. Use uma seringa de 1 mL para desenhar 0,2 mL de heparina de sódio (2 mL = 12.500 U) e em seguida umedeça uma seringa de 50 mL.
    Nota: 3 mL de citrato de sódio também é típico nesta etapa para substituir o sódio de heparina.
  3. Equipar um torniquete, esterilizar o cotovelo 2 - 3 vezes e usar a seringa de 50 mL a úmido para retirar a veia de cotovelo 30 mL de sangue periférico.
  4. Realize a primeira centrifugação.
    1. Divida o sangue periférico igualmente em dois tubos de centrífuga estéril de 50 mL.
    2. Colocar dois tubos em rotores horizontais na centrífuga, sob condições assépticas.
    3. Centrífuga para 6 minutos a 800 x g.
    4. Levar os rotores horizontais para fora, desgaste luvas estéreis e tirar os tubos de centrífuga.
    5. Observe as estratificações para certificar-se de que o sangue periférico é estratificado em duas camadas.
    6. Use uma seringa de 10 mL limpa para coletar o líquido sobrenadante destes tubos de centrífuga de dois para um tubo de centrifugação limpo.
  5. Realize a segunda centrifugação.
    1. Use uma seringa de 10 mL limpa para adicionar uma quantidade equivalente de água estéril ou solução salina normal para outro tubo de centrifugação limpo para o equilíbrio. Colocar os tubos nos rotores horizontais. Marque-o um com o líquido da camada sobrenadante por Emplastro adesivo.
    2. Centrifugue por 5 minutos a 1400 x g.
    3. Pegue os rotores horizontais para fora, e observando as estratificações verificar que o líquido do tubo marcado é dividido em três camadas.
    4. Use uma seringa de 10 mL para retirar a camada de células granulares médio (rico em leucócitos, PRP layer) e a camada inferior do sobrenadante de 4 mL de líquido. Se a quantidade de camada média é suficiente, apenas retire 4 mL isso.
    5. Coloque 0,4 mL do líquido em um tubo estéril de anticoagulante (EDTA de2K, 3,6 mg) para avaliação, deixando 3,6 mL de líquido remanescente na seringa.
      Nota: O protocolo pode ser pausado aqui.

2. intra-articular de PRP

  1. Deixe a paciente em decúbito dorsal na mesa de operações de mentira e dobrar o joelho a 90 graus.
  2. Localize o local de punção na margem inferior da patela e 1cm de ligamento patelar lateral. Use uma caneta para marcar o local.
  3. Realizar esterilização de pele no local de punção, três vezes com anerdian III, luvas estéreis e cubra com uma toalha-buraco asséptica.
  4. Coloque a seringa paralela ao planalto tibial e em seguida, executar a punção em ângulo de 45 graus. Introduza completamente a agulha na pele.
  5. Injete a 3,6 mL de PRP da seringa para a cavidade articular do joelho.
  6. Cobrir a posição de punção com gaze estéril e corrigi-lo com Emplastro adesivo.
  7. Aplique pressão sobre o ferimento por 10 minutos. Observe para qualquer reação adversa grave durante 30 minutos.
  8. Administre um total de três injeções em intervalos mensais.
    Nota: O protocolo pode ser pausado aqui.

3. no pós-operatório avaliação da injeção de PRP

  1. Avalie a concentração de plaquetas no PRP.
    1. Use o 0,4 mL de PRP do tubo de anticoagulação (K2EDTA, 3,6 mg).
    2. Analise a concentração de plaquetas do sangue do PRP usando um analisador automático de células sanguíneas.
  2. Avalie o resultado pós-operatório da injeção PRP.
    1. Com uma consulta 1 dia antes de cada um dos três tratamentos, conduta mais acompanhar paciente 1 dia depois de cada tratamento, 3 dias após cada tratamento, 1 semana após cada tratamento, 1 mês após o terceiro tratamento, 3 meses após o terceiro tratamento e 6 meses após o terceiro tratamento.
    2. Use uma escala análoga visual (VAS), o Western Ontario e McMaster universidades osteoartrite Index (WOMAC), joelho sociedade Pontuação (KSS) e escala funcional do joelho Lysholm para avaliar o efeito no pós-operatório.

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Representative Results

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Como resultado, as plaquetas contagem do PRP atingiu uma concentração padrão nível de 1121 x 103/µL. Realizamos os 15 inquéritos de seguimento descritos no protocolo de um paciente masculino de 55 anos com início KOA. Era óbvio que esse resultado clínico precoce foi satisfatório após a administração intra-articular de PRP (Figura 2). No entanto, a eficácia de médio prazo foi ligeiramente inferior. Um efeito analgésico marcadamente significativo foi observado (Figura 2A). Pontuação de joelho KSS foi superior a função KSS Pontuação (Figura 2 C, Figura 2D), o que significava que o efeito do PRP sobre sintomas subjetivos foi melhor do que sobre os sintomas da objetivos. O golo de escala funcional de joelho Lysholm indicou que o nosso método tinha um efeito probatório na melhoria da lesão da cartilagem e sintomas de lesão de tecidos moles (Figura 2E). Em geral, os efeitos terapêuticos do nosso protocolo PRP eram notáveis.

Figure 1
Figura 1 : Fluxograma do projeto protocolo. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 2
Figura 2 : Avaliação do resultado pós-operatório da injeção de PRP. Avaliação dos resultados clínicos por VAS (A), (B) de WOMAC, KSS (C, D) e Lysholm joelho funcional escala (E). KSS fornece joelho marcar (dor, mobilidade e estabilidade, C) e a função de Pontuação (pouca atividade de habilidade e da escada, D). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Discussion

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A concentração de plaquetas no sangue humano normal é entre 150.000 / µ l e 350.000 / µ l, e acredita-se amplamente que plaquetários concentração de PRP deve alcançar 1.000.000 / µ l, que é de 3 a 5 vezes concentrações normal9. De acordo com o sistema de hierarquia de pata, acredita-se que o PRP não tem nenhum efeito óbvio quando a concentração de plaquetas do sangue é inferior a três vezes a concentração normal, enquanto o PRP tem um efeito inibidor quando sua concentração de plaquetas do sangue é mais do que seis vezes a concentração normal de12. Portanto, um requisito mínimo para este protocolo é que a concentração de sangue plaquetas de PRP é entre estes níveis.

Preparação de PRP manual pode ser alcançada por uma centrifugação única ou com duas rodadas de centrifugação. Devido os parâmetros diferentes de centrífuga, a qualidade do PRP obtido difere entre as duas técnicas. As concentrações de plaquetas do sangue obtidas através da centrifugação única são baixas, mas o PRP não contém glóbulos brancos e vermelhos. As concentrações de plaquetas do sangue obtidas através da centrifugação dupla são elevadas, e o PRP normalmente contém uma pequena quantidade de células brancas do sangue e de glóbulos vermelhos até13. Se a existência de células brancas do sangue em PRP é benéfica para os resultados é disputada. Alguns estudos têm demonstrado que glóbulos brancos ricos PRP tem forte atividade antimicrobiana, facilita a recuperação funcional e está a menos de um irritante, reduzindo a necessidade de analgésicos14. No entanto, os radicais livres do oxigênio liberados de células brancas do sangue, metaloproteases, interleucinas e citocinas podem agravar danos na fase aguda, obstruindo o auto reparo de tecidos e retardar o processo cura15. Para obter as plaquetas de sangue em altas concentrações, usamos dupla centrifugação.

A taxa de coleta de sangue plaquetas também está relacionada à força centrífuga e tempo. É geralmente reconhecido que plaquetários concentração aumenta com o aumento da força centrífuga. No entanto, excessiva força centrífuga irá danificar as plaquetas do sangue, reduzindo a taxa de recuperação. Também aumenta a concentração de plaquetas com comprimento de centrifugação. Quando centrifugação é menos de 5 minutos, as plaquetas de sangue são baixas, e nenhum efeito significativo será obtido; entre 10 e 20 minutos de centrifugação, a concentração de plaquetas do sangue gradualmente e progressivamente aumenta; Depois de mais de 20 minutos, a concentração de plaquetas do sangue já não obviamente muda16. Uma centrifugação longa pode causar deposição excessiva de plaquetas e reduzem a bioatividade, então o tempo de centrifugação ideal é entre 5 e 10 minutos. Nós estabelecemos um tempo de centrifugação ideal para dupla centrifugação de 6 e 5 minutos para o primeiro e o segundo Centrifugar as forças de 800 e 1400 x g, respectivamente, para preparar o PRP.

Alguns PRP é colhido e injetado diretamente para a área de lesão, mas outras formulações adicionar um agente de ativação de plaquetas como trombina ou CaCl2. Em geral, o PRP usado para aliviar a inflamação crônica ou "desgaste" ferimentos tais como OA é geralmente injetada sem uma activação agente17.

Para a avaliação dos resultados dos tratamentos, foi utilizado um número de escalas. O VAS desde medição detalhada da dor. Usamos o WOMAC para avaliar a gravidade da gonite e o efeito do tratamento de acordo com os sinais e sintomas relevantes. A KSS prevista uma pontuação de joelho dor, mobilidade e estabilidade e um escore de função por acompanhar a atividade de habilidade e da escada. A escala funcional de joelho Lysholm avaliada a lesão do ligamento e cartilagem.

Houve várias limitações ao nosso método. Preparação manual, primeira é suscetível a erros do operador, principalmente da subjetividade no desenho do meio tampão camada e parte do líquido sobrenadante após a centrifugação de segunda. No entanto, após experiências repetidas com diferentes operadores, finalmente encontramos a concentração eficaz de plaquetas. Em segundo lugar, a preparação do lote PRP não está disponível usando esse método. PRP só pode ser preparada pelo sangue antes de cada injeção de desenho. Como armazenamento de amostras é difícil, deve ser aceitável para re-preparar PRP cada vez.

Em resumo, a injeção intra-articular de PRP é um tratamento eficaz para a osteoartrose do joelho. Este relatório de estudo fornece o procedimento de todo tratamento em detalhes, incluindo a preparação do PRP de qualidade confiável, a introdução de um procedimento de injeção padrão e um plano de avaliação científica e prática.

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Disclosures

Os autores não têm nada para divulgar.

Acknowledgments

Este estudo foi suportado pela Fundação Nacional de ciências naturais da China (81371991) e o maior programa de ciência e tecnologia de Guangdong (2015B020225007).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Centrifuge Eppendorf 5702
Centrifuge tube CORNING 430828
Horizontal rotor Eppendorf LL080
Anerdian III Shanghai Likang Disinfectant HiTech Co., LTD 310173 Disinfect the skin
1ml Syringe KDL  Medical Equipment Co., LTD 0.4*13 RWLB
10ml Syringe KDL  Medical Equipment Co., LTD 1.2*38 TWSB
50ml Syringe KDL  Medical Equipment Co., LTD 0.7*32 TWLB
Medical Tourniquet Changzhou Jinli Latex Products Co., LTD 0087-2011
Single-use sterile rubber surgical gloves Shanghai jinxiang Latex Products Co., LTD 17060
Disposable Draw Blood Needle KDL  Medical Equipment Co., LTD 0.55*20 L(II) RWLB
Heparin Sodium Injection SPH No.1 Biochemical & Pharmaceutical Co., LTD 1706101 2ml:12500U
Jifro Hand Antiseptic Rinse Free Gel Shanghai Likang Disinfectant HiTech Co., LTD 311793
Medical Cotton Swab Foshan Kangzheng Medical Supplies Co., LTD KZ3-12 Disinfect the skin
10ml Normal Saline  Jiangxi Shuangshi Pharmecutical Co., LTD 140211458
Automatic Blood Cell Analyzer Beckman Coulter LH-750
Hole-towe Sterile
Anticoagulation Tube(Blood Collection Tubes, K2E 3.6mg) Becton, Dickinson and Company CNL17-COO56 Store in a cool dry place within 4 to 25 degrees Celcius
Tweezers RWD LIFE SCIENCE F12006-10
Sterile Gauze Guangdong Ze Chang Trade Co., LTD 170915
Adhesive Plaster 3M Transpore 1527C-0
Skin Marker Pen Guangzhou Mingjia Medical Device Manufacturing Co., LTD 10110

DOWNLOAD MATERIALS LIST

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Chen, Z., Deng, Z., Ma, Y., Liao, J., Li, Q., Li, M., Liu, H., Chen, G., Zeng, C., Zheng, Q. Preparation, Procedures and Evaluation of Platelet-Rich Plasma Injection in the Treatment of Knee Osteoarthritis. J. Vis. Exp. (143), e57700, doi:10.3791/57700 (2019).More

Chen, Z., Deng, Z., Ma, Y., Liao, J., Li, Q., Li, M., Liu, H., Chen, G., Zeng, C., Zheng, Q. Preparation, Procedures and Evaluation of Platelet-Rich Plasma Injection in the Treatment of Knee Osteoarthritis. J. Vis. Exp. (143), e57700, doi:10.3791/57700 (2019).

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