Summary
Möss som utsätts för intraperitoneal LPS utsöndrar exosomes i Bronko-alveolar lavage (BAL) vätska som paketeras med microRNA. Samtidig kultur system med visar vi att exosomes släppt i BAL vätska störa uttrycket av åtsittande föreningspunkt proteiner i bronkial epitelceller och öka uttrycket av pro-inflammatoriska cytokiner som framhäver lungskada.
Abstract
Akut lungskada (ALI) och akut andnödssyndrom (ARDS) utgör en heterogen grupp av lungsjukdomar som fortsätter att ha en hög sjuklighet och dödlighet. Molekylär patogenes av ALI är att bättre definierade; på grund av sjukdomen komplexa har molekylära behandlingar dock ännu utvecklas. Här använder vi en lipopolysackarid (LPS) inducerade musmodell av akut septisk lungskada för att avgränsa rollen av exosomes i den inflammatoriska reaktionen. Använda denna modell, har vi kunnat visa att möss som utsätts för intraperitoneal LPS utsöndrar exosomes i Bronko-alveolar lavage (BAL) vätska i lungorna som paketeras med miRNA och cytokiner som reglerar inflammatoriska svar. Ytterligare med samtidig kultur modellsystem, visar vi att exosomes släppt från makrofager störa uttrycket av åtsittande föreningspunkt proteiner i bronkial epitelceller. Dessa resultat tyder på att 1) replikväxlning mellan medfödd immun- och strukturella celler genom den exosomal skytteltrafik bidrar till den inflammatoriska reaktionen och störningar av den strukturella hindren och 2) inriktning dessa MicroRNA föreskriva en roman plattform att behandla ALI och ARDS.
Introduction
ALI och ARDS är en livshotande form av andningssvikt med svår hypoxemi orsakad av icke-kardiogent lungödem som drabbar cirka 1 miljoner människor i världen årligen1. Etiologin av ARDS omfattar direkt skada på lungorna från infektioner eller aspiration och en mängd indirekta förolämpningar. Under det senaste decenniet har det skett en ökad förståelse för molekylär patogenes av ARDS, särskilda riktade behandlingar för ARDS är dock ännu vara utvecklat2,3.
Flera djurmodeller av Akut lungskada har utvecklats som ger en bro för att översätta experimentella behandlingar till humanstudier4,5. Ofta används modeller inkluderar lokal installation av oljesyra, bakterier, LPS och bleomycin. Andra metoder inkluderar ischemi-reperfusion, cecal ligering punktering, mekanisk ventilation-inducerad stretch skada, hyperoxia eller systemisk administrering av bakterier och LPS5. Dessa modeller ger ett användbart biologiska system för att testa kliniska hypoteser och för utvecklingen av potentiella behandlingar. För att simulera människors ARDS, bör djurmodeller återge inflammation och akut skada på epiteliala och endothelial celler med defekter i barriärfunktion i lungorna.
Exosomes är membranet blåsor med 20-200 nm i diameter, vars molekylära innehåll innehåller proteiner, DNA, RNA och lipider, och underlätta mellan mobilkommunikation i vävnad mikromiljö via molekylära sammansättning överföring. Exosomes utsöndras av flera typer av celler, endotelceller, epitelceller, glatta muskelceller och tumörceller, och finnas i mänskliga kroppsvätska. Studier visar att exosomes reglera överhörning mellan immunceller och stromaceller under smittsamma och sterila inflammatoriska sjukdomar, och deras onormala release verkar regleras genom olika naturliga och experimentell stimuli under fysiologiska och patologiska processer6. Sådan kommunikationsnätverk kan spela en viktig roll i patogenesen av lungsjukdomar och kan påverka patofysiologiska progression7,8. Som 18-22 nukleotid icke-kodande RNAs, MicroRNA finns i både vävnad och kroppsvätskor, plasma, serum och modulera mRNA uttryck posttranslationella nivå9,10.
Paketerade MicroRNA i exosomes påverkar differentiering och funktion av flera typer av celler, och alltför höga halter är associerade med en mängd olika sjukdomar, däribland cancer, lungsjukdomar, fetma, diabetes och hjärt-kärlsjukdom11, 12,13,14,15,16. Trätt i de mottagande cellerna och skytteltrafik av exosomal MicroRNA underlättar intercellulära kommunikationen modifiera hemostas mikromiljö17,18. Akut lungskada är en komplexa processer, som inbegriper flera celltyper med omfattande intercellulär kommunikation via exosomes8. miR-155 och miR-146a dela den gemensamma transkriptionell reglerande mekanismen och bidrar till den inflammatoriska reaktionen och immuntolerans19,20. Nyligen genomförda studier visar att både modulera inflammatoriska svar via exosomal MicroRNA skytteltrafik mellan immunceller21. Men de molekylära mekanismerna bakom immunmodulerande effekter av exosomal MicroRNA på alveolära svar på endotoxin förblir oklart, utan tvekan den potentiella kliniska relevansen och translationell implikation merit ytterligare undersökning.
Samtidig kultur modeller är att vara anställd att definiera samverkan mellan de specifika celltyper i komplexa miljön, såsom inflammation och cancer22,23. Dessa plattformar ger en alternativ strategi för att förhöra replikväxlning mellan celltyper särskilt för immun- och strukturella celler.
Intra-luftrör, aerosolized, intraperitoneal eller systemisk administrering av LPS används ofta för att framkalla experimentella lung skada24,25,26, och har visat för att inducera epitelial och endotel permeabilitet defekter. Här använder vi intraperitoneal LPS för att inducera en septisk modell av Akut lungskada hos möss. Inom 24 timmar efter intraperitoneal administrering av LPS induceras permeabilitet defekter i lungorna med rekrytering av inflammatoriska celler. Dessutom visar vi att exosomes från BAL innehåller miRNA-155 och miR-146a och exosomes från BAL vätska inducera pro-inflammatoriska cytokiner uttryck i mottagarens epitelceller, inklusive IL-6 och TNF-α. Dessa uppgifter är först att visa att exosomal MicroRNA utsöndras i BAL i denna modell av akut septisk lungskada.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Övergripande protokollet kräver 2 dagar, inklusive den första dagen av sepsis induktion och isolering av BAL vätska från djuret, och den andra dagen för exosomes isolering från musen BALF. Alla förfaranden har granskats och godkänts av institutionella djur vård och användning kommittén vid Atlanta VA medical center.
1. akut septisk Lung skada musmodell
- Använd 6-8 veckor - gamla vildtyp C57BL/6J hanmöss (vikt 20-22 g) för djuret modellera och utför alla procedurer med hjälp av aseptisk teknik och instrument. Autoklav alla kirurgiska instrument, inklusive pincett och sax under 20 minuter vid 121 ° C.
- Slumpmässigt fördela mössen i experimentell och kontrollgruppen. Hindra möss en kirurgisk ombord. Behandla möss med Escherichia coli lipopolysackarid (LPS, 15 mg/kg) av intraperitoneal rutt. Enligt den enskilda kroppsvikten, späd lämpliga LPS doser 0.1 ml PBS per mus, och sedan injicera LPS-lösningen med en 1 mL spruta med 27 G nål och injicera en motsvarande volym av PBS till djuren i kontrollgruppen.
- Hålla möss i djurens BSL2 anläggningen, som består av ren burar i lämplig rumstemperatur.
- 24 h euthanize senare, möss med CO2 inandning.
- Välj det kirurgiska området i mitten av musen hals. Gör ett litet snitt (ca 5 mm) och försiktigt separera muskler för åtkomst till luftstrupen med trubbig pincett tills luftstrupen är utsatt.
- Dra musen BAL vätska med 10 mL steril spruta med en 27 G nål. Först försiktigt, stick in nålen i luftstrupen och injicera 1 mL steril fosfatbuffrad Koksaltlösning långsamt i luftstrupen, sedan dra in BALF i en 3 mL engångsspruta med en 27 G nål. Efter slutförandet av förfarandet, kasta sprutor och nålar i biohazard avfallsbehållare.
- Behandla kirurgiska instrument med klordioxid, som tidigare beskrivits av Chauret et al. 27, och sedan sterilisera alla kirurgiska instrument i autoklav under 20 minuter vid 121 ° C.
2. Exosomes isolering-serial Ultra-centrifugering och karakterisering
- Samla in mus BAL vätska i 15 mL koniska rör. Att skörda alveolära celler, centrifug prover för 10 min vid 1000 g, vid 4 ° C.
- Överför supernatanten till nya 15 mL koniska rör och centrifugera proverna för 30 min vid 4000 x g vid 4 ° C ta bort cellfragment.
- Samla in supernatanten i ultracentrifugen rör och centrifugera proverna för 60 min vid 10 000 x g vid 4 ° C för att ta större cellulära partiklar.
- Överför supernatanten till nya koniska rör och sedan filtrera proverna genom 0,2 µm spruta-filter för att ta bort kvarvarande större partiklar.
- Samla in prover i ultracentrifugen rör och balansera rör. Centrifugera proverna för 2 h vid 140 000 x g vid 4° C till pellet i exosomes.
Obs: Storleken på exosomes varierar 20-200 nm. 0,2 µm filter används för att avlägsna större partiklar som är mer än 200 nm i storlek. - Kassera supernatanterna försiktigt. Lös pelleten med 100 µL PBS eller Lys lösning och överföring exosomes prover 1,5 mL rör och förvaras vid-80 ° C fram till användning.
Obs: Transmissionselektronmikroskop rekommenderas att kontrollera isolerade exosomes. - Följ TEM standardprov bearbetning protokoll28. Analysera exosomes exempel med transmissionselektronmikroskopi, och ta bilder, skala bar 200 nm.
3. beredning av miRNA och Performing miRNA-q-RT-PCR
Obs: miRNA-q-RT-PCR rekommenderas att analysera uttryck nivå av microRNA.
- Följ standard MicroRNA isolering protokoll och se till att använda en lika stor mängd renad RNAs i singel-strand omvänd Transkription24.
- Följ det standard realtidsdata PCR-protokollet för att upptäcka exosomal mikroRNA nivå i BAL vätska. Använd specifika realtids PCR primers mot miR-155, miR-146a och U6 SnRNA. Köra PCR-reaktion med kvantitativ PCR-apparaten och normalisera uttryckets värden ska internkontroll U6 snRNA.
Obs: Varje grupp består av tre exemplar prover24.
4. Exosomes märkning och rening
- Avbryta exosomes pellets med 100 µL fjädring lösning i en 1,5 mL polypropylen rör, sedan lägga 0.4 µL av exosomes färgämnet i andra röret med 100 µL av suspension lösningen.
- Snabbt lägger till exosomes i lösningen i dye lösningen och blanda grundligt genom pipettering. Förvara prover under 5 minuter i rumstemperatur, skyddas från ljus.
- Sätta en exosome spin kolumn i ett 1,5 mL eluering rör. Överför lösningen blandningen till mittpunkten på kolumnen exosome spin.
- Snurra kolumnen för 2 min vid 800 x g vid rumstemperatur.
- Ignorera kolumnen och lagra eluerade provet vid-20 ° C fram till användning.
5. validering av Exosomes upp tas av mottagarens celler
- Frö 1 x 104 MLE 12 /cell i en 8-väl kammaren bilden och kultur celler vid 37 ° C, 5% CO2.
- Lägg till 10 µL lysrör-märkt exosomes i cellerna. Inkubera i 1 timme vid 37 ° C.
- Ta bort kultur media och tvätta cellerna med PBS, sedan fixa celler med 1% PARAFORMALDEHYD i 10 minuter vid rumstemperatur.
- Montera bilden i mount medium med DAPI.
- Analysera prover genom fluorescens Mikroskop och ta bilder, 40 X förstoring.
6. kontroll av samspelet mellan Exosomes och mottagarens celler
- Utsäde 2 x 105 MLE12 per brunn i en 12-väl kultur tallrik innehållande lämpligt odlingsmedium och kultur celler vid 37 ° C, 5% CO2.
- Lägga till 20 µg exosomes från mus BAL vätska i MLE12 celler och ställa in replikat per experimentella gruppen.
- 24 h senare tvätta cellerna med PBS och lägga till 600 μl lyseringsbuffert in väl. Försiktigt skaka plattan och samla lysis prover i 1,5 mL tub med pipetten.
- Följ den standard totalt RNA isolering och cDNA omvänd Transkription-protokollet, komplett singel-strand cDNA omvänd Transkription29.
- Följ realtids PCR-standardprotokollet för att påvisa mRNA uttryck nivå i mottagarens celler29. Använd specifika realtids PCR primers mot TNF-α, IL-6 och ZO-1. Köra PCR-reaktioner med kvantitativ PCR-apparaten och normalisera uttryckets värden ska den interna kontrollen GAPDH.
Obs: Varje grupp består av tre exemplar prover.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
För att inducera septisk lungskada, behandlades möss med intraperitoneal LPS (15 mg/kg). Inom 24 h av LPS administration sågs neutrofil tillströmning i lungorna, som visas i figur 1A. Mus BAL vätska drogs, följt av isolering och rening av exosomes. Morfologi av BALF exosomes bekräftades av överföring elektronmikroskopi (figur 1B).
Uttryck för selektiv pro-inflammatoriska MicroRNA miRNA-155 och miR-146a upptäcktes av q-RT-PCR från den renade exosomes. Uttrycksnivåerna för miR-155 och miR-146a ökades betydligt i BAL vätska exosomes från möss som behandlades med LPS, jämfört med kontroll möss behandlades med PBS (miR-155, 1 ± 0,16 vs 11,6 ± 0,6; miR-146a, 1 ± 0,12 vs 13,5 ± 1.186) (figur 2).
För att definiera de funktionella effekterna av exosomes, behandlades mus bronkial epitelceller (MLE12 celler) med renat exosomes extraheras från BAL vätska av möss som behandlats med LPS eller PBS, respektive. Först visade vi tillträdeet av BALF exosomes in mottagarens epitelceller. BALF exosomes var märkt med PKH-67, och samtidig odlade med MLE12 celler, och sedan fluorescens mikroskopbilder Visa upptaget av exosomes av epitelceller (figur 3A). Uttryck för pro-inflammatorisk medlare, TNF-α och IL-6 har ökat betydligt i epitelceller som var samtidig odlade med exosomes från LPS behandlade möss, jämfört med kontrollgruppen (TNF-α, 1 ± 0,13 vs 5.01 ± 0,22; Il-6, 1 ± 0,02 vs 1,72 ± 0,17) (figur 3B). Vi har också konstaterat ett uttryck för tight junction proteinet ZO-1 som ett surrogat för epitelial integritet. Celler som behandlades med exosomes från LPS behandlade möss visade en betydligt försvagat uttryck för ZO-1, jämfört med LPS behandlas kontroll möss (ZO-1, 1 ± 0,12 vs 0,66 ± 0,13) (figur 3 c).
Figur 1: karakterisering av exosomes isolerade från BAL vätska av LPS-behandlade möss. C57BL/6J möss behandlades med intraperitoneal LPS (15mg/kg) injektion (N = 5), PBS användes som kontroll (N = 5). 24 h senare möss var euthanized och BAL vätska utfördes. Representativa bilder av mus lungvävnad behandlas med LPS och PBS visar Akut lungskada, skalstapeln, 50 µm, A). Exosomes utvanns från BAL-vätska. Överföring elektronmikroskopi (TEM) analysen visar exosomes, skala bar, 200 nm, B). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: Exosomal MicroRNA uttryck i BAL vätska isolerade från LPS-behandlade möss. C57BL/6J möss utmanades med intraperitoneal LPS. Uttryck för selektiv mikroRNA analyserades genom q-RT-PCR och normaliserade till U6 uttryck. (A) miR-155; (B) miR-146a. n = 5 möss per grupp. Students test, * P < 0,05. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: uttryck av inflammatoriska cytokiner och åtsittande föreningspunkt protein i mus epitelceller behandlas med exosomes. BAL vätska-derived exosomes var märkt med PKH-67 och fluorescens Mikroskop visar PKH67 märkt exosomes (grön), DAPI(Blue) och sammanslagna bilder av Visa upptag av exosomes i MLE12 celler, skalstapeln, 50 µm, som visas i A). Mus epitelceller MLE12 var samtidig odlade med exosomes isolerade från BAL vätska från möss som behandlats med LPS eller PBS. 24 h senare celler skördats och total-RNA isolerades. Uttryck av TNF-α och IL-6 mättes med q-RT-PCR, normaliserade till GAPDH intern kontroll. (B) TNF-α och (C) IL6; (D) ZO-1 mRNA uttryck mättes med q-RT-PCR. * P < 0,05, Students test. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Mus-modeller av sjukdomar är vanligt förekommande att utvärdera den fysiologiska funktionen av specifika gener och minska kostnaden för experiment2. Den akut septisk lungskada som beskrivs här härmar inflammatorisk reaktion som ses hos människa med ARDS. Denna modell är relevant att undersöka molekylär patogenes, utvecklingen av biomarkörer och testa potentiella nya terapier5.
Samtidig kultur system är relevanta för in-vivo studier inom ramen för utreda potentiella mekanismer för överföring av biologiska molekyler såsom RNA, DNA, lipider och protein i en in vitro-system23,30. Några av dessa plattformar har stor nytta i bedömningen av mekanistisk förståelse och utveckling av terapier för komplexa sjukdomar22,23. Som visas här exosomes från lavage celler (makrofager, neutrofiler) kan påverka integriteten för strukturella epitelceller genom överföring av exosomes.
De pathobiological effekterna av exosomes är framväxande som kritisk aspekt i mänskliga sjukdomar både från diagnostiken och terapeutisk synvinkel och förstå sjukdomen patogenes31,32. För att isolera exosomes från biologiska vätskor, inkluderar den vanligaste tekniken differentiell centrifugering tillsammans med ultracentrifugering som beskrivs här33,34. Denna teknik har flera styrkor, men begränsas av det faktum att det kan vara tidskrävande och risken för kontaminering med icke-exosomal proteiner. Nya metoder har föreslagits att övervinna dessa begränsningar, såsom exosome isolering av täthetlutningen eller immun-affinitet eller storlek-beroende metod35. Exosomes utreds i kliniska studier som biomarkörer för diagnos och prognos samt utveckling av riktade terapier.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Detta arbete stöds av VA Merit i 2I01BX001786-06A1 finansiering till RS.
Acknowledgments
Författarna har förklarat någon intressekonflikt.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| lipopolysaccharide | Sigma-Aldrich | Escherichia coli 055:B5 | |
| PBS pH7.2(1X) | Life technologies | 20012-027 | |
| mirVana miRNA isolation kit | Thermo Fisher | 449774 | |
| TaqMan Gene Expression Master Mix | Thermo Fisher | 4369016 | |
| mmu-miR-155 (002571) primer | Thermo Fisher | 4427975 | |
| has-miR-146a (000468) primer | Thermo Fisher | 4427975 | |
| U6snRNA primer | Thermo Fisher | 4427975 | |
| TNF-α(Mm00443258_m1 ) primer | Thermo Fisher | 4331182 | |
| IL-6 (Mm00446190_m1 )primer | Thermo Fisher | 4331182 | |
| ZO-1 (Mm00493699_m1 )primer | Thermo Fisher | 4331182 | |
| minimal essential medium (MEM) | Thermo Fisher | 11095-072 | |
| Trysin-EDTA solution(0.05%) | Thermo Fisher | 25300054 | |
| Exosomes were labeled with PKH67 through PKH67 Green Fluorescent Cell linker Mini Kit | Sigma-Aldrich | MINI67-1KT | |
| Exosome Spin Columns (MW3000) | Thermo Fisher | 4484449 | |
| Beckman Coulter Optima L-100XP ultracentrifuge | Beckman Coulter | L-100XP | |
| Ultra-clear centrifuge tubes | Beckman Coulter | 344058 | |
| Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System | Thermo Fisher | ||
| transmission electron microscopes (TEM) | JEOL Ltd | 120 kV TEM | |
| Olympus BX41 microscope | Olympus | BX41 |
References
- Rubenfeld, G. D., Herridge, M. S. Epidemiology and outcomes of acute lung injury. Chest. 131, 554-562 (2007).
- Baron, R. M., Choi, A. J., Owen, C. A., Choi, A. M. Genetically manipulated mouse models of lung disease: potential and pitfalls. American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. , L485-L497 (2012).
- Han, S., Mallampalli, R. K. The acute respiratory distress syndrome: from mechanism to translation. Journal of immunology. , Baltimore, Md. 855-860 (1950).
- Aeffner, F., Bolon, B., Davis, I. C. Mouse Models of Acute Respiratory Distress Syndrome: A Review of Analytical Approaches, Pathologic Features, and Common Measurements. Toxicologic pathology. 43, 1074-1092 (2015).
- Matute-Bello, G., Frevert, C. W., Martin, T. R. Animal models of acute lung injury. American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. , L379-L399 (2008).
- Terrasini, N., Lionetti, V. Exosomes in Critical Illness. Critical care medicine. , (2017).
- Fujita, Y., Kadota, T., Araya, J., Ochiya, T., Kuwano, K. Extracellular Vesicles: New Players in Lung Immunity. American journal of respiratory cell and molecular biology. , (2017).
- Kubo, H. Extracellular Vesicles in Lung Disease. Chest. 153, 210-216 (2018).
- Krol, J., Loedige, I., Filipowicz, W. The widespread regulation of microRNA biogenesis, function and decay. Nature reviews. Genetics. 11, 597-610 (2010).
- Bartel, D. P. MicroRNAs: target recognition and regulatory functions. Cell. 136, 215-233 (2009).
- Fanini, F., Fabbri, M. CANCER-DERIVED EXOSOMIC microRNAs SHAPE THE IMMUNE SYSTEM WITHIN THE TUMOR MICROENVIRONMENT: STATE OF THE ART. Seminars in cell & developmental biology. , (2016).
- Agarwal, U., et al. Experimental, Systems, and Computational Approaches to Understanding the MicroRNA-Mediated Reparative Potential of Cardiac Progenitor Cell-Derived Exosomes From Pediatric Patients. Circulation research. 120, 701-712 (2017).
- Prattichizzo, F., et al. Extracellular microRNAs and endothelial hyperglycaemic memory: a therapeutic opportunity? Diabetes, obesity & metabolism. 18, 855-867 (2016).
- Huang-Doran, I., Zhang, C. Y., Vidal-Puig, A. Extracellular Vesicles: Novel Mediators of Cell Communication In Metabolic Disease. Trends in endocrinology and metabolism: TEM. 28, 3-18 (2017).
- Khalyfa, A., et al. Circulating Plasma Extracellular Microvesicle MicroRNA Cargo and Endothelial Dysfunction in Children with Obstructive Sleep Apnea. American journal of respiratory and critical care medicine. 194, 1116-1126 (2016).
- Thomou, T., et al. Adipose-derived circulating miRNAs regulate gene expression in other tissues. Nature. 542, 450-455 (2017).
- Gregson, A. L., et al. Altered Exosomal RNA Profiles in Bronchoalveolar Lavage from Lung Transplants with Acute Rejection. American journal of respiratory and critical care medicine. 192, 1490-1503 (2015).
- Valadi, H., et al. Exosome-mediated transfer of mRNAs and microRNAs is a novel mechanism of genetic exchange between cells. Nature cell biology. 9, 654-659 (2007).
- Doxaki, C., Kampranis, S. C., Eliopoulos, A. G., Spilianakis, C., Tsatsanis, C. Coordinated Regulation of miR-155 and miR-146a Genes during Induction of Endotoxin Tolerance in Macrophages. Journal of immunology. , Baltimore, Md. 5750-5761 (2015).
- Schulte, L. N., Westermann, A. J., Vogel, J. Differential activation and functional specialization of miR-146 and miR-155 in innate immune sensing. Nucleic acids research. 41, 542-553 (2013).
- Alexander, M., et al. Exosome-delivered microRNAs modulate the inflammatory response to endotoxin. Nature communications. 6, 7321 (2015).
- Yuan, Z., et al. TREM-1 is induced in tumor associated macrophages by cyclo-oxygenase pathway in human non-small cell lung cancer. PloS one. 9, e94241 (2014).
- Xu, R., Richards, F. M. Development of In Vitro Co-Culture Model in Anti-Cancer Drug Development Cascade. Combinatorial chemistry & high throughput screening. 20, 451-457 (2017).
- Yuan, Z., et al. TREM-1-accentuated lung injury via miR-155 is inhibited by LP17 nanomedicine. American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. , L426-L438 (2016).
- Sadikot, R. T., et al. High-dose dexamethasone accentuates nuclear factor-kappa b activation in endotoxin-treated mice. American journal of respiratory and critical care medicine. 164, 873-878 (2001).
- Yuan, Z., et al. Curcumin mediated epigenetic modulation inhibits TREM-1 expression in response to lipopolysaccharide. The international journal of biochemistry & cell biology. 44, 2032-2043 (2012).
- Chauret, C. P., et al. Chlorine dioxide inactivation of Cryptosporidium parvum oocysts and bacterial spore indicators. Applied and environmental microbiology. 67, 2993-3001 (2001).
- Cizmar, P., Yuana, Y. Detection and Characterization of Extracellular Vesicles by Transmission and Cryo-Transmission Electron Microscopy. Methods in molecular biology. , Clifton, N.J. 221-232 (2017).
- Yuan, Z., et al. HIV-related proteins prolong macrophage survival through induction of Triggering receptor expressed on myeloid cells-1. Scientific reports. 7, 42028 (2017).
- Jackson, M. V., et al. Analysis of Mitochondrial Transfer in Direct Co-cultures of Human Monocyte-derived Macrophages (MDM) and Mesenchymal Stem Cells (MSC). Bio-protocol. 7, (2017).
- Fujita, Y., et al. Extracellular Vesicles: New Players in Lung Immunity. American journal of respiratory cell and molecular biology. 17, 474-484 (2017).
- Gunasekaran, M., et al. Donor-Derived Exosomes With Lung Self-Antigens in Human Lung Allograft Rejection. American journal of transplantation : official journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 17, 474-484 (2017).
- Kalra, H., et al. Comparative proteomics evaluation of plasma exosome isolation techniques and assessment of the stability of exosomes in normal human blood plasma. Proteomics. 13, 3354-3364 (2013).
- Baranyai, T., et al. Isolation of Exosomes from Blood Plasma: Qualitative and Quantitative Comparison of Ultracentrifugation and Size Exclusion Chromatography Methods. PloS one. 10, e0145686 (2015).
- Nordin, J. Z., et al. Ultrafiltration with size-exclusion liquid chromatography for high yield isolation of extracellular vesicles preserving intact biophysical and functional properties. Nanomedicine : nanotechnology, biology, and medicine. 11, 879-883 (2015).
