Summary
Ratones expuestos a LPS intraperitoneales secretan exosomas en el líquido del lavado (BAL) Bronco-alveolar que se empaquetan con miRNAs. Utiliza un sistema de cocultivo, demostramos que los exosomas liberados en el líquido del BAL interrumpen la expresión de proteínas de Unión estrecha en células epiteliales bronquiales y aumentan la expresión de citoquinas pro-inflamatorias que acentúan la lesión pulmonar.
Abstract
Lesión pulmonar aguda (ALI) y síndrome de dificultad respiratoria agudo (ARDS) representan un grupo heterogéneo de enfermedades pulmonares que sigue teniendo una alta morbilidad y mortalidad. La patogenia molecular de ALI está mejor definido; sin embargo, debido a la compleja naturaleza de la enfermedad terapias moleculares han desarrollado. Aquí utilizamos un modelo del ratón inducida por lipopolisacárido (LPS) de la lesión pulmonar aguda séptica para delinear el papel de los exosomas en la respuesta inflamatoria. Usando este modelo, hemos podido demostrar que ratones expuestos a LPS intraperitoneales secretan exosomas en el líquido del lavado (BAL) Bronco-alveolar de los pulmones que se empaquetan con miRNA y citoquinas que regulan la respuesta inflamatoria. Además utiliza un sistema de modelo de co-cultivo, mostramos que exosomas liberados de los macrófagos alteran la expresión de proteínas de Unión estrecha en células epiteliales bronquiales. Estos resultados sugieren que 1) diafonía entre células inmunes y estructurales innatas a través de la exosomal realizar trayectos contribuyen a la respuesta inflamatoria y alteración de la barrera estructural y 2) dirigidos a estos miRNAs puede proporcionar una nueva plataforma para tratar ALI y SDRA.
Introduction
LPA y el SDRA es las formas mortales de la insuficiencia respiratoria con hipoxemia severa causada por edema pulmonar no cardiogénico que afecta aproximadamente de 1 millón personas anualmente1. La etiología del SDRA incluye una lesión directa a los pulmones de las infecciones o aspiración y una variedad de insultos indirectos. En la última década ha habido una mayor comprensión de la patogenia molecular del SDRA, sin embargo, tratamientos específicos específicos para ARDS todavía ser desarrollado2,3.
Se han desarrollado varios modelos animales de lesión pulmonar aguda que proporcionan un puente para la traducción de terapias experimentales para los estudios en humanos4,5. Modelos comúnmente usados incluyen la instalación local de ácido oleico, bacterias, LPS y bleomicina. Otros métodos incluyen isquemia-reperfusión, punción cecal ligadura, lesión de estiramiento inducido por la ventilación mecánica, hiperoxia o la administración sistémica de bacterias y LPS5. Estos modelos proporcionan un sistema biológico útil para probar las hipótesis clínicas y para el desarrollo de terapias potenciales. Para simular el SDRA humano, modelos animales deben reproducir la inflamación y la lesión aguda a las células epiteliales y endoteliales con defectos en la función de barrera en los pulmones.
Exosomas son vesículas de membrana con 20 y 200 nm de diámetro, cuyo contenido molecular contiene proteínas, ADN, ARN y lípidos, y facilitan la comunicación inter celular en el microambiente del tejido mediante transferencia de composición molecular. Exosomas son secretadas por varios tipos de células, como células endoteliales, células epiteliales, las células musculares lisas y células del tumor y existen en el líquido de cuerpo humano. Estudios indican que los exosomas regulan entre las células inmunes y células del estroma durante enfermedades inflamatorias infecciosas y estériles, y su liberación anormal parece ser regulada por diversos estímulos naturales y experimentales durante fisiológico y procesos patológicos6. Dicha red de comunicación puede jugar un papel importante en la patogenesia de enfermedades pulmonares y puede afectar la progresión fisiopatológica7,8. 18-22 como nucleotide RNAs no codificantes, los miRNAs existen en tejidos y líquidos corporales, plasma, sueros y modulan la expresión del mRNA a poste-de translación nivel9,10.
Envasados miRNAs en exosomas influyen en la diferenciación y función de múltiples tipos de células, y niveles excesivos están asociados con una variedad de enfermedades, incluyendo cáncer, enfermedades pulmonares, obesidad, diabetes y enfermedad cardiovascular11, 12,13,14,15,16. Entrada en las células del receptoras y realizar trayectos de miRNAs de exosomal facilitar la comunicación intercelular modificando la hemostasia del microambiente17,18. Lesión pulmonar aguda es un procesos complejos, que involucran a múltiples tipos de células con extensas comunicaciones intercelulares a través de exosomas8. miR-155 y miR-146a comparten el mecanismo de regulación transcripcional común y contribuyan a la respuesta inflamatoria y la tolerancia inmunológica19,20. Estudios recientes indican que ambos modulan la respuesta inflamatoria mediante exosomal miRNAs realizar la transición entre las células inmunes21. Sin embargo, todavía no están claros los mecanismos moleculares subyacentes a efectos moduladores de miRNAs exosomal alveolar respuesta a endotoxinas, sin lugar a dudas el potencial relevancia clínica y traslacional implicación mérito más investigación.
Modelos de cocultivo se están empleando para definir la interacción de los tipos de células específicas en el entorno complejo, como inflamación y cáncer22,23. Estas plataformas proporcionan una estrategia alternativa para interrogar entre tipos celulares especialmente para las células inmunes y estructurales.
Intra-traqueal, administración aerosolizada, intraperitoneal o sistémica de LPS son ampliamente utilizados para inducir lesiones de pulmón experimental24,25,26y han demostrado para inducir la permeabilidad endotelial y epitelial defectos. Aquí utilizamos LPS intraperitoneales para inducir un modelo séptico de lesión pulmonar aguda en ratones. Dentro de las 24 h de la administración intraperitoneal de LPS, defectos de la permeabilidad son inducidos en los pulmones con el reclutamiento de células inflamatorias. Además, demostramos que los exosomas de BAL contienen miRNA-155 y miR-146a, y exosomas de líquido del BAL inducen la expresión de citoquinas proinflamatorias en células epiteliales receptores, incluyendo IL-6 y TNF-α. Estos datos son los primeros en Mostrar exosomal miRNAs son secretadas en BAL en este modelo de lesión pulmonar aguda séptica.
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Protocol
El protocolo general requiere de 2 días, incluyendo el primer día de la inducción de la sepsis y el aislamiento del líquido del BAL de la animal y el segundo día para aislamiento de exosomas de ratón BALF. Todos los procedimientos han sido revisados y aprobado por el cuidado institucional de animales y uso centro médico VA de Atlanta.
1. modelo de lesión pulmonar aguda séptica ratón
- Use 6-8 semanas - viejo tipo C57BL/6J ratones machos (20-22 g de peso) para el animal modelo y realizar todos los procedimientos utilizando instrumentos y técnicas asépticas. Autoclave de todos los instrumentos quirúrgicos como pinzas y tijeras por 20 min a 121 ° C.
- Distribuir aleatoriamente ratones en experimental y grupo control. Refrenar los ratones en una mesa quirúrgica. Tratamiento de ratones con Escherichia coli lipopolysaccharide (LPS, 15 mg/kg) por vía intraperitoneal. Según el peso del cuerpo individual, diluir dosis de LPS correspondientes a 0,1 mL de PBS por el ratón, luego inyectar solución de LPS, utilizando una jeringa de 1 mL con aguja 27 G e inyectar un volumen equivalente de PBS a los animales control.
- Mantener los ratones en las instalaciones BSL2 animal, que consiste en jaulas limpias a temperatura adecuada.
- 24 horas más tarde, eutanasia ratones con inhalación de CO2 .
- Seleccione el área quirúrgico en el centro del cuello del ratón. Hacer una pequeña incisión (5 mm aproximadamente) y separar suavemente los músculos para el acceso a la tráquea usando fórceps romos hasta que la tráquea quede expuesta.
- Retirar el líquido del BAL ratón con jeringa estéril de 10 mL con una aguja de 27 G. Primero, suavemente, inserte la aguja en la tráquea e inyectar lentamente 1 mL de PBS estéril en la tráquea, luego dibujar BALF en una jeringa desechable de 3 mL con una aguja de 27 G. Al finalizar el procedimiento, deseche las jeringas y agujas en el contenedor biológico.
- Tratar los instrumentos quirúrgicos con dióxido de cloro, como se describe anteriormente por Chauret et al. 27y luego esterilizar todos los instrumentos quirúrgicos en autoclave durante 20 min a 121 ° C.
2. exosomas aislamiento-serie Ultra-centrifugación y caracterización
- Recoger el líquido del BAL ratón en tubos cónicos de 15 mL. Para cosechar las células alveolares, centrifugar las muestras durante 10 minutos a 1.000 g, a 4 ° C.
- Transferir el sobrenadante a nuevos tubos cónicos de 15 mL y centrifugar las muestras durante 30 min a 4.000 x g a 4 ° C para eliminar restos celulares.
- Recoger el sobrenadante en tubos de ultracentrífuga y centrifugar las muestras durante 60 min a 10.000 x g a 4 ° C para eliminar las partículas más grandes de celulares.
- Transferir el sobrenadante a nuevos tubos cónicos y filtrar las muestras con jeringa-filtro de 0,2 μm para eliminar el remanente de las partículas más grandes.
- Recoger las muestras en tubos de ultracentrífuga y equilibrar los tubos. Centrifugar las muestras durante 2 h a 140.000 x g a 4° C para que sedimenten los exosomas.
Nota: El tamaño de exosomas varía de 20-200 nm. filtro de 0.2 μm se utiliza para quitar las partículas más grandes que son más de 200 nanómetro de tamaño. - Descartar el sobrenadante cuidadosamente. Disolver el precipitado con 100 μl PBS o solución de lisis y muestras de exosomas transferencia a tubos de 1,5 mL y guardar a-80 ° C hasta su uso.
Nota: Microscopio electrónico de transmisión se recomienda verificar exosomas aislado. - Siga la muestra TEM estándar protocolo28de procesamiento. Analizar muestras de exosomas utilizando microscopía electrónica de transmisión y tomar imágenes, escala bar 200 nm.
3. preparación de miRNA y escénicas miRNA-q-RT-PCR
Nota: miRNA-q-RT-PCR se recomienda analizar el nivel de expresión de miRNAs.
- Seguir protocolo de aislamiento estándar miRNAs y asegúrese de que utilizar una cantidad igual de RNAs purificados en la transcripción reversa del solo-filamento de24.
- Siga el protocolo estándar de PCR en tiempo real para detectar nivel de microARN exosomal en líquido del BAL. Uso de iniciadores específicos de PCR en tiempo real contra miR-155, miR-146a y SnRNA U6. Reacción de PCR con el aparato PCR cuantitativo y normalizar los valores de expresión para control interno U6 snRNA.
Nota: Cada grupo está formado por triplicado muestras24.
4. exosomas etiquetado y purificación
- Suspender exosomas sedimento con solución de suspensión de 100 μL en un tubo de polipropileno de 1.5 mL, luego agregar 0,4 μL de colorante de exosomas en el otro tubo con 100 μl de la solución de la suspensión.
- Rápidamente añadir exosomas en la solución a la solución de colorante y mezclar bien mediante pipeteo. Mantener las muestras durante 5 minutos a temperatura ambiente, proteger de la luz.
- Poner una columna de spin de exosomas en un tubo de 1,5 mL con elución. Transferir la mezcla de la solución para el centro de la columna de spin de exosomas.
- Girar la columna por 2 min a 800 x g a temperatura ambiente.
- Deseche el columna y almacenar las muestras eluídas a-20 ° C hasta su uso.
5. validación de exosomas de células receptores
- 1 x 104 12 MLE /cell en una diapositiva 8-pozo cámara y células en cultivo a 37 ° C, 5% CO2de la semilla.
- Añadir 10 μl marcado con fluorescente exosomas a las células. Incubar durante 1 h a 37 ° C.
- Quitar los medios de cultivo y lavar las células con PBS, luego fijar las células con paraformaldehído al 1% durante 10 minutos a temperatura ambiente.
- Monte la corredera en medio del Monte con DAPI.
- Analizar las muestras a través de un microscopio de fluorescencia y tomar imágenes, 40 aumentos.
6. verificación de la interacción entre células receptores y exosomas
- Semilla 2 x 105 MLE12/pozo de una placa de cultivo de 12 pozos conteniendo medio de cultivo apropiado y células en cultivo a 37 ° C, 5% CO2.
- Añadir 20 μg exosomas del líquido ratón BAL MLE12 células y configurar repeticiones por grupo experimental.
- 24 horas más tarde, lavar las células con PBS y añadir 600 μl de tampón de lisis en pozo. Homogeneizar la placa y recoger muestras de lisis en tubos de 1,5 mL con la pipeta.
- Seguir el protocolo de aislamiento de RNA total estándar y Protocolo de transcripción inversa de cDNA, completa la transcripción inversa single-strand cDNA del29.
- Siga el protocolo estándar de PCR en tiempo real para detectar el nivel de expresión de mRNA en células receptores29. Uso de iniciadores específicos de PCR en tiempo real contra el TNF-α, IL-6 y ZO-1. Reacciones de PCR con el aparato PCR cuantitativo y normalizar los valores de expresión para el control interno GAPDH.
Nota: Cada grupo está formado por las muestras por triplicado.
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Representative Results
Para inducir lesión pulmonar séptico, los ratones fueron tratados con LPS intraperitoneales (15 mg/kg). Dentro de las 24 h de la administración de LPS, neutrophilic afluencia fue visto en los pulmones, como se muestra en la figura 1A. Líquido del BAL de ratón fue dibujado, seguido por el aislamiento y purificación de exosomas. Morfología de exosomas BALF fue confirmado por microscopia electrónica de transmisión (figura 1B).
Expresión de miRNAs pro-inflamatoria selectivo miRNA-155 y miR-146a fueron detectados por RT-q-PCR de los exosomas purificados. Niveles de la expresión de miR-155 y miR-146a aumentaron significativamente en exosomas fluido del BAL de ratones tratados con LPS, en comparación con ratones control tratados con PBS (miR-155, 1 0,16 vs 11.6 ± 0,6; miR-146a, 1 0.12 vs 13,5 ± 1.186) (figura 2).
Para definir los efectos funcionales de los exosomas, ratón bronquiales epiteliales (células MLE12) fueron tratadas con exosomas purificado extraído líquido del BAL de ratones tratados con LPS o PBS, respectivamente. En primer lugar, hemos podido comprobar entrada de exosomas BALF en receptores células epiteliales. BALF exosomas fueron etiquetados con PKH-67 y cultivadas conjuntamente con las células MLE12, y luego imágenes de microscopio de fluorescencia muestran la absorción de exosomas de células epiteliales (Figura 3A). Expresión de mediador proinflamatorias, TNF-α e IL-6 fueron significativamente mayores en las células epiteliales que fueron cultivadas conjuntamente con exosomas de ratones LPS tratados, en comparación con el grupo control (TNF-α, 1 ± 0,13 vs 5.01 ± 0,22; IL-6, 1 ± 0,02 vs 1,72 ± 0,17) (figura 3B). También se determinó la expresión de la proteína de Unión estrecha ZO-1 como un sustituto para la integridad epitelial. Las células que fueron tratadas con exosomas de LPS trataron ratones demostradas una expresión significativamente atenuada de ZO-1, en comparación con ratones control de LPS tratados (ZO-1, 1 0.12 vs 0,66 ± 0,13) (figura 3).
Figura 1: caracterización de exosomas aislado de líquido del BAL de ratones tratados con LPS. Trataron a ratones C57BL/6J con inyección intraperitoneal de LPS (15mg/kg) (N = 5), PBS fue utilizado como control (N = 5). 24 horas más tarde, ratones fueron sacrificados, y se realizó el líquido del BAL. Imágenes representativas del tejido de pulmón de ratón tratan con LPS y PBS mostrando lesión pulmonar aguda, barra de escala 50 μm, A). Exosomas fueron extraídos en líquido del BAL. Microscopía electrónica (TEM) de transmisión análisis mostrando exosomas, escala bar, 200 nm, B). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2: Exosomal expresión de miRNAs en líquido del BAL aislada de ratones tratados con LPS. Ratones C57BL/6J se desafiaron con LPS intraperitoneales. Expresión de microRNAs selectivas se analizaron a través de q-RT-PCR y normalizado a la expresión de U6. A) miR-155; B) miR-146a. n = 5 ratones por grupo. Prueba de Student, * P < 0.05. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 3: expresión de citoquinas proinflamatorias y proteína de Unión estrecha en las células epiteliales de ratón tratados con exosomas. BAL exosomas derivados de líquido fueron etiquetadas con PKH-67, y microscopio de fluorescencia que muestran PKH67 etiquetados exosomas (verde), DAPI(Blue) y combinados imágenes de mostrar la absorción de exosomas de células MLE12, barra de escala 50 μm, como se muestra en la A). Las células epiteliales de ratón MLE12 fueron cultivadas conjuntamente con exosomas aislado de líquido del BAL de ratones tratados con LPS o PBS. 24 horas más tarde, las células se cosecharon, y ARN total fue aislado. Expresión de TNF-α e IL-6 se midió con q-RT-PCR, normalizado al control interno GAPDH. (B) TNF-α y c IL6; (D) ZO-1 la expresión del mRNA se midió con q-RT-PCR. * P < 0.05, test de Student. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
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Discussion
Modelos murinos de enfermedades se utilizan comúnmente para evaluar la función fisiológica de genes específicos y reducir el costo de experimentación2. La lesión pulmonar aguda séptica descrita aquí imita la respuesta inflamatoria en los seres humanos con SDRA. Este modelo es pertinente para investigar la patogenesia molecular, desarrollo de biomarcadores y para probar terapias de nuevo potencial5.
Sistemas de co-cultivo son relevantes para los estudios en vivo en el contexto de la investigación de posibles mecanismos de transferencia de moléculas biológicas como ARN, ADN, lípidos y proteínas en un sistema in vitro23,30. Algunas de estas plataformas tienen gran utilidad en la evaluación de la comprensión mecanicista y el desarrollo de terapias para enfermedades complejas22,23. Como se muestra aquí los exosomas de células broncoalveolares (macrófagos, neutrófilos) pueden afectar a la integridad de células epiteliales estructurales mediante transferencia de exosomas.
Los efectos pathobiological de exosomas están emergiendo como aspecto crítico en enfermedades humanas tanto desde el punto de vista terapéutico y el diagnóstico y entender enfermedad patogénesis31,32. Para aislar los exosomas de fluidos biológicos, la técnica más comúnmente utilizado incluye centrifugación diferencial juntada con ultracentrifugación como se describe aquí33,34. Esta técnica tiene varias ventajas, aunque está limitado por el hecho de que puede ser muy lento y el riesgo de contaminación con proteínas no exosomal. Se han propuesto nuevos enfoques para superar estas limitaciones, tales como el aislamiento de exosomas por el gradiente de densidad o la afinidad inmune o el método dependiente del tamaño35. Exosomas están siendo investigados en estudios clínicos como biomarcadores para el diagnóstico y pronóstico y desarrollo de terapias dirigidas.
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Disclosures
Este trabajo fue apoyado por VA mérito revisión 2I01BX001786-06A1 financiación a RS.
Acknowledgments
Los autores han declarado no hay conflicto de intereses.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| lipopolysaccharide | Sigma-Aldrich | Escherichia coli 055:B5 | |
| PBS pH7.2(1X) | Life technologies | 20012-027 | |
| mirVana miRNA isolation kit | Thermo Fisher | 449774 | |
| TaqMan Gene Expression Master Mix | Thermo Fisher | 4369016 | |
| mmu-miR-155 (002571) primer | Thermo Fisher | 4427975 | |
| has-miR-146a (000468) primer | Thermo Fisher | 4427975 | |
| U6snRNA primer | Thermo Fisher | 4427975 | |
| TNF-α(Mm00443258_m1 ) primer | Thermo Fisher | 4331182 | |
| IL-6 (Mm00446190_m1 )primer | Thermo Fisher | 4331182 | |
| ZO-1 (Mm00493699_m1 )primer | Thermo Fisher | 4331182 | |
| minimal essential medium (MEM) | Thermo Fisher | 11095-072 | |
| Trysin-EDTA solution(0.05%) | Thermo Fisher | 25300054 | |
| Exosomes were labeled with PKH67 through PKH67 Green Fluorescent Cell linker Mini Kit | Sigma-Aldrich | MINI67-1KT | |
| Exosome Spin Columns (MW3000) | Thermo Fisher | 4484449 | |
| Beckman Coulter Optima L-100XP ultracentrifuge | Beckman Coulter | L-100XP | |
| Ultra-clear centrifuge tubes | Beckman Coulter | 344058 | |
| Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System | Thermo Fisher | ||
| transmission electron microscopes (TEM) | JEOL Ltd | 120 kV TEM | |
| Olympus BX41 microscope | Olympus | BX41 |
References
- Rubenfeld, G. D., Herridge, M. S. Epidemiology and outcomes of acute lung injury. Chest. 131, 554-562 (2007).
- Baron, R. M., Choi, A. J., Owen, C. A., Choi, A. M. Genetically manipulated mouse models of lung disease: potential and pitfalls. American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. , L485-L497 (2012).
- Han, S., Mallampalli, R. K. The acute respiratory distress syndrome: from mechanism to translation. Journal of immunology. , Baltimore, Md. 855-860 (1950).
- Aeffner, F., Bolon, B., Davis, I. C. Mouse Models of Acute Respiratory Distress Syndrome: A Review of Analytical Approaches, Pathologic Features, and Common Measurements. Toxicologic pathology. 43, 1074-1092 (2015).
- Matute-Bello, G., Frevert, C. W., Martin, T. R. Animal models of acute lung injury. American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. , L379-L399 (2008).
- Terrasini, N., Lionetti, V. Exosomes in Critical Illness. Critical care medicine. , (2017).
- Fujita, Y., Kadota, T., Araya, J., Ochiya, T., Kuwano, K. Extracellular Vesicles: New Players in Lung Immunity. American journal of respiratory cell and molecular biology. , (2017).
- Kubo, H. Extracellular Vesicles in Lung Disease. Chest. 153, 210-216 (2018).
- Krol, J., Loedige, I., Filipowicz, W. The widespread regulation of microRNA biogenesis, function and decay. Nature reviews. Genetics. 11, 597-610 (2010).
- Bartel, D. P. MicroRNAs: target recognition and regulatory functions. Cell. 136, 215-233 (2009).
- Fanini, F., Fabbri, M. CANCER-DERIVED EXOSOMIC microRNAs SHAPE THE IMMUNE SYSTEM WITHIN THE TUMOR MICROENVIRONMENT: STATE OF THE ART. Seminars in cell & developmental biology. , (2016).
- Agarwal, U., et al. Experimental, Systems, and Computational Approaches to Understanding the MicroRNA-Mediated Reparative Potential of Cardiac Progenitor Cell-Derived Exosomes From Pediatric Patients. Circulation research. 120, 701-712 (2017).
- Prattichizzo, F., et al. Extracellular microRNAs and endothelial hyperglycaemic memory: a therapeutic opportunity? Diabetes, obesity & metabolism. 18, 855-867 (2016).
- Huang-Doran, I., Zhang, C. Y., Vidal-Puig, A. Extracellular Vesicles: Novel Mediators of Cell Communication In Metabolic Disease. Trends in endocrinology and metabolism: TEM. 28, 3-18 (2017).
- Khalyfa, A., et al. Circulating Plasma Extracellular Microvesicle MicroRNA Cargo and Endothelial Dysfunction in Children with Obstructive Sleep Apnea. American journal of respiratory and critical care medicine. 194, 1116-1126 (2016).
- Thomou, T., et al. Adipose-derived circulating miRNAs regulate gene expression in other tissues. Nature. 542, 450-455 (2017).
- Gregson, A. L., et al. Altered Exosomal RNA Profiles in Bronchoalveolar Lavage from Lung Transplants with Acute Rejection. American journal of respiratory and critical care medicine. 192, 1490-1503 (2015).
- Valadi, H., et al. Exosome-mediated transfer of mRNAs and microRNAs is a novel mechanism of genetic exchange between cells. Nature cell biology. 9, 654-659 (2007).
- Doxaki, C., Kampranis, S. C., Eliopoulos, A. G., Spilianakis, C., Tsatsanis, C. Coordinated Regulation of miR-155 and miR-146a Genes during Induction of Endotoxin Tolerance in Macrophages. Journal of immunology. , Baltimore, Md. 5750-5761 (2015).
- Schulte, L. N., Westermann, A. J., Vogel, J. Differential activation and functional specialization of miR-146 and miR-155 in innate immune sensing. Nucleic acids research. 41, 542-553 (2013).
- Alexander, M., et al. Exosome-delivered microRNAs modulate the inflammatory response to endotoxin. Nature communications. 6, 7321 (2015).
- Yuan, Z., et al. TREM-1 is induced in tumor associated macrophages by cyclo-oxygenase pathway in human non-small cell lung cancer. PloS one. 9, e94241 (2014).
- Xu, R., Richards, F. M. Development of In Vitro Co-Culture Model in Anti-Cancer Drug Development Cascade. Combinatorial chemistry & high throughput screening. 20, 451-457 (2017).
- Yuan, Z., et al. TREM-1-accentuated lung injury via miR-155 is inhibited by LP17 nanomedicine. American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. , L426-L438 (2016).
- Sadikot, R. T., et al. High-dose dexamethasone accentuates nuclear factor-kappa b activation in endotoxin-treated mice. American journal of respiratory and critical care medicine. 164, 873-878 (2001).
- Yuan, Z., et al. Curcumin mediated epigenetic modulation inhibits TREM-1 expression in response to lipopolysaccharide. The international journal of biochemistry & cell biology. 44, 2032-2043 (2012).
- Chauret, C. P., et al. Chlorine dioxide inactivation of Cryptosporidium parvum oocysts and bacterial spore indicators. Applied and environmental microbiology. 67, 2993-3001 (2001).
- Cizmar, P., Yuana, Y. Detection and Characterization of Extracellular Vesicles by Transmission and Cryo-Transmission Electron Microscopy. Methods in molecular biology. , Clifton, N.J. 221-232 (2017).
- Yuan, Z., et al. HIV-related proteins prolong macrophage survival through induction of Triggering receptor expressed on myeloid cells-1. Scientific reports. 7, 42028 (2017).
- Jackson, M. V., et al. Analysis of Mitochondrial Transfer in Direct Co-cultures of Human Monocyte-derived Macrophages (MDM) and Mesenchymal Stem Cells (MSC). Bio-protocol. 7, (2017).
- Fujita, Y., et al. Extracellular Vesicles: New Players in Lung Immunity. American journal of respiratory cell and molecular biology. 17, 474-484 (2017).
- Gunasekaran, M., et al. Donor-Derived Exosomes With Lung Self-Antigens in Human Lung Allograft Rejection. American journal of transplantation : official journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 17, 474-484 (2017).
- Kalra, H., et al. Comparative proteomics evaluation of plasma exosome isolation techniques and assessment of the stability of exosomes in normal human blood plasma. Proteomics. 13, 3354-3364 (2013).
- Baranyai, T., et al. Isolation of Exosomes from Blood Plasma: Qualitative and Quantitative Comparison of Ultracentrifugation and Size Exclusion Chromatography Methods. PloS one. 10, e0145686 (2015).
- Nordin, J. Z., et al. Ultrafiltration with size-exclusion liquid chromatography for high yield isolation of extracellular vesicles preserving intact biophysical and functional properties. Nanomedicine : nanotechnology, biology, and medicine. 11, 879-883 (2015).
