Summary
Mus utsatt for intraperitoneal LPS skiller exosomes i Broncho-alveolar lavage (BAL) væske som er pakket med miRNAs. Bruker en co kultur, viser vi at exosomes utgitt i BAL væske forstyrre uttrykk for tett krysset proteiner i bronkial epitelceller og øke uttrykk for pro-inflammatoriske cytokiner som fremhever lungen skade.
Abstract
Akutt lungen skade (ALI) og akutt respiratory distress syndrom (ARDS) representerer en heterogen gruppe av lungesykdommer som fortsetter å ha en høy sykelighet og dødelighet. Molekylær patogenesen av ALI blir bedre definert. men på grunn av den komplekse naturen av sykdommen har Molekylær terapi ennå å bli utviklet. Her bruker vi en lipopolysakkarid (LPS) indusert musemodell av akutt septisk lungen skade for å avgrense rollen exosomes i betennelsesreaksjon. Bruker denne modellen, kunne vi vise at mus er utsatt for intraperitoneal LPS skiller exosomes i Broncho-alveolar lavage (BAL) fluid fra lungen som er pakket med miRNA og cytokiner som regulerer betennelsesreaksjon. Videre bruker en co kultur modellsystem, viser vi at exosomes fra makrofager forstyrre uttrykk for tett krysset proteiner i bronkial epitelceller. Disse resultatene tyder på at 1) kryss-snakk mellom medfødte immunsystemet og strukturelle cellene til det exosomal skytteltrafikk bidrar til inflammatorisk respons og forstyrrelse av strukturelle barrieren og 2) rettet mot disse miRNAs kan gi en ny plattform for å behandle ALI og ARDS.
Introduction
ALI og ARDS er livstruende former av respirasjonssvikt med alvorlig hypoksemi forårsaket av ikke-kardiogent lungeødem som påvirker ca 1 million mennesker over hele verden årlig1. Etiologien for ARDS omfatter direkte skade lungene fra infeksjoner eller aspirasjon og en rekke indirekte fornærmelser. Det siste tiåret har det vært en økt forståelse av molekylære patogenesen av ARDS, men bestemt målrettet behandlinger for ARDS er ennå å bli utviklet2,3.
Flere dyr modeller av akutt lungen skade har blitt utviklet som gir en bro for å oversette eksperimentell terapi til menneskelige studier4,5. Brukte modeller inkluderer lokal installasjon av oljesyre, bakterier, LP-plater og bleomycin. Andre metoder inkluderer ischemia-reperfusion, cecal ligation punktering, mekanisk ventilasjon-indusert strekk skade, hyperoxia eller systemisk administrasjon av bakterier og LPS5. Disse modellene gir en nyttig biologiske system for å teste klinisk hypoteser og for utvikling av potensielle terapier. For å simulere menneskelige ARDS, bør dyremodeller reprodusere betennelse og akutt skade epitel og endothelial cellene med defekter i barriere-funksjonen i lungene.
Exosomes er membran blemmer med 20-200 nm i diameter, som molekylær innhold inneholder proteiner, DNA, RNA og lipider, og lette Inter cellular kommunikasjon i vev microenvironment Met molekylær komposisjon. Exosomes utskilles av flere typer celler, for eksempel endotelceller, epitelceller, glatt muskelceller og kreftceller, og finnes i menneskelige kroppen væske. Studier indikerer at exosomes regulere kryss-snakk mellom immunceller og stromal celler under smittsomme og sterile inflammatoriske sykdommer, og deres unormale utgivelse synes å være regulert av ulike naturlige og eksperimentelle stimuli under fysiologiske og patologisk prosesser6. Slike kommunikasjonsnettverk kan spille en viktig rolle i patogenesen av lungesykdommer og kan påvirke patofysiologiske progresjon7,8. Som 18-22 nukleotid ikke-koding RNAs, miRNAs finnes i både vev og kroppsvæsker, plasma, sera, og modulere mRNA uttrykk på post-translasjonell nivå9,10.
Pakket miRNAs i exosomes påvirke differensiering og funksjon av flere typer celler, og overdreven nivåer er knyttet til en rekke sykdommer, inkludert kreft, lungesykdommer, fedme, diabetes og hjerte-og karsykdommer11, 12,13,14,15,16. Mottaker cellene og skytteltrafikk av exosomal miRNAs lette intercellulære kommunikasjon endre hemostasen microenvironment17,18. Akutt lunge-skade er en komplekse prosesser, som involverer flere celletyper med omfattende intercellulære kommunikasjon gjennom exosomes8. miR-155 og miR-146a dele felles transcriptional regulatoriske mekanismen og bidra til inflammatorisk respons og immun toleranse19,20. Nyere studier viser at begge modulere inflammatorisk respons via exosomal miRNAs skytteltrafikk mellom immunceller21. Men molekylære mekanismer underliggende modulatory effekter av exosomal miRNAs på alveolar svar på endotoxin fortsatt uklare, utvilsomt potensielle klinisk betydning og translasjonsforskning implikasjon fortjener videre etterforskning.
Co kultur modeller brukes til å definere samspillet av de spesifikke celletyper i komplekse miljøet, for eksempel betennelse og kreft22,23. Disse plattformene gir en alternativ strategi for å avhøre kryss-snakk mellom celletyper spesielt for immun og strukturelle celler.
Intra-tracheal, aerosolized, intraperitoneal eller systemisk administrasjon av LPS brukes å indusere eksperimentelle lungen skade24,25,26, og har vist for å indusere epitel og endothelial permeabilitet defekter. Her bruker vi intraperitoneal LPS for å indusere en septisk modell av akutt lungen skade i mus. Innen 24 timer for intraperitoneal administrasjon av LPS, er permeabilitet defekter indusert i lungene med rekruttering av inflammatoriske celler. Videre, vi viser at exosomes fra BAL inneholder miRNA-155 og miR-146a, og exosomes fra BAL væske induserer pro-inflammatoriske cytokiner uttrykk i mottakerens epitelceller, inkludert IL-6 og TNF-α. Disse dataene er først til å vise at exosomal miRNAs utskilles i BAL i denne modellen av akutt septisk lungen skade.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Den generelle protokollen krever 2 dager, inkludert den første dagen av sepsis induksjon og isolering av BAL væske fra dyret, og den andre dagen for exosomes isolasjon fra musa BALF. Alle prosedyrer har blitt vurdert og godkjent av institusjonelle Animal Care og bruk komiteen ved Atlanta VA medical center.
1. mus akutt septisk lungen skade modell
- Bruker 6-8 uker - gammel mannlig vill-type C57BL/6J mus (vekt 20-22 g) for dyret modell, og utfører alle prosedyrer som bruker steril teknikk og instrumenter. Autoclave alle kirurgiske instrumenter, inkludert tang og saks etter 20 min på 121 ° C.
- Tilfeldig distribuere mus til eksperimentelle og kontroll grupper. Holde mus på en kirurgisk bord. Behandle mus med Escherichia coli lipopolysakkarid (LPS, 15 mg/kg) av intraperitoneal rute. Ifølge enkelte kroppsvekten, fortynne riktig LPS doser til 0,1 mL PBS per mus, og injisere LPS løsning ved hjelp av en 1 mL sprøyte med 27 G nål og injisere en tilsvarende volum på PBS kontrollen dyr.
- Vær mus dyr BSL2 anlegget, som består av ren bur i riktig romtemperatur.
- 24 timer senere euthanize mus med CO2 innånding.
- Velg det kirurgiske området i midten av musen. Lag et lite innsnitt (ca. 5 mm), og forsiktig skille musklene for tilgang til luftrøret bruke sløv tang til luftrøret er utsatt.
- Trekke musen BAL væske med 10 mL steril sprøyte med en 27 G nål. Først forsiktig, sette inn nålen inn i luftrøret og injisere 1 mL steril PBS sakte inn i luftrøret, deretter trekke BALF i 3 mL disponibel sprøyte med en 27 G nål. Ved ferdigstillelse av prosedyren, kast sprøyter og sprøytespisser i biohazard beholder.
- Behandle Kirurgiske instrumenter med klordioksid, som beskrevet tidligere av Chauret et al. 27, og deretter sterilisere alle kirurgiske instrumenter av autoklavering etter 20 min på 121 ° C.
2. Exosomes isolasjon-føljetong Ultra-sentrifugering og karakterisering
- Samle musen BAL væske i 15 mL konisk rør. Å høste alveolar celler, sentrifuger prøver i 10 min på 1000 g, på 4 ° C.
- Overføre nedbryting til nye 15 mL konisk rør og deretter virvel prøver for 30 min 4000 x g på 4 ° C fjerne celle rusk.
- Samle nedbryting i ultracentrifuge rør og sentrifuger prøver for 60 min 10 000 x g på 4 ° C fjerne større mobilnettet partikler.
- Overføre nedbryting til nye konisk rør og deretter filtrere prøver gjennom 0,2 µm sprøyte-filteret for å fjerne gjenværende større partikler.
- Oppsamling i ultracentrifuge rør og balanse rør. Sentrifuge prøver for 2t 140.000 x g på 4° C pellets til exosomes.
Merk: Størrelsen på exosomes varierer 20-200 nm. 0,2 µm filteret brukes for fjerning av større partikler som er mer enn 200 nm i størrelse. - Kast supernatants forsiktig. Oppløse pellets med 100 µL PBS eller lysis løsning og overføre exosomes prøver å 1,5 mL rør og lagre-80 ° c før bruk.
Merk: Transmission elektronmikroskop anbefales å bekrefte isolert exosomes. - Følg standard TEM prøven behandling protokollen28. Analysere exosomes prøver ved overføring elektronmikroskop og ta bilder, skala bar 200 nm.
3. forberedelse av miRNA og utøvende miRNA-q-RT-PCR
Merk: miRNA-q-RT-PCR anbefales å analysere uttrykk nivå av miRNAs.
- Følger standard miRNAs isolasjon protokollen og bruk en lik mengde renset RNAs i enkelt-strand omvendt transkripsjon24.
- Følg standard sanntids PCR-protokoll for å oppdage exosomal microRNA nivå i BAL væske. Bruk spesifikke sanntid PCR primere mot miR-155, miR-146a og U6 SnRNA. Kjør PCR reaksjon med kvantitative PCR apparatet og normalisere uttrykk verdiene til intern kontroll U6 snRNA.
Merk: Hver gruppe består av tre eksemplarer prøver24.
4. Exosomes merking og rensing
- Avbryte exosomes pellets med 100 µL suspensjonen løsning en 1,5 mL polypropylen tube, deretter legge 0,4 µL exosomes fargestoff inn i andre røret med 100 µL av suspensjon løsningen.
- Raskt legge exosomes i løsningen til fargestoff løsningen og bland det godt av pipettering. Hold prøver for 5 min ved romtemperatur, beskytte mot lyset.
- Sett exosome spinn kolonner i en 1,5 mL elueringsrør. Overføre løsning blandingen til midten av kolonnen exosome spinn.
- Spinne kolonnen for 2 min 800 x g ved romtemperatur.
- Forkaste kolonnen og lagre eluted prøven på 20 ° C før bruk.
5. validering av Exosomes tatt av mottakeren celler
- Frø 1 x 104 MLE 12 /cell i et 8-vel kammer lysbilde og kultur celler ved 37 ° C, 5% CO2.
- Legge til 10 µL fluorescerende-merket exosomes i cellene. Inkuber 1t på 37 ° C.
- Fjerne kultur medier vaske celler med PBS, og fikse celler med 1% paraformaldehyde i 10 minutter ved romtemperatur.
- Montere lysbildet i mount medium med DAPI.
- Analysere prøver gjennom fluorescens mikroskop og ta bilder, 40 X forstørrelse.
6. bekreftelse av samspillet mellom Exosomes og mottaker celler
- Frø 2 x 105 MLE12/godt i en 12-vel kultur plate inneholder riktig kultur medium og kultur celler ved 37 ° C, 5% CO2.
- Legge til 20 µg exosomes fra musen BAL væske i MLE12 celler og definere gjentak per forsøksgruppen.
- 24 timer senere, vaske celler med PBS og Legg 600 µL lyseringsbuffer i brønnen. Forsiktig riste platen og samle lysis prøver 1,5 mL tube med pipette.
- Følger standard totale RNA isolasjon protokollen og cDNA omvendt transkripsjon protokollen, fullføre de single-strand cDNA omvendte transkripsjon29.
- Følg standard sanntids PCR-protokoll for å oppdage mRNA uttrykk nivå i mottakerens celler29. Bruke bestemte sanntid PCR primere mot TNF-α, IL-6 og ZO-1. Kjør PCR reaksjoner med kvantitative PCR apparatet og normalisere uttrykk verdiene til intern kontroll GAPDH.
Merk: Hver gruppe består av tre eksemplarer prøver.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
For å indusere septisk lungen skade, ble mus behandlet med intraperitoneal plater (15 mg/kg). Innen 24 timer av LPS administrasjon, ble neutrophilic tilstrømningen sett i lungene, som vist i figur 1A. Musen BAL væske ble trukket, etterfulgt av isolasjon og rensing av exosomes. Morfologi av BALF exosomes ble bekreftet av elektronmikroskop overføring (figur 1B).
Uttrykk for selektiv pro-inflammatoriske miRNAs miRNA-155 og miR-146a ble oppdaget av q-RT-PCR fra den renset exosomes. Uttrykket nivåer av miR-155 og miR-146a var betydelig økt i BAL væske exosomes fra mus som ble behandlet med plater, sammenlignet med kontroll mus behandlet med PBS (miR-155, 1 ± 0,16 vs 11,6 ± 0,6, miR-146a, 1 ± 0,12 vs 13,5 ± 1.186) (figur 2).
Definere funksjonelle effekten av exosomes, ble mus bronkial epitelceller (MLE12 celler) behandlet med renset exosomes Hentet fra BAL væske mus behandlet med LPS eller PBS, henholdsvis. Først, vi viste oppføring av BALF exosomes i mottakerens epitelceller. BALF exosomes var merket med PKH-67 og co kultivert med MLE12 celler, og deretter fluorescens mikroskop bildene viser opptaket av exosomes av epitelceller (figur 3A). Uttrykk for pro-inflammatoriske formidler, TNF-α og IL-6 betydelig økte i epitelceller som var co kulturperler med exosomes fra LPS behandlet mus, sammenlignet med kontrollgruppen (TNF-α, 1 ± 0,13 vs 5.01 ± 0.22; Il-6, 1 ± 0,02 vs 1.72 ± 0,17) (figur 3B). Vi har også bestemt uttrykket tett krysset protein ZO-1 som et surrogat for epithelial integritet. Celler som ble behandlet med exosomes fra LPS behandlet mus viste et betydelig dempes uttrykk for ZO-1, i forhold til LPS behandlet kontroll mus (ZO-1, 1 ± 0,12 vs 0,66 ± 0,13) (Figur 3 c).
Figur 1: karakteristikk av exosomes isolert fra BAL væske LPS-behandlet mus. C57BL/6J mus ble behandlet med intraperitoneal plater (15mg/kg) injeksjon (N = 5), PBS ble brukt som kontroll (N = 5). 24 timer senere, mus var euthanized, og BAL væske ble utført. Representant bilder av musen lungevev behandlet med plater og PBS viser akutt lungen skade, skala bar, 50 µm, A). Exosomes ble Hentet fra BAL væske. Overføring elektronmikroskop (TEM) analyse viser exosomes, skalere bar, 200 nm, B). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: Exosomal miRNAs uttrykk i BAL væske isolert fra LPS-behandlet mus. C57BL/6J mus ble utfordret med intraperitoneal plater. Uttrykk for selektiv microRNAs ble analysert gjennom q-RT-PCR og normalisert U6 uttrykket. A) miR-155; B) miR-146a. n = 5 mus per gruppe. Student test, * P < 0,05. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: uttrykk for inflammatoriske cytokiner og tett krysset protein i musen epitelceller behandlet med exosomes. BAL væske-avledet exosomes var merket med PKH-67 og fluorescens mikroskop som viser PKH67 exosomes (grønn), DAPI(Blue) og flettede bilder for Vis opptak av exosomes i MLE12 celler, skala bar, 50 µm, slik som vist i A). Musen epitelceller MLE12 var co kulturperler med exosomes isolert fra BAL væske fra mus behandlet med LPS eller PBS. 24 timer senere celler ble høstet, og totalt RNA ble isolert. Uttrykket av TNF-α og IL-6 ble målt med q-RT-PCR, normalisert å GAPDH intern kontroll. (B) TNF-α og (C) IL6; (D) ZO-1 mRNA uttrykket ble målt med q-RT-PCR. * P < 0,05, Student test. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Musen modeller av sykdommer er vanlig å evaluere bestemte gener fysiologiske funksjon og redusere kostnadene for eksperimentering2. Akutt septisk lunge skaden beskrevet her etterligner betennelsesreaksjon sett i mennesker med ARDS. Denne modellen er relevant å undersøke molekylær patogenesen, utvikling av biomarkers og teste potensielle nye terapier5.
Co kultur systemer er relevante for i vivo studier i sammenheng med undersøker potensielle mekanismer for overføring av biologiske molekyler som RNA, DNA, lipider og protein i en i vitro systemet23,30. Noen av disse plattformene har stor nytte i vurderingen av mekanistisk forståelse og utvikling av terapi for komplekse sykdommer22,23. Som vist her exosomes fra lavage celler (makrofager, nøytrofile) kan påvirke integriteten til strukturelle epitelceller gjennom overføring av exosomes.
Pathobiological effekten av exosomes fremstår som kritisk del i menneskelige sykdommer både fra diagnostiske og terapeutiske ståsted og forstå sykdom patogenesen31,32. For å isolere exosomes fra biologiske væsker, inkluderer den mest brukte teknikken differensial sentrifugering kombinert med ultracentrifugation som beskrevet her33,34. Denne teknikken har flere styrker, men er begrenset av det faktum at det kan være tidkrevende og risiko for kontaminering med ikke-exosomal proteiner. Romanen tilnærminger har blitt foreslått å overvinne disse begrensningene som exosome isolasjon av tetthet gradert eller immun-affinitet eller størrelse avhengig av metoden35. Exosomes blir undersøkt i kliniske studier som biomarkers for diagnose og prognose og utvikling av målrettet terapi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Dette arbeidet ble støttet av VA fortjeneste gjennomgang 2I01BX001786-06A1 midler til RS.
Acknowledgments
Forfatterne har erklært noen interessekonflikt.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| lipopolysaccharide | Sigma-Aldrich | Escherichia coli 055:B5 | |
| PBS pH7.2(1X) | Life technologies | 20012-027 | |
| mirVana miRNA isolation kit | Thermo Fisher | 449774 | |
| TaqMan Gene Expression Master Mix | Thermo Fisher | 4369016 | |
| mmu-miR-155 (002571) primer | Thermo Fisher | 4427975 | |
| has-miR-146a (000468) primer | Thermo Fisher | 4427975 | |
| U6snRNA primer | Thermo Fisher | 4427975 | |
| TNF-α(Mm00443258_m1 ) primer | Thermo Fisher | 4331182 | |
| IL-6 (Mm00446190_m1 )primer | Thermo Fisher | 4331182 | |
| ZO-1 (Mm00493699_m1 )primer | Thermo Fisher | 4331182 | |
| minimal essential medium (MEM) | Thermo Fisher | 11095-072 | |
| Trysin-EDTA solution(0.05%) | Thermo Fisher | 25300054 | |
| Exosomes were labeled with PKH67 through PKH67 Green Fluorescent Cell linker Mini Kit | Sigma-Aldrich | MINI67-1KT | |
| Exosome Spin Columns (MW3000) | Thermo Fisher | 4484449 | |
| Beckman Coulter Optima L-100XP ultracentrifuge | Beckman Coulter | L-100XP | |
| Ultra-clear centrifuge tubes | Beckman Coulter | 344058 | |
| Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System | Thermo Fisher | ||
| transmission electron microscopes (TEM) | JEOL Ltd | 120 kV TEM | |
| Olympus BX41 microscope | Olympus | BX41 |
References
- Rubenfeld, G. D., Herridge, M. S. Epidemiology and outcomes of acute lung injury. Chest. 131, 554-562 (2007).
- Baron, R. M., Choi, A. J., Owen, C. A., Choi, A. M. Genetically manipulated mouse models of lung disease: potential and pitfalls. American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. , L485-L497 (2012).
- Han, S., Mallampalli, R. K. The acute respiratory distress syndrome: from mechanism to translation. Journal of immunology. , Baltimore, Md. 855-860 (1950).
- Aeffner, F., Bolon, B., Davis, I. C. Mouse Models of Acute Respiratory Distress Syndrome: A Review of Analytical Approaches, Pathologic Features, and Common Measurements. Toxicologic pathology. 43, 1074-1092 (2015).
- Matute-Bello, G., Frevert, C. W., Martin, T. R. Animal models of acute lung injury. American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. , L379-L399 (2008).
- Terrasini, N., Lionetti, V. Exosomes in Critical Illness. Critical care medicine. , (2017).
- Fujita, Y., Kadota, T., Araya, J., Ochiya, T., Kuwano, K. Extracellular Vesicles: New Players in Lung Immunity. American journal of respiratory cell and molecular biology. , (2017).
- Kubo, H. Extracellular Vesicles in Lung Disease. Chest. 153, 210-216 (2018).
- Krol, J., Loedige, I., Filipowicz, W. The widespread regulation of microRNA biogenesis, function and decay. Nature reviews. Genetics. 11, 597-610 (2010).
- Bartel, D. P. MicroRNAs: target recognition and regulatory functions. Cell. 136, 215-233 (2009).
- Fanini, F., Fabbri, M. CANCER-DERIVED EXOSOMIC microRNAs SHAPE THE IMMUNE SYSTEM WITHIN THE TUMOR MICROENVIRONMENT: STATE OF THE ART. Seminars in cell & developmental biology. , (2016).
- Agarwal, U., et al. Experimental, Systems, and Computational Approaches to Understanding the MicroRNA-Mediated Reparative Potential of Cardiac Progenitor Cell-Derived Exosomes From Pediatric Patients. Circulation research. 120, 701-712 (2017).
- Prattichizzo, F., et al. Extracellular microRNAs and endothelial hyperglycaemic memory: a therapeutic opportunity? Diabetes, obesity & metabolism. 18, 855-867 (2016).
- Huang-Doran, I., Zhang, C. Y., Vidal-Puig, A. Extracellular Vesicles: Novel Mediators of Cell Communication In Metabolic Disease. Trends in endocrinology and metabolism: TEM. 28, 3-18 (2017).
- Khalyfa, A., et al. Circulating Plasma Extracellular Microvesicle MicroRNA Cargo and Endothelial Dysfunction in Children with Obstructive Sleep Apnea. American journal of respiratory and critical care medicine. 194, 1116-1126 (2016).
- Thomou, T., et al. Adipose-derived circulating miRNAs regulate gene expression in other tissues. Nature. 542, 450-455 (2017).
- Gregson, A. L., et al. Altered Exosomal RNA Profiles in Bronchoalveolar Lavage from Lung Transplants with Acute Rejection. American journal of respiratory and critical care medicine. 192, 1490-1503 (2015).
- Valadi, H., et al. Exosome-mediated transfer of mRNAs and microRNAs is a novel mechanism of genetic exchange between cells. Nature cell biology. 9, 654-659 (2007).
- Doxaki, C., Kampranis, S. C., Eliopoulos, A. G., Spilianakis, C., Tsatsanis, C. Coordinated Regulation of miR-155 and miR-146a Genes during Induction of Endotoxin Tolerance in Macrophages. Journal of immunology. , Baltimore, Md. 5750-5761 (2015).
- Schulte, L. N., Westermann, A. J., Vogel, J. Differential activation and functional specialization of miR-146 and miR-155 in innate immune sensing. Nucleic acids research. 41, 542-553 (2013).
- Alexander, M., et al. Exosome-delivered microRNAs modulate the inflammatory response to endotoxin. Nature communications. 6, 7321 (2015).
- Yuan, Z., et al. TREM-1 is induced in tumor associated macrophages by cyclo-oxygenase pathway in human non-small cell lung cancer. PloS one. 9, e94241 (2014).
- Xu, R., Richards, F. M. Development of In Vitro Co-Culture Model in Anti-Cancer Drug Development Cascade. Combinatorial chemistry & high throughput screening. 20, 451-457 (2017).
- Yuan, Z., et al. TREM-1-accentuated lung injury via miR-155 is inhibited by LP17 nanomedicine. American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. , L426-L438 (2016).
- Sadikot, R. T., et al. High-dose dexamethasone accentuates nuclear factor-kappa b activation in endotoxin-treated mice. American journal of respiratory and critical care medicine. 164, 873-878 (2001).
- Yuan, Z., et al. Curcumin mediated epigenetic modulation inhibits TREM-1 expression in response to lipopolysaccharide. The international journal of biochemistry & cell biology. 44, 2032-2043 (2012).
- Chauret, C. P., et al. Chlorine dioxide inactivation of Cryptosporidium parvum oocysts and bacterial spore indicators. Applied and environmental microbiology. 67, 2993-3001 (2001).
- Cizmar, P., Yuana, Y. Detection and Characterization of Extracellular Vesicles by Transmission and Cryo-Transmission Electron Microscopy. Methods in molecular biology. , Clifton, N.J. 221-232 (2017).
- Yuan, Z., et al. HIV-related proteins prolong macrophage survival through induction of Triggering receptor expressed on myeloid cells-1. Scientific reports. 7, 42028 (2017).
- Jackson, M. V., et al. Analysis of Mitochondrial Transfer in Direct Co-cultures of Human Monocyte-derived Macrophages (MDM) and Mesenchymal Stem Cells (MSC). Bio-protocol. 7, (2017).
- Fujita, Y., et al. Extracellular Vesicles: New Players in Lung Immunity. American journal of respiratory cell and molecular biology. 17, 474-484 (2017).
- Gunasekaran, M., et al. Donor-Derived Exosomes With Lung Self-Antigens in Human Lung Allograft Rejection. American journal of transplantation : official journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 17, 474-484 (2017).
- Kalra, H., et al. Comparative proteomics evaluation of plasma exosome isolation techniques and assessment of the stability of exosomes in normal human blood plasma. Proteomics. 13, 3354-3364 (2013).
- Baranyai, T., et al. Isolation of Exosomes from Blood Plasma: Qualitative and Quantitative Comparison of Ultracentrifugation and Size Exclusion Chromatography Methods. PloS one. 10, e0145686 (2015).
- Nordin, J. Z., et al. Ultrafiltration with size-exclusion liquid chromatography for high yield isolation of extracellular vesicles preserving intact biophysical and functional properties. Nanomedicine : nanotechnology, biology, and medicine. 11, 879-883 (2015).
