Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Bioengineering
Click here for the English version

Bioengineering

Gnaver adfærdsmæssige test for at vurdere funktionelle mangler forårsaget af mikroelektrode Implantation i rotte motoriske Cortex

Published: August 18, 2018 doi: 10.3791/57829
Automatic Translation
1,2, 1,2, 1,2, 1,2, 1,2, 1,2, 1,2
1Advanced Platform Technology Center, Rehabilitation Research and Development, Louis Stokes Cleveland Department of Veterans Affairs Medical Center, 2Department of Biomedical Engineering, Case Western Reserve University

Summary

Vi har vist, at en mikroelektrode implantation i den motoriske hjernebark af rotter forårsager øjeblikkelig og varig motor underskud. Metoderne, der foreslås heri disposition en mikroelektrode implantering og tre gnaver adfærdsmæssige opgaver at belyse eventuelle ændringer i den fin eller grov motorik på grund af implantation-forårsaget skade på den motoriske hjernebark.

Abstract

Medicinsk udstyr implanteret i hjernen hold kolossalt potentiale. Som en del af en hjerne Machine Interface (BMI) demonstrere intracortical microelectrodes evnen til at optage handling potentialer fra individuelle eller små grupper af neuroner. Sådanne optagede signaler med held været anvendt til at tillade patienter at interface med eller styre computere, robot lemmer og deres egne lemmer. Dog har tidligere animalsk undersøgelser vist at en mikroelektrode implantation i hjernen ikke kun skader det omkringliggende væv, men kan også resultere i funktionelle mangler. Her diskuterer vi en række adfærdsmæssige test at kvantificere potentielle motoriske funktionsnedsættelser efter implantation af intracortical microelectrodes i den motoriske hjernebark af en rotte. Metoderne til åben feltgitteret, stigen passage og greb styrke test giver værdifulde oplysninger om de potentielle komplikationer som følge af en mikroelektrode implantation. Resultaterne af de adfærdsmæssige test er korreleret med slutpunkt histologi, giver yderligere oplysninger om de patologiske resultater og virkninger af denne procedure på tilstødende væv.

Introduction

Intracortical microelectrodes blev oprindeligt brugt til at knytte kredsløb i hjernen, og har udviklet sig til et værdifuldt værktøj til at muliggøre påvisning af motor intentioner, som kan bruges til at fremstille funktionelle udgange1. Detekterede funktionelle udgange kan tilbyde personer lider af rygmarvsskader, cerebral parese, amyotrofisk lateral sklerose (ALS) eller andre bevægelse-begrænsende betingelser en computer markøren2,3 , eller robot arm4,5,6, eller gendanne funktion til deres egen handicappede lemmer7. Derfor opstået intracortical mikroelektrode teknologi som en lovende og hurtigt voksende felt8.

På grund af de gode resultater set i feltet, er kliniske undersøgelser undervejs for at forbedre og bedre at forstå mulighederne for BMI technology5,9,10. Af at realisere det fulde potentiale af kommunikation med neuroner i hjernen, er rehabilitering programmer opfattet som ubegrænsede8. Selvom der er stor optimisme for fremtiden for intracortical mikroelektrode teknologi, er det også velkendt, at microelectrodes i sidste ende ikke11, muligvis på grund af en akut neuroinflammatory svar efter implantation. Implantation af en udenlandsk materiale i hjernen medfører øjeblikkelig skader til det omgivende væv og fører til yderligere skade som følge af den neuroinflammatory reaktion, som varierer afhængigt af egenskaber af implantatet12. Derudover et implantat i hjernen kan forårsage en microlesion effekt: en reduktion af glukose stofskifte menes at være forårsaget af akut ødem og blødning på grund af enheden indsættelse13. Derudover er signalkvaliteten og længden af tid, nyttige signaler kan registreres inkonsekvent, uanset dyremodel11,14,15,16. Flere undersøgelser har påvist forbindelsen mellem neuroinflammation og mikroelektrode ydeevne17,18,19. Konsensus i Fællesskabet er derfor, at den inflammatoriske reaktion af neurale væv, der omgiver microelectrodes, i det mindste delvis, kompromiser elektrode pålidelighed.

Mange studier har undersøgt lokale betændelse11,20,21,22 eller udforsket metoder til at reducere skader på hjernen forårsaget af indsættelse11,23, 24,25, med et mål om outplacement recording over tid14,26. Derudover har vi for nylig vist, at en iatrogen skade forårsaget af en mikroelektrode indsættelse i den motoriske hjernebark af rotter forårsager en øjeblikkelig og varig fine motor underskud27. Formålet med de protokoller, der præsenteres her er derfor at give forskere en kvantitativ metode til at vurdere mulige motor underskud som følge af hjernen traumer efter implantation og vedvarende tilstedeværelse af intracortical enheder (microelectrodes i den tilfælde af dette manuskript). Adfærd prøverne her var designet til at drille ud både grov og fin motorik funktionshæmninger og kan bruges i mange modeller af hjerneskade. Disse metoder er ligetil, reproducerbar, og kan nemt implementeres i en gnaver model. Yderligere, de metoder, der præsenteres her tillader en korrelation på motor adfærd til histologisk resultater, en fordel, der indtil for nylig, forfatterne ikke har set offentliggjort i feltet BMI. Endelig, da disse metoder var designet til at teste fin motorik28, grov motorik29og stress og angst adfærd29,30, de metoder, der præsenteres her kan også gennemføres i en række hovedskade modeller hvor forskerne vil regere ud (eller i) enhver motorik underskud.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alle procedurer og dyrs pleje praksis blev godkendt og udført i overensstemmelse med Louis Stokes Cleveland afdeling af veteraner anliggender medicinsk Center institutionelle dyrs pleje og brug udvalg.

Bemærk: For at uddanne forskere på beslutningen om brugen af en stab skade model som en kontrol, anbefales det at gennemgå Potter et al. arbejde 21.

1. mikroelektrode Implantation kirurgisk Procedure

  1. Pre kirurgisk animalske forberedelse
    1. Bedøver dyret i en induktion kammer bruger isofluran (2-4%). Mens under anæstesi, løbende Overvåg dyret ved hjælp af en vital målesystem til at overvåge puls og blod-iltindhold.
    2. Flytte dyret til en næsen kegle fortsat narkose. Subkutant (SQ) indsprøjtes et cephalosporin antibiotika, fx cefazolin (25 mg/kg) og et non-steroide anti-inflammatoriske, fx carprofen (5 mg/kg) til at forhindre infektion og administrere smerter, henholdsvis.
    3. Gavmildt anvende oftalmologiske salve til dyrets øjne at forhindre dem i tørring.
    4. Ved hjælp af små dyr negleklipper, trimme tånegle for at forhindrer dyret i at kradse suturer i løbet af sårheling. Sikre, at neglene ikke klippes for kort, da dette kan føre til smerter og blødning for dyret.
    5. Barbere dyrets hoved grundigt bag ørerne til mellem øjnene ved hjælp af en elektrisk barbermaskine trimmer.
    6. Give en lokal analgesi en SQ injektion af bupivacaine (0,3 mL af 0,125% bupivacaine fortyndes af stamopløsning) på toppen af dyrets hoved inden for indsnit.
    7. Montere dyret på en stereotaxisk ramme, ved hjælp af øret barer for at holde hovedet fra at flytte under operationen. Placer en cirkulerende vand varme pad under dyret til at bevare dyrets indre temperatur.
    8. Anvend en steril drapere, fx institutionelt godkendt sterile plastikfolie, at isolere den kirurgiske felt.
    9. Krat det kirurgiske område ved hjælp af en vekslende betadine løsning og isopropanol scrubs.
    10. Udføre en tå knivspids efter den institutionelle protokol at sikre, at dyret er under kirurgiske flyet.
  2. Forberede implantation dyr
    1. Oprette et snit på ca 1 i ned midterlinjen udsætter kraniet af med No. 10 skalpel klinge. Ligeud fjerne periosteum bruger en bomuld tippes applikator, og stop nogen blødning benytter en gauze afrivningsblok. Trække det omgivende væv ved hjælp af krokodillenæb og rengøre og dehydrere kraniet med hydrogenperoxid.
    2. Sted et par dråber af ren-baserede væv lim på udsatte kraniet at forbedre dental cement limning i senere trin.
    3. I den valgte halvkugle, Marker region af den motoriske hjernebark svarende til forpoteknogler bevægelse ca 3 mm lateral til midterlinjen og 2 mm foran bregma ved at oprette en nick i knoglen.
    4. Fjerne en del af kraniet ved hjælp af en 1,75-mm afrundet spids tand boremaskine, tager særligt hensyn ikke at bore for hurtigt eller for dybt og støtte en hånd på stereotaxisk rammen. Rutinen bør anvendes til kraniet periodisk at undgå overophedning31.
    5. Afspejle dura ved hjælp af en fin kroget 45° dura pick.
    6. Rydde eventuelle blødende bruger en bomuld tippes applikator og saltvand, tager sig ikke direkte berøring hjernen overflade.
  3. Indsættelse af mikroelektrode i motoriske cortex
    1. Omhyggeligt montere den steriliseret mikroelektrode i universal indehaveren på stereotaxisk rammen, tager forsigtig ikke at støde skanken af elektrode. Sikre, at headstage interface stik af elektrode holdes fast af indehaveren.
      Bemærk: Her, en ikke-funktionel Michigan-style silicium skanken elektrode måling 2 mm x 123 µm x 15 µm blev brugt, og skanken blev indsat ved hjælp af fine pincet.
    2. Ved hjælp af micromanipulators på stereotaxisk rammen, Placer spidsen af elektroden over den åbne kraniotomi.
    3. Sænk forsigtigt elektroden ca 2 mm ind i hjernen, ved hjælp af micromanipulators som en måling guide (afhængig af valg af elektrode, kan en automatiseret indsættelse til kontrollerede priser være påkrævet.) Tage forsigtighed for at undgå enhver synlig Vaskulaturen når det er muligt. Når elektroden er på plads, forsigtigt frigøre stikket fra den universelle indehaveren og trække indsættelse arm.
    4. Ren omhyggeligt nogen blødning fra omkring elektroden ved hjælp af en bomuld tippes applikator og saltvand.
    5. Forsegle kraniotomi omkring indopereret elektrode ved hjælp af et silikoneelastomer.
    6. Fix elektrode til kraniet ved hjælp af dental cement.
    7. Når cementen er helt tørt, samle kanterne af snittet på forsiden og bagsiden af cement headcap og sutur dem lukket.
  4. Postoperativ pleje
    1. Tillad dyret at komme på en cirkulerende vand varme pad samtidig med at overvåge sine vitale tegn. Undgå at bruge varmelamper som temperatur fra lamper er vanskeligere at kontrollere og dyr kan overophede.
    2. Når dyret er helt vågen, flytte dyret til et rent bur med nem adgang til mad og vand.
    3. Give dyrene SQ cephalosporin antibiotika (25 mg/kg) og et non-steroide anti-inflammatoriske (5 mg/kg) til at forhindre infektion og administrere deres smerter under postoperative dage 1-3.
    4. Overvåge dyr dagligt for tegn på smerte eller ubehag, blødning, vægtændring eller sutur spørgsmål igennem mindst postoperative dag 5.

2. adfærdsmæssige test

  1. For al adfærd test, test-dyr 2 x pr. test i uge før implantering elektrode til at beregne deres pre-kirurgi baseline scores. Efter kirurgi, tillade, at dyr til hvile i 1 uge før du begynder adfærd test 2 x pr uge på hver test. Konsekvent forsøgsbetingelser bør anvendes gennem hele studiet for både præ- og post-kirurgisk test for at minimere virkningerne af stress på den præstation, som kunne resultere i en måling af angst.
    1. Ren alle test udstyr med en klor kuldioxid-baseret sterilant i begyndelsen af hver test session og efter hvert dyr.
    2. Film åben feltgitteret og stigen test. Disse tests kræver et videokamera (1080p, minimum 15 fps, 78° diagonalt synsfelt), en bærbar computer, og plads til at gemme video data.
    3. I begyndelsen af hver test dag, bringe dyr til testning rummet og tillader dem at acclimate i mindst 20 min. før testning. Lokalet bør være lys og temperatur-kontrolleret, og det samme personale skal udfylde alle test. Ideelt set vil samme rum blive brugt til alle dyr i hele løbet af test uden ændringer til rummet.
    4. Brug mad belønninger at tilskynde dyr til at fuldføre opgaver, især under stigen træning. Korn eller små stykker af banan chips eller crackere gøre gode belønninger.
    5. Normalisér alle ugentlige test forestillinger til pre-kirurgi noder for hvert enkelt dyr (ligning 1).
      Ligning 1:Equation 1
  2. Åbn gitteret feltafprøvning
    Bemærk: Feltet åben gitter test blev bygget in-house og har en kørende overflade af 1 m2 med ca 40 cm høj uigennemsigtig sidevægge. Nederst kører overflade af nettet er opdelt i 9 lige store firkanter fra undersiden med tape (fig. 1A). Optagelsen kameraet er permanent monteret over midten af nettet på stilladser.
    1. For at begynde at åbne gitteret feltafprøvning, skal du placere dyret i midten af gitteret vender væk fra testeren.
    2. Tillade, at dyr til løb frit i 3 minut mens du optager en video.
    3. Når dyret har afsluttet test, fjerne dyret fra nettet og vende tilbage til buret. Ren gitter grundigt med klor kuldioxid-baseret sterilant.
    4. Teste hvert dyr 1 x pr. test dag.
    5. Analysere antallet af gitterlinjer krydsede, den samlede afstand og den maksimale hastighed for dyret som målinger af den grov motorik ved hjælp af en video tracking software.
      Bemærk: Dataene præsenteres her var kvantificeret manuelt af uddannede forskere, men det er foretrak at bruge en nyligt udviklede in-house tracking algoritme32.
  3. Stigen test
    Bemærk: Stigen test blev bygget in-house og består af 2 klar akryl sidevægge, hver 1 m i længde, forbundet med 3 mm diameter trinene fordelt på 2 cm fra hinanden (figur 2A). Stigen test er en dygtig test, og derfor kræver 1 uge med træning forud for optagelse pre-kirurgi baseline scores. Protokol til uddannelse og prøvning er den samme.
    1. Flytte dyret til en midlertidig ren bedrift bur til at begynde at stige teste.
    2. Indstille stigen, så det broer 2 bure. Start slutningen af stigen hviler på et rent bur, og finish ende hviler på dyrets hjem bur til at tjene som en motivation at afslutte Kør.
    3. Placer de samme (eller lignende) video kameraet på et stativ i midten af stigen. Placeringen af kameraet bør være på rung højde og mulighed for hele stigen skal ses.
    4. Med video kameraet kører, skal du holde dyret til startlinjen af stigen, så deres forreste ben at røre det første trin.
    5. Tillad dyret til at krydse stigen i deres eget tempo. Forløbet mellem det øjeblik, hvor dyrets pote rører den første rung målstregen på tredje til sidste rung vil fastslå dyrets tid til at krydse.
    6. Hvis dyret vender rundt på stigen eller bevæger sig ikke i en periode på 20 s, overveje dyr at have undladt at køre. Tildele dyr en straf score tid for hver kunne ikke køre. Bestemme straffen tid ved den langsomste ydelse registreres under pre-kirurgi test27.
    7. Tillade, at hvert dyr at krydse stige 5 x pr. test dag med ca 1 min hvile mellem hver kørsel.
    8. Gennemsnitlig de hurtigste 3 kører om dagen som en metrikværdi for fin motorik. Desuden optage antallet gange, hver af fronten poter glider ud trinene ved hjælp af en video tracking software.
      Bemærk: Dataene præsenteres her var kvantificeret manuelt af uddannede forskere, men det er foretrak at bruge en nyligt udviklede in-house tracking algoritme ved hjælp af Dona et al. 32.
  4. Greb styrke test
    1. Kalibrere greb styrke meter før hver test session, og måle styrken i gram.
    2. Placer greb styrke meter på kanten af en tæller med greb styret udvidet over gulvet.
    3. Tillad dyr at fange styret med begge front poter samtidig holde dyret ved bunden af hale (fig. 3A).
    4. Når dyret har et fast greb med hver pote, trække dyret fra måleren ved bunden af halen med langsom og støt kraft.
    5. Optage den maksimale gribestyrke udøves af dyret, der vises på det digitale output af greb styrke meter.
    6. Teste hvert dyr 3 x pr. test dag med ca 2 min hvile mellem hver test.
    7. Som en metrikværdi for fin motorik, optage og gennemsnitlig den maksimale gribestyrke output fra hver af de 3 forsøg.

3. post-adfærdsmæssige protokol

  1. Efter alle adfærdsmæssige test (fx, 8-16 uger efter implantation), bedøver dyrene dybt ved hjælp af ketamin (160 mg/kg) og xylazin (20 mg/kg), transcardially perfuse dem, høste deres hjerner og cryo-skive, og plette væv ved hjælp af immunhistokemiske markører til at kvantificere den cellulære reaktion omkring stedet for implantation33,34,35,36,37,38.

4. statistisk analyse

Bemærk: En prospektiv power analyse er kraftigt antydet for undersøgelser søger at besvare et bestemt forskningsspørgsmål. Power analyse, som oplyser antallet dyr, der kræves for at opnå en Statistisk signifikans for en bestemt undersøgelse design, bør baseres på den særlige forskning hypotese, design af eksperimentet, anslåede effekt størrelse og variation af de påtænkte behandlinger, som godt effekt størrelse kræves for at opnå klinisk eller videnskabelige relevans.

  1. Gennemføre statistiske analyser ved hjælp af fælles statistisk software.
  2. Tabulate den beskrivende statistik og få dem vist som gennemsnit ± standardafvigelse.
  3. Analysere adfærdsmæssige resultater [i feltet åben gitter (trin 2.2), stigen (trin 2.3), og greb styrke test (trin 2.4)] for hver ugentlige tidspunkt at sammenligne vs implanteret kontrolgrupper ved hjælp af en t-test med dobbelt stikprøve. Overveje hvert ugentlige tidspunkt en selvstændig foranstaltning.
  4. Kvantificere den langsgående ydeevne ved hjælp af en blandet effekt lineær model. Ugen og gruppen er faste faktorer og eksperimentelle dyr er indlejret i gruppen som en tilfældig effekt. En variansanalyse (ANOVA) bruges til at bestemme faktor effekten med et signifikansniveau på p < 0,05.
  5. Sammenlign stigen ydeevne med immunoglobin G (IgG) intensitet ved hjælp af en lineær regressionsanalyse. Beregnes korrelationskoefficienten af en Pearsons metode.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Ved hjælp af de metoder, der præsenteres her, er en mikroelektrode implantering i den motoriske hjernebark afsluttet følgende fastlagte procedurer39,40,41,42, efterfulgt af åben gitteret feltafprøvning for at vurdere grov motorik og stigen og greb fungere styrke test til at vurdere den fine motor27. Motorik test blev afsluttet 2 x pr uge for 16 uger efter operationen i implanterede dyr, med ingen kirurgi ikke implanteret dyr som kontrol. Alle post-kirurgi scoringer var i gennemsnit pr. uge og normaliseret til hvert enkelt dyr pre-kirurgi baseline scores. Alle fejl er rapporteret som standard fejl af middelværdien (SEM).

For at måle deres grov motorik og understrege adfærd, fik dyr lov at løbe frit i et åbent felt gitter test for 3 min (fig. 1A). Forskellige målinger fra denne test kan være optaget, herunder antallet af gitter linier krydser, den samlede afstand, og den maksimale hastighed opnås ved dyret. I denne tidligere rapporterede data præsenteres antallet gitterlinjer, der krydsede27. I den første uge efter tilbagebetalingsperioden (2-ugers tidspunkt), en væsentlig forskel var set i feltet åben gitter performance mellem de 2 grupper. Men der var ingen yderligere betydning i resten af undersøgelse (figur 1B). Kontrol og mikroelektrode-implanteret dyr scorede på samme måde i hele test, og variansen i ydeevne var relativt høj i begge sæt af dyr. Ingen betydning sås, når man sammenligner feltet åben gitter ydeevne i begge sæt af dyr på tværs af hele tiden, mens eksperimenterende. Fordi der var ingen forskel i ydelse mellem de 2 grupper af dyr, blev dette resultat tolket for at angive, at der er ingen gross motor underskud eller alvorligt begrænsende stress forårsaget af mikroelektrode implantation i den motoriske hjernebark27. Når fortolke dataene, et fald i antallet af gitterlinjer krydsede, den samlede afstand, eller den maksimale hastighed opnås ved dyret alle viser et fald i dens grov motorik (tabel 1).

For at måle koordineret greb og fin motorik, deltog dyr i en vandret stigen test (figur 2A) hvor den tid det tog dyret til at krydse stigen og hyppigheden af pote underkjoler blev registreret. Efter operationen stigen passage gange var normaliseret for hvert dyr til hvert enkelt dyr pre-kirurgi scores. Derfor en positiv procentvise falder sammen med et fald i tide at krydse stigen og en øget ydeevne, og en negativ procentdel falder sammen med en stigning i tid til at krydse stigen og en forringet ydeevne (figur 2B, Tabel 1).

I denne tidligere rapporterede data vises kontroldyr, efter at have modtaget intet implantat, den langsomste ydelse gange (82.6 ± 26,0%) i den første uge af post-kirurgi test umiddelbart efter genopretning fase27. Begynder i anden uge af post-kirurgi stigen testning, kontroldyr genoptaget deres oprindelige ydeevne gange og vedligeholdes scores svarende til deres oprindelige scores i løbet af undersøgelsen med meget lidt afvigelse.

Dyrene modtager en intracortical mikroelektrode så en reduceret ydelse straks følgende kirurgi. Disse dyr påvist en øget stigen passage af tid i forhold til deres grundlinje 199.1 ± 61,4% i den første uge af post-kirurgi test. De indopererede dyr vises en reduceret ydelse for varigheden af undersøgelsen og deres præstationer vendte tilbage ikke til deres oprindelige scores. På deres værste, indopererede dyr faldt i præstationer i løbet af uge 11 til gennemsnitligt 526.9 ± 139.4% i forhold til deres oprindelige ydeevne. Derudover de indopererede dyr viste en højere afvigelse i forhold til kontroldyr. Der var ingen signifikant forskel mellem kontrol og implanteret dyr i den første uge af test. Imidlertid en betydelig forskel i den procentvise ændring i forhold til baseline gange blev set mellem grupper på alle efterfølgende uger i undersøgelsen (Pedersen < 0,05) (figur 2B).

Yderligere beviser for fine motor værdiforringelse blev demonstreret af hyppigheden af forreste højre pote glider mellem de 2 grupper af dyr. Udførelsen af den forreste højre pote var af særlig interesse, fordi microelectrodes blev implanteret i den venstre hjernehalvdel i regionen i den motoriske hjernebark ansvarlig for front pote kontrol. Ved omhyggelig videoanalyse, pote underkjoler blev fortalte og kvantificeret (figur 2C). Mens ingen væsentlige forskelle blev set i hyppigheden af venstre pote underkjoler, konstateredes det, at de indopererede dyr oplevede betydeligt mere forreste højre pote glider i forhold til kontroldyr (gennemsnit af 0,54 ± 0,07 front højre pote glider pr. uge i den indopererede dyr i forhold til et gennemsnit på 0,32 ± 0,02 front højre pote underkjoler pr. uge i dyrenes kontrol). Når fortolke dataene, angiver en stigning i tid til at krydse stigen eller en stigning i antallet af pote underkjoler et fald i fin motorik (tabel 1).

Som en sekundær foranstaltning af koordineret greb og fin motorik afsluttet dyrene en greb styrkeprøve (fig. 3A) hvor den maksimale gribestyrke udøves af dyrene blev indspillet. Det enkelte dyr ugentlige greb scoringer var normaliseret til deres pre-kirurgi baseline gribestyrke. Det var set at den indopererede dyr efter operationen gribestyrke blev reduceret betydeligt i forhold til kontrol-dyrenes for næsten alle post-kirurgi tidspunkt. (Fig. 3B). Kontroldyr gribestyrke forbedret efter pre-kirurgi test, sandsynligvis på grund af træningseffekt. Yderligere, kontroldyr greb styrke var betydeligt større end den oprindelige plan i løbet af undersøgelsen (Pedersen < 0,05). Interessant, de indopererede dyr greb styrke ydeevne var betydeligt værre end baseline (p < 0,01) i den første uge af prøvning efter genopretningsfasen, men langsomt vendte tilbage til deres oprindelige ydeevne. Af note angiver et fald i den maksimale gribestyrke opnåede af dyret et fald i fin motorik (tabel 1).

Forskellige histologiske markører kan bruges til at visualisere mikromiljø nær en hjerne implantat, herunder neuronal kerner, astrocytter og blod - hjerne barrieren stabilitet. Her, udførte vi immunhistokemisk farvning for IgG, en fælles blod protein ikke almindeligt forekommende i hjernen. Tidligere arbejde har vist, at IgG er en nyttig indikator for blod - hjerne barrieren integritet, da det er et antistof i blodet, og normalt ikke til stede i hjernen16,18, og derfor tilstedeværelsen af IgG i den omkringliggende hjernevæv kan være korreleret til integriteten af blod - hjerne barrieren43. Her, var IgG fluorescens intensitet normaliseret til baggrunden hjernevæv og kvantificerede starter ved grænsen af elektrode explantation hul og flytter i koncentriske placeringer indtil IgG var ikke længere til stede i vævet. De indopererede dyr viste en betydelig stigning i IgG intensitet i nærheden af hullet ud til 150 µm i forhold til kontroldyr. IgG intensiteten i de indopererede dyr gradvist tilbage til baggrunden intensitet over afstanden udstrålende fra implanterede mikroelektrode hul. I kontroldyr, har aldrig været implanteret med en mikroelektrode var normaliseret IgG intensiteten ikke til stede i betydelige mængder over baggrunden intensitet som blod - hjerne barrieren ikke blev beskadiget i disse dyr.

Fordi betydelige forskelle blev set i både stigen ydeevne og IgG intensitet, to var korreleret (figur 4). Her, var den normaliserede fluorescerende intensiteten af IgG arealet under kurven fra 0-50 µm fra grænsefladen væv-elektrode til hvert dyr korreleret med gennemsnittet af hvert dyr stigen ydeevne i løbet af undersøgelsen. En korrelationskoefficient på 0,90 blev fastsat, viser en meget stærk sammenhæng mellem den fine motorisk præstation og skader på blod - hjerne barrieren.

Figure 1
Figur 1 . Repræsentative open field test Gitterresultater. (A) dette panel viser en adfærdsmæssige test setup for en åben feltgitteret test (for grov motor og angst test). Feltet åben gitter test består af en 1 m2 akryl ark med 4 uigennemsigtig væggene i 40 cm i højden og kvadratisk bund sektioner af ca 33 cm. (B) dette panel viser en grov motorik ydelse målt ved antallet af gitterlinjer krydsede, i forhold til baseline ydeevne. En væsentlig forskel i ydelse blev set mellem kontrolelementet (n = 10), og en indopereret (n = 17) grupper på 2 uger efter operationen (p < 0,05). Alle fejl er rapporteret som SEM. Dette tal er genoptrykt fra Goss-Varley et al. 27 med tilladelse fra naturen Publishing Group. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 2
Figur 2 . Repræsentative stigen testresultater. (A) dette panel viser en adfærdsmæssige test setup for en stige test (for fine motorik test). Stigen består af 2 klar akryl sider af 1 m i længden og 25 cm i højden, følgeskab af rustfrit stål trinene fordelt på 2 cm med en 3 mm diameter. (B) dette panel viser fin motorik præstationer målt med tid til at krydse stigen, i forhold til baseline ydeevne. Resultater under den stiplede linje angiver en forringelse af ydeevnen i forhold til baseline ydeevne. En væsentlig forskel i ydelse blev opdaget mellem kontrolelementet (n = 10), og en indopereret (n = 17) grupper for post-kirurgi uger 3-16 (* = p < 0,05, ** = p < 0,01) og på langs på tværs af hele studere () # = p < 0,05). (C) dette panel viser en kvantificeret forekomst af højre front pote underkjoler. En væsentlig forskel var opdaget i forekomsten af højre front pote underkjoler pr. uge når man sammenligner kontrollen og de indopererede grupper (* = p < 0,05). (D) Dette er et eksempel på en pote slip. Alle fejl er rapporteret som SEM. Dette tal er genoptrykt fra Goss-Varley et al. 27 med tilladelse fra naturen Publishing Group. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 3
Figur 3 . Repræsentative greb styrke testresultater. (A) dette panel viser en adfærdsmæssige test setup for gribestyrke (for fine motorik test). Greb styrke måleren består af en vejede base med en monteret styrke gauge tilsluttet en greb styret. (B) dette panel viser fin motorik ydeevne, målt ved den maksimale gribestyrke udøves i forhold til baseline ydeevne. Resultater under den stiplede linje angiver en forringelse af ydeevnen i forhold til baseline ydeevne. Betydelige forskelle blev set mellem kontrolelementet (n = 5), og en indopereret (n = 6) dyr for næsten alle post-operative uger (* = p < 0,05, ** = p < 0,01, *** = p < 0,001). Yderligere betydning blev set mellem kontroldyr ugentlige og baseline forestillinger (# = p < 0,05) og mellem den indopererede dyr ugentlige og baseline forestillinger (## = p < 0,01). Kontrollen og de indopererede dyr udføres væsentligt anderledes på langs på tværs af hele undersøgelsen (@@@ = p < 0,001). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 4
Figur 4 . Korrelation af IgG og stigen ydeevne. En normaliseret IgG fluorescens intensitet omkring stedet for implantation var korreleret med en ændring i stigen ydeevne, og en korrelationskoefficient på 0.901 blev fundet (p < 0,001). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Table 1
Bord 1. Samlede repræsentative adfærd data viser stige og falde i ydeevne i forhold til baseline scores for hver test metrikværdi. De grønne bokse repræsenterer en forbedret ydeevne, hvilket gør en motor underskud usandsynligt, og de røde bokse repræsenterer en nedsat ydeevne, hvilket gør motorik underskud sandsynligvis.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Den protokol, der er skitseret her har været brugt til effektivt og reproducerbar måling af både fint og groft motor underskud i en model af gnaver hjerneskade. Desuden, det giver mulighed for korrelation af fine motor adfærd til histologisk resultater efter en mikroelektrode implantation i den motoriske cortex. Metoderne er let at følge og billig at etablere, og kan ændres til at passe en forsker individuelle behov. Yderligere, opførsel test ikke forårsager stor stress eller smerte til dyr; Forskerne tror snarere, dyrene voksede til at nyde motion og belønninger, der fulgte med test. Tidligere undersøgelser har antydet, at motor cortex skader kan forårsage motor, hukommelse og funktionelle skader44,45. Men trods denne viden, der er begrænsede oplysninger om de funktionelle virkninger forårsaget af mikroelektrode implantation i den motoriske hjernebark27, som kunne have en negativ effekt de kliniske resultater hos patienter.

Ændringer kan foretages i hele protokollen, både i den kirurgiske procedure og adfærd test. Denne protokol beskriver proceduren, at implantatet microelectrodes i den motoriske hjernebark af dyr i den region, der påvirker forepaws. Denne procedure kan tilpasses nemt for at variere implantat, herunder elektroder til elektrisk stimulation46 eller cannulas for drug delivery47, eller typen skade, herunder en TBI model48. Kan foretages yderligere ændringer til scoring metrikværdier på friland gitter test, og at stigen test apparater. Ud over antallet gitterlinjer krydsede, den samlede afstand rejste, og den maksimale hastighed opnås ved dyret, tid brugt stagnerende og antallet af højre og venstre sving kan også registreres som yderligere parametre af motorisk præstation32 . Stigen-test, kan fjernelse trin49 eller anbringe stigen på en hældning50 øge sværhedsgrad, selv med de nuværende implantater forfatterne ikke fandt det nødvendigt at drille ud fine motor underskud i dette program. Endelig, selvom testapparater præsenteres her var designet til at bruges med rotter, enhederne kunne skaleres op eller ned til brug med forskellige størrelser gnavere. Det er vigtigt at bemærke, at hvis der opstår problemer, hvor et dyr er ikke i stand til at fuldføre den pre-kirurgi test konsekvent, dyret bør fjernes fra undersøgelsen.

Som med alle adfærdsmæssige test, er det kritisk at forblive så konsekvent som muligt i løbet af undersøgelsen. Det har vist sig at testresultater kan variere baseret på den forsker, der arbejder med dyr51, den placering, hvor den test er udført52og miljøfaktorer herunder animalske boliger og dyrehold procedurer53. Derudover har forskning vist stor variation i producerer en hjerneskade som skull varme under en kraniotomi procedure31 og modeller af TBI herunder vægt-slip model54 og mekaniske variation i en kontrolleret kortikale virkning model55. Forskerne bør derfor tage særlig omhu for at bevare sammenhængen i den kirurgiske procedure, afprøvning og boligforhold, og i de test personale, blandt andre.

Fremtidige retninger af disse opførsel testmetoder kunne udvide den test præsenteret her for at give mere grundig resultater. For eksempel kunne en vand maze test eller en rotor stang test indarbejdes for at udtrække angst56 eller grov motorik57 underskud, henholdsvis. Fremtidige arbejde kan derudover også sigte mod at reducere vævsskader forårsaget af en enhed indsættelse i hjernen. Igangværende arbejde på dette område har fokuseret på betændelse afbødning gennem anti-oxidant behandlinger42,58, mekanisk kompatibel implantater41,59,60, hæmning af den medfødte immunitet signalering vej14,15, og at reducere vaskulære skader under en enhed implantation31,61.

Endelig skal det overvejes, at det igangværende arbejde blev afsluttet ved hjælp af sunde, unge, mandlige rotter, der ikke nødvendigvis repræsenterer de særlige kendetegn ved den typiske menneskelige patienten modtager en hjerne implantat. Yderligere forskning at udforske yderligere fin og grov motorik opgaver i karakteristiske sygdomsmodeller skal ratificere resultaterne præsenteres her. I varierende sygdomsmodeller kræver forskelle mellem implanterede og ikke implanteret sham dyr, at de ovennævnte ændringer at teste betingelser.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ikke noget at oplyse.

Acknowledgments

Denne undersøgelse var delvist understøttet af Merit anmeldelse Award #B1495-R (Capadona) og den præsidentielle tidlige karriere Award for forskere og ingeniører (PECASE, Capadona) fra de Forenede Stater (USA) Institut for veteraner anliggender rehabilitering forskning og Udvikling af Service. Derudover blev dette arbejde støttet i en del af kontor for Assistant Secretary of Defense for sundhed anliggender gennem Peer Reviewed medicinske forskningsprogrammet under Award No. W81XWH-15-1-0608. Oplysningerne repræsenterer ikke synspunkter US Department of veterananliggender eller de Forenede Staters regering. Forfatterne vil gerne takke Dr. Hiroyuki Arakawa i CWRU gnaver adfærd kerne til hans vejledning i at designe og teste gnaver adfærdsmæssige protokoller. Forfatterne ønsker også at takke James Drake og Kevin Talbot fra den CWRU afdeling af mekanisk og astronautik for deres hjælp i design og fremstilling gnaver stigen test.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Sprague Dawley rats, male, 201-225g Charles River CD
Compac5 anesthesia system Vetequip 901812
Electric trimmers Wahl 9918-6171
Stereotaxic frame David Kopf Instruments 1760
Gaymar heated water pad and pump Braintree Scientific Inc  TP-700
Vetbond tissue adhesive 3M 07-805-5031
Dental drill Pearson Dental O60-0045
Dura pick Fine Science Tools 10064-14
Silicon shank microelectrode Made in-house at Cleveland VA Medical Center N/A
KwikCast silicone elastomer World Precision Instruments KWIK-CAST
Teets dental cement  A-M Systems 525000
Webcam HD Pro c920 Logitec 960-000764
Grip strength meter Harvard Apparatus 565084
Minitab 17 statistical software Minitab Inc
Open field grid test Made in-house at Case Western Reserve University N/A
Ladder test Made in-house at Case Western Reserve University N/A
Rabbit anti rat IgG antibody Bio-Rad 618501

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Donoghue, J. P. Bridging the brain to the world: a perspective on neural interface systems. Neuron. 60 (3), 511-521 (2008).
  2. McFarland, D. J., Sarnacki, W. A., Wolpaw, J. R. Electroencephalographic (EEG) control of three-dimensional movement. Journal of Neural Engineering. 7 (3), 036007 (2010).
  3. Wolpaw, J. R., McFarland, D. J. Control of a two-dimensional movement signal by a noninvasive brain-computer interface in humans. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (51), 17849-17854 (2004).
  4. Bell, C. J., Shenoy, P., Chalodhorn, R., Rao, R. P. Control of a humanoid robot by a noninvasive brain-computer interface in humans. Journal of Neural Engineering. 5 (2), 214-220 (2008).
  5. Collinger, J. L., et al. High-performance neuroprosthetic control by an individual with tetraplegia. The Lancet. 381 (9866), 557-564 (2013).
  6. Hochberg, L. R., et al. Reach and grasp by people with tetraplegia using a neurally controlled robotic arm. Nature. 485 (7398), 372-375 (2012).
  7. Ajiboye, A. B., et al. Restoration of reaching and grasping movements through brain-controlled muscle stimulation in a person with tetraplegia: a proof-of-concept demonstration. The Lancet. 389 (10081), 1821-1830 (2017).
  8. Bowsher, K., et al. Brain-computer interface devices for patients with paralysis and amputation: a meeting report. Journal of Neural Engineering. 13 (2), 023001 (2016).
  9. Taylor, D. M., Tillery, S. I., Schwartz, A. B. Direct cortical control of 3D neuroprosthetic devices. Science. 296 (5574), 1829-1832 (2002).
  10. Taylor, D. M., Tillery, S. I., Schwartz, A. B. Information conveyed through brain-control: cursor versus robot. IEEE Transactions on Neural Systems and Rehabilitation Engineering. 11 (2), 195-199 (2003).
  11. Jorfi, M., Skousen, J. L., Weder, C., Capadona, J. R. Progress towards biocompatible intracortical microelectrodes for neural interfacing applications. Journal of Neural Engineering. 12 (1), 011001 (2015).
  12. Anderson, D. J. Penetrating multichannel stimulation and recording electrodes in auditory prosthesis research. Hearing Research. 242 (1-2), 31-41 (2008).
  13. Pourfar, M., et al. Assessing the microlesion effect of subthalamic deep brain stimulation surgery with FDG PET. Journal of Neurosurgery. 110 (6), 1278-1282 (2009).
  14. Hermann, J. K., et al. Inhibition of the cluster of differentiation 14 innate immunity pathway with IAXO-101 improves chronic microelectrode performance. Journal of Neural Engineering. , (2018).
  15. Bedell, H. W., et al. Targeting CD14 on blood derived cells improves chronic intracortical microelectrode performance in chronic modified state of neuroinflammation. Biomaterials. 163, 163-173 (2018).
  16. Kozai, T. D. Y., Jaquins-Gerstl, A. S., Vazquez, A. L., Michael, A. C., Cui, X. T. Brain tissue responses to neural implants impact signal sensitivity and intervention strategies. ACS Chemical Neuroscience. 6 (1), 48-67 (2015).
  17. Rennaker, R. L., Miller, J., Tang, H., Wilson, D. A. Minocycline increases quality and longevity of chronic neural recordings. Journal of Neural Engineering. 4 (2), 1-5 (2007).
  18. Saxena, T., et al. The impact of chronic blood-brain barrier breach on intracortical electrode function. Biomaterials. 34 (20), 4703-4713 (2013).
  19. Kozai, T. D., et al. Effects of caspase-1 knockout on chronic neural recording quality and longevity: insight into cellular and molecular mechanisms of the reactive tissue response. Biomaterials. 35 (36), 9620-9634 (2014).
  20. Biran, R., Martin, D., Tresco, P. Neuronal cell loss accompanies the brain tissue response to chronically implanted silicon microelectrode arrays. Experimental Neurology. 195 (1), 115-126 (2005).
  21. Potter, K. A., Buck, A. C., Self, W. K., Capadona, J. R. Stab injury and device implantation within the brain results in inversely multiphasic neuroinflammatory and neurodegenerative responses. Journal of Neural Engineering. 9 (4), 046020 (2012).
  22. Szarowski, D. H., et al. Brain responses to micro-machined silicon devices. Brain Research. 983 (1-2), 23-35 (2003).
  23. Gunasekera, B., Saxena, T., Bellamkonda, R., Karumbaiah, L. Intracortical recording interfaces: current challenges to chronic recording function. ACS Chemical Neuroscience. 6 (1), 68-83 (2015).
  24. Villalobos, J., et al. Preclinical evaluation of a miniaturized Deep Brain Stimulation electrode lead. Conference Proceedings: Annual International Conferences of the IEEE Engineering in Medicine and Biology Society. 2015, 6908-6911 (2015).
  25. Zhong, Y., Bellamkonda, R. V. Controlled release of anti-inflammatory agent alpha-MSH from neural implants. Journal of Controlled Release. 106 (3), 309-318 (2005).
  26. Gage, G. J., et al. Surgical implantation of chronic neural electrodes for recording single unit activity and electrocorticographic signals. Journal of Visualized Experiments. (60), e3565 (2012).
  27. Goss-Varley, M., et al. Microelectrode implantation in motor cortex causes fine motor deficit: implications on potential considerations to brain computer interfacing and human augmentation. Scientific Reports. 7, 15254 (2017).
  28. Metz, G. A., Whishaw, I. Q. Cortical and subcortical lesions impair skilled walking in the ladder rung walking test: a new task to evaluate fore- and hindlimb stepping, placing, and co-ordination. Journal of Neuroscience Methods. 115 (2), 169-179 (2002).
  29. Bailey, K. R., Crawley, J. N. Anxiety-related behaviors in mice. Methods of Behavior Analysis in Neuroscience. Buccafusco, J. J. , CRC Press. Boca Raton, FL. chapter 5 (2009).
  30. Prut, L., Belzung, C. The open field as a paradigm to measure the effects of drugs on anxiety-like behaviors: a review. European Journal of Pharmacology. 463 (1-3), 3-33 (2003).
  31. Shoffstall, A. J., et al. Potential for thermal damage to the blood-brain barrier during craniotomy procedure: implications for intracortical recording microelectrodes. Journal of Neural Engineering. , (2017).
  32. Dona, K. R., et al. A novel single animal motor function tracking system using MATLAB's computer vision toolbox to assess functional deficits. Journal of Visualized Experiments. , Under Review (2018).
  33. Ereifej, E. S., et al. Implantation of neural probes in the brain elicits oxidative stress. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. , (2018).
  34. Ereifej, E. S., et al. The neuroinflammatory response to nanopatterning parallel grooves into the surface structure of intracortical microelectrodes. Advanced Functional Materials. , (2017).
  35. Ravikumar, M., et al. The roles of blood-derived macrophages and resident microglia in the neuroinflammatory response to implanted intracortical microelectrodes. Biomaterials. 0142-9612 (35), 8049-8064 (2014).
  36. Potter-Baker, K. A., et al. A comparison of neuroinflammation to implanted microelectrodes in rat and mouse models. Biomaterials. 34, 5637-5646 (2014).
  37. Nguyen, J. K., et al. Influence of resveratrol release on the tissue response to mechanically adaptive cortical implants. Acta Biomaterialia. 29, 81-93 (2016).
  38. Ravikumar, M., et al. The effect of residual endotoxin contamination on the neuroinflammatory response to sterilized intracortical microelectrodes. Journal of Materials Chemistry B. 2, 2517-2529 (2014).
  39. Potter, K. A., Simon, J. S., Velagapudi, B., Capadona, J. R. Reduction of autofluorescence at the microelectrode-cortical tissue interface improves antibody detection. Journal of Neuroscience Methods. 203 (1), 96-105 (2012).
  40. Potter, K. A., et al. Curcumin-releasing mechanically-adaptive intracortical implants improve the proximal neuronal density and blood-brain barrier stability. Acta Biomaterialia. 10 (5), 2209-2222 (2014).
  41. Nguyen, J. K., et al. Mechanically-compliant intracortical implants reduce the neuroinflammatory response. Journal of Neural Engineering. 11, 056014 (2014).
  42. Potter, K. A., et al. The effect of resveratrol on neurodegeneration and blood brain barrier stability surrounding intracortical microelectrodes. Biomaterials. 34, 7001-7015 (2013).
  43. McConnell, G. C., et al. Implanted neural electrodes cause chronic, local inflammation that is correlated with local neurodegeneration. Journal of Neural Engineering. 6 (5), 056003 (2009).
  44. Hamm, R. J., Pike, B. R., O'Dell, D. M., Lyeth, B. G., Jenkins, L. W. The rotarod test: an evaluation of its effectiveness in assessing motor deficits following traumatic brain injury. Journal of Neurotrauma. 11 (2), 187-196 (1994).
  45. Teuber, H. L. Recovery of function after brain injury in man. Ciba Foundation Symposium. (34), 159-190 (1975).
  46. Carmel, J. B., Kimura, H., Martin, J. H. Electrical stimulation of motor cortex in the uninjured hemisphere after chronic unilateral injury promotes recovery of skilled locomotion through ipsilateral control. Journal of Neuroscience. 34 (2), 462-466 (2014).
  47. Hayn, L., Koch, M. Suppression of excitotoxicity and foreign body response by memantine in chronic cannula implantation into the rat brain. Brain Research Bulletin. 117, 54-68 (2015).
  48. Marklund, N. Rodent models of traumatic brain injury: methods and challenges. Methods in Molecular Biology. 1462, 29-46 (2016).
  49. Metz, G. A., Whishaw, I. Q. The ladder rung walking task: a scoring system and its practical application. Journal of Visualized Experiments. (28), e1204 (2009).
  50. Pajoohesh-Ganji, A., Byrnes, K. R., Fatemi, G., Faden, A. I. A combined scoring method to assess behavioral recovery after mouse spinal cord injury. Neuroscience Research. 67 (2), 117-125 (2010).
  51. Chesler, E. J., Wilson, S. G., Lariviere, W. R., Rodriguez-Zas, S. L., Mogil, J. S. Influences of laboratory environment on behavior. Nature Neuroscience. 5 (11), 1101-1102 (2002).
  52. Crabbe, J. C., Wahlsten, D., Dudek, B. C. Genetics of mouse behavior: interactions with laboratory environment. Science. 284 (5420), 1670-1672 (1999).
  53. Richter, S. H., Garner, J. P., Auer, C., Kunert, J., Wurbel, H. Systematic variation improves reproducibility of animal experiments. Nature Methods. 7 (3), 167-168 (2010).
  54. Xiong, Y., Mahmood, A., Chopp, M. Animal models of traumatic brain injury. Nature Reviews Neuroscience. 14 (2), 128-142 (2013).
  55. Osier, N. D., Dixon, C. E. The controlled cortical impact model: applications, considerations for researchers, and future directions. Frontiers in Neurology. 7, 134 (2016).
  56. Harrison, F. E., Hosseini, A. H., McDonald, M. P. Endogenous anxiety and stress responses in water maze and Barnes maze spatial memory tasks. Behavioural Brain Research. 198 (1), 247-251 (2009).
  57. Jackson, J. R., et al. Reduced voluntary running performance is associated with impaired coordination as a result of muscle satellite cell depletion in adult mice. Skeletal Muscle. 5, 41 (2015).
  58. Potter-Baker, K. A., et al. Implications of chronic daily anti-oxidant administration on the inflammatory response to intracortical microelectrodes. Journal of Neural Engineering. 12 (4), 046002 (2015).
  59. Ware, T., Simon, D., Rennaker, R. L., Voit, W. Smart polymers for neural interfaces. Polymer Reviews. 53 (1), 108-129 (2013).
  60. Ecker, M., et al. Sterilization of thiol-ene/acrylate based shape memory polymers for biomedical applications. Macromolecular Materials and Engineering. 302 (2), 160331 (2017).
  61. Kozai, T., et al. Reduction of neurovascular damage resulting from microelectrode insertion into the cerebral cortex using in vivo two-photon mapping. Journal of Neural Engineering. 7 (4), 046011 (2010).

Tags

Bioteknologi spørgsmålet 138 adfærd rotte iatrogen skade hjernen traumer TBI stigen åben feltgitteret gribestyrke
Gnaver adfærdsmæssige test for at vurdere funktionelle mangler forårsaget af mikroelektrode Implantation i rotte motoriske Cortex
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Goss-Varley, M., Shoffstall, A. J.,… More

Goss-Varley, M., Shoffstall, A. J., Dona, K. R., McMahon, J. A., Lindner, S. C., Ereifej, E. S., Capadona, J. R. Rodent Behavioral Testing to Assess Functional Deficits Caused by Microelectrode Implantation in the Rat Motor Cortex. J. Vis. Exp. (138), e57829, doi:10.3791/57829 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter