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Environment

एक 3 आयामी (3 डी)-उच्च प्रवाह Zebrafish भ्रूण सरणी के लिए टेंपलेट मुद्रित

doi: 10.3791/57892 Published: June 1, 2018

Summary

यहां, हम एक को डिजाइन प्रोटोकॉल वर्तमान और एक zebrafish भ्रूण सरणी टेंपलेट, उच्च प्रवाह zebrafish एक ९६-अच्छी तरह से थाली में सरणी भ्रूण के लिए टेंपलेट के उपयोग पर एक विस्तृत प्रक्रिया के बाद बनाना ।

Abstract

zebrafish एक विश्व स्तर पर मांयता प्राप्त ताजा पानी अक्सर विकास जीव विज्ञान, पर्यावरण विषविज्ञान, और मानव रोग से संबंधित अनुसंधान क्षेत्रों में इस्तेमाल किया जीव है । बड़ी fecundity, भ्रूण translucency, तेजी से और एक साथ विकास, आदिसहित अपनी अनूठी विशेषताओं के लिए धन्यवाद, zebrafish भ्रूण अक्सर रसायनों और दवा के बड़े पैमाने पर विषाक्तता आकलन के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं/कंपाउंड स्क्रीनिंग । एक ठेठ स्क्रीनिंग प्रक्रिया वयस्क zebrafish अंडे शामिल है, भ्रूण चयन, और बहु में भ्रूण सरणी अच्छी तरह से प्लेटें । वहां से, भ्रूण प्रदर्शन और रासायनिक की विषाक्तता के अधीन हैं, या दवाओं की प्रभावशीलता/यौगिकों अपेक्षाकृत जल्दी phenotypic टिप्पणियों के आधार पर मूल्यांकन किया जा सकता है । इन प्रक्रियाओं के अलावा, सरणी भ्रूण एक सबसे अधिक समय लेने वाली और श्रम गहन कदम है कि प्रवाह स्तर सीमा में से एक है । इस प्रोटोकॉल में, हम एक अभिनव दृष्टिकोण है कि एक 3 डी मुद्रित सरणी वैक्यूम हेरफेर के साथ मिलकर इस श्रमसाध्य कदम को गति टेंपलेट का उपयोग करता है वर्तमान । इस के साथ साथ प्रोटोकॉल सरणी टेम्पलेट, एक विस्तृत प्रायोगिक सेटअप और कदम दर कदम प्रक्रिया, प्रतिनिधि परिणामों के बाद के समग्र डिजाइन का वर्णन करता है । जब कार्यांवित, यह दृष्टिकोण अनुसंधान अनुप्रयोगों के परीक्षण विषयों के रूप में zebrafish भ्रूण का उपयोग कर की एक किस्म में फायदेमंद साबित करना चाहिए ।

Introduction

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एक लोकप्रिय मॉडल जीव के रूप में, zebrafish चिकित्सा और विषविज्ञान1,2,3,4के खेतों में व्यापक रूप से प्रयोग किया जाता है । इन विट्रो प्लेटफार्मों में की तुलना में, zebrafish एक या दो सेल प्रकार की पेशकश नहीं कर सकता है कि बहुत अधिक जैविक जटिलताओं की पेशकश करते हैं । एक पूरे जीव मॉडल जा रहा है इसके अलावा, zebrafish के बड़े fecundity, तेजी से और एक साथ भ्रूण विकास, और उच्च अंग translucency बड़े पैमाने पर विषाक्तता या दवाओं के लिए इस्तेमाल किया जा करने के लिए इस मॉडल अद्वितीय लाभ दिया है/ वयस्क zebrafish की एक जोड़ी द्वारा उत्पादित भ्रूण के सैकड़ों प्रत्येक सप्ताह किसी भी अन्य पूरे जानवर मॉडल को पार और यह उच्च प्रवाह स्क्रीनिंग के लिए उपयुक्त बना दिया है ।

एक ठेठ स्क्रीनिंग प्रक्रिया zebrafish का उपयोग कर ऐसे वयस्क zebrafish के रूप में मैनुअल काम, के एक महत्वपूर्ण राशि शामिल है, भ्रूण चयन, और उपयुक्त कंटेनरों में सरणी भ्रूण जहां वे जल विसर्जन के माध्यम से जोखिम के अधीन हैं । भ्रूण के विकास पर नजर रखी है और ऐसी मृत्यु, सेने और विषमता के रूप में अवलोकन अंतिमबिंदु अक्सर मैंयुअल रूप से मूल्यांकन कर रहे है और रसायनों या की प्रभावशीलता के संकेत के विषाक्तता के प्रारंभिक पहचान के रूप में इस्तेमाल किया दवाओं या यौगिकों । स्क्रीनिंग प्रक्रिया को गति देने के लिए, इस तरह के स्वचालित इमेजिंग और कंप्यूटर की सहायता से छवि विश्लेषण के रूप में दृष्टिकोण पहले से पता लगाया गया है । उदाहरण के लिए, उच्च सामग्री इमेजिंग क्षमताओं के साथ सूक्ष्मदर्शी को स्वचालित उज्ज्वल क्षेत्र या zebrafish भ्रूण पर प्रतिदीप्ति इमेजिंग 96/384 अच्छी तरह से6प्लेटों से विभिंन विकासात्मक चरणों में प्रदर्शन के लिए अनुकूलित किया गया है । Microfluidic माइक्रोस्कोप के साथ मिलकर उपकरणों मस्तिष्क न्यूरॉन्स की इमेजिंग के लिए वर्तमान हेरफेर के माध्यम से zebrafish लार्वा की स्थिति के लिए इस्तेमाल किया गया7. इन तरीकों काफी पारंपरिक मैनुअल आपरेशन की तुलना में छवि अधिग्रहण की दक्षता में सुधार सकता है । इसके अलावा, छवियों की बड़ी संख्या के साथ उत्पंन किया जा रहा है, छवि विश्लेषण उपकरण भी करने के लिए डेटा प्रोसेसिंग की गति विकसित किया गया है, के रूप में लियू एट अल. और टू एट अल । 8 , 9.

इमेजिंग और छवि विश्लेषण बढ़ जाती है के प्रवाह स्तर के रूप में, यह स्पष्ट है कि दर को परखने के लिए कदम सीमित जोखिम है, जो आम तौर पर उंहें ९६ में सरणी का मतलब है के लिए zebrafish भ्रूण तैयार करने की प्रक्रिया में निहित है-या ३८४-अच्छी तरह से प्लेटें । इस अड़चन कदम को हल करने के लिए विजन-गाइडेड रोबोटिक Mandrell एट अल द्वारा विकसित किया गया । 10 और अमेरिका11 पहले मैनुअल हैंडलिंग की जगह लेकिन उपकरणों बल्कि परिष्कृत थे और वहां एक गहरी सीखने की अवस्था ऐसी तकनीकों को लागू करने के लिए है । इसलिए, एक आसान करने के लिए उपयोग दृष्टिकोण प्रदान करने के लिए आगे zebrafish स्क्रीनिंग का प्रवाह स्तर में सुधार करने के लिए एक महत्वपूर्ण कारक बन जाता है और इस काम का मुख्य उद्देश्य है ।

इस काम में, हम डिजाइन और 3 डी मुद्रण द्वारा टेंपलेट एक भ्रूण सरणी गढ़े । इस तरह के एक सरणी टेंपलेट कुओं में zebrafish भ्रूण entrap कि एक मानक ९६-अच्छी तरह से थाली के साथ फिट डिजाइन किया गया था । इसके बजाय भ्रूण का चयन और उंहें एक एक करके व्यक्तिगत रूप से एक में सरणी, एक भ्रूण फंसाने और एक बहु परत थाली में सभी ९६ भ्रूण सरणी एक बार में प्रदर्शन कर सकता है । इस टेम्पलेट और निम्न प्रोटोकॉल का उपयोग करते हुए, एक काफी बहु परत प्लेटों, जो अवधि में स्क्रीनिंग की क्षमता को बढ़ावा देने में होगा, मैन्युअल ऑपरेशन की तुलना में भ्रूण सरणी की दक्षता में वृद्धि हो सकती है. नीचे वर्णित प्रोटोकॉल सरणी टेंपलेट के लिए एक समग्र डिजाइन, zebrafish अंडे, भ्रूण संग्रह, और सरणी शामिल है । चित्र 1 सरणी टेंपलेट के समग्र डिज़ाइन को दिखाता है । आरेख 2 भागों 3 और 4 में वर्णित टेंपलेट के उपयोग पर चरण-दर-चरण प्रोटोकॉल का ओवरव्यू दिखाता है ।

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Protocol

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1. डिजाइन और एक Zebrafish के निर्माण टेंपलेट सरणी भ्रूण

  1. डिजाइन सरणी एक 12 से 8, ९६-अच्छी तरह से लेआउट है कि एक मानक ९६-अच्छी तरह से प्लेट फिट बैठता है के साथ टेंपलेट । ऊपरी भ्रूण फंसाने चैंबर के लिए चित्र 1a में सूचीबद्ध आयामों का उपयोग करें (पूरक फ़ाइल भी देखें).
    1. अच्छी तरह से फंसाने के लिए चित्रा 1b और 1 डी में दिखाया आयामों का प्रयोग करें ।
    2. नीचे वैक्यूम चैंबर के लिए चित्रा 1C में आयामों का उपयोग करें ।
    3. /आउटलेट में हवा के लिए चित्र 1b में आयामों का उपयोग करें ।
  2. टेंपलेट मुद्रित करने के लिए 3d प्रिंटर (०.१ mm शुद्धता के साथ) का उपयोग करें; मुद्रण के लिए इस्तेमाल किया जा करने के लिए अनुशंसित राल के लिए सामग्री की तालिका देखें ।
    नोट: ०.१ mm परिशुद्धता के साथ 3d प्रिंटर सरणी टेंपलेट के निर्माण के लिए अनुशंसित है ( सामग्री की तालिकादेखें) । टेम्पलेट की सतह के लिए सुझाए गए रंग डार्क ग्रे या काला है ।

2. Zebrafish भ्रूण पैदा करना

  1. संभोग बॉक्स प्रति पुरुष और महिला मछली के दो जोड़े जगह एक दिन के लिए अंडे से पहले । एक स्पष्ट प्लास्टिक विभक्त द्वारा अलग पुरुषों और महिलाओं ।
  2. सुबह में डिवाइडर से उतारकर नर और मादा मछली को मिक्स कर लें ।
  3. पुरुष और मादा मछली निकालें और एक ठीक जाल छलनी का उपयोग कर zebrafish भ्रूण इकट्ठा । २५० मिलीलीटर अंडे के पानी के साथ भ्रूण धो ( सामग्री की तालिकादेखें) ।
  4. पेट्री व्यंजन (व्यास में ९० मिमी) के लिए एकत्र भ्रूण हस्तांतरण Holtfreter समाधान के साथ ( सामग्री की तालिकादेखें) और एक stereomicroscope का उपयोग कर मृत और निषेचित भ्रूण को हटा दें ।
  5. एक २८.५ डिग्री सेल्सियस मशीन में भ्रूण प्लेस । 4 एच पोस्ट निषेचन (hpf) में, भ्रूण का पालन करें और किसी भी मृत और अस्वस्थ भ्रूण को दूर । भ्रूण अब अगले कदम के लिए तैयार है ।

3. सरणी टेंपलेट की तैयारी

  1. 2 टेंपलेट धो-५०० मिलीलीटर पानी के साथ 3 बार और सुखाने ओवन में डाल (४५ ° c) 5 मिनट के लिए ।
  2. फिल्म सील (चित्रा 2, चरण 1) के एक टुकड़े के साथ नीचे चैंबर टेप ।
  3. टेंपलेट के तल पर एयर आउटलेट के माध्यम से एक वैक्यूम पंप कनेक्ट ।
    नोट: वैक्यूम पंप के लिए अनुशंसित मैक्स वैक्यूम ०.१ Mpa है । वैक्यूम इस्तेमाल की ताकत के बारे में पता होना । यदि नकारात्मक दबाव भी मजबूत है, सील फिल्म पर एक पार आकार के छेद में कटौती करने के लिए दबाव कम ।

4. एक ९६-अच्छी तरह से थाली में सरणी Zebrafish भ्रूण

  1. एक प्लास्टिक हस्तांतरण पिपेट का उपयोग करना, टेंपलेट में लगभग १५० भ्रूण प्लेस, के रूप में चित्रा 2, चरण 2 में प्रदर्शन किया ।
  2. एयर आउटलेट के लिए वैक्यूम पंप कनेक्ट करने के लिए कदम ३.३ में सील फिल्म द्वारा सील चैंबर में नकारात्मक दबाव उत्पंन ।
  3. हिला पूरे क्षैतिज टेंपलेट जब तक एक अच्छी तरह से एक भ्रूण फंस है (चित्रा 2, चरण 3) ।
    नोट: यदि Holtfreter के समाधान से पहले सूख जाता है भ्रूण एक अच्छी तरह से फंस रहे हैं, फंसाने चैंबर में अतिरिक्त Holtfreter समाधान जोड़ने और इस कदम को दोहराने ।
  4. अतिरिक्त Holtfreter का समाधान और भ्रूण है कि कुओं में फंस नहीं है त्यागें (चित्रा 2, चरण 4) ।
  5. बंद करें और वैक्यूम पंप डिस्कनेक्ट कर दें ।
  6. एक मानक ९६-अच्छी तरह से प्लेट ऊपर नीचे टेंपलेट (चित्रा 2, 5 कदम) और एक ही समय (चित्रा 2, 6 कदम) पर दोनों को घुमाएगी के खिलाफ नीचे रखें ।
  7. टेंपलेट के नीचे ठोकर या एक संपीड़ित गैस के लिए एयर आउटलेट कनेक्ट करने के लिए ९६-अच्छी तरह से प्लेट (चित्रा 2, 6 कदम) को टेंपलेट से सभी फंस भ्रूण हस्तांतरण कर सकते हैं ।
  8. दोहराएँ चरण ४.१ ४.८ करने के लिए अतिरिक्त बहु-वेल प्लेटें तैयार करने के लिए.
  9. सील फिल्म निकालें और टेंपलेट धो 3 बार ऊपर से नीचे करने के लिए ५०० मिलीलीटर भविष्य के उपयोग के लिए पानी के साथ ।
    नोट: किसी भी कार्बनिक सॉल्वैंट्स का उपयोग नहीं, इथेनॉल की तरह, को साफ करने के लिए टेंपलेट ।

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Representative Results

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आरेख 3 एक विशिष्ट 3d-मुद्रित सरणी टेंपलेट दिखाता है । इस टेम्पलेट कच्चे माल के रूप में सहज राल का उपयोग करता है और एक 3 डी प्रिंटर द्वारा बनाया गया था; भ्रूण के रंग के लिए एक बेहतर विपरीत प्रदान करने के लिए काले रंग की एक परत लागू किया गया था । ९६ कुओं की स्थिति (8 से 12) के लिए एक मानक ९६ अच्छी तरह से थाली के साथ फिट डिजाइन किया गया था । इसी तरह, एक ३८४ (24 से 16) अच्छी तरह से टेंपलेट भी डिजाइन और एक ही विधि का उपयोग कर गढ़े जा सकता है । उल्टा चैंबर एक मानक ९६ से थोड़ा बड़ा था अच्छी तरह से थाली एक बेहतर फिटिंग प्रदान करने के लिए । खांचे भी सरणी के दौरान अतिरिक्त भ्रूण पकड़ डिजाइन किए गए थे ।

मामूली दर पर, 20 प्लेट्स 30 मिनट के भीतर 3 डी मुद्रित सरणी टेम्पलेट का उपयोग कर तैयार किया जा सकता है, जबकि केवल दो से तीन प्लेटों मैन्युअल रूप से तैयार किया जा सकता है. तालिका 1 मैंयुअल, रोबोटिक, और सरणी टेंपलेट कार्रवाइयों के बीच तुलना दिखाता है । चित्रा 4 दो प्लेटों, 3 डी-मुद्रित सरणी टेम्पलेट, एक मैन्युअल रूप से तैयार द्वारा सरणी के बीच एक तुलना से पता चलता है. सरणी टेम्पलेट का उपयोग करना, वहाँ भ्रूण के साथ स्थानांतरित तरल की एक नगण्य राशि थी, जो भी इसे आगे जोखिम प्रयोगों के लिए सुविधाजनक बना दिया.

चित्रा 5 से पता चलता है कि मैनुअल और सरणी टेंपलेट तरीकों से चढ़ाया जा रहा है के बाद भ्रूण के समग्र स्वास्थ्य की स्थिति पर कोई महत्वपूर्ण प्रभाव थे । सुनिश्चित करें कि भ्रूण इस तरह के एक सरणी प्रक्रिया से प्रभावित नहीं थे बनाने के लिए, हम उंहें ९६ में सरणी के बाद भ्रूण विकास के बाद 3 दिनों के लिए अच्छी तरह से प्लेटें । सेने दर, जीवित रहने की दर, और zebrafish भ्रूण की कुरूपता दर पर 24, ४८, और ७२ hpf थे सभी भ्रूण के साथ तुलनीय मैंयुअल रूप से सरणी ।

Figure 1
चित्र 1: एक zebrafish भ्रूण सरणी टेंपलेट के डिजाइन । (A और C) 3-डी मैक्स टेम्पलेट का ओवरव्यू दिखा आरेखण । (B) टेंपलेट का क्रॉस-अनुभाग दृश्य । (D) टेंपलेट का आंशिक दृश्य । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 2
चित्र 2: सरणी टेम्प्लेट का उपयोग करते समय विशिष्ट चरण. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 3
चित्र 3:3d मुद्रित सरणी वाले टेम्पलेट की फ़ोटोग्राफ़. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 4
चित्रा 4: भ्रूण के सूक्ष्म छवियों ९६ को हस्तांतरित के बाद अच्छी तरह से थाली । (a) एक ९६-अच्छी तरह से टेंपलेट द्वारा सरणी प्लेट की आंशिक छवि । () एक ९६-अच्छी तरह से प्लेट की आंशिक छवि मैंयुअल रूप से सरणी । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 5
चित्रा 5: भ्रूण के समग्र स्वास्थ्य की स्थिति मैनुअल और सरणी टेम्पलेट विधियों द्वारा चढ़ाया जा रहा है के बाद. के आधार पर सेने, असामांय, और भ्रूण के जीवित रहने की दर या तो मैनुअल या सरणी टेंपलेट तरीकों का उपयोग कर चढ़ाया जा रहा है, भ्रूण के समग्र स्वास्थ्य पर कोई महत्वपूर्ण प्रभाव या तो मामले में मनाया गया । त्रुटि पट्टियां मानक विचलन हैं । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

मैनुअल रोबोट प्लेटफार्म सरणी टेंपलेट
चढ़ाना समय 10 – 30 मिनट/ 5 – 10 मिनट/ 1 – 2 मिनट/
लागत कम उच्च कम
आवश्यक प्रशिक्षण न्यूनतम उच्च Minumum
कार्य क्षेत्र छोटे बड़े छोटे
भ्रूण पर प्रभाव छोटे से कोई नहीं छोटे से कोई नहीं छोटे से कोई नहीं
प्रति कुआं जोड़ा तरल की मात्रा यादृच्छिक 5 – 10 µ l न्यूनतम

तालिका 1: मैंयुअल, रोबोटिक, और सरणी टेंपलेट कार्रवाइयों की तुलना ।

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Discussion

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इस प्रोटोकॉल में दो महत्वपूर्ण कदम है कि 3 डी के एक सफल कार्यांवयन के लिए करीब ध्यान की आवश्यकता है-zebrafish भ्रूण सरणी के लिए टेंपलेट मुद्रित ।

सरणी टेंपलेट के डिजाइन पर सबसे महत्वपूर्ण कारक फंसाने अच्छी तरह से है । करने के लिए यकीन है कि वहां केवल एक ही एक भ्रूण प्रत्येक में फंस गया है, एक व्यास के करीब ध्यान देना चाहिए और अच्छी तरह से फंसाने की गहराई, और छेद के माध्यम से के व्यास । अनुशंसित व्यास एक ठेठ भ्रूण (चोरियों सहित) के व्यास के १.५ से 2 बार के भीतर है । अच्छी तरह से फंसाने की गहराई एक ठेठ भ्रूण के व्यास के 2 बार के भीतर होना चाहिए (चोरियों सहित) के लिए एक ही कुआं में भ्रूण के stacking से बचने के लिए । छेद के माध्यम से का व्यास एक ठेठ भ्रूण के व्यास के लगभग आधे होना चाहिए (चोरियों सहित) को भ्रूण से बचने के लिए नकारात्मक दबाव से छेद के माध्यम से निचोड़ा जा रहा है । डिजाइन की जटिलता के कारण, 3 डी मुद्रण प्रौद्योगिकी सरणी टेंपलेट के निर्माण के लिए सिफारिश की है ।

सरणी टेंपलेट का सार निर्दिष्ट स्थानों पर व्यक्तिगत भ्रूण entrap है, यानी पदों है कि एक ९६-या ३८४ अच्छी तरह से थाली के साथ फिट बैठते हैं । एक उचित नकारात्मक उंहें नुकसान पहुंचाए बिना जगह में व्यक्तिगत भ्रूण पकड़ दबाव बनाने के लिए, एक नकारात्मक निर्वात डिवाइस द्वारा उत्पंन दबाव को समायोजित करना होगा । बहुत अधिक दबाव भ्रूण को नष्ट कर सकता है, जबकि बहुत कम दबाव उंहें कुओं में जाल नहीं हो सकता है । इसलिए, यह अत्यधिक multiwell प्लेटों में स्थानांतरित करने से पहले एक stereomicroscope के तहत टेम्पलेट में फंस भ्रूण का पालन करने के लिए सिफारिश की है. इसके अलावा, फंसाने के दौरान, भ्रूण इस प्रक्रिया के दौरान हवा से अवगत कराया जा सकता है । ऐसा होना चाहिए, कदम ४.३ के अनुसार फंसाने चैंबर में अतिरिक्त Holtfreter के माध्यम जोड़ें । इसके अलावा, क्योंकि भ्रूण की संभावना को हवा से अवगत कराया जा रहा है, वर्तमान प्रोटोकॉल dechorionated zebrafish भ्रूण पर काम नहीं करता है ।

सरणी इस काम में प्रस्तुत टेम्पलेट एक कम लागत और उच्च प्रवाह स्क्रीनिंग मंच zebrafish भ्रूण का उपयोग कर स्थापित करने के लिए एक अभिनव दृष्टिकोण प्रदान करता है । पहले से स्थापित रोबोट प्लेटफार्मों या व्यावसायिक रूप से उपलब्ध प्रवाह cytometry आधारित साधन की तुलना में, इस विधि का उपयोग करने के लिए आसान है और परिष्कृत प्रशिक्षण की आवश्यकता नहीं है । 3 डी प्रिंटिंग तकनीक का लाभ लेते हुए, एक आसानी से सरणी के प्रारूप को बदल सकता है विभिंन प्रयोजनों के लायक खाके ।

इसके वर्तमान रूप में टेम्पलेट और प्रोटोकॉल में अभी भी कुछ मैन्युअल कार्य की आवश्यकता है. प्रक्रिया को व्यवस्थित और प्रवाह स्तर में सुधार और समय की एक छोटी अवधि के भीतर तैयार multiwell प्लेटों की मात्रा में वृद्धि कर सकता है ।

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Disclosures

लेखकों ने बताया 3डी प्रिंटेड टेम्पलेट पर एक पेटेंट भर दिया है ।

Acknowledgments

यह काम "1000plan युवा" कार्यक्रम, Tongji विश्वविद्यालय से स्टार्टअप धन, और NSFC अनुदान # २१६०७११५ और २१७७७११६ (लिन) द्वारा समर्थित किया गया था ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Zebrafish Facility Shanghai Haisheng Biotech Co., Ltd. Z-A-S5
Mating box Shanghai Haisheng Biotech Co., Ltd.
Wash Bottle, 500 ml Sangon Biotech F505001-0001
Sodium chloride Vetec V900058-500G
Potassium Chloride Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd 10016318
Calcium chloride Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd 20011160
Sodium bicarbonate  Vetec v900182-500G
Methylene Blue Hydrate TCI M0501
Hydrochloric acid Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd 10011008
Sea Salts Instant Ocean SS15-10
Pipetter Fisherbrand 13-675M
Controlled Drop Pasteur Pipet Fisherbrand 13-678-30
Microscope OLYMPUS SZ61
Biochemical incubator Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd. LRH-250
3D printer UnionTech Lite600
Photosensitive resin UnionTech UTR9000
Vacuum pump Shanghai Yukang Scientific Instrument Co., Ltd. SHB-IIIA
Adhesive PCR Plate Seals Solarbio YA0245
96 well plate Costar 3599
Multi 8-channel pipette 30 - 300 μl Eppendorf 3122000.051
Compressed Gas Duster Shanghai Zhantu Chemical Co., Ltd. ST1005
DI Water Thermo GenPure Pro UV/UF
Drying oven Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd. BPG-9106A
System water Water out of the facility’s water system
Egg water Dilute 60mg “Instant Ocean” sea salts and 0.25 mg/L methylene blue in 1 L DI water
Holtfreter’s solution Dissolve 7.0 g Sodium chloride (NaCl), 0.4 g Sodium bicarbonate (NaHCO3), 0.1 g Potassium Chloride (KCl), 0.235 g Calcium chloride (CaCl2.2H2O) in 1.9 L DI water. Adjust pH to 7 using HCl and adjust volume to 2 L using Di water

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References

  1. Howe, K., et al. The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome. Nature. 496, (7446), 498-503 (2013).
  2. Leslie, M. Zebrafish larvae could help to personalize cancer treatments. Science. 357, (6353), 745-745 (2017).
  3. Lin, S., et al. Understanding the Transformation, Speciation, and Hazard Potential of Copper Particles in a Model Septic Tank System Using Zebrafish to Monitor the Effluent. ACS Nano. 9, (2), 2038-2048 (2015).
  4. Lin, S., et al. Aspect ratio plays a role in the hazard potential of ceo2 nanoparticles in mouse lung and zebrafish gastrointestinal tract. ACS Nano. 8, (5), 4450-4464 (2014).
  5. Baraban, S. C., Dinday, M. T., Hortopan, G. A. Drug screening in Scn1a zebrafish mutant identifies clemizole as a potential Dravet syndrome treatment. Nature Communications. 4, (2013).
  6. Lin, S., et al. High content screening in zebrafish speeds up hazard ranking of transition metal oxide nanoparticles. ACS Nano. 5, (9), 7284-7295 (2011).
  7. Kuipers, J., Kalicharan, R. D., Wolters, A. H. G., van Ham, T. J., Giepmans, B. N. G. Large-scale Scanning Transmission electron microscopy (nanotomy) of healthy and injured zebrafish brain. Journal of Visualized Experiments. (111), (2016).
  8. Liu, R., et al. Automated Phenotype Recognition for Zebrafish Embryo Based In vivo High Throughput Toxicity Screening of Engineered Nano-Materials. PLoS One. 7, (4), (2012).
  9. Tu, X., et al. Automatic Categorization and Scoring of Solid, Part-Solid and Non-Solid Pulmonary Nodules. in CT Images with Convolutional Neural Network. Scientific Reports. 7, 8533 (2017).
  10. Mandrell, D., et al. Automated zebrafish chorion removal and single embryo placement: optimizing throughput of zebrafish developmental toxicity screens. Journal of Laboratory Automation. 17, (1), 66-74 (2012).
  11. Lin, S., Zhao, Y., Nel, A. E., Lin, S. Zebrafish: An in vivo model for nano EHS studies. Small. 9, (9-10), 1608-1618 (2013).
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Yu, T., Jiang, Y., Lin, S. A 3-dimensional (3D)-printed Template for High Throughput Zebrafish Embryo Arraying. J. Vis. Exp. (136), e57892, doi:10.3791/57892 (2018).More

Yu, T., Jiang, Y., Lin, S. A 3-dimensional (3D)-printed Template for High Throughput Zebrafish Embryo Arraying. J. Vis. Exp. (136), e57892, doi:10.3791/57892 (2018).

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