Summary
Hier presenteren we een protocol om een repliceerbaar geleidingsverlies inductie te creëren via chirurgische trommelvlies membraan punctie en verificatie door Otoscoop visualisatie en gedrags beoordeling door Clap Startle.
Abstract
Conductief gehoorverlies (CHL) is een overwegend gehoorstoornis bij de mens. Het doel van het protocol is om een eenvoudige chirurgische procedure te beschrijven voor het induceren van CHL bij knaagdieren. Het protocol demonstreert CHL door trommelvlies membraan punctie. Verificatie van de CHL-chirurgie was door Otoscoop-onderzoek en gedrags beoordeling door Clap schrikreactie-respons, zowel repliceerbaar als betrouwbaar, en zijn eenvoudige methoden om gehoorverlies aan te tonen. De eenvoudige CHL-procedure is voordelig vanwege de reproduceerbaarheid en flexibiliteit van verschillende activiteiten in onderzoek naar gehoorverlies. De beperkingen van inducerende CHL door een chirurgische benadering worden geassocieerd met de leercurve om de chirurgische ingreep en het vertrouwen in Audiologisch onderzoek uit te voeren. Door een gehoorstoornis door CHL te induceren, kan men gemakkelijk de neurale manifestaties en gedrags resultaten van gehoorverlies bestuderen.
Introduction
De prevalentie van het gehoorverlies bij kinderen en volwassenen is respectievelijk ongeveer 19,5%1 en 15,2%2 . Echter, ongeveer 39,3% van alle pasgeborenen met een abnormale Gehoorscreening krijgen geen corrigerende behandeling zoals gerapporteerd door de centra voor Ziektecontrole3. Gehoorverlies is een algemeen bestudeerde aandoening en het knaagdier is een robuust model voor het bestuderen van normale gehoor-en gehoor aandoeningen4,5,6,7,8,9 ,10,11,12,13,14,15. Gehoor aandoeningen zoals Conductief gehoorverlies (CHL) leiden tot een toename van de korte termijn synaptische depressie in de auditieve cortex4, wat resulteert in onlagere psychometrische hellingen geassocieerd met frequentiemodulatie detectiedrempels 5. geleidende gehoorverlies modellen door chirurgische verwijdering/verplaatsing van de malleus, trommelvlies membraan (TM) punctie of oordopje worden gemakkelijk gebruikt en maken de snelle inductie van het gehoorverlies model5,14 ,15,16,17,18. Het doel van dit protocol en de huidige methode is om een eenvoudig en reproduceerbaar CHL-model bij knaagdieren aan te tonen.
Het huidige protocol is goedkoop (≈ USD $300 met alle tools), en gemakkelijk te gebruiken voor verschillende onderzoeksactiviteiten. De rat heeft gedetailleerde beoordelingen van de anatomie van het middenoor19,20,21,22,23, chirurgische benaderingen24, modellen in otitis media25, 26,27 en TM punctie regeneratie16,17,18,28,29,30, waardoor het een ideaal model om te studeren Gehoorverlies. Hier wordt een eenvoudige CHL-inductie procedure beschreven met verificatie door Otoscoop en gedrags beoordeling met Clap schrikreactie respons bij ratten, die vervolgens kunnen worden gebruikt om extra gevolgen van gehoorverlies te onderzoeken. De CHL-procedure wordt geïnduceerd door een chirurgische punctie van de TM. Verificatie van de CHL-procedure wordt uitgevoerd door Otoscoop-visualisatie om de afwezigheid van de TM te bepalen. Gedrags beoordeling wordt uitgevoerd door een hoge decibel (dB) geluidsdrukniveau (SPL) hand-clap. Deze methode is eerder toegepast in een verscheidenheid van knaagdieren. Het is gemakkelijk te repliceren, produceert robuuste psychometrische verschillen en veranderingen in neurale fysiologische reacties4,5,16,17,18.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
De huidige studie en procedures werden goedgekeurd door de ethische comités voor onderzoek van dieren van de Universiteit van Hongkong, de University of Hong Kong en het Department of Health van de speciale administratieve regio Hongkong.
1. dieren
- Gebruik Sprague-Dawley (SD) ratten van twee maanden (N = 90, 200-250 g).
Opmerking: knaagdieren werden verstrekt door de geaccrediteerde laboratorium Animal Unit van de Universiteit van Hong Kong. - Houd de ratten onder een constante temperatuur van 25 °C en 60-70% vochtigheid bij de onderzoekseenheid voor laboratoriumdieren.
- Huis knaagdieren in 12/12-h licht/donker cycli met toegang tot voedsel en drinkwater, ad libitum.
- Acclimate knaagdieren in de huisvesting omgeving voor ten minste één dag voorafgaand aan CHL chirurgie.
- Neem het knaagdier op bij de Scruff en anesthetiseer het knaagdier met een cocktail van ketamine en xylazine (respectievelijk 80-100 mg/kg: 5-10 mg/kg) via intraperitoneale injectie (Combineer 1,0 mL ketamine met 0,5 mL xylazine als eindconcentratie).
Opmerking: gebruik een spuit van 1 mL met een 23-25G naald. Injecteer ongeveer 0,2 mL per 100 g lichaamsgewicht van de rat gedurende 30 minuten anesthesie. - Voer de teen pinch om pijn sensatie te controleren en om de juiste anesthesie te bevestigen. Een reactie op diepe teen knijpen (door terugtrekking van Hind ledemaat) duidt op onvoldoende anesthesie.
2. chirurgische installatie
- Steriliseren van alle apparatuur in een autoclaaf of hete glazen kraal sterilisator vóór het begin van de operatie. Reinig het chirurgische gebied met 70% ethanol.
- Gebruik latex handschoenen en Labcoat voordat u begint met de procedure.
- Plaats een steriele chirurgische draperen op de schone Bank (Figuur 1a).
- Steriliseren micro-schaar en een Otoscoop voorafgaand aan de operatie om oorontsteking te minimaliseren (Figuur 1b).
- Plaats de micro-schaar en Otoscoop in het steriele gebied.
- Plaats het knaagdier in het chirurgische veld en in lijn met de chirurg.
- Ga verder met de chirurgische inductie van CHL.
3. chirurgische inductie van Conductief gehoorverlies
- Plaats de staart en het hoofd van het knaagdier uitgelijnd in een liggende positie, hoofd dichtst bij de chirurg.
- Visualiseer het linker-en rechteroor van het knaagdier onder Otoscoop om een gezond tympanisch membraan te garanderen (Figuur 2a). Evalueer zowel het rechter-als het linkeroor van elke knaagdier om de gezonde toestand te controleren voorafgaand aan de CHL-inductie.
- Grijp de oorhelix en verleng de uitwendige gehoorgang (d.w.z. gehoorgang, uitwendige gehoorgang, in dit auditieve kanaal) om de binnenkant te verduisterd en door diepte te verduisterd. Hier wordt het gehoorkanaal loodrecht op het oppervlak van de TM aangebracht.
Opmerking: Zorg ervoor dat de gehoor cannel nu direct parallel is en de TM een rechte hoek vormt met de as van het inbrengen van de micro-schaar. Het zal worden gevisualiseerd als een zwarte buis zonder licht. Soms moet de gehoorgang in een lichte hoek worden gekanteld, ongeveer 15 ° naar het vlakke oppervlak van de schedel. Dit zorgt ervoor dat de chirurg hand loodrecht staat op het oppervlak van de TM. - Introduceer de micro-schaar in het midden van het gehoorkanaal aandacht niet te skim of Nick het weefsel van de gehoorgang en ga iets, ongeveer ≈ 5 mm van het centrum van de duisternis, voorwaarts door zachtjes door het midden van de TM.
Opmerking: TM-punctie kan worden bevestigd door een pop-geluid wanneer de micro-schaar tips de TM prik. Het popping geluid kan worden gehoord op ongeveer ≈ 2 min 52 s in de video. Dit is geen schaar klank; Dit is een TM punctie geluid. Zoals gemeten na de analyse, is de "pop" ongeveer ≈ 20 dB SPL groter dan het achtergrondgeluid, zoals opgenomen door een microfoon met hoge frequentie. Het is niet nodig om het "pop"-geluid in deze mate te verifiëren, Otoscoop-visualisatie is voldoende. De onderzoeker moet mogelijk oefenen om ervoor te zorgen dat tijdens elke CHL-procedure een ' pop ' wordt gehoord. - Open onmiddellijk de veerbelaste micro-schaar en draai drie keer na het prikken van de TM om de verplaatsing van het hoofd van de malleus weg van de TM te verzekeren (alleen als de verplaatsing van malleus gewenst is).
- Verwijder de micro-schaar en plaats het knaagdier onder de Otoscoop voor visualisatie.
Opmerking: het is belangrijk op te merken dat er na de chirurgische ingreep geen significante bloeding optreedt. Euthaniseer het knaagdier en ga niet naar de gedrags beoordeling als er bloedingen optreden. - Induceren van bilaterale CHL door verder te gaan zoals hierboven in het tegenovergestelde oor.
4. otoscope visualisatie
- Bevestig een succesvolle CHL-operatie met een Otoscoop met een kleine diameter speculum om het middenoor van de knaagdieren te visualiseren.
- Evalueer elke knaagdier voorafgaand aan en na de CHL chirurgische ingreep onder de Otoscoop. Zorg voor een bevestiging van Normal TM (Figuur 2a) en beschadigde TM na CHL-inductie (Figuur 2b).
-
Postoperatieve verzorging voor het knaagdier
- Plaats het knaagdier in de kooi van een huis onder een warme lamp.
- Observeer de knaagdier post-CHL inductie tot de knaagdieren rechten zelf.
- Injecteer het knaagdier met glucose (dextrose/Saline) serum om het bewustzijn te herstellen en plaats knaagdieren in homecage voor herstel.
Opmerking: gebruik een 23G naald met een 10 mL spuit om 5 mL zoutoplossing te injecteren na een CHL chirurgie. - Injecteer het knaagdier via intramusculaire met anti-bacteriële Enrofloxacine 0,05 mg/kg tweemaal tijdens de herstelperiode van 24 uur.
- Observeer het knaagdier regelmatig op Pijngedrag of symptomen na de operatie.
5. gedrags beoordeling (validering van de CHL-inductie)-reactie van Clap schrikreactie
- Bevestigen van CHL (na Otoscoop bevestiging) 24 h na chirurgie met de gedrags beoordeling bestaande uit de Clap-Startle-test.
- Plaats de CHL geïnduceerde rat naast een normale rat in twee aparte aangrenzende kooien.
- Plaats de knaagdieren in een stille ruimte.
- Stand ongeveer 0,5 m afstand van de knaagdieren en ga naar Clap in gelijkmatig verdeelde duur een aantal keren (5 klappen werden gekozen en gespreid over 1 seconde).
Opmerking: de Clap schrikreactie geproduceerd door de hand clap gemeten ≈ 40 dB SPL groter dan achtergrondgeluid zoals opgenomen door een hoge frequentie microfoon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
De eenvoudige CHL-procedure werd uitgevoerd op 90 ratten en uit deze groep 2 had een significante bloeding en 2 had de volgende dag geen gehoorverlies als beoordeeld door Behavioral Clap Startle. Deze vier ratten werden weggegooid. Ratten moeten worden weggegooid zoals beschreven door de redenen in de discussie als gevolg van complicaties. Inducerende TM punctie en/of verplaatsing/verwijdering van malleus (Figuur 2b) ONTLOKT CHL, wat resulteert in gedrags manifestaties (d.w.z. CHL-geen reactie op LUIDE dB SPL Startle). Ratten moeten worden gecontroleerd door Otoscoop voor de operatie om te zorgen voor normale trommelvlies membraan en na de operatie om te zorgen voor trommelvlies membraan punctie (Figuur 2; Aanvullende figuur 1). Er moet geen bloeding of significante ontsteking optreden (aanvullend Figuur 2). De CHL geïnduceerde-knaagdier zal niet reageren op een luide dB SPL Clap geluid, terwijl een controle gehoor kooi stuurman zal springen naar de luide klap. De CHL rat is niet doof voor geluid, maar heeft een CHL en daarom subtiele gedrags manifestaties optreden5. Een controle gehoor knaagdier reageert krachtig met sprongen naar een luide dB SPL geluid, zoals de Clap Startle. De sprong/Startle reactie is duidelijk zichtbaar in de video van de gehoor kooi stuurman, terwijl de CHL geïnduceerde rat niet reageert. Het gedrag voor een CHL rat kan subtieler zijn. We demonstreren de algemene Clap schrikreactie reflex voor een representatieve CHL rat en controle gehoor rat. Na verloop van tijd post-CHL chirurgie sommige ratten kunnen krijgen Clap schrikreactie reactie.
Met behulp van de CHL-procedure hebben eerdere onderzoeken de neurale manifestaties van gehoorverlies onderzocht. Bijvoorbeeld, de mate van gehoorverlies na de procedure is gekwantificeerd door het meten van auditieve Evoked mogelijkheden15,16,17, ronde venster opnames4,18, en gedrags drempels voor gedrag5. Neurale activiteit na CHL is bestudeerd met de 2-Deoxyglucose-methode en volledige-cel opnames4,16,17. Auditieve zenuwactiviteit is ook onderzocht met ronde venster opnames18. Frequentiemodulatie detectiedrempels zijn onderzocht behavioraal5. Deze CHL-procedure is duidelijk verenigbaar met een breed scala aan experimentele methoden voor gedetailleerde onderzoeken naar gehoorverlies.
Figuur 1: chirurgische opstelling. A) plaats knaagdieren in een goed verlicht gebied met een chirurgische lamp. Anesthetiseer het knaagdier. Maak klaar een assortiment van micro-schaar, als de kleinste niet werkt, een groter paar kan zorgen voor TM punctie. Zorg ervoor dat de Otoscoop klaar is. B) veer geladen micro-schaar. Pincet zal volstaan als experimenteur de opening en sluiting kan regelen. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.
Figuur 2: representatief tympanisch membraan. A) tympanisch membraan (TM) voorafgaand aan punctie. B) TM na punctie. Bij het uitvoeren van CHL en TM punctie bevestiging met de Otoscoop, is het noodzakelijk om eerst te noteren het hoofd van de malleus en na CHL inductie, een succesvolle verwijdering en punctie van TM. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.
Aanvullende informatie Figuur 1: voor en na de CHL-operatie, zoals gevisualiseerd door een Otoscoop. Otoscope visualisatie voor en na CHL chirurgie (onmiddellijk) in identieke rat. Linker kolom van figuren zijn representatieve rat auditieve kanalen gevisualiseerd vóór CHL procedure door Otoscoop met normale TM en middenoor ossikels. Rechterkolom van figuren zijn representatieve rat auditieve kanalen gevisualiseerd na CHL procedure door Otoscoop met punctureerde TM en ontheemde middenoor ossikels. Significante bloeding bestaat uit bloed ophoping in de oren. Studie middenoor anatomie van knaagdieren voor het uitvoeren van de procedure19,20,21,22,23,24,25, 26,27,28,29. Otoscope visualisatie werd 24 uur na de operatie uitgevoerd. Klik hier om dit cijfer te downloaden.
Aanvullende informatie Figuur 2: controle en na CHL chirurgie rat gehoorgang zoals beoordeeld door histologie. Histologische weergave van het middelste oor in controle en na CHL chirurgie (Bar = 500 μm). Auditieve kanalen werden verwerkt door hematoxyline en eosine (H & E) en Masson's trichrome (MT) kleuring in controle en 24 uur na CHL chirurgie. Linker kolom van cijfers zijn representatieve histologische secties van het gehoorkanaal in de controle ratten. Rechterkolom van cijfers zijn representatieve histologische secties van de gehoorgang na CHL-procedure. Merk op dat er geen significante ontsteking optreedt na een CHL-operatie. Geen verschil werd opgemerkt tot een week. Klik hier om dit cijfer te downloaden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
We beschrijven een eenvoudige chirurgische inductie van CHL met verificatie met behulp van Otoscoop visualisatie en Behavioral Clap schrikreactie respons bij ratten. Hier demonstreren we de methode op rat en eerder is deze methode toegepast op gerbils en muizen. De methode kan gemakkelijk worden overgenomen door andere knaagdieren. Inductie van CHL maakt het mogelijk om een subtiele vorm van gehoorverlies te bestuderen die zich manifesteert in auditieve corticale veranderingen en psychopfysische gedrags bevindingen4,5,16,17,18 .
Het falen om CHL te induceren kan worden veroorzaakt door verschillende redenen zoals hieronder vermeld. In elk geval raden we aan om de rat te verwijderen. Euthaniseer de rat als een van de oren bloeden. Bloeden geeft aan dat de schaar contact maakte met de gehoorgang en de chirurgische aanpak was niet schoon. Anders, het kan betekenen dat de punctie was dieper dan de voorkeur, waardoor interne schade, eventueel hersenbeschadiging. Interne schade kan een diepe invoeging of een picknicken van de gehoorgang betekenen. De procedure is een minimaal invasieve trommelvlies membraan en/of malleus verwijdering/verplaatsing; Daarom moet er geen significante bloeding optreden (aanvullend figuur 1). Als er significante bloedingen optreden, euthaniseer de rat. Als er geen "pop" geluid wordt gehoord tijdens de trommelvlies membraan punctie, kan dit duiden op een slechte CHL, wat betekent dat de schaar geen direct contact heeft met het tympanische membraan. Gooi het knaagdier van de groep weg en euthaniseer. Met behulp van de Otoscoop, als visualisatie bevestigt dat het middenoor vergelijkbaar is met besturings oren, geeft dit aan dat het trommelvlies membraan niet is doorprikt. Er werd geen CHL geïnduceerd en daarom moet het knaagdier worden weggegooid. Als het knaagdier reageert op de Clap-Sound-test, moet het worden weggegooid. Als een CHL geïnduceerde knaagdieren sprongen of sprongen na Clap geluiden, vergelijkbaar met zijn kooi genoot, dit geeft aan dat de chirurgische ingreep niet succesvol was. Een reactie op een Clap-geluid geeft aan dat er geen CHL is opgetreden en dat de rat moet worden weggegooid of geëuseerd. De beperkingen van inducerende CHL door een chirurgische benadering worden geassocieerd met de leercurve om de chirurgische ingreep en het vertrouwen in Audiologisch onderzoek19,20,22,23, 27,28,29. Bovendien heeft dit protocol ABR of DPOAE niet gebruikt voor de beoordeling van gehoorverlies15 om een eenvoudig protocol vast te stellen voor wetenschappers die niet vertrouwd zijn met audiologische procedures. De ABR en DPOAE voor audiologische procedures kunnen worden gebruikt voor wetenschappers die verdere beoordeling van CHL15willen.
Een modificatie van de techniek is het gebruik van TM punctie met verplaatsing van malleus. Voor een beginner kan dit moeilijk te bepalen zijn, maar de malleus is duidelijk gevisualiseerd met een Otoscoop in bijna alle knaagdieren oren. De TM is een vezelachtig membraan met een pellucida uitstraling dat licht uitzendt. Oefen Otoscoop-verificatie om consistente visualisatie te maken op basis van eerdere literatuur19,20,22,23,27,28,29 . Na een vertrouwen in de visualisatie van de malleus, de verplaatsing tijdens de operatie is gemakkelijk bevestigd door een luide ' pop ' zoals kan worden gehoord op ≈ 2 min 52 s. Deze pop is een luide dB SPL verandering in het audiobestand van ongeveer 20 dB SPL voorafgaand aan het draaien van de veerbelaste micro-schaar. De luide pop bevestigt TM punctie en succes zonder de gehoorgang te beschadigen. Twee aspecten van de chirurgische ingreep moeten met zorg worden uitgevoerd: 1) Zorg ervoor dat de micro-schaar in het midden van de gehoorgang wordt geplaatst, en 2) Zorg ervoor dat de hoek van de micro-schaar parallel is met de gehoorgang tijdens de neerwaartse punctie. Zorg ervoor dat de punctie beweging snel en ongeveer 5 mm neerwaartse stuwkracht van de opening van de gehoorgang is. Draai en open de micro-schaar voor de verplaatsing van de malleus indien wenselijk.
De belangrijkste stappen van het CHL-protocol zorgen voor TM punctie en het verifiëren van gedragsclap Startle. Zorgen voor verificatie van malleus verwijderen/punctie van de TM bevestigt CHL is uitgevoerd. Verificatie gebeurt via otoscopisch onderzoek. De kritische stappen voor de gedrags beoordeling zijn om te zorgen voor een luid genoeg Clap dat het knaagdier wordt geschrold. Er zijn verschillen geconstateerd wanneer een CHL rat wordt geplaatst in een soortgelijke kooi als een hoorrat; Hier wordt één rat door de ander geschokkeld, zelfs als de rat het geluid niet kan horen. Een geschokkelde rat/knaagdier zal vaak springen of hoppen, maar dit is geen criterium. Zoals kan worden waargenomen, de CHL rat beweegt niet naar de Clap. Omdat de TM punctie een CHL is, kunnen verschillende niveaus van dB SPL sounds worden gehoord door de knaagdieren5.
De primaire betekenis van deze eenvoudige CHL-methode is dat deze kan worden uitgevoerd door een breed scala aan onderzoekers, zelfs met slechts bescheiden middelen. Verificatie van gehoorverlies wordt uitgevoerd door Otoscoop visualisatie en gedragsmatige Clap schrikreactie respons bij ratten. Hier demonstreren we de methode op rat en eerder is deze methode toegepast op gerbils en muizen. De methode kan gemakkelijk worden overgenomen door andere knaagdieren. Inductie van CHL maakt het mogelijk om een subtiele vorm van gehoorverlies te bestuderen die zich manifesteert in auditieve corticale veranderingen en psychopfysische gedrags bevindingen4,5,16,17,18 De huidige techniek kan worden gecombineerd met elektrofysiologie en gedrags technieken om de corticale gevolgen van gehoorverlies te bepalen, wat van groot belang is voor onderzoek naar gehoorverlies31.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs verklaren geen financiële of niet-financiële belangenconflicten.
Acknowledgments
Dit werk werd deels gesteund door de Hong Kong Research Grants Council, het Early Career Scheme, project #21201217 to C. L., voor het project Brain Mapping geleide elektrofysiologie met toepassingen in gehoor-en lawaai vervuiling onderzoek. Wij danken de Posgrado en Ciencias Biomédicas, het Instituto de Neurobiología van de Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM), de Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACyT) México voor de Graduate Fellowship 578458 aan FAM Manno.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Latex, polyvinyl or nitrile gloves | AMMEX | Use unpowdered gloves 8-mil | |
| Micro spring scissors (see Fig. 1b) | RWD Life Science | S11035-08 | 8.0 cm total length, with 3.5mm cutting edge, or similar micro forceps. Standard tweezers with spring action will suffice |
| Otoscope mini 3000 | HEINE | D-008.70.120M | Standard LED otoscope will suffice |
| Rat or mouse | JAX labs | Any small rodent | |
| Small rodent cage | Tecniplast | 1284L | Need two cages to separate CHL rodent from hearing rodent. If rodents are in direct contact with one-another, they will startle each other. Cage dimensions 365 x 207 x 140 mm, floor area: 530 cm2/82.15 in2 |
References
- Shargorodsky, J., Curhan, S. G., Curhan, G. C., Eavey, R. Change in prevalence of hearing loss in US adolescents. The Journal of the American Medical Association. 304 (7), 772-778 (2010).
- Lucas, J. W., Schiller, J. S., Benson, V. Summary health statistics for U.S. adults: National health interview survey, 2001. National Center for Health Statistics. Vital and health statistics. 10 (218), 1-134 (2004).
- Gaffney, M., Green, D. R., Gaffney, C. Newborn hearing screening and follow-up: Aare children receiving recommended services? Public Health Reports. 125 (2), 199-207 (2010).
- Xu, H., Kotak, V. C., Sanes, D. H. Conductive hearing loss disrupts synaptic and spike adaptation in developing auditory cortex. The Journal of Neuroscience. 27 (35), 9417-9426 (2007).
- Buran, B. N., et al. A sensitive period for the impact of hearing loss on auditory perception. The Journal of Neuroscience. 34 (6), 2276-2284 (2014).
- Finck, A., Sofouglu, M. Auditory sensitivity of the Mongolian gerbil. The Journal of Auditory Research. 6, 313-319 (1966).
- Finck, A. Auditory sensitivity of the Mongolian Gerbil (Merionesunguiculatus). The Journal of the Acoustical Society of America. 41 (60), 1579 (1967).
- Finck, A., Schneck, C. D., Hartman, A. F. Jr Development of auditory function in the Mongolian gerbil. The Journal of the Acoustical Society of America. 46 (1A), 107 (1969).
- Ryan, A. Hearing sensitivity of the Mongolian gerbil, Meriones Unguiculatis. The Journal of the Acoustical Society of America. 59, 1222-1226 (1976).
- Dallos, P., Harris, D., Ozdamar, O., Ryan, A. Behavioral, compound action potential, and single unit thresholds: relationship in normal and abnormal ears. The Journal of the Acoustical Society of America. 64 (1), 151-157 (1978).
- Kelly, J. B., Potash, M. Directional responses to sounds in young gerbils (Meriones unguiculatus. Journal of Comparative Psychology. 100 (1), 37-45 (1986).
- Heffner, H. E., Koay, G., Heffner, R. S. Behavioral assessment of hearing in mice--conditioned suppression. Current Protocols in Neuroscience. , Chapter 8, Unit 8.21D (2006).
- Heffner, R. S., Koay, G., Heffner, H. E. Audiograms of five species of rodents: implications for the evolution of hearing and the perception of pitch. Hearing Research. 157 (1-2), 138-152 (2001).
- Lupo, E. J., Koka, K., Thornton, J. L., Tollin, D. J. The effects of experimentally induced conductive hearing loss on spectral and temporal aspects of sound transmission through the ear. Hearing Research. 272 (1-2), 30-41 (2011).
- Liberman, M. C., Liberman, L. D., Maison, S. F. Chronic conductive hearing loss leads to cochlear degeneration. PLoS One. 10 (11), e0142341 (2015).
- Tucci, D. L., Cant, N. B., Durham, D. Conductive hearing loss results in a decrease in central auditory system activity in the young gerbil. Laryngoscope. 109, 1359-1371 (1999).
- Tucci, D. L., Cant, N. B., Durham, D. Effects of conductive hearing loss on gerbil central auditory system activity in silence. Hearing Research. 155, 124-132 (2001).
- Cook, R. D., Hung, T. Y., Miller, R. L., Smith, D. W., Tucci, D. L. Effects of conductive hearing loss on auditory nerve activity in gerbil. Hearing Research. 164, 127-137 (2002).
- Albuquerque, A. A., Rossato, M., Oliveira, J. A., Hyppolito, M. A. Understanding the anatomy of ears from guinea pigs and rats and its use in basic otologic research. Brazilian Journal of Otorhinolaryngology. 75, 43-49 (2009).
- Li, P., Gao, K., Ding, D., Salvi, R. Characteristic anatomical structures of rat temporal bone. Journal of Otology. 10, 118-124 (2015).
- Judkins, R. F., Li, H. Surgical anatomy of the rat middle ear. Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 117, 438-447 (1997).
- Hellström, S., Salén, B., Stenfors, L. E. Anatomy of the rat middle ear. A study under the dissection microscope. Acta Anatomica (Basel). 112, 346-352 (1982).
- Albiin, N., Hellström, S., Salén, B., Stenfors, L. E., Wirell, S. The vascular supply of the rat tympanic membrane. The Anatomical Record. 212, 17-22 (1985).
- Li, P., Ding, D., Gao, K., Salvi, R. Standardized surgical approaches to ear surgery in rats. Journal of Otology. 10, 72-77 (2015).
- Johansson, U., Hellström, S., Anniko, M. Round window membrane in serous and purulent otitis media. Structural study in the rat. Annals of Otology, Rhinology & Laryngology. 102, 227-235 (1993).
- Magnuson, K., Hellström, S. Early structural changes in the rat tympanic membrane during pneumococcal otitis media. European Archives of Oto-Rhino-Laryngology. 251, 393-398 (1994).
- Hellström, S., Salén, B., Stenfors, L. E. The site of initial production and transport of effusion materials in otitis media serosa. A study on rat middle ear cavity. Acta Oto-Laryngologica. 93, 435-440 (1982).
- Shen, Y., et al. Scaffolds for tympanic membrane regeneration in rats. Tissue Engineering Part A. 19, 657-668 (2013).
- Wang, A. Y., et al. Rat model of chronic tympanic membrane perforation: Ventilation tube with mitomycin C and dexamethasone. International Journal of PediatricOtorhinolaryngology. 80, 61-68 (2016).
- Stenfeldt, K., Johansson, C., Hellström, S. The collagen structure of the tympanic membrane: collagen types I, II, and III in the healthy tympanic membrane, during healing of a perforation, and during infection. Archives of Otolaryngology--Head & Neck Surgery. 132, 293-298 (2006).
- Zhao, H., et al. Temporary conductive hearing loss in early life impairs spatial memory of rats in adulthood. Brain and Behavior. 8, e01004 (2018).
